原癌基因在大鼠心肌梗死的表达及福辛普利的干预作用

目的 探讨大鼠心肌梗死（MI）时原癌基因的表达及幅辛普利对其影响。方法 用冠状动脉结扎法制成大鼠MI模型，分假手术组、梗死模型组、幅辛普利小剂量组、福辛普利大剂量组。在MI后24h和4w剪取心肌标本，用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）测定原癌基因c-myc、c-fas、c-jun的mRNA表达。结果 大鼠M124h后：c-myc、c-fos、c-jan高表达，福辛普利能抑制其表达。大鼠M14w后：c-myc、c-fos、c-jun的表达基本停止，福辛普利对其表达无明显影响。结论 原癌基因在AMI的早期有高表达，血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）对其有明显抑制作用，AMI后尽早应用ACEI对防治心室重构具有重要意义。     

大鼠心肌梗死后的原癌基因表达

目的本实验旨在探讨心肌梗死后左心室重构的分子生物学机制。方法用地高辛标记的原位杂交方法观察了大面积心肌梗死后存活心肌细胞的原癌基因c-myc。c-fos及c-jun的mRNA水平的动态变化，并用巯甲丙脯酸进行干涉。大鼠随机分为三组：（1）单纯心肌梗死组；（2）梗塞给药组；（3）假手术组。梗塞给药组于手术前3d开始饲以巯甲丙脯酸（2g／L）。结果左室非梗塞区心肌的c-myc，c-fos及c-jun的mRNA水平手术后24h达峰值，c-myc于手术后10d，c-jun于手术后7d恢复到假手术组水平，但c-fos于术后持续高表达。在梗塞给药组，c-myc，c-fos于手术后7d、10d，c-jun于手术后各时间点其mRNA水平达假手术组程度。结论上述基因在非梗塞区心肌均有过量表达，持续时间较长，转换酶抑制剂对其有所抑制。     

胰岛素样生长因子Ⅱ与胃癌细胞SGC7901 c-fos和c-jun表达的关系

目的:探讨胰岛素样生长因子Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)与胃癌细胞SGC7901 c-fos和c-jun表达的关系.方法:体外细胞培养,分别用MTT法和免疫组织化学以及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测不同浓度IGF-Ⅱ(0,10,50,100 mg/L)作用胃癌细胞后细胞的增殖率和c-fos和c-jun蛋白及mRNA的表达情况.结果:IGF-Ⅱ作用于细胞SGC7901的增殖效应呈浓度和时间依赖性:随着药物浓度的升高,c-fos和c-jun蛋白,mRNA表达均增加.在IGF-Ⅱ10,50,100 mg/L时,c-fos和c-jun蛋白分别为41.32±1.28 mg/L,50.43±0.57 mg/L,64.22±1.76 mg/L;52.00±0.67 mg/L,63.20±0.95 mg/L,76.31±1.16 mg/L;c-fos,c-jun mRNA与GAPDH mRNA比值分别为0.316±0.021,0.392±0.0357,0.478±0.028;0.379±0.006,0.412±0.022.0.494±0.048,均与相应对照组(30.00±1.01 mg/L,41.14±2.02 mg/L,0.220±0.037,0.290±0.064)相比有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论:胰岛素样生长因子Ⅱ可能通过旁分泌上调c-fos和c-jun的表达而诱导胃癌细胞增殖.     

地尔硫(艹卓)对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察地尔硫(Dil)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法将组织贴块法培养的大鼠胸主动脉VSMC随机分为5组,即空白组、模型组和地尔硫1、2、3组(浓度分别为10-5、10-6、10-7mol/L),应用MTT检测VSMC的增殖能力,用流式细胞术检测细胞周期构成比和增殖指数。结果各浓度的Dil都能抑制VSMC增殖(P<0.05);使VSMC的G0/G1期构成比显著升高(P<0.05);细胞增殖指数(PI)值均显著下降(P<0.05)。结论Dil具有抑制VSMC的增殖的作用。     

