microRNA⁃449a通过调控MDM4抑制神经母细胞瘤生长

目的：研究microRNA?449a（miR?449a）对神经母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法：在BE（2）?C细胞中过表达miR?449a后通过实时荧光定量PCR（quantitative real?time PCR,qPCR）分析基因表达水平的变化,MTT分析细胞活力,克隆形成试验观察肿瘤细胞增殖能力,同时,采用microRNA靶标预测和功能注释数据库miRDB预测miR?449a潜在靶向基因,对靶基因MDM4进行过表达和干扰表达后,Western blot分析相关蛋白表达水平,流式细胞术分析细胞凋亡。结果：miR?449a过表达抑制细胞增殖及克隆形成。经过软件预测和实验验证,证实MDM4为miR?449a的1个靶基因。另外干扰MDM4表达后亦可以抑制细胞增殖和克隆形成。过表达MDM4可以抵消由转染miR?449a模拟物所引起的细胞凋亡和p53蛋白量的增加。miR?449a可以促进BE（2）?C细胞凋亡,但是在稳定干扰p53表达的细胞株没有观察到这种效应。结论：miR?449a通过靶向调控MDM4基因进而稳定p53蛋白从而促进肿瘤细胞凋亡,提示miR?449a可能作为神经母细胞瘤潜在治疗靶标之一。     

miR-376c-3p通过靶向谷氨酸受体相互作用蛋白1影响乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的: 探讨miR-376c-3p在乳腺癌中的表达水平、生物学功能及分子调控机制。方法：通过实时荧光定量PCR检测乳腺上皮MCF-10A细胞及乳腺癌细胞中miR 376c-3p表达水平;然后,用miR-376c-3pmimic转染乳腺癌MCF-7与MDA-MB-231细胞,用平板克隆实验、划痕实验以及Transwell实验分别检测其增殖与迁移能力。利用Starbase数据库预测miR-376c-3p的下游靶基因,并通过蛋白质印迹实验进行验证。结果： 与人乳腺上皮MCF-10A细胞相比,乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中miR-376c-3p表达水平显著降低（P<0.01）;平板克隆实验显示,过表达miR-376c-3p可以显著抑制乳腺癌细胞增殖（P均<0.05）;Transwell实验和划痕实验表明,miR-376c-3p表达上调可抑制乳腺癌细胞迁移能力;通过生物信息学预测分析,结果显示miR-376c-3p可以与谷氨酸受体相互作用蛋白1（glutamate receptor interacting protein 1,GRIP1）结合,且蛋白质印迹实验证实过表达miR-376c-3p可以抑制乳腺癌细胞GRIP1表达,同时波形蛋白表达水平明显下调,E-钙黏蛋白表达明显上调。结论： 在乳腺癌细胞中,miR-376c-3p表达下调;在体外,过表达miR-376c-3p可显著抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,可能通过靶向GRIP1调节乳腺癌细胞上皮间质转化进程。     

