大鼠肠缺血-再灌注后营养对肠黏膜屏障功能的影响

目的:研究不同营养物质及营养支持途径对大鼠肠道缺血-再灌注时肠黏膜屏障功能的影响. 方法:将大鼠随机分为缺血-再灌注组、对照组及缺血-再灌注后各营养支持组.实验结束行肠黏膜屏障功能指标的检测. 结果:缺血-再灌注后肠黏膜发生明显损伤,普通肠外营养(PN)组D-乳酸、血浆内毒素水平、细菌移位率均显著高于其他各组(P<0.05);普通肠内营养(EN)组血浆内毒素水平明显低于谷氨酰胺肠外营养(G-PN)组(P<0.05),EN和免疫肠内营养(IEN)组细菌移位率无显著差异(P>0.05). 结论:①肠内营养在维护肠黏膜屏障功能方面优于肠外营养.②谷氨酰胺对改善肠黏膜屏障功能有显著作用,但无法取代肠内营养的作用.③免疫增强型营养与普通肠内营养相比,对细菌移位的防治效果并不大.     

荧光标记生物素法评价大鼠肠黏膜屏障损伤

目的:利用荧光标记生物素检测大鼠缺血-再灌注肠黏膜屏障损伤。方法:将20只大鼠随机分为对照(假手术)组、缺血-再灌注后1、3和5h组,共四组,每组5只。利用动脉夹夹闭肠系膜上动脉1h后放开,建立大鼠缺血-再灌注模型。观察缺血-再灌注损伤后肠组织形态学改变,并用荧光标记生物素作为探针,应用激光共聚焦显微镜,检测大鼠缺血-再灌注肠黏膜屏障损伤。结果:大鼠缺血-再灌注损伤后,肠黏膜明显受损,病理表现为肠黏膜水肿和炎性细胞浸润。损伤程度随缺血后再灌注时间的延长而增加。激光共聚焦显微镜观察发现,荧光标记生物素穿透缺血-再灌注肠上皮进入黏膜下层,表明肠上皮屏障受到破坏。结论:缺血-再灌注可损伤大鼠肠屏障功能。荧光标记生物素法是一种适合评价实验动物肠黏膜屏障损伤的方法。     

预防性应用类高血糖素多肽-Ⅱ对缺血-再灌注肠黏膜屏障的影响

目的:观察类高血糖素多肽-Ⅱ(GLP-Ⅱ)对缺血-再灌注所致的肠黏膜屏障损害的预防保护作用.方法:采用夹闭肠系膜上动脉20 min所致肠道缺血-再灌注损伤小鼠模型,将30只小鼠随机分为正常(N)组、对照(C)组和GLP-Ⅱ预处理(P)组.观察缺血-再灌注后1天,肠黏膜形态、肠道细菌移位率、血浆内毒素水平和肠道IgA浓度的变化,并进行相关分析.结果:缺血-再灌注后,C组肠黏膜受到明显损伤,P组肠黏膜增生明显,C组和P组小鼠的肠道细菌移位率和血浆内毒素水平均明显高于N组(P＜0.01),肠道IgA浓度则明显降低(P＜0.01).与C组相比,P组的细菌移位率和内毒素水平要低于C组(P=0.005),IgA浓度要高于C组(P＜0.01).结论:缺血-再灌注严重损害了肠黏膜屏障,经GLP-Ⅱ预处理可以有效地减轻肠黏膜屏障的损伤.     

膳食纤维对弥漫性脑损伤大鼠肠黏膜屏障的保护作用

目的:研究膳食纤维对重型颅脑损伤大鼠受损肠屏障功能的保护作用。方法:将大鼠致重型颅脑损伤后,随机分为A组(给予等渗盐水)和B组(给予膳食纤维),分别于伤后6、12、24、48和72 h处死大鼠。距回盲部5 cm处向上取2 cm小肠组织,在光镜下观察其病理形态变化。取门静脉血检测血浆微量内毒素的变化,取腹主动脉血测血浆二胺氧化酶、D-乳酸的变化。结果:①致伤后大鼠各组肠黏膜组织结构受损,内毒素、二胺氧化酶、D-乳酸值明显升高,以伤后12～24 h最显著,至72 h仍未恢复;②B组大鼠早期添加膳食纤维,至伤后48 h对上述各观察指标有明确改善。结论:重型颅脑损伤大鼠早期应用EN添加膳食纤维对肠屏障有保护作用。     

