VKORC1基因多态性的检测及其与华法林稳定剂量的相关性

目的:探讨维生素K环氧化物还原酶复合物1基因(VKORC1)-1639G>A与1173C>T单核苷酸多态性与华法林稳定剂量的相关性。方法:运用高分辨率熔解曲线(HRM)以检测使用稳定剂量华法林患者的VKORC1-1639G>A、1173C>T的基因型。两位点基因突变与华法林服用剂量之间关系采用多元线性模型和一般线性模型(GLM)分析。结果:VKORC1-1639G>A基因型检测分布:113例AA型,31例GA型,1例纯合子GG型。VKORC1-1639G>A GG/GA组华法林剂量4.08±1.30mg/d明显高于AA组2.75±1.02mg/d,差异有统计学意义。VKORC11173C>T基因型检测分布:113例TT型,31例CT型,1例纯合子CC型。两位点患者基因型分布完全一致。GLM分析模型:D=exp[0.758+0.669*CM2-0.009*year+0.153*(VK-GG)-0.369*(VK-AA)-0*(VK-AG)]。结论:运用HRM检测技术,成功检测VKORC1-1639 G>A、VKORC1 1173C>T不同基因型与华法林使用剂量相关。     

CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林抗凝强度的影响

目的 探讨上海地区汉族人群中细胞色素氧化酶P450 2C9(CYP2C9)、维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因多态性对华法林稳定剂量及华法林血浆浓度的影响.方法 纳入在体外循环下行瓣膜置换术且术后需服用华法林抗凝的患者226例,采用焦磷酸测序及UPLC/MS-MS法分别检测其CYP2C9和VKORC1基因型及其华法林血浆总浓度及游离浓度,分别以基因型、性别、年龄进行分组,比较不同组别患者华法林维持剂量和血浆浓度,并计算基因多态性及血药浓度、性别、年龄对华法林稳定剂量的贡献率.结果 CYP2C9 (1061A/C)基因型中,AA型患者华法林维持量高于AC型(P＜0.05);VKORC1(-1639G/A)基因型中,AG型患者华法林维持量高于AA型患者(P＜0.01);VKORC1 (1173C/T)基因型中,CT型患者华法林维持量高于TT型患者(P＜0.01).CYP2C9(1061 A/C)不同基因型间其华法林血浆浓度差异无统计学意义,VKORC1(-1639G/A)不同基因型间及VKORC1 (1173C/T)不同基因型间华法林血浆浓度差异有统计学意义(P＜0.01).男性患者所需华法林维持量高于女性患者(P＜0.05),60岁以上患者所需华法林维持量低于60岁以下患者(P＜0.05).CYP2C9(1061A/C)、VKORC1(-1639G/A)、VKORC1 (1173C/T)基因多态性及华法林血药浓度、年龄、性别分别解释了7.2％、29.1％、30.4％、6.7％、1.6％和1.4％的华法林个体剂量差异,多因素联合可解释47.2％的华法林个体剂量差异.结论 CYP2C9基因多态性与华法林抗凝药物剂量的个体间差异有关;VKORC1基因多态性与华法林抗凝药物剂量的个体间差异有关,且与其血药浓度密切相关.年龄和性别是影响华法林维持量的重要非基因因素.     

VKORC1-1639A/G基因多态性对机械心脏瓣膜置换术后妊娠期华法林抗凝效果的影响

目的 探讨维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1基因（VKORC1）多态性对机械心脏瓣膜置换术后妊娠期华法林抗凝效果的影响。方法 收集56例机械心脏瓣膜置换术后妊娠者,妊娠期全程口服华法林,应用聚合酶链反应、限制性片段长度多态性方法检测VKORC1基因多态性,同时记录服用华法林初始抗凝效果、维持剂量,以及妊娠结局情况。结果 VKORC1-1639AA型频率最高（78.57%）,VKORC1-1639AG型频率为21.43%,未发现VKORC1-1639GG型;VKORC1-1639AA型华法林初始达标剂量、时间及维持剂量均少于VKORC1-1639AG型（P〈0.05）;VKORC1-1639AA型妊娠结局优于VKORC1-1639AG型。结论 VKORC1-1639AA型对华法林敏感度更高;建议VKORC1-1639AA型妊娠期可考虑口服华法林,VKORC1-1639AG型建议联合用药。     

