血必净注射液对脓毒症大鼠组织肿瘤坏死因子-α及凝血功能的影响

目的:探讨血必净注射液对脓毒症大鼠凝血功能及组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法:采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症动物模型。96只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和血必净治疗组,后两组分别于CLP后0.5、12、24、36、48和60 h经大鼠阴茎背静脉注射生理盐水或血必净注射液4 ml/kg,分别于CLP后2、8、24、48和72 h 5个时间点各处死8只动物。各组大鼠取腹主动脉血检测血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)及纤维蛋白原(Fbg)含量;取肝、肺组织测定TNF-α蛋白水平。结果:CLP后2 h模型组动物肝、肺组织TNF-α蛋白水平迅速升高(P均<0.01),8 h达到高峰,分别为正常对照组的2.57倍(P<0.01)和4.77倍(P<0.01)。血必净注射液治疗后可显著降低肝、肺组织TNF-α蛋白水平(P<0.05或P<0.01),于CLP后24 h均恢复至伤前正常范围。模型组CLP后2~72 h,PT、APTT有不同程度的缩短,血浆Fbg水平显著降低(P<0.05或P<0.01);血必净治疗组CLP后2~24 h PT、APTT均较模型组明显延长(P<0.05或P<0.01),血浆Fbg含量回升。结论:血必净注射液可显著降低脓毒症大鼠组织TNF-α蛋白水平,防止凝血功能异常,从而有效防止脓毒症的发生发展。     

血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α及其靶基因诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 104只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和血必净治疗组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,血必净组于CLP后2、12、24、36、48、60 h经阴茎背静脉注射血必净注射液4 ml/kg,其余各组注射等量生理盐水.各组分别于CLP后6、12、24、72 h分别活杀大鼠取肝脏,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织HIF-1α和iNOS的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α和iNOS的mRNA表达.结果 与正常对照组比较,模型组CLP后6 h HIF-1α和iNOS蛋白表达均迅速升高,其中HIF-1α蛋白表达24 h升高幅度最明显,iNOS蛋白表达12 h达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h差异仍有统计学意义(P<0.05或P<0.01);血必净治疗组HIF-1α、iNOS 蛋白表达受到明显抑制,CLP后12、24、72 h HIF-1α、iNOS蛋白表达均较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01).模型组CLP后6 h HIF-1α、iNOS mRNA表达开始升高,12 h均达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h仍明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);血必净注射液能显著抑制肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达升高,CLP后6、12、24、72 h肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达均明显下调,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 血必净注射液能抑制脓毒症大鼠HIF-1α及其靶基因iNOS的表达.     

血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4及核转录因子-κB表达的影响

目的 观察血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达和核转录因子-κB(NF-κB)活性的干预作用.方法 将110只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、血必净干预组,后两组再分为染菌后1、6、12、24、48 h亚组,每组10只大鼠.于大鼠左后肢皮下注射创伤弧菌悬液制备创伤弧菌脓毒症模型;血必净组于染菌后0.5 h腹腔注射血必净注射液4 ml/kg.各时间点处死大鼠取肺组织,检测肺组织湿/干重比值(W/D比值)、TLR4 mRNA表达、NF-κB活性和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量.结果 模型组大鼠肺组织W/D比值于染菌后6、12、24、48 h明显高于正常对照组,而血必净组24 h、48 h较模型组明显减小(均P<0.05).模型组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达在染菌后6、12、24 h明显高于正常对照组,而血必净组6 h较模型组明显减少(均P<0.05).模型组大鼠肺组织NF-κB活性在染菌后1、6、12 h明显高于正常对照组,而血必净组1 h、6 h较模型组明显降低,24 h、48 h较模型组明显升高(均P<0.05).模型组大鼠肺组织TNF-α于染菌后1、6、12、24 h明显高于正常对照组,而血必净组12 h较模型组明显降低(均P<0.05).结论 TLR4-NF-κB通路参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤的早期病理生理过程;血必净注射液能抑制TLR4-NF-κB活化,减轻创伤弧菌脓毒症大鼠肺损伤.     