miR-222-3p通过靶向调节Bim蛋白表达参与肾细胞癌的发生发展

目的: 检测miR 222 3p在肾细胞癌组织中的表达,探讨其参与肾细胞癌发生发展的分子机制。方法: 运用qRT PCR检测15对肾细胞癌组织和对应癌旁组织miR 222 3p的表达水平。生物信息学预测miR 222 3p的靶基因,荧光素酶报告实验验证其靶向调控作用。运用免疫组化和蛋白质印迹技术检测癌组织中靶基因蛋白表达水平。进一步通过脂质体瞬时转染技术实现肾细胞癌细胞株769 P中miR 222 3p过表达,采用流式细胞术检测miR 222 3p对细胞凋亡的影响。结果： qRT PCR结果显示,miR 222 3p在肾细胞癌组织的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。生物信息学预测显示,抗凋亡蛋白Bim是miR 222 3p潜在的靶基因。荧光素酶报告实验证实,过表达miR 222 3p可抑制含有Bim 3’ UTR的荧光素酶报告基因的荧光素酶活性,但对Bim 3’ UTR突变体的荧光素酶活性没有影响。免疫组化结果显示,肾细胞癌组织中Bim蛋白免疫组化阳性反应程度明显低于相应的癌旁组织（P<0.01）;蛋白质印迹结果进一步证实Bim蛋白在肾细胞癌组织中的表达较癌旁组织明显下调（P<0.01）。进一步在769 P细胞中瞬时过表达miR 222 3p后,发现Bim蛋白水平明显下调（P<0.01）,但Bim mRNA水平无明显变化。流式细胞术检测结果显示,过表达miR 222 3p可显著抑制769 P细胞的凋亡（P<0.01）。 结论： miR 222 3p可通过靶向作用于抑癌基因Bim表达抑制肾癌细胞的凋亡,在肾癌的发生发展中起重要作用,miR 222 3p/Bim轴为肾细胞癌治疗提供新的途径。     

miR-200c-3p靶向CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞增殖

目的 预测和验证miR-200c-3p的靶基因并探讨其对肾母细胞瘤增殖的抑制作用。方法 应用生物信息学软件对miR-200c-3p在肾母细胞瘤中的靶基因进行预测,建立SK-NEP-1及G401的miR-200c-3p过表达及抑制表达的稳定细胞系。实验设未转染组（Blank）、模拟物阴性对照组（mimic NC）、miR-200c-3p模拟物组（miR-200c-3p mimic）、抑制剂阴性对照组（inhibitor NC）及miR-200c-3p抑制剂组（miR-200c-3p inhibitor）。采用 RT-PCR及Western blot方法检测CCNE2在SK-NEP-1及G401不同组中的表达水平,荧光素酶报告基因检测miR-200c-3p 和CCNE2的靶向关系,细胞计数盒（CCK-8）和软琼脂克隆形成实验检测miR-200c-3p对SK-NEP-1及G401细胞增殖的抑制作用。结果 生物信息学方法预测CCNE2为miR-200c-3p的靶基因之一。RT-PCR实验结果示肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）;荧光素酶报告基因检测证实CCNE2是miR-200c-3p的靶基因（P<0.01）。Western blot示在肾母细胞瘤细胞中miR-200c-3p模拟物组的CCNE2蛋白的表达水平低于模拟物阴性对照组（P<0.05）;CCK-8和软琼脂克隆形成实验证实miR-200c-3p对肾母细胞瘤细胞的增殖能力有明显抑制作用（P<0.01）;而miR-200c-3p抑制剂组结果相反。结论 miR-200c-3p通过靶基因 CCNE2抑制肾母细胞瘤细胞的增殖。     

长链非编码RNA TTN-AS1靶向miR-134-5p调控乳腺癌细胞的生长和转移

【摘要】目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA) TTN AS1对乳腺癌生长和转移的作用及机制。方法 qRT PCR检测TTN AS1在MDA MB 231、BT 20、SKBR 3、MCF 7、MDA MB 468 5种乳腺癌细胞中的表达水平。乳腺癌细胞转染shRNA抑制TTN AS1的表达,转染后,CCK8检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Transwell小室法检测各组细胞迁移能力,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl 2、Bax、Cleaved Caspase 3、Caspase 3相对表达水平。miRcode数据库预测LncRNA TTN AS1与miR 134 5p的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA TTN AS1与miR 134 5p的靶向关系。乳腺癌细胞中转染shRNA抑制TTN AS1的表达的同时转染miR 134 5p inhibitor抑制miR 134 5p的表达,然后检测细胞增殖、凋亡、迁移能力及凋亡相关蛋白的表达。结果 TTN AS1在5种乳腺癌细胞中均高表达;抑制TTN AS1的表达后乳腺癌细胞的增殖和迁移能力显著下调,细胞凋亡水平显著增加,Bcl 2表达显著下调,Bax、Cleaved Caspase 3显著上调（均P＜005）。miR 134 5p为LncRNA TTN AS1靶基因,抑制TTN AS1表达的同时抑制miR 134 5p表达细胞增殖和迁移能力均显著高于单独抑制TTN AS1组,细胞凋亡水平显著低于单独抑制TTN AS1组,凋亡相关蛋白表达亦呈显著变化(均P＜005)。结论 TTN AS1通过靶向抑制miR-134-5p调控乳腺癌细胞的增殖、凋亡、迁移能力以及凋亡相关蛋白的表达。     