Hp感染与胃癌和癌前病变中p53、ras、c-myc基因表达的关系

目的研究幽门螺杆菌（Hp）感染与胃癌（GC）和癌前病变中p53、ras、c-myc基因表达的关系,以探讨其致病机制。方法用美兰和W-S特殊染色方法确定Hp感染,免疫组化SP法检测p53、ras、c-myc基因的表达。结果慢性萎缩性胃炎（CAG）、肠化生（IM）、异型增生（DYS）、GC的Hp感染率均高于慢性浅表性胃炎（CSG）（P均〈0.05）;p53、ras、c-myc基因在GC、DYS中的表达均高于CAG（P均〈0.05）,p53、ras基因在IM中的表达均高于CAG（P〈0.05）;IM中Hp阳性者的p53阳性表达率高于Hp阴性者（P〈0.05）,DYS、GC中Hp阳性者p53、ras、c-myc的表达率高于Hp阴性者（P均〈0.05）。结论Hp感染可能通过调节p53、ras、c-myc基因的表达而促进GC的发生。     

低分子壳聚糖季铵盐对血管平滑肌细胞增殖的影响及作用机制

目的探讨低分子壳聚糖季铵盐（LMTC）对血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响及机制。方法取体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞,采用结晶紫染色、透射电镜、MTT法、流式细胞仪及Western blot法分别观察LMTC对VSMCs形态、增殖、周期及对原癌基因c-fos、c-myc表达的影响。结果 LMTC可呈浓度依赖性（10、50、100 mg/L）地抑制20%小牛血清所致平滑肌细胞增殖;LMTC 100 mg/L可使原癌基因c-fos及c-myc的表达减少。结论 LMTC可呈浓度依赖性地抑制VSMCs增殖,其机制可能为抑制原癌基因的表达。     

微小RNA-223及其标靶基因c-myc在肝癌发病中的作用

目的 探讨微小RNA-223(miR-223)对原癌基因c-myc的调控及其在肝癌发病中的作用.方法 通过实时定量聚合酶链反应和Western blot检测正常肝脏组织、癌旁组织、肝癌组织及肝癌HepG2细胞、胎肝L02细胞中miR-223和c-myc的mRNA和蛋白质表达水平.构建miR-223模拟物(mimics)上调肝癌细胞HepG2中miR-223表达后,实时定量聚合酶链反应和Western blot 检测HepG2细胞中c-myc表达水平的变化.分别用独立样本t检验和单因素方差分析进行两组及多组数据间的比较,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 miR-223在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.055±0.015、0.030±0.008和0.020±0.016,肝癌组织低于正常肝组织(t=-0.031,P＜0.05).miR-223在HepG2细胞中的表达较L02细胞下调(0.005±0.003比0.011±0.006,t=12.74,P＜0.01).c-myc mRNA在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.029±0.023、0.136±0.071和0.425±0.026,肝癌组织高于正常肝组织(t=-0.317,P＜0.05);c-myc蛋白在正常肝组织、癌旁组织和肝癌组织中的相对表达量分别为0.137±O.015、0.299±0.033和0.439±0.027,差异有统计学意义(F=103.35,P＜0.01).miR-223 mimics转染HepG2细胞后,c-myc蛋白在空白组、转染组和阴性对照组的相对表达量分别为0.423±0.041、0.116±0.015和0.432±0.034,转染组较其他两组明显降低(F=94.93,P＜0.05).结论 miR-223在肝癌组织中表达下调,丧失其对c-myc表达的抑制而导致c-myc异常高表达可能是肝癌发生的重要机制.

Abstract：

Objective To investigate the regulatory role of microRNA-223 (miR-223) on c-myc and its role in hepatocarcinogenesis.Method miR-223 and c-myc mRNA expressions in normal tissue,paraneoplastic tissue,liver cancer tissue and liver cancer cells were tested with microRNA microarray and quantitative real-time PCR (qRT-PCR).C-myc protein expression was detected by Western blot.MiR-223mimic was transfected into HepG2 cells and the expression changes of c-myc mRNA and protein were tested with qRT-PCR and Western blot respectively.Results MiR-223 was down-regulated by 61.53% and 30.77% respectively in hepatocellular carcinoma and adjacent tissues as compared to normal liver tissues and the expression of miR-223 was also decreased in HepG2 cell as compared to fetal liver cells L02,whereas the expressions of c-myc mRNA and protein increased in paraneoplastic and HCC tissues compared with normal liver tissues.It prompts that the expressions of miR-223 and c-myc are negatively correlated.No obvious difference found among c-myc mRNA expressions after miR-223 mimics transfection.Conclusions The cmyc abnormal high-expression may play a dynamic role in hepatocarcinogenesis due to the miR-223 downregulation.     