血必净注射液对脓毒症大鼠血栓调节蛋白及内皮蛋白C受体基因表达的影响

目的探讨血必净注射液对脓毒症大鼠血栓调节蛋白（TM）及内皮蛋白C受体（EPCR）基因表达的影响。方法采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型。将96只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和血必净治疗组,后两组又按处死时间分为术后2、8、24、48和72h亚组,每组8只。留取肝、肺组织,分别检查各组动物组织TM和EPCR的mRNA表达。结果正常对照组和假手术组肝、肺组织TM和EPCR的mRNA有一定表达。CLP后2h肝、肺组织TM和EPCR的mRNA表达无明显变化（P均〉0.05）,8～48h肝、肺组织TM和EPCR的mRNA表达均有不同程度的增强（P均〈0.01）,至伤后72h基本恢复到术前水平（P均〉0.05）;与模型组比较,血必净治疗组CLP后8h和24h组织TM和EPCR的mRNA表达均有不同程度下降,48h和72h的基因表达有不同程度提高。结论血必净注射液可以从基因水平影响脓毒症动物组织TM及EPCR的基因表达。     

血必净注射液对脓毒症大鼠活化蛋白C及凝血功能的影响

目的 探讨血必净注射液对脓毒症大鼠活化蛋白C(APC)及其凝血功能的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型.清洁级雄性Wistar大鼠104只被随机分为正常对照组、假手术组、脓毒症模型组和血必净治疗组,各组按处死时间分为术后12、24、48、72 h 4个亚组,每组8只.除正常对照组外,其余各组分别于术后2 h给予生理盐水或血必净注射液(4 ml/kg)1次.各组在相应时间点处死8只动物,经腹主动脉取血,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆APC、血管性假血友病因子(vWF)和血管性假血友病裂解酶(ADAMTS-13)的含量;肝素抗凝测血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FBG)含量、血小板计数(PLT)等凝血功能指标.结果 与正常对照组比较,脓毒症组血浆APC含量均有不同程度的下降(P<0.05或P<0.01);用血必净注射液治疗后,APC水平随时间延长逐渐升高.CLP后大鼠血浆vWF含量升高;用血必净注射液治疗后均有不同程度的降低,以12、24、48 h最为明显.CLP后大鼠ADAMTS-13含量在12 h略有升高(P<0.01),但随时间延长明显降低(P<0.05或P<0.01);用血必净注射液后能明显升高ADAMTS-13含量(P均<0.01).CLP后,PT、APTT均有不同程度缩短,FBG含量降低,PLT减少;用血必净注射液后,凝血功能得到明显改善.结论 血必净注射液能提高脓毒症大鼠血浆APC、ADAMTS-13水平,降低vWF含量,明显改善脓毒症大鼠的凝血功能.     

血必净注射液对脓毒症大鼠基因调控的影响

目的:在基因水平探讨血必净注射液对脓毒症大鼠肝脏保护作用的机制。方法:采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型。选择140只Wistar大鼠,其中60只随机均分为血必净治疗组和模型组,观察术后48 h和72 h的存活率;另80只按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组和血必净治疗组。透射电镜观察术后24 h肝脏病理学改变。采用含有4 096条大鼠基因cDNA克隆的表达谱基因芯片,检测并分析脓毒症大鼠经血必净注射液治疗后24 h肝组织的基因表达变化,并以计算机软件筛选出差异表达的基因。结果:与模型组比较,血必净治疗组大鼠48 h和72 h存活率显著升高,且血必净注射液有延长存活时间的作用(P<0.05或P<0.01)。24 h血必净治疗组肝脏病理学损伤改变明显减轻。在4 096条基因中,有差异表达的基因122条,下调基因主要涉及神经细胞与神经传导、细胞信号转导、各种基本生物化学物质代谢酶类基因、能量代谢相关基因;上调基因主要涉及细胞骨架与运动类蛋白、细胞周期调控、各种基本生物化学物质代谢酶类基因以及能量代谢相关基因。结论:血必净注射液能延长脓毒症大鼠的存活时间,并具有肝脏保护效应,其作用环节可能涉及物质代谢、脂类代谢基因、免疫、细胞信号转导等多方面。     

