从环境中分离致病性自由生活阿米巴

作者选择湘江(长沙市内段)、温泉、池塘、电厂废水池和游泳池为观察点,定期定点采集泥样和水样,运用无营养琼脂加大肠杆菌作培养基进行自由生活阿米巴(FLA)的培养。 于1986年秋和1987年春夏季共采集标本236个,其中泥样113个,水样123个。经标准化处理后,前者FLA的检出率为63％,后者为31.5％,有极显著性差异(P<0.01).从5个采样点共培养分离出9种FLA。按发     

特异核酸捕获-PCR技术在从高背景标本中检测TT病毒DNA的应用

目的 解决因TTV在样本中的水平极低而导致从高背景核酸样本中检测TTV DNA存在非特异性扩增的问题。方法 采用辛和素生物素系统将TTV特异的核酸片段包括被在微孔板上，利用特异核酸捕获样本中的TTV DNA，从而建立特异核酸捕获－PCR检测TTV DNA方法，并以10份血清（4份TTV DNA阳性）和肝组织配对标本为对象与抽提法进行比较，阳性产物进行DNA序列分析，最后评价特异核酸捕获－PCR的特异性。结果 抽提法在血清和肝组织中的检出率分别为4／10和9／10。RFLP初步分析产物具有特异性，但经DNA序列分析证实的检出率仅分别为2／10和3／10。采用特异核酸捕获－PCR检测的结果与抽提法经DNA序列分析后的结果一致，获得的电泳条带也更为清晰。结论 特异核酸捕获－PCR方法能显著提高TTV DNA检测的特异性，特别是针对高背景核酸标本，表明该方法在其他低水平病原体检测及高背景核酸样本检测中也有广泛的应用前景。目前广泛采用的TTV DNA检测方法如不进行DNA序列分析则可导致过高地估计了TTV的感染率。．     

酶消化热裂解法处理血清样本进行RT-PCR检测的研究

目的探讨相对简便和不易污染的直接热变性处理血清样本进行RT－PCR检测的敏感性和重复性不理想的原因，并对其进行改良。方法对比分析直接热变性上清液中的pH值和蛋白抑制因子对RT－PCR体系的pH值和PCR扩增效果的影响。评价改良方法的性能。结果10份正常血清直接热变性上清的pH值平均为8．96±1．34。与RT－PCRⅠ液和改良RT-PCRⅠ液混合后的pH值分别为8．55±0．53和8．32±0.07。直接热变性上清液对PCR的抑制作用这100－1000倍。这种抑制作用可被加入300μg/mL蛋白酶K消化而完全消除。消化热变性法的敏感性和重复性与传统的抽提法接近，且不易污染。结论pH值波动和蛋白性抑制因子的存在是直接热变性法重复性和敏感性差的重要原因。消化热变性法不仅敏感性高，重复性能与抽提法相媲美，而且简便性和防污染能力更为优越。     

自然环境中分离出致病性自由生活阿米巴

湘江、泳池等水源中采集样本236个,其中77.5％有自由生活阿米巴(FLA)生长,从属于9种不同类型。65个阳性样本经鼻滴注小鼠作致病试验,筛选出4个致病性FLA分离物。该分离物使部分小鼠死于阿米巴脑炎。死亡小鼠脑、鼻粘膜等组织可见棘阿米巴滋养体和包囊。进一步观察证明。此阿米巴经鼻粘膜和筛孔直接侵犯中枢神经系统,该种阿米巴初步鉴定为多噬棘阿米巴。     

丙型肝炎病毒感染及其抗原表达与细胞凋亡的关系

目的：细胞模型上研究表明，ＨＣＶ抗原能抑制细胞凋亡。本研究在体内研究水平进一步探讨ＨＣＶ抗原表达对细胞凋亡的影响。方法：采用原位细胞凋亡、免疫组织化学及其双染色等技术，对７０例肝细胞癌（ＨＣＣ）和１０例慢性肝炎的组织标本进行研究。结果：ＨＣＶ感染或组织ＨＣＶ抗原表达阳性的患者中，细胞凋亡指数与阴性患者无显著性差异。而仅有纤维化的慢性肝炎组织较伴有肝硬变的癌周组织的凋亡指数显著升高（２０２７±２４１ｖｓ８４７±３２４，Ｐ＜００１）。在分布上，慢性肝炎组织中细胞凋亡与抗原分布一致，与炎症反应密切相关，而癌周组织中两者常不一致。结论：在组织水平上ＨＣＶ抗原表达对细胞凋亡的影响相对复杂。感染早期，ＨＣＶ抗原主要通过炎症反应而促进细胞凋亡。感染后期则主要表现为抑制细胞凋亡     

血浆置换患者TT病毒感染的观察

目的 研究血浆转换患者人群中经输血传播ＴＴ病毒的感染状况及临床意义。方法 用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测４５例血浆转换口才呼慢性肝炎患者的ＴＴ病毒（ＴＴＶ）感染情况，分析ＴＴＶ感染的致病力。结果 ＴＴＶ在４５例血浆转换患者中的感染率为１５．６％（７／４５），在８７例慢性肝炎患者中的感染率３．４％（３／８７），经统计学处理，两组感染率比较差异有显著性（Ｘ＾２＝４．６０，Ｐ〈０．０５）。７例ＴＴＶ阳     