扩张压力对兔颈外静脉桥c-myc和c-fos基因mRNA表达的研究

目的：对比不同扩张压力对兔颈外静脉桥c-myc和c-fos基因mRNA表达的影响。方法 在兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型上以原位杂交方法检测不同扩张压力：（50mmHg，100mmHg和200mmHg）对静脉置入动脉之间后早期c-myc基因和c-fos基因mRNA的表达。结果 正常静脉未见c-myc基因和c-fos基因mRNA表达。移植后30分钟，50mmHg组静脉桥血管壁未见或偶见c-myc、c-fos mRNA的表达信号；而在100mmHg和200mmHg组，c-myc、c-fos mRNA强烈表达。结论：50mmHg的扩张压力对c-myc、c-fos mRNA表达几无影响：100mmHg和200mmHg组的表达强烈。三组c-myc、c-fos mRNA的表达的差异与静脉桥再狭窄程度的差异相对应，提示扩张压力影响静脉桥再狭窄可能通过激活c-myc、c-fosmRNA的表达始动。     

雷公藤甲素对哮喘大鼠气道平滑肌增生及c-fos与c-jun表达的影响

目的：探讨雷公藤甲素（TL）对哮喘大鼠气道平滑肌（ASM）增生及原癌基因c-fos与c-jun基因表达的影响。方法：选择70只雄性SD大鼠随机分为7组，每组10只，采用卵蛋白腹腔注射及雾化吸入制成大鼠哮喘模型，采用志录－聚合酶链反应（RT－PCR）法检测各组的c-fos与c-jun的mRNA表达水平，同时用免疫组化方法检测c-fos与c-jun蛋白表达水平，并在光镜下观察支气管壁厚度（WA／Pi)，支气管平滑肌厚度（平滑肌面积／Pi)，支气管平滑肌细胞核数量（N／Pi)及肺组织形态学改变，结果：RT－PCR和免疫组化均显著哮喘组（A组），治疗组（C，D，E，F，G组）c-fos与c-jun的mRNA和蛋白表达与对照组（B组）比较，差异有显著性（P＜0．01）；各治疗组的表达与A组比较差异也有显著性（P＜0．01），而各治疗组之间比较差异无显著性（P＞0．05），是结果显示，TL减轻ASM的增生。结论：ASM增生肥厚是哮喘的一个显著特征，c-fos及c-jun可能在此起着促进作用，TL通过下调c-fos和c-jun表达而起抑制ASM增生作用。     

三元复合因子Net对人胰腺癌细胞株BxPC3增殖的影响

目的研究三元复合因子Net转染人胰腺癌细胞株BxPC后的表达状态及对原癌基因c—fos表达的影响。方法采用脂质体2000将重组人pEGFP—Net质粒和空质粒pEGFP转染人胰腺癌BxPC3细胞株,建立稳定高表达Net的细胞系。应用MTT、流式细胞仪等方法检测胰腺癌细胞的增殖,应用实时定量PCR和Western blotting检测Net及c—fos mRNA和蛋白的表达。结果BxPC3细胞低表达Net,转染pEGFP-Net后稳定高表达Net,并抑制c-fos的表达。转染pEGFP—Net的细胞生长缓慢,转染后第3、5、7天的抑制率分别为38．8％、55．3％、56．9％,显著高于空质粒转染组的5．1％、12．4％、8．6％（P〈0．05）;G0／G1期细胞占（61．8±5．7）％,显著高于空质粒转染组的（45．1±3．4）％。结论三元复合因子Net能抑制人胰腺癌BxPC3细胞的增殖,其机制可能与抑制c—fos表达有关。     