CYP2 C9和VKORC1基因多态性与川东北肺栓塞患者华法林维持剂量的相关性

目的探索CYP2C9和VKORC1基因多态性与川东北汉族肺栓塞患者华法林维持剂量的相关性。方法采用荧光染色原位杂交测序法,对60例川东北地区汉族肺栓塞患者CYP2C9、VKORC1基因型进行检测,对服用华法林的60例患者进行随访,评估CYP2C9、VKORC1对肺栓塞患者华法林维持剂量的影响。结果 60例服用华法林达维持剂量的患者中,CYP2C9 1075基因中AA型为85.0%,AC型为15.0%,CC型为0; VKORC1 1639基因中GG型为3.3%,AA型为83.3%,GA型为13.3%。各基因型所需的华法林剂量:CYP2C9 1075 AA基因型为(3.14±0.99) mg/d,AC基因型为(2.22±0.65) mg/d,VKORC1 1639 GG+GA基因型为(4.76±1.25) mg/d,AA基因型为(2.62±0.79) mg/d。结论 CYP2C9和VKORC1基因多态性会影响川东北地区汉族肺栓塞患者华法林的剂量,CYP2C9和VKORC1基因多态性的检测结果可为肺栓塞临床治疗调整华法林剂量提供依据。     

CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法林剂量的关系

【摘要】 目的 探索CYP2C9和VKORC1基因多态性与川东北汉族患者华法林维持剂量的关系。方法 采用荧光染色原位杂交测序法,对100例服用华法林的川东北地区汉族患者CYP2C9、VKORC1基因型进行检测并随访,评估CYP2C9、VKORC1对华法林剂量的影响。结果 100例服用华法林达维持剂量的患者中,CYP2C9 1075基因中AA型为890%,AC型为110%,CC型为0;VKORC1 1639基因中GG 型为20%,AA型为860%,GA型为120%。各基因型所需的华法林剂量：CYP2C9 1075 AA基因型为（305 ± 087） mg/d,AC基因型为（213 ± 054）mg/d,VKORC1 1639 GG + GA基因型为（490 ± 122）mg/d,AA基因型为（258 ± 065）mg/d。不同基因型的华法林维持剂量两两相比,均具有统计学意义（P＜ 005）。结论 CYP2C9和VKORC1基因多态性会影响川东北地区汉族患者华法林的剂量,检测结果可为临床治疗中调整华法林剂量提供依据。     

基因多态性对川东北患者心脏瓣膜置换术后华法林抗凝疗效的影响

目的探讨川东北地区汉族人群的CYP2C9、VKORC1基因多态性对心脏瓣膜置换术后华法林抗凝疗效的影响。方法选取南充市中心医院2016年8月至2017年8月的心脏瓣膜置换术患者74例,术后口服华法林进行抗凝治疗,记录华法林稳态剂量、国际标准化比值(INR)。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测患者的CYP2C9、VKORC1基因型。结果 CYP2C9(1075 A>C)基因型分布为:AA型89. 19%,AC型10. 81%,无CC型;VKORC1(1639G>A)的基因型分布为:AA型86. 49%,GA型10. 81%,GG型2. 70%。CYP2C9的AC基因型的华法林稳态剂量[(2. 13±0. 52) mg/d]明显低于AA基因型[(2. 74±0. 44) mg/d],差异有统计学意义(P<0. 05); VKORC1的AA基因型的华法林稳态剂量[(2. 90±0. 63) mg/d]明显低于GA[(3. 85±0. 86) mg/d]/GG基因型[(4. 51±0. 69) mg/d],差异有统计学意义(P<0. 05)。结论川东北地区汉族人群CYP2C9(1075 A>C)基因的AC型和VKORC1(1639G>A)基因的AA型对华法林具有较高的敏感性。因此在华法林敏感型患者的临床用药中应该适当降低华法林剂量,避免出血的风险。     