miR-4715-5p通过靶向MUC1基因对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响

目的 分析微小RNA(miRNA,miR)-4715-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平,探讨其高表达对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响及机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-4715-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平。在miR-4715-5p表达水平最低的乳腺癌细胞中,采用体外转染法分别转染对照模拟物(NC)和miR-4715-5p模拟物,分别命名为对照组和实验组。qRT-PCR法检测两组细胞中miR-4715-5p的表达水平。采用细胞划痕实验和细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测高表达miR-4715-5p对乳腺癌细胞迁移和增殖的影响。采用生物信息学软件和双荧光素酶报告基因实验分别预测和验证miR-4715-5p的靶基因。采用qRT-PCR和Western blot法分别检测靶基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果 与癌旁组织比较,乳腺癌组织miR-4715-5p的表达水平显著降低(P<0.01)。与正常乳腺细胞系比较,乳腺癌细胞系miR-4715-5p的表达水平显著降低(P<0.05),MCF-7细胞中的表达水平最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组MCF-7细胞中miR-4715-5p的表达水平显著增加(P<0.01)。高表达miR-4715-5p可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移(P<0.01)和增殖(P<0.05)。miR-4715-5p的靶基因可能是黏蛋白1(mucins 1,MUC1),miR-4715-5p可互补结合MUC1 mRNA(P<0.01)。高表达miR-4715-5p可显著抑制MUC1基因的表达(P<0.01)。结论 miR-4715-5p在乳腺癌组织和细胞系中的表达水平显著降低,高表达miR-4715-5p可通过下调MUC1基因的表达,抑制乳腺癌MCF-7细胞的迁移和增殖。     

脑缺血再灌注模型大鼠miR133b-3p表达及意义

目的: 分析miR133b-3p在大鼠脑缺血再灌注模型中的表达及与靶基因的作用。方法: 将28只成年雄性SD大鼠随机分为脑缺血再灌注组(n=14)和假手术组(n=14),采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型,2 h后拔除线栓,假手术组仅分离肌肉,显露血管;再灌注24 h后行神经行为学评分评估脑梗死严重程度;断头取整个脑组织行TTC染色测定脑梗死体积;脑组织石蜡切片行TUNEL染色检测凋亡细胞数;行实时荧光定量PCR分析miR133b-3p表达量。生物信息学分析寻找凋亡相关的靶基因,双荧光素酶系统验证miR133b 3p与其靶基因的相互作用。结果： 与假手术组相比,脑缺血再灌注组神经行为学评分明显升高(Z=-4.365,P<0.01),脑梗死体积百分率增多,凋亡细胞数明显增多(t=-4.232,P<0.05),miR133b-3p表达量明显降低(t=4.91,P<0.01)。生物信息学显示miR133b 3p与凋亡相关的可能的靶基因为bcl2l2;双荧光素酶靶点验证报告显示,转染miR133b-3p后,bcl2l2野生型相对荧光强度明显下调。结论： miR133b-3p在大鼠脑缺血再灌注损伤模型中表达明显降低,bcl2l2可能是其靶基因。     

