遗传性血色病(HH)分子遗传学研究进展

遗传性血色病是欧籍人群中一种重要遗传病，ＨＬＡＨ 基因的突变是本病发病的分子遗传学基础，其Ｃｙｓ２８２Ｔｙｒ 突变和Ｈｉｓ６３Ａｓｐ 突变是绝大部分患者发病分子基础的阐明，为欧籍人群ＨＨ 病家族的基因诊断提供了科学的依据。本文就此加以概述。     

先天性巨结肠RET基因的突变

酪氨酸激酶受体基因（ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＲＥＴ基因）被定位于染色体１０ｑ１１．２上，其突变可导致３种多发性内分泌瘤综合征和先天性巨结肠的发生。为了探讨ＲＥＴ基因突变在先天性巨结肠发病中的作用，采用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）及单链ＤＮＡ构象多态性分析（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）的方法，对３４例散发先天性巨结肠基因组ＤＮＡ进行ＲＥＴ基因第６外显子突变筛查，并对电泳条带变异的ＰＣＲ产物进行了直接核苷酸序列分析。发现１例为ＧＡＣＴＣＡＧＡＣ→ＧＡＡＴＣＡＡＡＣ碱基突变，导致两个氨基酸发生改变。表明ＲＥＴ基因突变与先天性巨结肠发病有关。     

抗HBsAg二硫键稳定性Fv抗体（dsFv）突变基因的构建与？…

ｄｓＦｖ是近年发展起来的一种新型基因工程抗体，具有分子小，稳定性好，生物学活性高等特点。我们采用ＰＣＲ定点突变方法，成功地构建了抗ＨＢｓＡｇ ｄｓＦｖ抗体的轻、重链突变基因，并进行了序列分析，证明在重链第４４位氨基酸和轻链第１００位氨基酸，已突变形成半胱氨酸（Ｃｙｓ），为进一步表达有活性的抗ＨＢｓＡｇ ｄｓＦｖ抗体奠定了基础。     

抗HBsAg二硫键稳定性Fv抗体(dsFv)突变基因的构建与序列分析

ｄｓＦｖ是近年发展起来的一种新型基因工程抗体，具有分子小，稳定性好，生物学活性高等特点。我们采用ＰＣＲ定点突变方法，成功地构建了抗ＨＢｓＡｇｄｓＦｖ抗体的轻、重链突变基因，并进行了序列分析，证明在重链第４４位氨基酸和轻链第１００位氨基酸，已突变形成半胱氨酸（Ｃｙｓ），为进一步表达有活性的抗ＨＢｓＡｇｄｓＦｖ抗体奠定了基础。     

血管紧张素原基因核心启动子区域突变与藏族原发性高血 …

目的 寻找血管紧张素原（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｇｏｇｅｎ，ＡＧＴ）基因核心启动子区域存在的突变，分析该突变在中国西藏人群中的分布以及与原发性高血压的关联。方法 以藏族１０３例原发性高血压患者和８２名健康爱试者为研究对象进行病例－对照研究。用聚合酶链反应－单链构象多态性（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ／ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ     

天津地区G6PD缺陷患者常见基因突变分析

目的研究北方地区葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，Ｇ６ＰＤ）基因突变类型、基因突变与人口变迁。方法采用“错配引物”介导的聚合酶链反应／限制性酶切分析法和双脱氧核苷酸指纹印迹检测法，对天津地区２２例Ｇ６ＰＤ缺陷患者进行３种中国南方人群常见的Ｇ６ＰＤ基因突变的分析。结果８例患者（８／２２，３６．４％）有Ｒ４５９Ｌ（１３７６Ｇ→Ｔ）突变；７例患者（７／２２，３１．８％）有Ｒ４６３Ｈ（１３８８Ｇ→Ａ）突变；７例（７／２２）无１３７６和１３８８位点突变病例中，有３例做了Ｈ３２Ｒ（９５Ａ→Ｇ）突变分析，提示１例有该位点突变。结论北方地区也存在中国南方人群常见的３种Ｇ６ＰＤ基因突变，大多数中国北方Ｇ６ＰＤ缺陷患者是由于中国南方移民迁移造成的。     

Alzheimer＇s病形态学变化的分子生物学基础（综述）

Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓ病形态学变化的分子生物学基础（综述）吴珂四川生殖卫生学院成都６１００４１人大脑的形态结构与功能有年龄性变化，过去认为中枢神经系统的老化是痴呆最直接的因素，但为何老龄人群中也仅有少数患阿茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ＇ｓｄｉｓｅａｓ...     