不同CYP2 C9及GGCX基因型在人工瓣膜置换术后的抗凝效果比较

目的了解不同CYP2C9及GGCX基因型对人工瓣膜置换术后抗凝效果的影响。方法选取2013年1月-2016年12月在该院心脏外科接受心脏瓣膜置换术的患者,采集服药后空腹12 h的外周静脉血3 ml进行CYP2 C9和GGCX基因型检测,收集患者相关临床资料,采用SPSS 21.0软件进行数据分析。结果选取80例患者, CYP2 C9基因型有2 种,包括73例CYP2C9*1*1和7例CYP2C9*1*3 患者;42例GGCX*A*G型和38例GGCX*G*G型患者。两种基因型患者在性别、年龄、体质指数（BMI）、凝血酶原时间（PT）、国家标准化比值（INR）值及达到稳定抗凝效果后的华法林血药浓度差异无统计学意义（p <0.05）,但CYP2C9*1*1 型患者INR首次达标时间>CYP2C9*1*3 型患者（ p=0.013）,CYP2C9*1*1型患者华法林日均稳定维持剂量>CYP2C9*1*3 型患者（p =0.011）,GGCX*A*G 型患者华法林日均稳定维持剂量>GGCX*G*G 型患者（p =0.000）,同时为CYP2C9*1*1 型和GGCX*A*G 型的患者华法林日均稳定维持剂量> 其他3 组（p =0.024）。CYP2 C9基因型（p =0.001）和GGCX基因型是影响患者术后第6天是否能达到治疗窗的影响因素（P =0.032）。结论根据CYP2 C9基因型和GGCX基因型确定个人使用剂量,可提高患者抗凝治疗效果。     

重庆地区人工机械瓣膜置换术后患者VKORC1-1639A/G遗传基因多态性与华法林剂量调整的研究

目的 探讨重庆地区人工机械瓣膜置换术后患者VKORCI-1639A/G基因多态性与华法林剂量和抗凝效果的关系.方法 采用PCR-RFLP技术对100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者VKORC1-1639A/G多态性位点进行检测,计算其基因型和等位基因频率,同时记录患者服药期间的用药剂量.结果 100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者中共筛选到2种等位基因:A和G.等位基因频率分别为92%和8%.,同时VKORC1-1639A/G基因多态性共检测到3种基因型,以AA基因型常见,基因型频率86%,其次为AG和GG型,分别为12%和2%.在达到抗凝指标(1.5～2.0)后,含有等基因G的患者需要的华法林维持剂量[(5.27±0.55)mg]明显高于基因型为AA患者的华法林维持剂量[(2.41±0.75)mg].100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者VKORC1-1639A/G基冈多态性与相应的患者的口服剂量有相关.结论 VKORC1基因多态性与术后扰凝治疗患者华法林维持剂量有关系.     

重庆地区人工机械瓣膜置换术后患者VKORCI-1639A/G遗传基因多态性与华法林剂量调整的研究

目的 探讨重庆地区人工机械瓣膜置换术后患者VKORCI-1639A/G基因多态性与华法林剂量和抗凝效果的关系.方法 采用PCR-RFLP技术对100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者VKORC1-1639A/G多态性位点进行检测,计算其基因型和等位基因频率,同时记录患者服药期间的用药剂量.结果 100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者中共筛选到2种等位基因:A和G.等位基因频率分别为92%和8%.,同时VKORC1-1639A/G基因多态性共检测到3种基因型,以AA基因型常见,基因型频率86%,其次为AG和GG型,分别为12%和2%.在达到抗凝指标(1.5～2.0)后,含有等基因G的患者需要的华法林维持剂量[(5.27±0.55)mg]明显高于基因型为AA患者的华法林维持剂量[(2.41±0.75)mg].100例重庆地区汉族人工机械瓣膜置换术后抗凝治疗患者VKORC1-1639A/G基冈多态性与相应的患者的口服剂量有相关.结论 VKORC1基因多态性与术后扰凝治疗患者华法林维持剂量有关系.     

华法林相关基因CYP2C9、VKORC1、CYP4F2的多态性分布

目的 研究CYP2C9、VKORC1、CYP4F2基因多态性在陕西省宝鸡地区汉族人群中的分布情况,为华法林个体化用药提供遗传依据。方法 选取2022年1月至2023年5月在宝鸡市中医医院心内科接受华法林治疗并进行相关基因检测的住院患者475例,采用飞行时间质谱仪对华法林药物相关基因CYP2C9、VKORC1、CYP4F2分别进行检测,然后对检测结果的基因多态性进行分析。结果 华法林药物相关各基因分布频率符合Hardy-Weinberg equilibrium规律,475例患者VKORC1基因型分别是AA型、AG型、GG型,基因频率分别为83.79%,15.58%,0.63%;CYP2C9基因型分别是*1/*1型、*1/*3型、*1/*2型,基因频率分别为95.17%,4.74%,0.11%,未检出*2/*2、*2/*3、*3/*3基因型;CYP4F2基因型分别是*1/*1型、*1/*3型、*3/*3型,基因频率分别为52.40%,39.37%,8.21%。各基因型分布在患者不同性别、年龄之间无统计学差异。结论 陕西宝鸡地区汉族人群华法林药物基因VKORC1(c.-1639G>A)...     