大鼠肠缺血-再灌注损伤后细菌易位发生部位的实验研究

目的:探讨肠道缺血-再灌注损伤对不同肠段细菌易位的影响。方法:将大鼠随机分为对照组(行假手术)和肠道缺血-再灌注组(分别于再灌注后1、6和24 h取材)。检测空肠、回肠和结肠的细菌、内毒素易位情况,各段肠系膜静脉中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平。结果:对照组和肠道缺血-再灌注1 h组各肠段系膜淋巴结细菌培养均阴性,再灌注后24 h组空肠、回肠系膜淋巴结细菌易位率明显高于对照组和结肠系膜淋巴结(P0.05);两组大鼠各段肠系膜静脉血培养、内毒素测定均为阴性;肠道缺血-再灌注后1 h和6 h组大鼠TNF-α浓度明显高于对照组(P0.05);各段肠系膜静脉血IL-6浓度均明显高于对照组(P0.05),再灌注后6 h组,空肠、回肠的肠系膜静脉血IL-6浓度明显高于结肠(P0.05)。结论:肠道缺血-再灌注损伤可造成肠道细菌易位,空、回肠更易遭受肠缺血-再灌注损伤的打击,从而发生细菌易位。     

大鼠小肠缺血-再灌注损伤后隐窝细胞增殖在肠黏膜屏障损伤修复中的作用

目的:探讨大鼠肠道缺血-再灌注(I-R)损伤后肠道隐窝细胞的增殖特征及其在肠黏膜屏障损伤修复中的作用。方法:选50只大鼠,随机分为对照组(n=5)和I-R组(缺血30 min),其中I-R组根据再灌注(R)0、0.5、1、2、4、6、12、24和48 h再分为9组,每组5只。观察各组大鼠小肠组织的病理学改变。用免疫组化法检测小肠隐窝细胞的增殖程度(Ki67,Musashi-1)。用蛋白质印迹法检测小肠黏膜组织中紧密连接蛋白ZO-1和Oc-cludin的表达。用ELISA法检测血清中D-乳酸和IL-6浓度。从回肠灌注FITC-Dextran-4溶液后,用荧光分光光度法测算其在血清中的浓度。结果:与对照组比,I/R组在R 0～1 h时出现明显的肠黏膜结构损害,渗透性增高,炎性反应增强,黏膜屏障损伤。R 1～2 h时隐窝细胞增殖明显,肠黏膜屏障功能开始修复。R 2 h时肠道渗透性显著降低,紧密连接蛋白表达开始恢复。至R 12～24 h时肠黏膜损伤基本恢复。结论:肠道I-R损伤后,隐窝细胞的增殖在肠黏膜屏障修复中起着重要作用。     

谷氨酰胺对创伤性脑损伤后肠黏膜超微结构和细胞凋亡的影响

目的:探讨谷氨酰胺(Gln)对创伤性脑损伤(TBI)后大鼠肠黏膜超微结构和细胞凋亡的影响.方法:将54只大鼠随机分为对照组(N组,6只)、脑损伤组(TBI组,24只)和脑损伤后Gln治疗组(Gln组,24只),TBI组和Gln组按脑损伤后检测时间再分为1、3、5、7d组,每组6只大鼠,对回肠黏膜行电镜检查,并以TUNEL法观察细胞凋亡.结果:TBI后3d肠黏膜超微结构的损伤及细胞凋亡达到高峰,Gln可使细胞凋亡下调,明显减轻肠黏膜超微结构的损伤.结论:Gln能抑制TBI后肠黏膜细胞凋亡,保护肠黏膜结构.     

