二仙汤及其拆方对雌性大鼠垂体前叶细胞黄体生成素和卵泡刺激素的影响

目的:从细胞生物学水平观察二仙汤及其拆方和部分提取物对原代培养的雌性大鼠垂体前叶细胞的作用。方法:在原代培养的大鼠垂体前叶细胞中直接加入二仙汤全方或其拆方及部分提取物,用放射免疫法测定培养液中黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)的含量。结果:二仙汤全方及其拆方滋阴泻火方和调理冲任方直接加药能促进大鼠垂体前叶细胞LH和FSH的分泌;温肾益精方也有一定促进趋势。二甲亚砜作为淫羊藿苷和仙茅苷的溶剂对实验结果有一定影响。结论:二仙汤全方及其拆方滋阴泻火方和调理冲任方对垂体前叶细胞LH和FSH的分泌有促进作用。     

基于Nrf2通路研究二仙解毒方对弱精子症大鼠精子微环境的影响*

目的基于Nrf2信号通路研究二仙解毒方对弱精子症模型大鼠精子微环境的改善作用及可能机制。方法 使用奥硝唑法构建成熟雄性大鼠弱精子症模型,随机分为模型组、二仙解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组,每组各12只,连续灌胃4周后,检测各组大鼠精子浓度、精子活动力、相关氧化应激指标、大鼠睾丸及附睾中基于Nrf2蛋白表达及mRNA表达。结果 二仙解毒方可增强弱精子症模型大鼠精子活动力,剂量越高,氧化应激指标改变越显著,二仙解毒方高剂量组可将模型组大鼠的精液抗氧化能力恢复至正常大鼠水平;二仙解毒方可促进大鼠附睾、睾丸组织Nrf2基因转录与蛋白表达。结论 二仙解毒方确有提高精子活动力的作用,其可能的作用机制为通过诱导上调生殖细胞内Nrf2 mRNA和蛋白表达,以改善弱精子症大鼠精液氧化应激状态,从而提高精子活动力。     

益精方对腺嘌呤不育症大鼠睾丸支持细胞间连接黏附分子和闭合小环蛋白表达的作用

目的观察益精方对腺嘌呤不育症肾阳虚大鼠睾丸支持细胞间连接黏附分子(JAM)及闭合小环蛋白(ZO)表达的影响。方法选用48只健康的SPF级Wistar雄性大鼠,2月龄,按随机数字表法,平均分为正常组、模型组、复方玄驹组、益精方组,每组12只。造模成功后,各给药组灌胃相应药物,连续20 d。然后处死大鼠,摘取睾丸和附睾,采用计算机精子分析系统计数精子密度和精子活动率;采用免疫组化方法测定大鼠睾丸支持细胞间JAM及ZO表达。结果与正常组比较,模型组精子密度、精子活动率、JAM及ZO表达均显著降低(P0.01)。与模型组比较,复方玄驹组和益精方组精子活动率、精子密度均显著升高(P0.05),益精方组JAM及ZO表达显著增加(P0.05)。结论益精方能够通过调控JAM及ZO的表达,修复腺嘌呤法诱导的肾阳虚模型大鼠的睾丸支持细胞紧密连接蛋白的损伤。     

续断种子方对少精子症模型小鼠附睾结构改变的干预

目的：探讨续断种子方对少精子症模型小鼠附睾结构的影响。方法：将45只中的10只雄性小鼠标记为正常组，余下35只小鼠经腹注射白消安，连续注射5 d后，使用水合氯醛麻醉随机选取的5只小鼠，并取出其左侧附睾，光学显微镜下观察附睾见少量精子，表明成功造模，随机分为模型组、左卡组、续断组3组各组10只。续断组和左卡组依照人体等效剂量溶剂配药灌胃，正常组和模型组予生理盐水灌胃。灌胃8周后处杀全部实验小鼠，并摘取左侧附睾，行精子检测、精浆生化、HE染法色检测，电镜检测附睾。结果：模型组小鼠附睾上皮细胞增大，部分主细胞及基细胞空泡变性，间质细胞水肿，血管扩张。与正常组比较，模型组精液浓度、活力、SOD、α-葡糖苷酶、果糖显著下降，差异具有统计学意义（P<0.01）；药物灌胃治疗8周，续断组相较于模型组在精液浓度、活力、SOD、α-葡糖苷酶、果糖等方面显著增加，差异具有统计学意义（P<0.01）。结论：续断种子方对于少精子症模型小鼠附睾结构、附睾精子成熟微环境、维护附睾上皮结构稳定性方面有着显著改善，为精子在附睾培育成熟创造条件。     