Extremely low warfarin dose in patients with genotypes of CYP2C9*3/*3 and VKORC1-1639A/A

Background  Patients with the genotypes of both CYP2C9*3/*3 and VKORC1-1639 A/A are expected to require the lowest dose of warfarin, and to have a greatly increased risk of bleeding. The experience for the dosing of warfarin in such extremely rare cases has been seldom reported.

Methods  Demographic and clinical data from two cases with stable low dose of warfarin in China were studied by resequencing the corresponding gene segments in their whole blood DNA. The potential clinical value of the pharmacogenetic algorithm for them was evaluated by calculating the stable dose of warfarin in pharmacogenetic algorithm developed by International Warfarin Pharmacogenetics Consortium. 

Results  Both cases (68-year-old female and 50-year-old male) were diagnosed as chronic nonvalvular atrial fibrillation needing warfarin treatment, with target international normalized ratio (INR) 2 to 3. Case 1 had stable warfarin dose of 0.625 mg/d and case 2 1.25 mg/d. They needed more than 1 month to stabilize their anticoagulation. Exceeding INR values were recorded for them when the dose of warfarin was no more than 2 mg/d. Hemorrhagic complication appeared in case 1 when the dose was titrated from 2.5 to 1.25 mg/d. No concomitant medicine to increase or decrease the INR value was recorded for them. Genotyping CYP2C9 and VKORC1 showed both patients were the carriers of the homozygous alleles–CYP2C9*3/*3 and VKORC1-1639 A/A. Their stable doses of warfarin calculated by the pharmacogenetic dose algorithm (0.672 mg/d for case 1 and 1.16 mg/d for case 2) were comparable with their actual stable therapeutic doses. 

Conclusions  Two Chinese with the rare genotypes of both CYP2C9*3/*3 and VKORC1-1639 A/A were found to require the extremely low dose of warfarin. The pharmacogenetic algorithm incorporating the variances of VKORC1 and CYP2C9 genotypes, as well as the non-genetic factors could predict their stable dose of warfarin with high accuracy.

     

Factors affecting warfarin dose requirements and quality of anticoagulation in adult Egyptian patients: role of gene polymorphism

Background

Warfarin is the mainstay of anticoagulation therapy worldwide. CYP2C9 and VKORC1 are two major genetic factors associated with inter-individual and inter-ethnic variability in the warfarin dose.

Aim

This study aims to assess the impact of VKORC1–1639G>A polymorphism and the most common CYP2C9 variant alleles (*2 and *3) on warfarin response in Egyptian patients.

Methods

Genetic analysis of VKORC1–1639G>A and CYP2C9*2, CYP2C9*3 was performed using real-time PCR system. Patients maintained on a constant dose targeting an international normalized ratio range of 2–3.5 for at least three consecutive times were considered as good candidates. A stepwise linear regression analysis was used to determine the independent effects of genetic and non-genetic factors on daily warfarin dose requirements.

Results

Patients carrying VKORC1 and CYP2C9 variant genotypes needed a 44.8 % lower mean daily warfarin dose as compared to wild types. Patients with G allele for VKORC1–1639G>A had a significantly higher number of thromboembolic complications per month during therapy. On the first 30 days of therapy, presence of a variant allele either in VKORC1 or in CYP2C9 was associated with increased time required to achieve stable dosing. Multiple regression analysis showed that, VKORC1–1639G>A, age, CYP2C9*3, and smoking status explained 43.4 % of the overall variability in the warfarin dose.

Conclusion

VKORC1–1639G>A and CYP2C9 polymorphisms contribute to the difference in warfarin dose requirements and quality of anticoagulation amongst Egyptian patients. Study results support using personalized warfarin treatment in Egyptian patients.     