血必净对脓毒症大鼠肠黏膜屏障及巨噬细胞抗体表达的作用

目的 观察血必净对脓毒症大鼠肠黏膜屏障和巨噬细胞抗体表达的变化的影响作用,探讨其在脓毒症发病中的作用机制及意义.方法 Wistar大鼠150只,分成脓毒症组、血必净干预组和假手术组.采用肓肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型,模型标准是发热、呼吸频率增加、心率加快和白细胞总数改变.血必净组大鼠术前12 h、术后腹腔内注射4 mL/kg血必净,1次/12 h,共3 d;其余两组大鼠同时注射相同体积的生理盐水.利用图像分析系统检测三组大鼠肠黏膜病理变化和巨噬细胞的表达水平,并运用等级资料秩和检验和方差分析进行统计学分析.结果 假手术组大鼠小肠黏膜多为基本正常黏膜,12 h,24 h,48 h,72 h脓毒症组、血必净组大鼠肠道黏膜出现病变;脓毒症组病变较血必净组更为严重,差异具有统计学意义(H=19.732,P<0.01).在0 h三组小肠黏膜巨噬细胞抗体的表达数基本一致,12 h,24 h,48 h,72 h脓毒症组和血必净组间差异具有统计学意义,且均较C组变化差异具有统计学意义(F=560.13,P<0.05).结论 脓毒症大鼠肠道黏膜机械屏障和免疫屏障均有不同程度的损害,血必净注射液可部分保护肠道黏膜机械屏障和免疫屏障.     

血必净注射液对脓毒症大鼠纤溶系统功能的影响

目的 观察血必净注射液对脓毒症早期循环及纤溶系统功能的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型.75只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组和血必净组,各组按处死时间又分为术后2、4、6、8、12 h 5个亚组,每组5只.假手术组和模型组术后即刻静脉补充生理盐水;血必净组术后1 h内给予血必净注射液,之后补充生理盐水.每小时监测平均动脉压(MAP);各组于相应时间点取血检测血浆组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI)含量.结果 假手术组MAP有所下降,但在正常范围内;模型组和血必净组MAP均下降,并逐渐进入休克状态,11 h和12 h MAP与假手术组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).假手术组血浆t-PA含量无明显变化;模型组血浆t-PA含量在术后2 h即明显高于假手术组,之后逐渐下降,至12 h仍高于假手术组(P<0.05或P<0.01);血必净组血浆t-PA含量在术后2 h即高于假手术组,之后逐渐升高,且于术后6、8、12 h显著高于模型组(P<0.05或P<0.01).假手术组血浆PAI含量无明显变化;模型组血浆PAI含量在术后4 h明显高于假手术组(P<0.05),之后降至假手术组水平,12 h时明显低于假手术组(P<0.05);血必净组在术后6、8、12 h PAI显著高于假手术组和模型组(均P<0.01).结论 血必净注射液对脓毒症大鼠早期循环功能有一定的改善作用,并能促进纤溶系统的激活,从而改善脓毒症早期机体的高凝状态.     

