抗HBe阳性慢性肝炎患者的HBV感染状态研究

本文结合肝内HBsAg与HBcAg的表达情况对15例抗-HBe阳性慢性肝炎患者进行了肝细胞内HBV DNA原位杂交分析。发现其HBV感染状态可分为3种类型;①HBV活动复制型(4例,26.7％),肝内HBV DNA、HBsAg、HBcAg三者或HBsAg、HBcAg阳性;②HBV不完全复制或表达型(8例,53.3％),肝内HBV DNA、HBsAg阳性;③HBV非复制型(3例,20.0％),肝内HBV DNA及HBV标志均阴性。提示:在血清HBeAg向抗-HBe转换的病例中,HBV感染状态不尽相同,部分患者仍存在HBV活动性复制,少数病例的HBV复制已停止,半数病例处于由活动性复制相向非复制相过渡阶段。     

重型慢性活动性肝炎患者急性加重的病因探讨

为探讨慢性活动性肝炎患者急性加重的病因,对15例患者进行肝细胞内HBV DNA(乙肝病毒脱氧核糖核酸)原位杂交研究,同时检查血清与肝内HBV标志及肝内HDAg。发现:①60.0％(9/15)患者存在HBV活动性复制或HBV复制重新激活,观察到表达浆膜型HBcAg肝细胞多紧紧毗邻肝细胞坏死灶;②20.0％(3/15)患者肝内HBsAg或(和)HBVDNA阳性,虽无HBcAg表达,但见到浆膜型HBsAg表达或含HBV DNA肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切的表现:③13.3％(2/15)患者有HDV二重感染;④1例患者缺乏HBV感染标志。表明慢性活动型肝炎急性加重主要与HBV活动性复制、HBV复制重新激活或HBV感染持续存在有关,其次是HDV二重感染,少数病例可能存在HAV或HCV的重叠感染。     

肝细胞内HBV DNA、基因产物表达及其与肝细胞坏死灶的关系

应用原位分子杂交方法分析慢性乙肝患者肝细胞内乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)。发现肝内HBV DNA复制部位往往与HBsAg或HBcAg表达部位相同;HBsAg与HBcAg同时在肝内表达时,数量多不均衡,提示编码HBsAg与HBcAg基因数量或复制活性不同;且观察到含HBV DNA的肝细胞数明显超过表达HBsAg、HBcAg的肝细胞数,提示胞浆HBV DNA一部分可能处于复制期,另一部分为非复制期:肝内HBV DNA复制与HBsAg、HBcAg表达对应的部位常紧紧毗邻肝细胞坏死灶,两者频率相似。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与肝组织病理及免疫组化水平的关系。方法检测76例慢性乙型肝患者血清及肝组织外周血HBsAg，如BeAg和HBV DNA水平，常规病理和肝组织内的HBsAg，HBcAg。结果外周血中HBeAg阳性的患者中有91．49％HBV DNA阳性，而在如BeAg阴性的患者中，有58．62％的患者HBV DNA阳性，只有慢性乙型肝炎轻度患者的血清HBV DNA水平与其他各组差异有显著性（P〈0．05），而其余各组之间HBV DNA的复制水平均无明显差异，中度以上的血清HBV DNA多呈高水平分布。所有样本肝组织的HBsAg均为阳性，从肝组织不同HBsAg表达强度下，HBcAg表达的趋势来看，HBcAg有随着HBV DNA量的增加而表达增强的趋势。结论患者血清HBV DNA水平的变化可以反映HBV的复制水平而不能反应肝脏损伤程度。同时肝组织内的HBsAg检测更适合于低水平HBV感染的患者。     