高原人群CYP2C9和VKORC1基因多态性及其与华法林用药剂量的相关性研究

目的 探讨高原人群基于中国人群华法林用药剂量计算公式（PRC模型）和国际华法林遗传药理学协会推荐的亚裔人群华法林剂量计算公式（IWPC模型）两种模型预测剂量的准确性及其临床应用价值。方法 回顾性分析曲靖市第一人民医院2016年10月—2020年1月375例行华法林代谢基因多态性检测患者的临床资料。通过qRT-PCR检测CYP2C9和VKORC1基因多态性,记录患者基本信息和临床用药情况,采用两种模型计算预测剂量并分析其与维持剂量［国际标准化比值（INR）稳定维持在2.0～3.0范围内时所服用的华法林剂量］的相关性,评估两模型预测的准确性。结果 在实际治疗过程中患者是否选择服用华法林进行抗凝,通常与患者的性别、身高、吸烟史、是否合并房颤、是否注射低分子肝素钙无关,而与患者年龄、体重、体表面积（BSA）、初INR、是否置换主动脉瓣膜、是否服用阿司匹林、利伐沙班或氯吡格雷相关。375例患者CYP2C9和VKORC1基因频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,其中CYP2C9基因*1/*1（AA）、*1/*3（AC）及*3/*3（CC）基因型频率分别为93.07%（349/375）、6.93%（26/375）和0.00%（0/375）,VKORC1-1639基因AA、AG和GG基因型频率分别为82.66%（310/375）、16.27%（61/375）和1.07%（4/375）。无论是使用PRC还是IWPC模型,除CYP2C9*1/*1 & VKORC1AA（n =289）组与CYP2C9*1/*3 & VKORC1AG（n =5）组预测剂量的差异无统计学意义（P >0.05）外,其他所有基因型组预测剂量两两比较均有差异（P <0.05）。在收集到维持剂量的174例患者中,CYP2C9*1/*1 & VKORC1 AG和CYP2C9*1/*1 & VKORC1 GG组维持剂量分别为［（3.41±1.01）mg,n =30］和［（4.75±0.35）mg,n =2］,均高于CYP2C9*1/*1 & VKORC1 AA组［（2.59±0.73）mg,n =136］（P <0.05）;CYP2C9*1/*3 & VKORC1 AA组维持剂量为［（2.00±0.53）mg,n =5］,低于其他基因型组合（P <0.05）。PRC和IWPC模型预测准确性分别为72.99%（127/174）和62.64%（109/174）;Pearson相关系数（r₁ =0.546,r₂ =0.567）;决定系数（R₁²=0.298,R₂²=0.322）。两个模型预测剂量间无差异（r =0.839,P >0.05）。结论 携带CYP2C9*3等位基因的患者对华法林更敏感,所需华法林剂量较低,而携带VKORC1-1639 G等位基因的患者需要更高剂量的华法林才可以获得有效的抗凝疗效。基因组学预测剂量可为临床使用华法林剂量提供依据,提高抗凝治疗的安全性和有效性。     

云南地区汉族人群CYP2C9和VKORC1基因多态性研究

目的 了解CYP2C9和VKORC1基因单核苷酸多态性在云南汉族人群中的频率分布.方法 采用电化学基因传感器法对202例样本的CYP2C9(430C> T、1075A>C和1080C>G)位点及 VKORC1(-1639G>A和1173C> T)位点基因多态性进行检测,统计其等位基因频率和基因型频率,并与相关人群的基因多态性分布进行分析.结果 202份样本中共检测到CYP2C9*2位点C/C基因型202例(100.0%),等位基因C频率为100.0%;CYP2C9*3位点A/A基因型185例(91.6%),A/C基因型15例(7.4%),C/C基因型2例(1.0%),等位基因 A频率为95.3%,C为4.7%;CYP2C9*5位点C/C基因型202例(100.0%),等位基因 C 频率为100.0%;VKORC1的 -1639G > A 位点 A/A 基因型145例(71.8%),G/A 基因型57例(28.2%),等位基因A频率为85.9%,G为14.1%;1173C> T位点T/T基因型145例(71.8%),C/T基因型57例(28.2%),等位基因T频率为85.9%,C为14.1%.结论 云南汉族人群CYP2C9基因和我国其他地区汉族人群的分布一致;VKORC1基因与国外人群、我国汉族和部分少数民族的基因分布有较大区别.     