Gax基因双向调节低氧性肺动脉内皮细胞增殖及影响HIF-1α基因表达的研究

目的观察Gax基因对低氧性肺动脉内皮细胞（PAECs）增殖和低氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因表达的影响,为进一步研究Gax基因调节低氧性肺动脉高压（HPH）的作用与机制奠定基础。方法取大鼠肺动脉,用酶消化法获取PAECs并进行原代培养;PAECs分4组：未转染常氧对照组（常氧组）、未转染低氧处理组（低氧组）、Ad—SGal转染再行低氧处理组（Ad—SGal＋低氧组）、Ad—Gax转染再行低氧处理组（Ad—Gax＋低氧组）。分别在常氧（21％O2）和低氧（2．5％O2）1h、3h、6h和12h各时相点,采用3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入法检测PAECs增殖;使用RT—PCR和Weatern blot方法分别检测PAECs中HIF-1α mRNA和蛋白表达水平。结果①PAECs的3H-TdR掺入量：与常氧组同时相点比较,低氧组和Ad—pGaJ＋低氧组均显著升高（P均〈0．01）,在低氧6h达最大值;Ad．Gax＋低氧组与常氧组同时相点比较均显著升高（P均〈0．01）,但与低氧组比较却均明显降低（P〈0．01、P〈0．05）,到低氧6h降幅最大;②在低氧处理6h,与常氧组比较,低氧组和Ad—BGal＋低氧组HIF-1α mRNA和蛋白表达均明显上调;与低氧组或Ad—BGal＋低氧组比较,Ad—Gax＋低氧组HIF-1α mRNA和蛋白表达皆显著下调,差异有统计学意义（P〈0．05、P〈0．01）。低氧早期内皮细胞异常增殖加速,而此时增强Gax基因的表达可抑制细胞的异常增殖;随着低氧时间的不断延长,细胞增殖受到抑制,而此时增强内皮细胞中Gax基因表达却又促进细胞增殖,以此来维持细胞的数量。结论Gax基因对维持内皮细胞数量的稳态具有双向调节作用。增强Gax基因的表达能下调低氧诱导的HIF-1α mRNA和蛋白表达,这可能与Gax基因抑制低氧性内皮细胞异常增殖的机制相关。     

瓜蒌皮提取物对PDGF-BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响

目的 研究瓜蒌皮提取物对血小板源生长因子BB所致血管平滑肌细胞增殖周期的影响并探讨其可能机制.方法 组织块贴块法培养SD大鼠胸主动脉平滑肌细胞,3H-TdR掺入观察瓜蒌皮提取物(10、20和30mg/L)对血小板源生长因子BB(20 μg/L)所致血管平滑肌细胞DNA合成的影响;流式细胞仪分析细胞增殖周期;real time RT-PCR检测血管平滑肌细胞中c-fos、c-myc mRNA表达.结果 血小板源生长因子BB可明显升高细胞每分钟脉冲数(P＜0.01),并增加S期细胞比例而降低G0/G1期细胞比例(P＜0.01),并上调c-fos、c-myc mRNA表达(P＜0.01).瓜蒌皮提取物各浓度组均明显抑制血小板源生长因子BB诱导的每分钟脉冲数升高(P＜0.01),降低S期细胞比例而升高G0/G1期细胞比例,明显下调血小板源生长因子BB所致的c-fos、c-myc mRNA高表达(P＜0.01).结论 瓜蒌皮提取物通过阻止血管平滑肌细胞由G0/G1期进入S期而抑制血小板源生长因子BB所致的增殖,其作用机制可能与降低细胞内c-fos、c-myc mRNA高表达有关.     

厄贝沙坦对心肌梗死后大鼠心肌组织因子和组织因子途径抑制物的影响

目的观察大鼠心肌梗死后心肌组织因子（TF）和组织因子途径抑制物（TFPI）的mRNA表达及厄贝沙坦对其的影响。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支建立大鼠急性心肌梗死模型组,另设假手术组（20只）。模型组术后24h存活大鼠随机分为安慰剂组（20只）和厄贝沙坦组（50mg·kg^-1d^-1,20只）。用药4周后处死各组大鼠并分别称其心室重量,计算左心室重量指数及心肌梗死面积,应用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测心肌TFmRNA和TFPImRNA。结果模型组左心室重量指数大于假手术组（F=7．83,P〈0．05）。模型组内药物组左心室重量指数明显低于安慰剂组（F=8．96,P〈0．05）,心肌梗死面积比较差异无统计学意义（F=0．96,P〉0．05）;模型组TFmRNA、TFPImRNA表达均高于假手术组（F：8．24,P〈0．05）,其中药物组＇IFmRNA较安慰剂组明显降低（F=8．57,P〈0．05）,药物组TFPI mRNA较安慰剂组增加（F=1．35,P〉0．05）。结论大鼠心肌梗死后心肌TF mRNA、TFPI mRNA表达均明显增高。厄贝沙坦可显著降低心肌梗死大鼠心肌TF mRNA的表达。     