慢性乙型病毒性肝炎血清HBV DNA载量与肝组织病毒学标志及肝脏损害程度的关系

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清HBV DNA载量与肝组织病毒学标志及肝组织病理损伤的关系。方法根据血清学检查结果将90例CHB患者分为血清HBV DNA阳性与阴性2组,对2组患者血清HBeAg阳性率、肝组织病毒学标志HBsAg、HBcAg的表达及肝组织病理损伤进行对比分析。结果血清HBV DNA阳性组血清HBeAg阳性率、肝组织中HBeAg、HBcAg表达明显高于HBV DNA阴性组,统计学处理有显著性差异,而2组肝组织肝脏炎症和纤维化程度比较无明显差异。结论CHB患者血清HBV DNA定量与血清HBeAg阳性率、肝组织中HBsAg、HBcAg表达有高度的相关性,而与肝组织炎症和纤维化程度无关。     

原发性肝癌内HBV DNA及HBAg的分布与意义

采用原位分子杂交和免疫组化及双标记技术,对44例原发性肝细胞肝癌及痛旁肝组织进行了乙型肝炎病毒DNA及其表达产物x抗原、核心抗原检测。癌组织中HBV DNA、HBxAg、HBcAg检出率分别为70.5％、65.9％及20.5％;癌旁肝组织依次为76.5％、76.5％及29.4％。HBV DNA及HBxAg主要位于肝细胞浆中,在HBcAg阳性组中的检出率高于HBcAg阴性组(P<0.05)。9例枯否氏细胞浆有HBxAg检出。HBVDNA在癌及癌旁组织中的检出有“伴随现象”。HBcAg多位于核内,部分为核浆型,且总是伴随HBV DNA和(或)HBxAe检出,无一例单独检出HBcAg者。此外,HBxAg可由肝内游离型HBV DNA所表达;肝内核型或浆型HBcAg均可反映HBV的复制。因此,肝内HBxAg的检测可作为HBV感染的灵敏指标之一,进一步证实HBV感染与HCC的发生有密切关系。     

慢性肝炎肝细胞坏死与HBV标志及T细胞亚群的关系

本文应用兔疫组化方法研究慢性肝炎肝细胞坏死与乙型肝炎病毒(HBV)标志及T细胞亚群的关系,结果发现:e抗原阳性(eAg+)患者肝内HBsAg与HBcAg检出率明显高于e抗原阴性(eAg-)患者;在大多数膜HBsAg或浆膜型HBcAg表达部位中间或周围伴有肝细胞坏死,聚集在eAg+慢性活动型肝炎肝细胞坏死部位的单个核细胞大多为OKT~+_8细胞,OKT~+_4细胞少见,提示:eAg+的肝细胞破坏与HBV标志膜表达及OKT~+_8细胞浸润有一定关系。     

肝细胞浆内HBV DNA与HBV感染状态关系的探讨

在原位杂交研究的基础上,本文对慢性乙肝患者胞浆型HBV DNA及肝内其它乙肝指标进行综合分析。发现胞浆型HBV DNA可分3种类型:①肝内同时有核衣壳蛋白(HBcAg)与包膜蛋白(HBsAg)表达,此与HBV复制的产物表达特征一致;②肝内仅有HBsAg表达,此与HBVDNA和宿主基因组整合后的表达特点相似;③肝内HBsAg、HBcAg表达均缺如,可能代表一种HBV非复制状态。由此表明在HBV非复制期,出现胞浆HBV DNA杂交信号可能系DNA RNA杂交体所致。     

肝细胞内HBV DNA原位杂交的研究

应用生物素标记HBV DNA(乙肝病毒脱氧核糖核酸)作探针,对129例肝病患者肝组织作原位杂交研究。HBV DNA在慢性活动性肝炎中检出率最高(80.7％),显著高于肝硬化、慢性小叶性肝炎、急性肝炎及原发性肝癌组。具有乙肝复制指标阳性患者的肝细胞内HBV DNA检出率(82.0％)明显高于非复制组(63.0％),P<0.05。本研究观察到;HBB DNA阳性肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切,多位于肝细胞坏死灶中间或(和)周边,其中以局灶型分布的HBVDNA阳性肝细胞与肝细胞坏死灶关系密切。提示HBV复制与肝细胞坏死有关。     