CYP2C18基因多态性对瓣膜置换术后服用华法林剂量的影响研究

目的 探讨云贵高原汉族人群细胞色素P450 (CYP) 2C18、维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)、CYP2C9的基因型分布情况及其基因多态性与华法林稳定剂量的相关性.方法 以2011年1月至2014年1月在该院行瓣膜置换术后持续服用华法林抗凝治疗的云贵高原汉族患者176例为研究对象,采集静脉血检测各位点基因型,分析基因型及等位基因频率分布,以及基因多态性与华法林稳定剂量的相关性.结果 各位点基因型及等位基因频率分布均符合Hardy-Winberg遗传平衡(P＞0.05);CYP2C18(rs7896133)、VKORC1 (rs9923231)、CYP2C9(rs1057910)、CYP2C9 (rs4086116)基因位点的基因多态性与华法林稳定剂量相关(P＜0.05).结论 云贵高原汉族患者CYP2C18(rs7896133)、VKORC1(rs9923231)、CYP2C9(rs1057910)、CYP2C9(rs4086116)基因多态性可能是华法林稳定剂量个体差异的影响因素.     

CYP4F2基因多态性对心脏机械瓣膜置换术后患者华法林初始剂量的影响

  目的  研究细胞色素P-450 4F2（CYP4F2）基因多态性对心脏机械瓣膜置换术后患者华法林初始剂量的影响。  方法  收集2013年1月?2015年12月期间于我院心脏外科接受心脏机械瓣膜置换术后需服用华法林的患者350例,华法林剂量术后初始阶段国际标准化比值（INR）≥2的患者称为达标组,INR<2的患者称为非达标组。留取血样标本检测每位患者的CYP4F2基因型,分析CYP4F2基因多态性对心脏机械瓣膜置换患者术后华法林初始剂量（心脏机械瓣膜术后5～10 d患者住院期间的平均每日剂量）的影响。  结果  本研究发现在所有患者人群中,不同CYP4F2基因型患者间华法林的初始剂量差异无统计学意义;但在INR达标组的患者中,CYP4F2 TT基因型患者的华法林初始剂量高于CYP4F2 CC基因型患者〔（3.37±0.68） mg vs.（2.94±0.74） mg,P<0.05〕;同基因型患者,INR未达标组CYP4F2 CC〔（4.02±0.58） mg vs.（2.94±0.74） mg〕和CYP4F2 CT基因型〔（4.15±0.88） mg vs.（3.18±0.82） mg〕患者华法林的初始剂量大于INR达标组患者（P<0.05）。纳入性别,年龄,体质量指数（BMI）,合并疾病（高血压,糖尿病,冠心病,房颤）,细胞色素P-450 2C9（CYP2C9）、CYP4F2和维生素K过氧化物还原酶复合体1（VKORC1）基因多态性以及INR达标与否等因素进行多元线性回归分析,回归方程为:华法林初始剂量（mg）=?8.634+0.352×BMI（kg/m2）+1.102×CYP4F2基因型（CC或CT取值1,TT取值2）+2.147×VKORC1（AA或AG取值1,GG取值2）+1.325×INR（达标取值0,不达标取值1）,回归方程的决定系数 R2=0.431（P<0.05）。  结论  CYP4F2基因多态性对心脏机械瓣膜置换术后患者的华法林初始剂量有影响,同时该作用也受机体特征和其他因素的影响。     

血栓性疾病个体化用药指导基因芯片试剂盒的制备和效果评价

目的：探讨血栓性疾病（TD）个体化用药指导基因芯片的制备过程,阐明一种快速、高通量检测氯吡格雷和华法林药物代谢基因的方法。方法：根据氯吡格雷药物代谢基因位点（CYP3A4、CYP2C19*17、CYP2C19*2和CYP2C19*3）和华法林药物代谢基因位点（CYP4F2*3、GGCX、VKORC1-2、VKORC1-1、CYP2C9*2和CYP2C9*3）设计相应的探针和引物,制备TD个体化用药指导的基因芯片检测试剂盒。经过DNA提取、PCR扩增、杂交、洗脱和扫描等步骤对基因芯片的灵敏性、重复性和稳定性进行评价。收集3个地区的150例TD受试者样本并进行药物代谢基因检测,以受试者在临床中接受的用药指导及6个月后患者的疾病恢复情况为依据,评价基因芯片试剂盒的有效率。结果：基因芯片检测2种药物的代谢基因均出现良好的杂交信号;芯片检测PCR扩增产物的最低检测浓度为10³ copies·mL^-1;对不同批次的3张芯片及同一批次的10张芯片进行平行测定,符合率为100%;芯片具有稳定性,有效期长达6个月;来源于3个地区的150例TD样本验证基因芯片检测试剂盒的有效率在90%以上。结论：成功制备了高通量检测氯吡格雷和华法林药物代谢基因的TD个体化用药指导基因芯片试剂盒,该方法灵敏度高,重复性好,稳定性强,制备效果优良。