慢性铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响

目的 研究铝暴露对小鼠精子质量及睾丸细胞焦亡的影响。方法 将12只成熟雄性c57bl/6j小鼠分为两组：对照组(n=6)、铝模型组(n=6),对照组用蒸馏水灌胃，铝模型组采用10 mg/(kg·d) AlCl₃灌胃，8周后，获取小鼠睾丸组织、附睾组织及附睾精子。对附睾精子进行精子质量分析，对睾丸及附睾HE染色进行病理检测；运用PCR、免疫组化检测睾丸组织细胞焦亡关键基因的mRNA和蛋白表达。结果 与对照组相比，铝暴露的小鼠睾丸重量、附睾重量、精子活力、精子数量均显著下降(P<0.01),精子畸形率显著增加(P<0.01)。睾丸形态学观察结果显示，铝暴露小鼠睾丸生精小管中细胞排列紊乱，生精小管的面积和直径减小，管内精子减少。PCR及免疫组化结果显示，铝暴露小鼠睾丸组织中焦亡关键基因Nlrp3、Caspase-1、Gsdmd和IL-1b的mRNA及蛋白表达均上调(P<0.01)。结论 铝暴露可降低小鼠的精子质量，促进睾丸细胞焦亡，从而损伤雄性生殖系统。     

核因子-资B/白细胞介素1茁在脂多糖诱导小鼠附睾炎中的作用研究

目的探讨核因子-资B（NF-资B）/白细胞介素1β（IL-1β）在脂多糖（LPS）诱导小鼠附睾炎中的作用机制。方法40只雄性小鼠按随机数字表法分为3组,LPS组30只,磷酸盐缓冲液（PBS）组（对照）5只,LPS+JSH-23组5只。LPS组小鼠于造模0、6、12、24、48h及3周,PBS组、LPS+JSH-23组分别于造模3周采用颈椎脱臼法处死,收集血清及附睾;观察LPS小鼠血清、附睾IL-1β浓度及mRNA表达水平变化,同时比较LPS组与PBS组造模3周后附睾精子常规参数,以及3组小鼠附睾NF-资Bp65蛋白表达及血清、附睾IL-1β浓度及附睾组织mRNA表达水平,血清睾酮浓度。结果与0h比较,LPS组小鼠6、12、24h血清、附睾IL-1β浓度及附睾组织mRNA表达水平明显升高,且呈时间依赖性（P＜0.05）;至48h开始降低（P＜0.05）。造模3周,LPS组精子总数、活动精子百分比、前向运动精子百分比、非前向运动精子百分比较PBS组均明显降低（均P＜0.05）,不活动精子百分比高于PBS组（均P＜0.05）。与PBS组比较,LPS组小鼠附睾组织NF-资Bp65蛋白表达上调（P＜0.05）,LPS+JSH-23组明显下调（P＜0.05）。与PBS组比较,LPS组小鼠血清、附睾IL-1β浓度及附睾组织mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）,LPS+JSH-23组较LPS组明显降低（均P＜0.05）。LPS组小鼠血清睾酮浓度较PBS组明显降低（P＜0.05）,LPS+JSH-23组较LPS组明显升高（P＜0.05）。结论LPS能显著诱导小鼠附睾炎中IL-1β表达,而NF-资B抑制剂能有效抑制LPS诱导小鼠附睾炎中炎症因子IL-1β的产生,进而抑制小鼠附睾的炎性反应。     