血必净注射液对脓毒症大鼠蛋白C及肿瘤坏死因子基因表达的影响

目的探讨血必净注射液对脓毒症大鼠蛋白C（PC）及肿瘤坏死因子-α（TNF—α）基因表达的影响。方法将96只健康Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和血必净治疗组，后两组又按处死时间分为术后2、8、24、48和72h亚组，每组8只。采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型。取腹主动脉血进行血小板计数，并留取肝、肺组织分别检测各组动物组织PC和TNF—α的mRNA表达。结果CLP后8～72h模型组大鼠肝组织PC mRNA表达显著下调（P均〈0．01），血必净注射液可显著提高脓毒症大鼠PC mRNA表达水平（P均〈0．01）。CLP后2h模型组动物肝、肺组织TNF—α mRNA表达均迅速升高并持续至伤后24h（P〈0．05或P〈0．01）；血必净注射液治疗可显著降低肝、肺组织TNF—α mRNA水平（P〈0．05或P〈0．01），术后24h均恢复至伤前正常范围。模型组动物CLP后8～72h血小板计数不同程度减少，血必净治疗组较模型组能明显提高血小板计数（P〈0．05或P〈0．01）。结论血必净注射液可以从基因水平影响脓毒症动物组织PC和TNF—α的mRNA表达。     

血必净注射液与活化蛋白C对脂多糖诱导大鼠单核细胞组织因子干预效果的比较研究

目的 比较血必净注射液与活化蛋白C(APC)对脂多糖(LPS)刺激大鼠单核细胞表达组织因子(TF)及蛋白酶激活受体1(PAR-1)的影响.方法采用黏附法分离正常大鼠外周血单核细胞后,按随机数字表法分为正常对照组、LPS刺激组、LPS+APC组和LPS+血必净组.分别于LPS刺激后12、24、48、72 h收集细胞,用流式细胞仪检测PAR-1表达的荧光强度;同时留取细胞培养上清液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TF、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 LPS刺激组24 h后各时间点大鼠单核细胞PAR-1的荧光强度较正常对照组显著升高,各时间点上清液中TF、IL-6、TNF-α水平也明显高于正常对照组(P均<0.01).与LPS刺激组比较,LPS+APC组和LPS+血必净组PAR-1、TF、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);且LPS+血必净组24 h、48 h时PAR-1、TF、TNF-α水平均显著低于LPS+APC组(P<0.05或P<0.01).结论血必净注射液和APC均可显著降低LPS刺激大鼠单核细胞PAR-1表达,减少TF、IL-6、TNF-α分泌,血必净的作用较APC明显.     

血必净调节脓毒症脾组织Fas Bax蛋白表达改善免疫麻痹的实验研究

目的观察血必净对脓毒症大鼠脾组织促调亡相关蛋白表达及细胞免疫功能的影响。方法96只Wistar大鼠随机分为正常对照组(8只)、假手术组(8只)、模型组(40只)和血必净组(40只),以盲肠结扎穿孔法(CLP)制备脓毒症模型。ELISA法检测血清IL-2、IL-10水平,免疫组化法检测脾组织Fas、Bax蛋白表达水平。结果模型组大鼠脾组织Fas、Bax表达明显增多,同时于造模后36、48h,血清IL-2水平明显下降,IL-10水平显著升高。血必净干预后可明显降低脾组织Fas、Bax表达,提高IL-2水平,同时可降低IL-10水平,减轻重要脏器的病理损伤。结论血必净干预可通过降低促凋亡相关蛋白表达缓解脓毒症时的免疫麻痹状态。     

血必净对脓毒症大鼠回肠黏膜形态学的影响

目的 观察不同给药途径及不同给药时间情况下,血必净注射液对脓毒症大鼠回肠黏膜形态学的影响.方法 91只健康Sprague-Dawley大鼠由中山大学实验动物中心提供,随机分为正常对照组(n=7)、脓毒症组(n=21)、灌胃给药+脓毒症组(预处理组)(n=21)、静脉给药+脓毒症组(预处理组)(n=21)和脓毒症+静脉给药组(治疗组)(n=21).除正常对照组外,其余各组按手术后3 h,6 h,12 h再分3组,每组7只.采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型.正常对照组不予任何处理,灌胃给药+脓毒症组于术前2 h灌胃给药(5 mL/kg血必净);静脉给药+脓毒症组于术前2 h尾静脉给药(5 mL/kg血必净);脓毒症+静脉给药组于术后2 h尾静脉给药(5 mL/kg血必净).正常对照组不作任何处理,直接留取组织标本;其余各组于术后3 h,6 h,12 h分别活杀大鼠留取回肠标本,用以进行形态学观察及回肠上皮损伤指数测定.用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析;组间比较用方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 预处理组及治疗组大鼠回肠上皮损伤程度均较脓毒症组减轻(P<0.01);预处理组中,静脉给药较灌胃给药的保护效果更好(P<0.05).结论 血必净注射液能减轻脓毒症大鼠回肠黏膜的损伤程度,预先静脉给药效果更佳.     