乙型肝炎病毒核心蛋白原蛋白转化酶切割假定产物的体外研究

目的 通过体外试验探讨furin切割核心蛋白的可能性,并通过重组载体表达,研究其假定产物在HepG2细胞内的分布特点. 方法 重组HBV核心蛋白,并将其在不同温度和时间条件下(4℃消化16 h、30℃消化1h和30℃消化3h)接受furin切割,产物采用Western blot分析.构建HBV核心蛋白furin切割假定产物的真核表达载体,并以完整核心蛋白表达载体作为对照,转染HepG2细胞,获得稳定表达细胞株.使用核心蛋白与假定产物共同区的单克隆抗体进行间接免疫荧光染色,用共聚焦显微镜观察其细胞内分布. 结果 HBV核心蛋白在多种条件下均被furin切断,其主要产物相对分子质量约为15 000,与预期相符,且30℃切割1 h的效果最好.真核表达的核心抗原假定切割产物能与核心蛋白单克隆抗体结合,且在细胞内的分布与完整核心蛋白类似,主要以颗粒形式分布在细胞质. 结论 HBV核心蛋白在体外能被furin切割,其主要产物与完整核心蛋白有类似的免疫原性和相同的细胞内分布,提示furin或其家族成员参与了HBV复制调节,其切割产物对机体抗病毒免疫可能存在深远影响,值得深入研究.     

OAS-1基因SNP rs2660与慢性HBV感染者自发性HBeAg血清转换的关系

 【目的】 探讨寡聚腺苷酸合成酶基因-1(OAS-1)位点 rs2660的单核苷酸多态性(SNP)与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者自发性HBeAg血清转换的关系?【方法】 收集126例慢性HBV感染者(HBeAg阳性组58例,HBeAb阳性组68例)和无HBV感染者(对照组72例)的外周血,进行DNA提取和扩增,再利用竞争分化聚合酶链反应(CD-PCR)进行扩增,并结合酶免疫法显色以检测该SNP的基因型,两组间基因型比例或等位基因频率采用?字2检验和优势比(OR)计算?【结果】 在HBeAg阳性组SNP rs2660基因型GG + GA比例为29.3%(17/58)?等位基因G频率为16.4%(19/116),而在HBeAb阳性组分别为47.1%(32/68)和28.7%(39/136),对照组分别为52.7%(38/72)和30.6%(44/144);HBeAg阳性组与HBeAb阳性组或对照组之间的差异均存在统计学意义(基因型:P = 0.042和0.007;等位基因:P = 0.021和0.008),而HBeAb阳性组与对照组之间的差异无统计学意义(基因型:P = 0.499;等位基因:P = 0.731)?【结论】 SNP rs2660等位基因G可能有助于慢性HBV感染者发生自发性HBeAg血清转换,其基因型检测对于干扰素治疗慢性HBV感染者可能有一定的疗效预测价值     

衣霉素通过诱导内质网应激抑制乙型肝炎e抗原分泌

目的研究N-糖基化抑制剂衣霉素抑制乙型肝炎e抗原(HBeAg)分泌的机制,为今后探索直接抑制HBeAg分泌的高效抗HBV方法提供基础。方法观察衣霉素在HepG2.2.15细胞模型上对HBeAg分泌和内质网应激的影响;采用Western印迹比较研究衣霉素对胞质和包含内质网的非胞质中的HBeAg前体的影响。结果在HepG2.2.15细胞上,衣霉素显著减少HBeAg在培养上清中的含量,并诱导代表内质网应激的拼接xbp-1 mRNA形成。衣霉素在不显著影响胞质中HBeAg前体和β-肌动蛋白的情况下显著减少非胞质中这些蛋白的水平。结论衣霉素抑制HBeAg分泌不是糖基化抑制的直接结果,而是诱导内质网应激的效应。     

细胞凋亡和p53、bc1-2蛋白在肝细胞癌中的表达

目的：探讨HCC中细胞凋亡情况及其与p53和bcl-2蛋白表达的关系。方法：细胞凋亡采用原位细胞凋亡检测法．p53和bcl-2蛋白表达采用免疫组他方法．细胞凋亡与p53、bcl-2蛋白表达的关系采用双标记法进行检测。结果：70例HCC中。癌组织和癌周组织中细胞凋亡指数(1000个细胞中)分别为3．63士1．96和10．63±3.64，bcI-2和突变型p53置自检出率分别为22．9％和42．9％．bcl-2主要表达在癌周组织中，抑制肝细胞凋亡。而p53则仅表过在癌组织，抑制癌细胞凋亡。双染色显示细胞凋亡与p53或bel-2不同时在一个细胞中表选。结论：HCC癌细胞凋亡减弱一突变型p53蛋白是癌细胞凋亡减弱的主要原因．而be-2则可能在维持HCC的肝脏功能方面具有重要作用。