梗阻性无精子症患者附睾蛋白P34h的表达及其意义

目的:探讨梗阻性无精子症患者的附睾组织中附睾蛋白P34h mRNA及蛋白表达情况,并探讨其在梗阻性无精子症患者中的意义?方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例因不同梗阻(输精管或射精管水平梗阻)所致的梗阻性无精子症患者附睾组织中P34h基因mRNA的表达水平,Western Blot检测2组P34h蛋白的表达?结果:2组均有P34h mRNA的表达,输精管梗阻的P34h/β-actin均值为0.418 ± 0.045,射精管梗阻的P34h/β-actin均值为0.719 ± 0.069,输精管梗阻的附睾组织中P34h mRNA水平显著低于射精管梗阻(P < 0.05)?2组亦均有P34h蛋白的表达,输精管梗阻平均光密度为 0.095 ± 0.014,射精管梗阻为0.276 ± 0.054(P < 0.05),两组P34h蛋白的表达差异有统计学意义?结论:P34h mRNA及其蛋白在不同梗阻因素所致的无精子症患者的附睾中表达水平有明显差异,提示P34h可能是梗阻性无精子症时导致精子成熟障碍的一个重要因素?     

加味聚精食疗方对少、弱精子症大鼠EGF、EGFR睾丸内表达的影响

目的观察加味聚精食疗方对少、弱精子症大鼠表皮生长因子（EGF）、表皮生长因子受体（EGFR）睾丸内表达的影响。方法 60只3月龄雄性SD大鼠采取随机化法分为六组：G1组、G2组、G3组、G4组、G5组、G6组,每组10只。G1组蒸馏水灌胃52 d;其余五组予雷公藤多苷（GTW）灌胃26 d造模。造模结束后,G6组立即脱颈处死,以了解造模质量;G2组加味聚精食疗方灌胃;G3组枸橼酸他莫昔芬片灌胃;G4组五子衍宗片灌胃;G5组蒸馏水灌胃,以上均每天1次,连续26 d。治疗结束后CASA技术检测大鼠附睾精子质量;Envision两步法检测睾丸组织EGF、EGFR的表达。结果G6组附睾精子质量的各项指标均较G1组明显减低（P〈0.05）,显示造模成功。G2组附睾精子质量所有指标均明显优于G5、G6组（P〈0.05）。G2组附睾精子密度明显优于G3、G4组（P〈0.05）。G1、G2组附睾精子质量所有指标组间比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。G1、G2组大鼠睾丸组织EGF、EGFR表达水平明显优于G5、G6组（P〈0.05）。结论加味聚精食疗方能显著上调大鼠睾丸间质细胞EGF、EGFR的表达水平,改善精子质量。     

骨桥蛋白在雄性小鼠生殖系统中的表达及意义

目的:检测骨桥蛋白(OPN)在小鼠睾丸、附睾、精子中的表达,探讨其意义。方法:用免疫组织化学方法检测OPN在正常小鼠睾丸及附睾中的表达情况,免疫细胞荧光法检测OPN在小鼠精子中的表达情况,分析OPN与雄性小鼠生殖能力的关系。结果:OPN在小鼠睾丸、附睾组织及精子上均具有特征性表达。在睾丸中,OPN表达于Sertoli细胞、Leydig细胞以及各级生精细胞,尤其是精原细胞、精子细胞和精子的胞质中;附睾内,OPN的表达主要见于各段上皮主细胞胞质中,部分基细胞、亮细胞中也可见到免疫阳性反应。并且附睾头部的免疫阳性染色相对较弱;免疫荧光染色则将OPN定位于附睾尾精子的顶体帽区及鞭毛。结论:小鼠睾丸、附睾及精子中均存在OPN的特异性表达,OPN可能参与精子的发生及成熟过程,并与精子的活力和受精能力密切相关。     

益精方对环磷酰胺小鼠少弱精症模型精子凋亡的干预作用

目的 探讨补肾益精、补血活血中药方剂益精方对环磷酰胺小鼠少弱精模型精子凋亡的影响.方法 将40只雄性昆明小鼠随机分为对照组、模型组、小剂量治疗组和大剂量治疗组.按60 mg/kg给对照组小鼠腹腔注射生理盐水,60 mg/kg给模型组、小剂量治疗组、大剂量治疗组小鼠腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续5 d.第6天开始按体重...     