急性髓细胞白血病H—ras基因点突变及临床相关性研究

为了解急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）Ｈ－ｒａｓ基因点突变的情况，应用聚合酶链反应和限制性酶切图谱分析技术，对５５例初诊ＡＭＬ患者进行了检测，发现１６例（２９．１％）存在Ｈ－ｒａｓ基因点突变，此突变与ＡＭＬ的发生及某些临床指标有一定关系。Ｈ－ｒａｓ基因突变可望成为ＡＭＬ诊断分型、指导治疗及判断预后的一项有价值的指标。     

Wilson's病8号外显子突变研究

目的对中国人ＷＤ基因８号外显子进行突变分析。方法对中国人Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓ病（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）４５例患者以及２０例正常人的ＡＴＰ７Ｂ基因８号外显子进行ＳＳＣＰ分析,对有异常者进行测序,根据突变点序列设计合适的内切酶对所有患者进行酶切分析。结果正常组未见异常。患者组发现ｅｘ－ｏｎ８有泳动异常,序列分析证实Ｇ２２７３Ｔ置换,即Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变。用限制性内切酶ＭｓｐⅠ对４５例患者以及２０例正常对照进行该位点酶切分析,表明正常组未见异常,患者组有２例突变纯合子,占患者总数４．４％,１１例杂合子,占１２．２％。外显子８的Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ突变率占ＷＤ突变基因的１６．６７％。检测了２个突变家系。结论８号外显子突变可能是中国人ＷＤ发病的较重要原因。     

Kennedy氏遗传病分子遗传学研究进展

早在１９９１年就已明确人类ＡＲ基因上ｐ（ＣＡＧ）ｎ重复序列拷贝数的扩展是Ｋｅｎｎｅｄｙ氏遗传病发病的分子基础。但近年来有关Ｋｅｎｎｅｄｙ氏遗传病动态突变的研究文献并不多，从有限数量的文献中可以看出：（１）Ｋｅｎｎｅｄｙ氏遗传病与其它典型的动态突变疾病相比具有较大的特异性，如缺乏早现遗传现象，甚至对是否存在ｐ（ＣＡＧ）ｎ重复序列拷贝数与病情严重程度及发病早晚之间的相关性仍有争议；（２）大量人工构建的重复序列拷贝数各异ＡＲ基因ｃＤＮＡ突变体的出现及其在体外细胞中表达的研究，在一定程度上揭示了Ｋｅｎｎｅｄｙ氏遗传病的发病机理存在数量效应和位置效应，这一研究有利于动态突变，尤其是那些动态突变部位位于翻译区内疾病发病机理共同规律的阐明。本文就Ｋｅｎｎｅｄｙ氏遗传病分子遗传学的研究进展加以概述。     

21－羟化酶CYP21B基因Ile~（172）→Asn错义突变

为了解先天性肾上腺皮质增生症患者的２１－羟化酶ＣＹＰ２１Ｂ基因中Ｉｌｅ~（１７２）→Ａｓｎ错义突变的发生率，根据放大受阻突变体系（Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ＡＲＭＳ）的要求，设计了３种引物：５＇ｄ（ＴＴＧＧＧＡＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＣＴ）３＇（共同引物）、５＇ｄ（ＡＧＧＴＧＡＧＧＴＡＡＣＡＧＡ）３＇（正常引物）、５＇ｄ（ＡＧＧＴＧＡＧＧＴＡＡＣＡＧＴ）３＇（突变引物），在７例患儿中进行了检测，发现具有本突变者３例。对其中一例进行的家系分析，结果提示：这组引物有快速、简便的优点，不需使用同位素就能对具有Ｉｌｅ~（１７２）→Ａｓｎ变异的高危家庭成员作产前诊断。     