hsa-miR-302a-3p靶向VEGFA抑制胃癌细胞增殖的机制研究

目的 探讨过表达hsa-miR-302a-3p下调血管内皮生长因子A（VEGFA）对胃癌细胞SGC-7901存活、运动和上皮间质转化的调节作用。方法 采用细胞转染,将hsa-miR-302a-3p mimic转染于miR组细胞,pc-VEGFA转染于VEGFA组细胞,同时将两个基因共转染于miR+VEGFA组。采用RT-PCR和Western blot检测转染效率,生物信息学靶向预测和荧光素实验验证两个基因靶向关系,采用CCK-8法检测各组细胞增殖,Transwell检测各组细胞侵袭能力,划痕实验检测各组细胞迁移能力,显微镜下观察细胞的形态是否发生上皮间质转化（EMT）,采用Western blot检测各组细胞存活相关蛋白Ki67和Caspase-3、EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Snail以及VEGFA下游靶基因p-P38、p-MAPKAPK和p-Hsp27蛋白表达水平。结果 VEGFA是miR-302a-3p的预测靶位点;与对照组相比,miR组细胞数量、侵袭和迁移率均下降（ P<0.05）,VEGFA组细胞数量、侵袭和迁移率均升高（ P<0.05）;与VEGFA组相比,miR+VEGFA组细胞数量、侵袭和迁移率均下降（ P<0.05）,E-cadherin蛋白表达水平上调（ P<0.05）,Vimentin、N-cadherin和Snail蛋白表达水平下调（ P<0.05）,p-P38、p-MAPKAPK和p-Hsp27蛋白表达水平下调（ P<0.05）。结论 hsa-miR-302a-3p通过抑制VEGFA的表达,抑制胃癌细胞SGC-7901的增殖、侵袭和迁移。     

lncRNA HAND2⁃AS1对子痫前期患者血管内皮细胞的影响

目的：探究lncRNA HAND反义RNA1（HAND2?AS1）、miRNA hsa?miR?520c?3p和整合素亚基β8（integrin subunit beta 8,ITGB8）在子痫前期患者胎盘中表达量的改变以及HAND2?AS1对血管内皮功能的影响和机制。方法：收集25例子痫前期患者胎盘样本和20例匹配的健康产妇胎盘样本,通过荧光定量PCR技术检测HAND2?AS1、hsa?miR?520c?3p和ITGB8的表达量。通过细胞活力、划痕、血管形成和荧光定量PCR实验,观察过表达和敲低HAND2?AS1对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）增殖、迁移和血管形成的影响以及对hsa?miR?520c?3p和ITGB8表达量的影响。结果：与对照组胎盘相比,子痫前期患者胎盘中HAND2?AS1和ITGB8的表达量显著升高,而hsa?miR?520c?3p表达量降低。同时,子痫前期患者的胎盘中,HAND2?AS1的表达量与hsa?miR?520c?3p呈负相关,与ITGB8呈正相关。在HUVEC中过表达HAND2?AS1,HUVEC的增殖、迁移和血管形成能力减弱,同时hsa?miR?520c?3p表达量下降,ITGB8表达增高;敲低HAND2?AS1,结果相反。结论：HAND2?AS1抑制血管内皮增殖、迁移和血管形成能力,其潜在机制可能是通过调控hsa?miR?520c?3p/ITGB8的表达,有望成为子痫前期的治疗靶点。     

miR-1275通过靶向〖STBX〗IGF 1R〖STBZ〗基因对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