骨髓间充质干细胞移植降低缺血-再灌注肠黏膜通透性的实验研究

目的:观察骨髓间充质干细胞移植对缺血-再灌注损伤的肠黏膜通透性变化的影响。方法:体外分离、培养和扩增雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞,将雌性SD大鼠随机分为三组,A组为假手术组,仅行剖腹,不夹闭肠系膜上动脉;B组大鼠行肠系膜上动脉夹闭45min后开放,取培养至第三代的骨髓间充质干细胞直接肠黏膜下注射移植;C组大鼠夹闭肠系膜上动脉45min后开放,黏膜下注射等量的等渗盐水。术后第3和第6天行乳果糖/甘露醇(L/M)灌胃,6h后收集尿液测定尿L/M比值。取回肠组织行Y染色体原位杂交检测供鼠来源的细胞。测定血浆D-乳酸水平。结果:移植的骨髓间充质干细胞能向缺血-再灌注损伤的肠黏膜归巢,细胞移植的大鼠肠黏膜通透性较C组明显降低(P0.05)。结论:骨髓间充质干细胞移植可抑制缺血-再灌注损伤后肠黏膜通透性的升高,维护肠黏膜机械屏障的完整性。     

依达拉奉对大鼠肠部分缺血再灌注损伤保护作用及机制的实验研究

目的 探讨依达拉奉(edaravone)对大鼠肠部分缺血再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 选择健康雄性SD大鼠30只,体重240～280 g,随机分为3组,假手术组(C组)、肠部分缺血再灌注组(IR组)、依达拉奉治疗组(E组),每组10只.除C组外,其他两组大鼠分离SMA后,用自行设计的血流阻断器阻断SMA血流量70%左右,缺血60 min,然后开放SMA,再灌注120min,E组于开放SMA同时静脉内给予依达拉奉3 mg/kg,所有大鼠在实验过程中均以生理盐水10 ml·kg-1·h-1持续输注.观察肠部分缺血再灌注后肠黏膜的损伤程度,测定血和肠组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、二胺氧化酶(DAO)的水平.结果 依达拉奉治疗组肠黏膜损伤程度较轻,能够反映肠黏膜损伤程度的DAO活性在肠组织中明显下降,血中的DAO明显升高,过度氧化应激指标MDA、MPO在血和肠组织中明显升高,SOD活性下降.结论 依达拉奉对大鼠肠缺血再灌注损伤具有良好的保护作用,这种保护作用的部分机制是清除自由基,减轻肠部分缺血再灌注损伤后肠组织的过氧化应激,减少肠缺血再灌注损伤后肠组织内PMN的聚集,进而减轻PMN所参与的炎症反映损伤.     