血清和肝组织内HBV复制状态与肝脏病变活动性关系的研究

经病理确诊的47例乙型肝炎患者血清中HBV DNA、HBeAg的检出率在各型肝炎之间无显著性差异(P>0.05)。肝组织HBsAg检出率为76.6％,其形态呈包涵体型、弥漫型和膜型为主分布者分别是36.1％、55.6％和8.3％。HBsAg呈弥漫型分布者各类型肝炎之间无显著性差异(P>0.05),提示肝细胞内HBsAg的表达仅反映HBV复制,而与肝组织病变无关。肝组织HBcAg检出率为27.7％,其形态呈核型和浆型分布者分别占38.5％和61.5％,浆型主要见于炎症明显的肝细胞内,而核型刚见于病变较轻的肝细胞中,反映了HBcAg的表达与肝组织活动性病变有关。     

Analysis of intrahepatic HBVDNA in serologic HBV markers-negative or HBsAg-negative patients with chronic hepatitis

Summary To explore HBV infection status in a group of serologic HBV markers-negative or HBsAg-negative patients with chronic hepatitis, in situ hybridization to hepatccellular HBVDNA was carried out in combination with detection of HBsAg and HBcAg in the liver tissues. It was found that prevalence of intrahepatic HBVDNA, HBsAg and HBcAg was 43 %, 39 % and 17 % respectively, and 15 out of 23 cases studied were sure to bear one or more positive marker (s) of intrahepatic HBVDNA, HBsAg and HBcAg. These findings suggest that more than half of the patients with chronic hepatitis were still undergoing HBV infection, despite serologic HBV markers or HBsAg negative. Furthermore, we found that hepatocytes containing HBV-DNA or surface or core antigen were often close to hepatic necrosis foci, indicating that HBV replication and its antigen(s) expression in hepatocytes could account for chronic, active and necrotic inflammation occurring in the liver of the patients mentioned above.     

丁型肝炎病人肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA表达及关系

目的：探讨丁型肝炎病人肝组织中ＨＤＡｇ与ＨＢｓＡｇ／ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达及关系。方法：应用免疫组化双重染色和原位杂交,检测７９例丁型肝炎病人肝组织ＨＤＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达,以５２例乙型肝炎作对照。结果：丁型肝炎ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ检出率（８１％、７１％）较乙型肝炎（９４％、９２％）低（Ｐ〈０．０５或０．０１）。ＨＤＡｇ以肝细胞核表达为主,ＨＢｓＡｇ以肝细胞浆表达     

乙型肝炎病毒基因型B/C型患者血清和肝细胞内HBsAg表达水平的差异

目的 了解HBV基因型（B和C）对血清及肝内HBsAg表达的影响。方法 选择在广州南方医院感染内科住院的76例慢性乙型肝炎患者,具有同期对应的血清和肝组织切片。用PCR-RFLP方法行HBV基因分型;Abbott Architect法定量检测血清HBsAg;采用单克隆抗体或多克隆抗体对肝脏组织内的HBsAg和HBcAg分别进行免疫组织化学染色,计数阳性细胞数。并对6例基因型B和8例基因型C患者血清HBV HBsAg部分区段DNA进行序列测定。结果 共检测到4种基因型：B（47例）、C（21例）、D（3例）和B／C混合（5例）。血清HBsAg水平在基因型B和C之间无区别,但HBV基因C型患者肝内HBsAg的表达高于B型（P〈0．01）。在HBV基因B型患者中,HBsAg阳性肝细胞分布多为单个或散在几个（22／47）,C型中则多为广泛分布（8／21）（P〈0．01）。在基因B型的患者中,血清HBsAg和血清HBVDNA（r=0．674,P=0．000）,核心抗原核内（r=0．534,P0．000）以及细胞质表达水平（r=0．405,P=0．004）呈正相关关系;在基因c型的患者中,血清HBsAg仅与血清HBV DNA正相关（r=0．503,P=0．017）。肝内HBsAg水平仅在基因B型患者中与肝细胞质内HBcAg的表达水平呈正相关关系（r=0．318,P=0．029）,与血清HBsAg、HBV DNA、核心抗原核内表达水平无相关。序列分析显示基因型B和C表面抗原前20个氨基酸序列存在明显差异。结论 基因C型患者肝组织中HBsAg表达水平高于B型;而基因B型的血清HBsAg水平和病毒复制水平相关性明显。     

A study of hepatitis B virus DNA in situ hybridization for chronic active hepatitis.