【摘要】目的 探讨miR 1275靶向胰岛素样生长因子1受体（IGF 1R）对鼻咽癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 通过在线生物信息学软件预测miR 1275和IGF 1R的靶向关系,采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。Western blot检测转染miR 1275 模拟物（mimics）或抑制物（inhitior）后的鼻咽癌HONE 1细胞IGF 1R表达。MTT法、流式细胞术及Western blot检测miR 1275/IGF 1R分子轴对HONE 1细胞增殖、凋亡及蛋白激酶B（AKT）、磷酸化的蛋白激酶B（p AKT）、细胞增殖核抗原( PCNA)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase 3）表达的影响。结果 HONE 1细胞转染miR 1275 mimics后,miR 1275表达明显升高,细胞增殖活力明显降低,凋亡率明显升高,p AKT和PCNA表达明显降低,cleaved caspase3表达明显升高（P＜005）。miR 1275可靶向作用于IGF 1R并下调其表达。抑制IGF 1R表达可明显降低HONE 1细胞增殖活力,促进细胞凋亡,下调p AKT和PCNA,上调cleaved caspase3表达（P＜005）。抑制miR 1275和IGF 1R表达可逆转IGF 1R对细胞增殖、凋亡及p AKT、PCNA和cleaved caspase3表达的影响。结论 过表达miR 1275可抑制鼻咽癌HONE 1细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制AKT信号途径。IGF 1R是miR 1275的靶基因,miR 1275可靶向IGF 1R并调控AKT信号途径影响鼻咽癌细胞增殖和凋亡,miR 1275/IGF 1R分子轴可能成为鼻咽癌治疗的重要靶点。     

敲降MIR210HG通过调控miR-6838-5p/AIP5轴抑制裸鼠肺癌移植瘤生长并改善肺血管栓塞特征

探讨长链非编码RNA MIR210HG对肺癌移植瘤裸鼠肿瘤生长和肺血管栓塞的影响和机制。方法 用癌症基因组图谱（TCGA）数据库分析MIR210HG在肺癌中的表达。用短发夹RNA（shRNA）构建敲降MIR210HG（shMIR210HG）的肺癌细胞系MDA-MB-231,体外CCK-8实验检测敲降MIR210HG对MDA-MB-231细胞的增殖能力的影响。生物信息学分析MIR210HG与miR-6838-5p的结合关系。荧光素酶报告基因分析微小RNA（miR）-6838-5p与萎缩素相互作用蛋白5（AIP5）的直接作用。动物实验评估敲降MIR210HG对移植瘤裸鼠体内肿瘤生长和裸鼠肺血管栓塞特征的影响。功能回复实验和蛋白免疫印迹实验分析MIR210HG通过miR-6838-5p/AIP5轴调控裸鼠体内肿瘤生长和裸鼠肺血管栓塞。结果 MIR210HG在肺癌组织中高表达（P＜0.05）,并与低存活率呈正相关（P＜0.05）。敲降MIR210HG抑制体外肺癌细胞增殖和裸鼠体内肿瘤的生长（均P＜0.05）,敲降MIR210HG改善裸鼠肺动脉炎性浸润,明显减少肺评分、降低裸鼠的右心室收缩压（RVSP）、血清TNF-α和IL-6的水平（均P＜0.05）。生信分析预测MIR210HG与miR-6838-5p具有多个结合位点,且shMIR210HG促进miR-6838-5p的表达（均P＜0.05）。AIP5 被鉴定为miR-6838-5p的靶基因。此外,shMIR210HG可以明显抑制AIP5的mRNA和蛋白表达（均P＜0.05）,而miR-6838-5p inhibitor促进AIP5的mRNA和蛋白表达（均P＜0.05）。另外,在裸鼠体内敲降MIR210HG基础上用miR-6838-5p inhibitor治疗或者AIP5的过表达质粒（AIP5-OE）治疗后裸鼠体内肿瘤的生长增加,裸鼠肺评分、RVSP、及血清TNF-α和IL-6的水平均明显增加（均P＜0.05）。结论 敲降MIR210HG通过调控miR-6838-5p/AIP5轴能抑制肺癌移植瘤裸鼠肿瘤生长并改善肺血管栓塞特征     