中国南方人苯丙氨酸羟化酶基因外显子7点突变及其频率分析

采用ＰＣＲ、变性梯度凝胶电泳及ＤＮＡ直接序列分析等突变分析方法，对５８例中国南方人苯丙酮尿症的苯丙氨酸羟化酶外显子７进行了分析，共发现５种突变位点：ＩＶＳ６ｎｔ－１、Ａｒｇ２４１Ｃｙｓ、Ａｒｇ２４３Ｇｌｕ、Ｖａｌ２４５Ｖａｌ及Ａａｌ２４５Ｖａｌ及Ａｒｇ２５２Ｇｌｎ，其频率分别为３／１１６、１／１１６、１１／１１６、７／１１６及４／１１６。结果提示南方人群ＰＫＵ基因突变位点有别于北方人群。     

中国人亨廷顿病CAG三核苷酸重复的分子分析

为在分子水平了解中国人亨廷顿病的发病机理，为该病的基因诊断和遗传咨询提供科学依据，应用巢式ＰＣＲ、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳以及ＤＮＡ测序等方法，对正常中国人及亨廷顿病（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ，ＨＤ）患者的ＩＴ１５基因（ＣＡＧ）ｎ重复序列的拷贝数进行了分析。４０例正常中国人以及１３个ＨＤ家系的研究结果表明：中国人正常ＩＴ１５基因（ＣＡＧ）ｎ重发序列的拷贝数为１３～２６，多数为１６；而所有被分析的ＨＤ患者都携带一个ＣＡＧ序列高度重复的ＩＴ１５基因，其（ＣＡＧ）ｎ的拷贝数为４０～９４；且ＣＡＧ重复序列的拷贝数与发病年龄呈现一定的相关性。正常和ＨＤ等位基因之间的（ＣＡＧ）ｎ拷贝数不相重叠，在１０３例高风险ＨＤ家庭成员的症状前诊断中，根据（ＣＡＧ）ｎ拷贝数的测定，发现了３５例ＨＤ基因携带者，结果表明，ＩＴ１５基因的不稳定突变是导致中国人亨廷顿病的遗传基础。     

血幼素研究进展

血幼素(hemojuvelin,HJV)是新发现的一种铁代谢调节分子,基因定位于19q13。研究表明,其基因(HJV)突变是大多数幼年型血色病(juvenile hemochromatosis,JH,HFE2)发病的分子遗传学基础。HJV在机体铁稳态调控方面具有十分重要的作用,可能是上调Hepcidin表达的上游调节分子,两者参与共同的铁代谢途径。HJV有可能成为一种治疗机体铁代谢相关性疾病重要的靶分子。     

新生儿乙型肝炎疫苗免疫后首次检测为乙型肝炎病…

报告了新生儿乙型肝炎（乙肝）疫苗免疫后１－９年的ＨＢｓＡｇ阳性者年阴转率的定人随访结果。母亲ＨＢｓＡｇ阳性儿，乙肝疫苗免疫后首次检出的８４例ＨＢｓＡｇ阳性者，动态观察了１－９年，ＨＢｓＡｇ年抗ＨＢｓ，２／１０无抗－ＨＢｓ应答。结论：母婴阻断失败者的ＨＢｓＡｇ阳性儿，其ＨＢｓＡｇ年阴转率很低，和人群观察结果（１．１１％）相似；阴转者８０％能够产生抗－ＨＢｓＡｇ阳性儿，其ＨＢｓＡｇ年阴转率很低，和人群     

基因混合对药物代谢酶多态性的影响——分析拉丁美洲混合人群NAT2和CYP2E1基因突变

从无亲缘关系的尼加拉瓜的混合人群中选择健康受试者 137名 ,在其基因组的ＤＮＡ中研究药物和致癌物代谢酶—ＮＡＴ2 (芳香氨Ｎ 乙酰转移酶 ,ａｒｙｌａｍｉｎｅＮ ａｃｅｔｙｌｔｒａｓｆｅｒａｓｅ 2 )和ＣＹＰ2Ｅ1(细胞色素Ｐ4 50 2Ｅ1)多态性的遗传学基础。结果表明 ,在ＮＡＴ2基因编码区识别出 6个位点突变 ,包括最常见的等位基因ＮＡＴ2 4 (4 1.6 % )、ＮＡＴ2 5Ｂ(31.4 % )和ＮＡＴ2 6Ａ(16 .8% )。两种缺陷基因携带者占 4 9 6 %。被研究的尼加拉瓜人群处在ＮＡＴ2基因型的Ｈａｒｄｙ Ｗｉｎｂｅｒｇ不平衡情况下(Ｐ <0 .0 1) ,等…     