腹腔脂肪组织脂肪细胞因子mRNA表达与新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病的相关性研究

目的 探讨腹腔脂肪组织脂肪细胞因子mRNA表达与新疆维吾尔族肥胖及T2DM的相关性。 方法 选取腹部择期手术的维吾尔族患者114例,分为正常对照（NC） 组50名,肥胖 （Ob） 组48例和T2DM组16例,术时取网膜脂肪组织,采用RT-PCR方法检测各组APN、TNF-α、MCP-1 mRNA表达情况。 结果 NC组APN高于Ob、T2DM组,TNF-α低于Ob、T2DM组,MCP-1低于T2DM组（P〈0.05）。APN mRNA相对拷贝数与BMI、DBP、FPG、TG、LDL-C水平及TNF-α、MCP-1表达量呈负相关（P〈0.05）。TNF-α mRNA相对拷贝数与BMI、FPG、TG呈正相关（P〈0.05）。MCP-1 mRNA相对拷贝数与体重、BMI、WC呈正相关（P〈0.05）。 结论 腹腔脂肪组织脂肪细胞因子APN、TNF-α、MCP-1 mRNA异常表达可能是新疆维吾尔族肥胖及T2DM发生的危险因素。     

S-腺苷蛋氨酸对活化人肝星状细胞增殖和凋亡的影响

背景:肝星状细胞(HSCs)的活化是肝纤维化发生的中心环节。S-腺苷蛋氨酸(SAM)是机体最重要的甲基供体,既往研究表明SAM具有一定的抗纤维化作用,能抑制HSCs的活化。目的:观察SAM对活化人肝星状细胞株LX-2增殖、凋亡的作用及其相关机制。方法:用不同浓度SAM培养LX-2细胞24 h,采用CCK-8法检测SAM对LX-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,实时定量PCR法检测cyclin D1 mRNA表达,蛋白质印迹法检测α-SMA蛋白表达。结果:与对照组相比,3.0~8.0 mmol/L SAM能抑制LX-2细胞增殖,并呈剂量依赖性(P0.05);2.0、4.0 mmol/L组G1/G0期细胞比例显著降低(P0.05),S期细胞比例显著升高(P0.05);4.0、8.0 mmol/L组早期凋亡率和总体凋亡率显著升高(P0.05);2.0、4.0 mmol/L组cyclin D1 mRNA表达显著升高(P0.05);1.0、2.0、4.0 mmol/L组α-SMA蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:SAM能抑制LX-2细胞增殖,其机制可能通过上调cyclin D1的表达而使细胞周期阻滞于S期;同时,SAM能诱导LX-2细胞的凋亡,并下调α-SMA的表达。     

促红细胞生成素促心肌细胞肥大的实验研究

目的观察促红细胞生成素（Erythropoietin,Epo）对离体乳鼠心肌细胞肥大形态学及分子生物学表现的影响。方法（1）新生大鼠原代心肌细胞分为空白对照、AngⅡ1×10^-6M和Epo10U／ml干预组,取24h、48h和72h三个时间点固定细胞,cTnI免疫组化染色,比较各组细胞面积;（2）RT．PCR法检测比较空白对照和Epo10U／ml干预30min c-los mRNA和2hANP和BNPmRNA表达;（3）Western blot检测Epo10U／ml刺激p-ERK表达的时间变化。4）Western blot检测不同浓度Epo刺激p-ERK表达的差异。结果（1）AngⅡ和Epo刺激均使心肌细胞面积增大（P〈0．05,24h、48h和72h,AngII组VSCon组;P〈0．05,48h和72h,Epo组VSCon组）;（2）Epol0U／ml干预组心肌细胞30minc．fosmRNA表达量与对照组相比差异不明显,2hANP mRNA和BNP mRNA表达量和对照组相比,明显升高（P〈0．05）;（3）Western blot结果显示,Epo干预心肌细胞后P—ERK2表达随时间出现先升高后下降的变化,30min时达到高峰,与干预前和干预后120min差别具有统计学意义（P〈0．05,30minVS0,120min）;（4）随Epo干预浓度增大,P-ERK2表达水平升高（P〈0．05,Epo10U／ml和Epo100U／ml组VS Con组）。Epo刺激p-ERKl表达也出现相同的时间浓度趋势,但各组差别无统计学意义。结论Epo刺激可使心肌细胞表面积增大,促进肥大基因ANP-BNP mRNA表达的升高,并刺激p-ERK出现时间相关性和浓度依赖性表达。