ω-3多不饱和脂肪酸对肠道缺血再灌注损伤和淋巴干结扎的影响

目的研究肠道缺血再灌注损伤时肠淋巴干结扎和ω-3多不饱和脂肪酸（ω-PUFA）对肠道和远隔组织的影响。方法将40只SD大鼠胃造瘘后随机分为假手术组、肠内营养（EN）组、EN＋淋巴千结扎（EN＋L）组、ω-PUFA组和ω—PUFA＋L组5组,每组8只。营养干预7d后,用动脉夹夹闭肠系膜上动脉60min,结扎组同时进行肠淋巴干结扎,假手术组只开腹。术后继续原营养干预3d后,分别测定肠道通透性、肠黏膜形态、细菌培养和血中细胞因子。结果缺血再灌注3d后,EN组和EN＋L组大鼠体重较造瘘前明显下降（P〈0．05）,EN＋L组大鼠体重明显低于ω-PUFA组和ω-PUFA＋L组（P〈0．05）。缺血再灌注后第1天,各组大鼠的L／M值均显著增加（P〈0．05或P〈0．01）,缺血再灌注后第3天,EN＋L组、ω-PUFA组和ω-PUFA＋L组大鼠的L／M值均明显低于缺血再灌注后第1天（P〈0．05）,EN组和EN＋L组大鼠的L／M值明显高于ω-PUFA＋L组（P〈0．05）;ω—PUFA组和ω-PUFA＋L组大鼠的空肠黏膜厚度及绒毛高度均明显高于假手术组、EN组和EN＋L组（P〈0．05或P〈0．01）,其回肠黏膜厚度及绒毛高度也均明显高于EN组（P均〈0．05）;ω-PUFA＋L组大鼠的血清内毒素和肿瘤坏死因子-α水平明显低于EN组（P〈0．05）,白细胞介素（IL）-6水平明显低于ω-PUFA组（P〈0．05）,IL-1β水平明显低于其余各组（P〈0．05）;EN组大鼠的肺细胞凋亡指数明显高于其余4组（P〈0．05）,其诱导型一氧化氮合酶和髓过氧化物酶浓度明显高于ω-PUFA＋L组（P〈0．05）,EN＋L组大鼠的诱导型一氧化氮合酶浓度也明显高于ω-PUFA＋L组（P〈0．05）。结论缺血60min可引起大鼠肠道损伤、肠屏障功能障碍、通透性增加;再灌注72h后,肠道损伤部分恢复,通透性较缺血后降低,细菌内毒素仍存在移位,肺仍有凋亡细胞。肠淋巴管结扎可弱化肺组织损伤,促进肠黏膜修复,维护肠屏障功能,减少内毒素移位和减轻系统炎症反应。添加ω-3PUFA的EN显著优于普通EN。     

不同营养干预对肠道缺血再灌注大鼠肠屏障和系统炎症影响

目的探讨不同营养干预对大鼠肠道缺血再灌注损伤时肠道通透性、细菌内毒素移位和系统炎症反应的影响。方法40只SD大鼠胃造瘘后随机分为普通饮食组（OF）、普通肠内营养组（EN）、谷氨酰胺肠内营养组（Gin）、免疫增强型肠内营养组（IEEN）和假手术组（Sham）。7天营养干预后用动脉夹夹闭肠系膜上动脉60分钟，继续原营养3天后分别测定肠道通透性、肠黏膜形态、细菌培养和循环细胞因子。结果OF组、EN组和Sham组肠道缺血再灌注可引起体重下降和肠道通透性增加（P〈0．05），Gln组的内毒素水平明显低于OF组（P〈0．05），IEEN组的肿瘤坏死因子α（TNF—α）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素1β（IL-1β）水平显著低于EN组（P〈0．05），Gin组和IEEN组的肠黏膜厚度和绒毛高度明显高于OF组和EN组（P〈0．05）。结论大鼠肠道缺血再灌注损伤时可引起肠道通透性增加、细菌内毒素移位和系统炎症反应。谷氨酰胺和免疫增强型肠内营养可明显弱化肠道损伤，减少细菌内毒素移位，减轻系统炎症反应。     

Effects of Enteral Nutrition on the Barrier Function of the Intestinal Mucosa and Dopamine Receptor Expression in Rats With Traumatic Brain Injury

Background: Impaired intestinal mucosal barrier (IMB) function is common in traumatic brain injury (TBI), but dopamine receptors (DRs) change in intestinal mucosa after TBI, and effects of enteral nutrition (EN) and supplements on IMB function remain unclear. Our purpose was to study the effects of EN and supplements on intestinal mucosal permeability (IMPB) and the expression of DRs DRD1 and DRD2 in the intestinal mucosa of rats with TBI. Methods: Forty‐eight rats were divided into 8 groups; control, animals with TBI, dopamine group, animals with TBI treated with dopamine antagonist, EN alone, or EN combined with glutamine, probiotics, or a combination of probiotics and glutamine daily after TBI. Results: The IMPB was improved in the glutamine, probiotics, and combination groups. Including probiotics improved IMPB more than adding glutamine, and bacterial translocation in the intestines after TBI was reduced in the probiotics and combination groups (all Ps < .01). TBI led to elevated DRD1 and DRD2 mRNA and protein levels, which were reduced in the DA antagonist, glutamine, probiotics, and combination groups. DRD2 mRNA and protein levels in the probiotics and combination groups were decreased more than in the DA antagonist group (all Ps < .01). The increased IMPB after TBI correlated with increased DRD1 and DRD2 levels in the rat intestinal mucosa. Conclusion: EN supplemented with probiotics or combining glutamine and probiotics lowers the increased IMPB, bacterial translocation, and DRD1 and DRD2 mRNA and protein expression in rat intestinal mucosa caused by TBI.     