血必净对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏组织翻译控制肿瘤蛋白表达的影响

目的 探讨血必净对鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏组织翻译控制肿瘤蛋白(TCTP)表达的影响.方法 健康清洁级成年雄性Wistar大鼠42只,随机取6只大鼠作为对照组;余36只按随机数字表法均分为脓毒症组和血必净组.通过腹腔注射鲍曼不动杆菌悬液制作脓毒症模型,30 min后血必净组尾静脉注射血必净注射液.脓毒症组和血必净组于制模后6、12和24 h随机取6只大鼠,处死取肝脏组织标本,苏木素-伊红(HE)染色,观察肝脏组织病理学改变;免疫组化法分析肝脏组织TCTP表达阳性细胞;蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肝细胞TCTP的表达.结果 HE染色显示,脓毒症组肝脏炎性受损,血必净组肝组织炎性损伤较脓毒症组减轻.免疫组化结果显示,与对照组比较,脓毒症组6、12和24 h TCTP阳性细胞表达评分(分)明显升高(7.33 ± 0.82、10.67±1.21、7.67±1.21比2.50±1.05,均P＜0.05);与脓毒症组比较,血必净组6、12和24 h肝组织TCTP阳性细胞表达评分(5.83±0.75、7.50±1.05、5.67±1.37)均降低(均P＜ 0.05).Western blotting结果显示,与对照组比较,脓毒症组6、12和24hTCTP表达量明显增加(1.94±0.59、3.20±0.72、1.96±0.55比0.93±0.24,均P＜0.05);与脓毒症组比较,血必净组6、12和24 h TCTP表达量(1.38±0.36、2.03±0.49、1.30±0.30)明显降低(均P＜0.05).结论 血必净有利于减轻鲍曼不动杆菌脓毒症大鼠肝脏的炎性损伤,其机制可能与降低肝细胞表达TCTP有关.     

血必净注射液对脓毒症大鼠营养代谢的影响

目的:观察血必净注射液对脓毒症大鼠血糖、血脂、血浆蛋白等营养物质含量的影响.方法:健康雄性wistar大鼠60只随机分为对照组(n=20)、脓毒症组(n=20)和血必净治疗组(n=20).脓毒症组、血必净治疗组于注射内毒素(LPS)后0.5 h分别尾静脉注射4 mL/kg生理盐水(NS)和血必净注射液,正常对照组予以注射4mL/kg NS.在注射NS/LPS后2、6、12、24 h,经颈动脉取血用于检测血浆血糖、血脂、血浆总蛋白和白蛋白值.结果:脓毒症组大鼠在LPS尾静脉注射后2 h,血糖浓度开始升高,6 h后达到高峰,并且血糖浓度一直处于较高水平,而血必净和对照组比较,血糖变化无统计学意义.血必净组2 h后甘油三酯、极低密度脂蛋白升高明显,12、24 h后各血脂指标和对照组比较无统计学意义.脓毒症组大鼠24 h后总蛋白、白蛋白明显下降,而血必净和对照组比较不明显.结论:脓毒症早期应用血必净注射液可以控制血糖,减少脂蛋白的参与炎症复合物的形成,减少血浆蛋白分解.     