miR⁃29c过表达对P19细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的：探讨microRNA?29c（miR?29c）过表达对P19细胞增殖、凋亡和分化的影响及机制。方法：体外传代培养P19细胞,利用细胞转染技术构建miR?29c过表达细胞（mimic组）。CCK?8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期;Hoechst染色结合流式细胞技术检测细胞凋亡情况,定量PCR和蛋白质免疫印迹（Western blot）检测凋亡相关因子Bax/Bcl?2表达情况;二甲亚砜（DMSO）诱导P19细胞分化,定量PCR检测心肌特异性标志基因肌球蛋白重链（α?myosin heavy chain,αMHC）,转录因子GATA4和心肌增强因子2c（myocyte enhancer factor 2c,Mef2c）表达情况,明确miR?29c过表达对P19细胞分化的影响;生物信息学分析结合荧光素酶报告实验和Western blot明确miR?29c的靶基因。结果：与对照组相比,miR?29c过表达组细胞增殖速率较慢,细胞周期S期比例降低;miR?29c过表达组细胞凋亡率增高,Bax表达水平增高,而Bcl?2表达无明显差异;P19细胞分化第6天和第8天miR?29c过表达组αMHC、GATA4和Mef2c的表达水平显著高于对照组;Akt3被证实为miR?29c的靶基因。结论：miR?29c过表达可能是通过调控Akt3来抑制P19细胞增殖、促进P19细胞的凋亡和分化。     

miR-30-5p在食管癌中的表达及对食管癌细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨miR-30-5p对食管癌细胞增殖和迁移的影响及分子机制。方法：选取开封市中心医院心胸血管外科和河南省人民医院胸外科2014年6月到2019年6月收集的食管癌和癌旁组织样本各120例,采用荧光定量PCR测定miR-30-5p mRNA表达水平。采用慢病毒建立食管癌细胞系EC109中建立miR-30-5p过表达稳定细胞系（miR-30-5p组）和对照细胞系（miR-control组）。采用EdU染色分析2组细胞的增殖情况;采用Transwell分析2组细胞的迁移情况;采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-30-5p的靶基因;在miR-30-5p组和miR-control组过表达靶基因对细胞增殖和迁移的影响。结果：与癌旁组织比较,食管癌组织中miR-30-5p mRNA表达水平明显上调,差异有统计学意义（P<0.05）。与miR-control组比较,miR-30-5p组细胞增殖能力和细胞迁移能力明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。生物信息学和双荧光素酶报告基因显示BCL-9是miR-30-5p的靶基因。在miR-control组细胞中过表达BCL-9,可显著提高细胞的增殖和迁移,差异有统计学意义（P<0.05）。而miR-30-5p组细胞过表达BCL-9,细胞增殖和迁移差异无统计学意义（P<0.05）。结论：miR-30-5p在食管癌中呈低表达,可导致靶基因BCL-9表达上调,进而促进食管癌细胞的增殖和迁移。     

lncRNA DLEU2通过调节miR-410-3p表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖及迁移、侵袭的影响

目的 研究长链非编码RNA（lncRNA）DLEU2对微小RNA（miR） 410 3p的调控作用及对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞增殖、迁移、侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR（qRT PCR）检测类风湿性关节炎患者滑膜组织中DLEU2和miR 410 3p的表达。LncBase Predicted v.2预测和双荧光素酶报告实验分析DLEU2和miR 410 3p的靶向关系。在RA滑膜成纤维细胞MH7A中转染si DLEU2或miR 410 3p,或共转染si DLEU2和anti miR 410 3p。噻唑蓝（MTT）、Transwell、Western blot检测RA滑膜成纤维细胞MH7A的增殖、迁移、侵袭及细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、p21、基质金属蛋白酶（MMP） 2、MMP 9蛋白表达。结果 RA患者滑膜组织中DLEU2表达量明显增加,miR 410 3p表达量显著减少（P＜0.05）。lncRNA DLEU2靶向调控miR 410 3p的表达。抑制DLEU2表达或miR 410 3p过表达明显降低RA滑膜成纤维细胞MH7A 24 h、48 h、72 h的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP 2、MMP 9蛋白表达量,而显著提高p21蛋白水平（P＜0.05）。干扰miR 410 3p表达逆转了抑制DLEU2表达对RA滑膜成纤维细胞MH7A增殖、迁移侵袭的抑制作用。结论 lncRNA DLEU2在类风湿关节炎滑膜组织中表达上调,抑制其表达通过靶向miR 410 3p抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞的增殖、迁移侵袭。     