谷氨酰胺对内毒素血症大鼠小肠营养作用的实验研究

35只大鼠随机分为四组 ,A组为正常对照组 ,B组为谷氨酰胺肠外营养组 (Gln TPN) ,C组为不含Gln的常规TPN组和经肠道营养的D组。内毒素以每天每公斤体重 2mg的剂量 ,混入营养液或等渗盐水中 ,持续滴注 5d。结果显示 ,B组肠壁蛋白质和DNA含量高于C组 ,其中回肠蛋白质含量有显著性差异 (P <0 .0 5)。在绒毛高度、小肠粘膜及全层厚度等指标B组也明显优于C组 (P <0 .0 5) ,经肠道营养的D组在上述组织学观察数值上均与正常组相近 ,且粘膜厚度、绒毛高度均超过正常值 (P <0 .0 5)。B、D两组肠道细菌易位率均低于C组 (P <0 .0 5)。研究结果表明 ,加入Gln的TPN有助于防止内毒素血症大鼠肠粘膜萎缩及细菌易位。早期应用经肠道营养更具有积极的生理意义     

Effects of alanyl-glutamine on intestinal adaptation and bacterial translocation in rats after 60% intestinal resection

The effects of alanyl-glutamine dipeptide (Ala-Gln)-enriched parenteral nutrition on intestinal mucosa and gut barrier function were investigated. Wistar rats were studied. After moderate surgical stress was induced by 60% resection of the small intestine, the rats were randomized to three groups: the chow group was given standard rat chow; the PN group received standard parenteral nutrition (PN); and the Ala-Gln group received glutamine dipeptide-enriched parenteral nutrition (3% Ala-Gln). Rats were maintained on their respective diets for 8 days. The chow and Ala-Gln groups maintained serum glutamine concentrations, intestinal mucosal thickness and villus height. Bacterial translocation rates in the chow and Ala-Gln groups were 20%, which was significantly less than that in the PN group (70%, P < 0.05). The results indicated that Ala-Gln-enriched parenteral nutrition maintains intestinal adaptation and gut barrier function after massive intestinal resection and parenteral nutrition.     

肠内营养在维护门静脉高压症术后患者肠道黏膜屏障功能中的作用

目的了解肠内营养在维护门静脉高压症术后患者肠道黏膜屏障功能中的作用和地位。方法40例门静脉高压症手术患者随机进入肠内(EN)或肠外营养(PN)组,术后分别接受肠内外营养,观察两种营养方式对患者内脏蛋白合成能力、肝功能及其储备、胃肠功能、内毒素水平、肠道细菌移位和乳果糖/甘露醇比值等方面的影响。结果两种营养方式均能改善患者的营养状况。EN术后并发症少,在刺激肠道蠕动,减轻内毒素水平,防止肠道菌群移位,维护肠黏膜屏障方面优于PN,且差异显著(P<0.05)。结论EN是维护此部分患者肠道黏膜免疫屏障功能稳定的有效方式。     