血必净注射液对脓毒症大鼠血清内毒素及脾脏特异性免疫功能的影响

目的：观察脓毒症大鼠血中内毒素水平及脾淋巴细胞表面人白细胞DR抗原（HLA-DR）、脾淋巴细胞增殖及脾淋巴细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）特异性免疫功能状态的变化以及血必净注射液对脓毒症免疫功能的影响。方法：采用盲肠结扎穿孔术（CLP）制备脓毒症模型，将72只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、左氧氟沙星组和血必净组。制模后3、24和72h经腹腔静脉取血后活杀动物取脾脏；采用改良基质显色法检测血中内毒素水平，采用流式细胞仪检测HLA-DR水平，采用免疫组化法检测caspase-3阳性细胞表达，采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）检测脾淋巴细胞的增殖。结果：模型组大鼠血中内毒素水平、脾脏淋巴细胞增殖反应和caspase-3阳性细胞表达指数均较假手术组明显升高，脾脏HLA-DR百分比较假手术组明显降低（P均〈0．01）。血必净注射液能明显降低脓毒症大鼠血中内毒素水平，提高脾HLA-DR百分比，促进淋巴细胞增殖，降低脾淋巴细胞caspase-3阳性细胞表达，与模型组比较差异均有显著性，且作用优于左氧氟沙星组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：脓毒症大鼠的免疫功能处于紊乱状态，特异性免疫功能受到抑制；血必净注射液能改善脓毒症时的特异性免疫功能状态。     

血必净注射液对急性肺损伤大鼠氧自由基变化的影响

目的:探讨血必净注射液对急性肺损伤大鼠氧自由基变化的影响.方法:SD大鼠72只随机分为正常对照组、内毒素组(LPS组)和内毒素联合血必净组(LPS+XBJ组),后两组又分别分为给药后1、2、4、12 h 4个亚组,每个亚组8只.采用静脉注射LPS(5 mg/kg)建立急性肺损伤模型.LPS+XBJ组予静脉注射LPS后同时腹腔注射血必净(10 mL/kg),LPS组腹腔注射等量生理盐水(10 mL/kg),正常对照组给予等量生理盐水.观察各组肺组织病理学变化,检测各组肺湿干质量比(W/D)、血清丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活力等的变化.结果:血必净注射液干预可显著降低急性肺损伤大鼠升高的W/D(P<0.05)和血清肺MDA浓度(P<0.01或P<0.05).显著升高急性肺损伤大鼠降低的SOD浓度(P<0.01或P<0.05),减轻肺组织形态学损伤.结论:血必净注射液可抑制氧自由基产生.对LPS所致急性肺损伤大鼠具有肺保护作用.     

血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶及一氧化氮的影响

目的 研究血必净注射液对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)含量的影响及意义.方法 将110只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组和血必净组.皮下注射创伤弧菌悬液制备创伤弧菌脓毒症模型.分别于术后1、6、12、24、48 h活杀10只动物,留取肺组织,检测iNOS活性、NO含量、髓过氧化物酶(MPO)活性,并观察肺组织病理变化.结果 模型组肺组织iNOS活性(U/mg)在染菌后1、6、12、24 h(分别为12.57±3.20、22.17±7.29、19.73±6.23、14.37±3.78)均明显高于正常对照组(6.69±1.87,均P<0.01);血必净组6、12、24 h iNOS活性(分别为14.97±3.48、15.15±5.46、10.28±4.13)明显低于同时间点模型组(P<0.05或P<0.01).模型组肺组织NO含量(μmol/g)在染菌后1、6、12、24、48 h(分别为14.53±3.82、31.52±7.01、41.32±7.28、32.82±5.42、24.82±6.01)均显著高于正常对照组(4.94±1.48,均P<0.01);血必净组肺组织NO含量在12 h、24 h(分别为30.93±5.19、25.25±4.67)与同时间点模型组比较均明显下调(均P<0.01).模型组肺组织MPO活性(U/g)在染菌后1、6、12、24 h(分别为1.21±0.32、2.11±0.28、2.05±0.24、1.07±0.36)也明显高于正常对照组(0.55±0.18,均P<0.01);血必净组MPO活性在6 h、12 h(分别为1.69±0.47、1.37±0.42)与同时间点模型组比较明显下调(均P<0.01).染菌后24 h,模型组大鼠肺组织损伤明显,血必净组大鼠肺损伤较模型组有所减轻.结论 iNOS和NO参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤的病理生理学过程;血必净注射液干预治疗能显著下调肺组织iNOS活性及NO生成,减轻创伤弧菌感染所致的肺损伤.     