Liver biopsies of 50 patients with chronic active hepatitis B were analysed immunohistochemically for HBcAg and HBsAg, and, by in situ hybridization, for hepatitis B virus (HBV) DNA. Double staining for manifesting HBV DNA and viral antigen simultaneously was also performed in some of them. The localization patterns of HBV DNA in hepatocytes could be classified into whole cytoplasmic, submembranous, nucleic and intermembranous types. The last type suggests that HBV DNA might be transmitted directly to the adjacent hepatocytes through the cell membranes. The double staining indicated that the majority of hepatocytes with high levels of HBV replication did not contain HBcAg of HBsAg. Conversely, most liver cells with strongly positive HBAg had low or negligible levels of viral replication. In addition, in a few cases HBV DNA could be found in the cytoplasm of bile ductule epithelia and sinusoidal endothelia.

     

血清学标志阴性的慢性肝炎患者病理与临床

目的了解血清学标志阴性的慢性肝炎患者病理与临床特征。方法对62例血清学标志阴性反复肝功能异常的肝炎患者进行血清肝炎病毒学检测、肝穿刺病理和免疫组化检查、肝功能和凝血功能检查,对其中乙肝患者采用荧光定量PCR方法检测血清乙肝病毒DNA（HBVDNA）。结果62例患者临床诊断与病理诊断的符合率为53．2％,慢性肝炎轻度的符合率较高为69．1％。62例患者肝组织免疫组化检查示28例（45．2％）HBsAg和／或HBcAg阳性,可确诊为乙型肝炎。28例乙肝患者肝组织病理均有炎症病变,其中G1最高占13例（46．4％）,其次G2占10例（35．7％）,G4最少占2例（7．1％）;肝纤维化分期S0占12例（42．9％）,S1占7例（25％）,S4最少占1例（3．6％）。28例患者中10例（35．7％）检测血清HBVDNA阳性,平均（3．3±2．2）×10^3拷贝／ml,肝脏炎症分级及纤维化分期各组之间血清HBVDNA定量水平比较差异无统计学意义（P〉0．05）。HBVDNA阳性和阴性患者的各项指标比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。乙肝患者和非乙肝患者各项指标比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论血清学标志阴性HBV感染仍是我国原因不明肝病的主要病因之一,且多为慢性肝炎,HBVDNA仍低水平复制,临床表现轻,炎症分级和纤维化程度较轻,但仍可发展为肝硬化。     

慢性乙型肝炎肝组织HBsAg和HBcAg的表达

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织中HBsAg和HBcAg的表达与血清HBV-DNA含量、肝组织中HBV-DNA含量、肝组织病理及临床之间的关系。方法选择慢性乙肝患者83例,检测血清HBV-DNA的含量,并行肝穿刺取肝组织,用免疫组化法检测乙肝患者肝组织中HBsAg和HBcAg的表达并检测肝组织中HBV-DNA的含量,同时行常规肝组织病理染色。结果在慢性乙型肝炎患者肝组织内HBsAg和HBcAg阳性表达率分别为81.9%和53%。HBsAg 98.5%是浆膜型;HBcAg浆膜型占62.8%、胞核型占37.2%,浆膜型的肝组织炎症、纤维化较胞核型明显。HBsAg表达强度与血清HBV-DNA定量、肝组织HBV-DNA定量及肝组织炎症和纤维化之间均无相关性。HBcAg表达强度随着血清HBV-DNA定量的增加而增加,呈正向关联（r=0.291,P=0.008）,与肝组织HBV-DNA定量呈现明显的正向关联（r=0.664,P〈0.001）,与肝组织炎症、纤维化分级也呈正相关（r=0.611,0.841,P〈0.001）。结论慢性乙肝患者肝组织免疫损伤发生的免疫应答的主要抗原是HBcAg。将肝组织中HBcAg的表达结合HBV-DNA载量作为抗病毒治疗指标更可靠。