Cdyl、G9a、及HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达

目的 观察Cdyl、G9a、HDAC1在肾阳虚大鼠睾丸组织中的表达,探讨Cdyl及相关因子引起雄性大鼠肾阳虚的机制.方法 20只健康雄性SD大鼠随机分为空白组与模型组,模型组采用环磷酰胺50 mg/kg·d腹腔注射,空白组给予等量生理盐水注射.大鼠造模后第6天,将大鼠取血处死,分离睾丸、附睾进行相关指标检测. 结果 与空白组比较,模型组大鼠精子浓度、活力及活率明显降低;模型组大鼠睾丸组织Cdyl、G9a表达明显降低(P<0.01),HDAC1表达明显升高(P<0.01). 结论 Cdyl、G9a表达降低,HDAC1表达升高与雄性大鼠肾阳虚相关.     

直链烷基苯磺酸钠对小鼠精子成熟和生育能力的影响

目的探讨直链烷基苯磺酸钠(Linear alkylbenzene sulphonates,LAS)对小鼠附睾内精子成熟和繁殖后代能力的影响。方法 4周龄昆明雄系小鼠,随机分为实验组A(LAS630 mg/kg,n=20),实验组B(LAS315mg/kg,n=20),对照组C(生理盐水,n=20)。实验组小鼠经口摄入直链烷基苯磺酸钠,每日1次,连续染毒60天时,取三组小鼠附睾头和附睾尾精子,分别检测精子密度、活力、正常形态率及胞浆小滴率,并通过与正常雌鼠交配比较不同染毒剂量下小鼠繁殖子代的能力。结果实验组小鼠附睾头和附睾尾精子密度,活力均显著低于对照组(P<0.001,P<0.05),胞浆小滴率和畸形精子率均显著高于对照组(P<0.001),低剂量组、高剂量组小鼠的子代数量与对照组的差异均有统计学意义(P<0.005),且具有明显的剂量效应关系。结论直链烷基苯磺酸钠影响小鼠附睾内精子的成熟过程,并可引发小鼠的生育能力降低。     

Research in reproductive toxicity of Sudan Red on sperms of mice

目的 为了探讨苏丹红Ⅱ的雄性生殖毒性效应,研究了苏丹红Ⅱ对雄性昆明小鼠的睾丸、附睾和精子的毒性作用.方法 采用不同剂量的苏丹红Ⅱ配制的饲料喂食小鼠即0.012mg/kg、0.12mg/kg、1.20mg/kg对小鼠染毒,对照组小鼠给予不含苏丹红Ⅱ的饲料喂食,每只每天0.10kg,连续7d,染毒后35d脱颈处死小鼠,观察和分析小鼠精子的数量、活动度和畸形率.结果 小鼠睾丸、附睾湿重与体重比值染毒组与对照组无明显差异;精子密度及精子活力染毒组与对照组也无统计学差异显著性;染毒组小鼠畸形精子显著高于对照组,经统计学分析其差异显著.结论 苏丹红Ⅱ导致小鼠睾丸附睾重量减低对生殖器官有损害作用.     

苏丹红Ⅱ对雄性小鼠精子毒性的研究

目的为了探讨苏丹红Ⅱ的雄性生殖毒性效应,研究了苏丹红Ⅱ对雄性昆明小鼠的睾丸、附睾和精子的毒性作用。方法采用不同剂量的苏丹红Ⅱ配制的饲料喂食小鼠即0.012mg/kg、0.12mg/kg、1.20mg/kg对小鼠染毒,对照组小鼠给予不含苏丹红Ⅱ的饲料喂食,每只每天0.10kg,连续7d,染毒后35d脱颈处死小鼠,观察和分析小鼠精子的数量、活动度和畸形率。结果小鼠睾丸、附睾湿重与体重比值染毒组与对照组无明显差异;精子密度及精子活力染毒组与对照组也无统计学差异显著性;染毒组小鼠畸形精子显著高于对照组,经统计学分析其差异显著。结论苏丹红Ⅱ导致小鼠睾丸附睾重量减低对生殖器官有损害作用。     