谷氨酰胺强化的肠内营养对烧伤大鼠肠三叶因子表达的影响

目的: 探讨谷氨酰胺(Gln)强化的肠内营养是否能促进烧伤大鼠肠三叶因子(ITF)表达及可能的机制。方法:采用30%体表面积Ⅲ度烧伤大鼠模型,随机分正常对照(C)组,普通肠内营养(EN)组及Gln强化的肠内营养(Gln)组。各组大鼠提供等氮、等能量的营养支持,动态观察烧伤后大鼠血浆Gln浓度和肠组织中ITF 及ITF mRNA的变化。结果: 正常大鼠血浆Gln浓度较高(642.30±85.38 mmol/L),小肠中ITF及ITF mRNA均有一定表达。烧伤后血浆Gln呈不断下降趋势,伤后10 d达最低值,仅为正常值的45%,ITF的表达也明显降低。两组比较,Gln组大鼠血浆Gln含量和肠组织中ITF 及ITF mRNA水平均明显高于EN组,同时Gln组肠粘膜受损程度也明显低于EN组。相关分析显示,血浆Gln浓度同肠粘膜ITF含量呈显著正相关(r =0.94,P<0.01)。结论:严重烧伤后血浆Gln浓度降低,肠道合成和分泌ITF的能力下降,口服Gln能抑制烧伤后机体Gln耗竭,保护肠粘膜正常结构和功能,促进ITF特别是ITF二聚体的合成和分泌。     

丹参肠内营养防护兔多脏器损伤的研究

目的:探讨丹参(DS)肠内营养对内毒素所致大白兔多脏器损伤的防护作用。方法:将近交系纯种大耳白幼兔44只,按体重随机分为正常对照组(N)、内毒素攻击组(LPS)、内毒素攻击+能全力组(LPS+EN)和肉毒素攻击+DS肠内营养组(LPS+DS),除正常对照组8只外,其余三组均为12只。内毒素攻击前3d始,LPS+DS组每日给予DS肠内营养液80ml/kgbw(其中每100ml营养液含丹参15g)灌胃,LPS+EN组按每日给予能全力营养液80ml/kgbw灌胃,N组灌胃等量生理盐水,至试验结束。同时观察:动物血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、内毒素、小肠粘液SIgA含量。整个实验期为10d。动物处死后,取心脏、肝脏、肾脏、小肠、肺进行组织形态学检查。结果:病理检查显示,LPS组小肠绒毛损伤、坏死、绒毛变短;肝脏可致汇管区出血、胞浆气球样变等;肺和肾脏也有变化。而LPS+DS组可见小肠绒毛损伤较轻,间隙致密。绒毛高度有轻微减少。其他脏器损伤较轻。内毒素攻击后,LPS+DS组血清MDA水平显著低于LPS组,内毒素水平亦低于LPS组,小肠粘液SIgA含量LPS+DS组高于LPS组。结论:DS肠内营养可以减少氧化损伤,维持肠道粘膜细胞的结构和功能,提高小肠免疫球蛋白的释放,对多脏器损伤防护有一定作用。     

Effect of enteral nutrition of monoacetoacetin on bacterial translocation in burned rats

BACKGROUND: Bacterial translocation (BT) occurs under stress, and enteral nutrition is said to be effective in counteracting this effect. The usefulness of i.v. nutrition of monoacetoacetine (MA) under stress has been reported previously, and we studied the effect of enteral nutrition of MA as it is related to BT. METHODS: Rats were given 13.6% MA or 15% glucose (Glu) via gastrostomy, and after 4 days a 30% full-thickness burn was made. Before and after administration of the burn, we measured serum cytokines; amounts of bacteria in the mesenteric lymph node (MLN), liver, and spleen (estimation of BT); mucosal thickness of the terminal ileum; and body weight changes. To confirm the effectiveness of MA in the small intestine, we estimated succinyl-CoA:3-oxoacid CoA-transferase (SCOT) expression in the terminal ileum by immunohistochemical staining and Western blot analysis. RESULTS: At 6 hours after burn, all cytokines were lower, and BT in the MLN was inhibited significantly in the MA group. Ileal mucosal thickness was not significantly different, but mucosa was more edematous in the Glu group. At 3 days after burn injury, BT was significantly inhibited in the MLN and liver, and the ileal mucosa was significantly thicker in the MA group. Body weight loss after burn injury was significantly smaller in the MA group. SCOT expression was the strongest at 6 hours after burn injury by Western blot analysis but not by immunohistochemical staining. CONCLUSIONS: Enteral nutrition of MA may be useful for the inhibition of intestinal mucosal atrophy and the prevention of multiple organ dysfunction syndrome caused by the inhibition of BT and subsequent overproduction of cytokines.