长链非编码RNAAC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响研究

目的检测长链非编码RNAAC003973.4在人乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中的表达,探讨其对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测20例乳腺癌组织及配对的癌旁组织,以及检测乳腺癌细胞株（BT-549、MDA-MB-231、MCF-7、T47D）和正常乳腺上皮细胞株MCF-10A中AC003973.4的表达。取AC003973.4表达水平最低的乳腺癌细胞株转染过表达质粒以上调AC003973.4的表达,分别采用MTS法、Transwell迁移和侵袭实验检测AC003973.4对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;生物信息学法预测AC003973.4互补结合的miRNA及下游靶基因,qRT-PCR法检测miRNA和下游靶基因mRNA的表达,Westernblot检测相关蛋白的表达。结果乳腺癌组织AC003973.4表达水平明显低于癌旁组织（P＜0.01）。乳腺癌细胞株AC003973.4表达水平明显低于人正常乳腺上皮细胞（均P＜0.05）,MCF-7细胞中AC003973.4的表达水平最低（P＜0.01）。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱（均P＜0.05）。AC003973.4可互补结合miR-224-5p,miR-224-5p可互补结合PTEN。上调MCF-7细胞AC003973.4的表达后,miR-224-5p的表达均下调（P＜0.01）,PTENmRNA和蛋白的表达均上调（均P＜0.01）,细胞增殖相关蛋白CDK4、CyclinD1与细胞迁移相关蛋白Zeb-1、N-cadherin表达均下调（均P＜0.01）。结论乳腺癌组织和细胞株中AC003973.4表达水平降低,上调AC003973.4表达可减弱乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其作用机制可能与调节miR-224-5p与PTEN基因的表达有关。     

艾滋病相关性弥漫大B细胞淋巴瘤 microRNA表达谱研究

目的：分析艾滋病相关性弥漫大B细胞淋巴瘤（ HIV－DLBCL）及艾滋病患者淋巴结反应性增生（ HIV－RH）的microRNA表达谱,筛选差异表达microRNA,为研究microRNA在HIV－DLBCL发生发展及诊断治疗中的作用提供依据。方法收集筛选6例HIV－DLBCL及4例HIV－RH石蜡包埋组织标本,提取总RNA,进行microRNA芯片杂交,运用SPSS 17．0软件进行统计学分析;利用miRWalk、Targetscan、miRanda软件对两组中存在统计学差异的microRNA进行靶基因预测,并进一步通过Gene Ontology（ GO）和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）数据库分析靶基因功能。结果与HIV－RH组相比,miR－4492、miR－208b－3p、miR－4738－3p、miR－4674在HIV－DLBCL组织中显著上调,miR－4453、miR－363－3p显著下调（表达变化＞5倍）。预测6个靶基因可能与HIV－DLBCL的发生发展有关：miR－208b－3p的靶基因CDKN1A、NLK、SMAD4及miR－363－3p的靶基因E2F3、FOXG1、TBX3。结论筛选得到多个HIV－DLBCL中具有深入研究价值的microRNA及其靶基因,为进一步研究差异表达microRNA在HIV－DLBCL发病机制中的作用及其靶基因的生物学效应奠定了基础。     