承德市1939例1～12岁儿童HBsAg携带情况分析

承德市１９３９例１～１２岁儿童ＨＢｓＡｇ携带情况分析姜明杰，王翠华，张齐目前我国约有一亿人为ＨＢｓＡｇ携带者，而ＨＢｓＡｇ阳性的婴儿大部分转为慢性ＨＢｓＡｇ携带者，这可能是导致我国乙肝高流行区和人群中ＨＢｓＡｇ高携带率的原因。我站采用ＲＰＨＡ法于１９...     

肝豆状核变性基因常见突变区域的DNA分析

目的：本研究对４０例肝豆状核变性（又称Ｗｉｌｓｏｎ病,ＷＤ）病人的外显子１４及１８进行ＤＡＮ测序分析,并比较突变类型与临床表现的关系。方法：提取ＤＡＮ,ＰＣＲ,ＤＮＡ直接测序分析。统计学处理应用ｔ和ｘ２检验。结果：１５例病人在外显子１４或１８上有点突变,其中１０例为Ｈｉｓ１０７０Ｇｌｎ,１例为Ｇｌｕ１０６５Ａｌａ,４例为Ｇｌｙ１２４３Ｇｌｕ。１０例Ｈｉｓ１０７０Ｇｌｎ突变者发病年龄（２１．２±６．３岁）较其它３０例ＷＤ病人（１３．７±５．４岁）晚（ｔ＝８．３２,Ｐ＜０．００１）,且前者肝脏病变的发生率（２／１０）较后者（２４／３０）低（ｘ２＝１３．８５,Ｐ＜０．００５）。结论：Ｈｉｓ１０７０Ｇｌｎ为一常见突变类型且病人发病晚,少有肝脏病变,提示Ｈｉｓ１０７０Ｇｌｎ突变尚未完全破坏运铜蛋白的结构及功能,临床表现与基因突变的位点有关。     

成纤维细胞的银掺入试验以诊断MENKES病

Ｍｅｎｋｅｓ病（Ｍｅｎｋｅｓｄｉｓｅａｓｅ）是一种严重Ｘ连锁隐性铜代谢疾病，主要症状为神经变性、结缔组织异常和发育停滞。各种铜依赖性酶因铜吸收不良和铜的利用率降低而缺乏。该病通常可导致婴儿期及幼儿期死亡。培养的成纤维细胞和羊水细胞的铜掺入试验已被用于产前及产后Ｍｅｎｋｅｓ病的诊断。在１９９３年该缺陷基因被发现以后，通过Ｍｅｎｋｅｓ基因ＡＴＰ７Ａ突变分析的诊断也成为可能，然而由于突变范围太广而且８０％的突变为微小的碱基对改变，所以生化学诊断仍然是证实临床怀疑的必要方法。而且铜掺入实验需要特殊的专业…     

中国人WD基因第14和18号外显子的错义突变

目的了解中国人肝豆状核变性（Ｗｉｌｓｏｎ＇ｓｄｉｓｅａｓｅ,ＷＤ）基因第１４和１８号外显子的突变情况,与国外报道的这两个外显子的高突变频率进行比较。方法应用聚合酶链反应－单链构像多态（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合ＤＮＡ测序技术,对４４例无亲缘关系的ＷＤ患者及６０例正常对照进行突变检测。结果一例患者在１４号外显子发生了Ａｒｇ１０４１Ｐｒｏ（３１２１Ｇ→Ｃ）纯合错义突变,另一例患者在１８号外显子发生了Ａｓｎ１２７０Ｓｅｒ（３８０９Ａ→Ｇ）杂合错义突变。结论Ａｒｇ１０４１Ｐｒｏ为未报道过的新型错义突变,Ａｓｎ１２７０Ｓｅｒ突变与国外报道一致。但均未呈热区分布。