血必净注射液对脓毒症大鼠凝血功能障碍的干预

目的 观察脓毒症大鼠凝血功能的动态变化及其在脓毒症发病中的作用,探讨中药血必净注射液对凝血功能障碍的干预作用.方法 采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型,检测脓毒症组、假手术组和药物干预组大鼠外周血凝血检测指标0、12、24、48、72 h的动态变化.结果 脓毒症大鼠凝血功能变化明显异常,ATⅢ、PC含量减少,PAI-1活性增高,药物干预组大鼠凝血功能指标在不同时间段均优于脓毒症组大鼠.结论 脓毒症早期凝血功能即出现异常改变,血必净注射液可一定程度上改善凝血功能.     

血必净对创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织核因子-κB p65表达作用的研究

目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)p65基因及蛋白表达,并探讨血必净对其的干预作用.方法 SD大鼠110只,随机分为正常组(A组,n＝10)、创伤弧菌脓毒症组(B组,n＝50,采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液制作大鼠创伤弧菌脓毒症模型)和血必净治疗干预组(C组,n＝50,感染后半小时腹腔注射血必净4 mL/kg).B、C组于染菌后1、6、12、24、48 h活杀(各时间点n=10),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 法、Western blot法和双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测大鼠肺组织NF-κB p65的基因与蛋白表达及IL-10的含量,数据采用单因素方差分析.结果 与A组比较,B组大鼠肺组织创伤弧菌感染后6、12 h NF-κB p65 mRNA表达量与6、12、24和48 h肺组织NF-κB p65蛋白表达量均明显增高 (P<0.05);与B组相同时间点比较,C组6 h肺组织NF-κB p65 mRNA表达量与12、24及48 h肺组织NF-κB p65 蛋白表达量明显减少(P<0.05); 与A组比较,B组创伤弧菌菌感染12、24和48 h IL-10的含量明显增加(P<0.05),与B组相同时间点比较,C组24 h(52.444±9.605)肺组织IL-10的含量明显增高(P<0.05);感染后48 h,大鼠肺内血管明显充血,间质水肿并伴炎性浸润,肺泡腔塌陷,血必净干预后,肺组织损伤有所减轻.结论 NF-κB参与了创伤弧菌脓毒症肺损伤过程;血必净能抑制NF-κB p65的表达,从而起到保护创伤弧菌脓毒症大鼠肺组织的作用.     

血必净注射液对脓毒症大鼠血清炎症介质及Th1/2的影响

目的观察血必净注射液对脓毒症时促炎／抗炎免疫功能及免疫器官组织病理改变的影响。方法按随机数字表法将动物分为假手术组、模型组、左氧氟沙星组和血必净组4组，每组18只；采用盲肠结扎穿孔术制备脓毒症模型。制模后3、24和72h经腹腔静脉取血，采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血中自细胞介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；采用流式细胞仪（FACS）检测全血细胞中辅助性T细胞1／2（Th1／Th2）比值；观察肝、脾组织病理改变。结果脓毒症大鼠早期Th1／Th2明显升高，后期明显下降；24hTNF-α、IL-10水平均明显升高，后期明显下降。血必净组Th1／Th2仅在72h才明显升高，且表现为血必净能明显降低TNF-α和IL-10的水平，使促炎与抗炎达到平衡。结论脓毒症大鼠的免疫功能处于紊乱状态，特异性免疫功能受到抑制，而非特异性免疫功能亢进；血必净能改善脓毒症的免疫功能状态。