MiR-671-3p靶向DEPTOR而抑制乳腺癌细胞的增殖与侵袭

目的 研究miR-671-3p对乳腺癌细胞增殖、侵袭生物学功能的影响及其可能的作用机制。方法 以实时荧光定量PCR方法检测正常乳腺上皮细胞（MCF-10A）与乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3）中miR-671-3p表达情况;检测miR-671-3p 在MCF-7细胞中的转染效率;通过CCK-8法检测miR-671-3p对MCF-7细胞增殖的影响;通过Transwell实验、划痕实验检测miR-671-3p对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响;Targetscan预测miR-671-3p的靶基因,并通过双荧光素酶法和Western blot法对靶基因DEPTOR进行验证,并检测DEPTOR的表达。结果 miR-671-3p在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR3的表达量低于乳腺正常上皮细胞MCF-10A的表达。通过mimics、inhibitor分别促进、抑制miR-671-3p在MCF-7细胞中的表达后,结果显示miR-671-3p对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用（P<0.05）,对肿瘤细胞的侵袭和迁移有抑制作用（P<0.05）。双荧光素酶结果 显示DEPTOR蛋白为miR-671-3p的直接作用靶点,过表达miR-671-3p可直接抑制DEPTOR蛋白的表达。结论 miR-671-3p直接靶向作用于DEPTOR蛋白从而抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。     

miR －329的表达对神经胶质瘤细胞增殖的影响

目的：探讨miR－329对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法构建稳定表达人miR－329前体的载体,转染SNB19神经胶质瘤细胞,将实验分为两组,空白组为转染pcDNA6．2－GW／EmGFP空载体的细胞,高表达miR－329组为转染pcDNA6．2－GW／EmGFP／miR－329载体,并建立稳定高表达miR－329的细胞。然后分别采用MTT法、克隆形成实验、BrdU掺入实验及Western blot检测空白组和高表达miR－329组细胞的增殖抑制速率、细胞的增殖能力、细胞的增殖活性及靶基因E2F1在蛋白水平的表达。结果与空白组相比,高表达miR－329组增殖速率减慢,指数增殖特征明显减弱;克隆形成实验显示高表达miR－329组克隆形成明显减少,克隆形成率为（5.5±1.7）％,与空白组的（14.3±2.5）％比较差异有统计学意义（P＜0.05）。 BrdU掺入实验显示空白组细胞在生长过程BrdU阳性的细胞为（32.4±4.7）％,与高表达miR－329组的BrdU阳性细胞的（18.1±2.3）％比较差异有统计学意义（ P＜0.05）。 Western blot显示在SNB19细胞中过表达miR－329后,其靶基因E2F1的表达明显被抑制。结论 miR－329的表达可抑制SNB19神经胶质瘤细胞的增殖,可能发挥类似抑癌基因的作用,其抑制细胞增殖的机制可能与靶向E2 F1的作用相关。     

miRNA-224-5p靶向JAG1抑制乳腺癌细胞自噬活性的机制研究

目的探讨miRNA-224-5p靶向JAG1抑制乳腺癌细胞自噬活性的机制。方法收集2017年1月至2018年9月在台州市中心医院接受手术治疗的40例乳腺癌患者（乳腺癌组）及同期性别、年龄相匹配的40例健康体检者（健康对照组）的血清。采用实时定量逆转录-聚合酶链反应检测血清中miRNA-224-5p的表达;采用免疫印迹试验检测乳腺癌细胞MDA-MB-231中miRNA-224-5p的表达与自噬活性的关系。采用生物信息学的软件TargetScan7.2和MiRDB预测miRNA-224-5p作用的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验对预测的靶基因进行验证。结果乳腺癌组血清miRNA-224-5p相对表达量为188.51±59.26,明显高于健康对照组的41.63±14.29,差异有统计学意义（P＜0.05）。在MDA-MB-231细胞中,抑制miRNA-224-5p的表达后自噬活性增加。双荧光素酶报告基因实验验证JAG1为miRNA-224-5p的靶基因。结论miRNA-224-5p在乳腺癌患者血清中高表达,在MDA-MB-231细胞中miRNA-224-5p通过靶向JAG1抑制自噬活性。