实验性房室不节对雄性小鼠生殖机能影响的初步研究

目的　通过比较不同造模方法对雄性小鼠生殖机能方面的影响 ,研究单纯的房室不节是否能影响雄性小鼠生殖机能。方法　利用房室不节建立肾阳虚证雄性小鼠模型 ,同时以脾虚证、恐伤肾致肾虚证、氢化可的松致肾虚证为对照因素 ,研究造模小鼠的睾丸乳酸脱氢酶—同工酶 (LDH X)、母鼠怀孕活胎数、精子密度、精子活力、精子畸形数。结果　房室不节组的睾丸乳酸脱氢酶—同工酶 (LDH X)、母鼠怀孕活胎数、精子密度、精子活力、精子畸形数与正常组、脾虚组比较有统计学意义 (0 .0 1

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2,4-D对小鼠精子毒性作用的研究

目的 研究2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)对小鼠精子的毒性作用.方法 将24只小鼠按随机数字表法分为4组:对照组、2,4-D 50mg·kg-1组(染毒1组)、2,4-D 100 mg·kg-1组(染毒2组)、2,4-D 200mg·kg-1组(染毒3组),每组6只.动物经灌胃染毒,1次·d-1.14d后,处死小鼠,计算睾丸指数、附睾指数,并观察精子数量及精子活力、精子活率的情况.结果 与对照组、染毒1组比较,染毒2组、染毒3组显著抑制了精子生成,并呈剂量依赖的方式降低了小鼠精子数量(P＜0.05);与对照组比较,染毒2组、染毒3组明显降低了小鼠的精子活力(P＜0.05),染毒2组、染毒3组呈剂量依赖的方式降低了小鼠的精子活率(P<0.05),染毒1组对小鼠精子活力、精子活率无显著的影响(P＞0.05).结论 2,4-D能够降低小鼠精子质量,从而引起生殖毒性损伤.     

可乐对小鼠精子质量影响的研究

目的探讨可乐对小鼠精子质量和数量的影响。方法42只昆明种雄性小鼠随机分为低剂量组（0．3mL可乐）、高剂量组（0．6mL可乐）、阴性对照组（0．6mL生理盐水）和阳性对照组,低剂量组、高剂量组和阴性对照组各组又分为连续灌胃28d组和连续灌胃42d组。每天定时给予各组小鼠灌胃,灌胃第28天和第42天分批处死实验组和阴性对照组小鼠。阳性对照组0．6mL环磷酰胺腹腔注射1次,第7天脱臼处死阳性对照组小鼠。处死小鼠后,分离附睾测定小鼠精子运动参数,并在光镜下观察精子畸形发生率。结果连续灌胃28d和42d可乐的各剂量组小鼠与相应的阴性对照组比较,精子密度随灌胃时间的延长明显降低（P=0．000）;灌胃28d组和42d组中各组间精子畸变率比较,差异均有统计学意义（P=0．000）;灌胃28d高剂量组和低剂量组的精子畸变率均高于阴性对照组（P〈0．05）,高剂量组精子畸变率高于低剂量组（P〈0．05）;畸形精子分类中以无定型为主,无钩型次之,香蕉型较少见,双尾型及尾折迭型极少见,畸形主要集中在精子头部。结论可乐对雄性小鼠精子密度和精子形态有一定的影响。     

精索静脉曲张与弱精子症动物模型中精子CatSper3和CatSper4表达的关系

目的 探讨精索静脉曲张动物模型中精子特异性阳离子通道(CatSper)3、CatSper4的表达差异,以及精索静脉曲张导致的弱精子症与CatSper3、CatSper4的关系;并探讨CatSper抑制剂对附睾成熟精子的作用。方法 建立精索静脉曲张大鼠模型。剪碎附睾组织,离心收集附睾精子,对大鼠进行精子形态学分析。采用qRT-PCR和Western-blot检测大鼠精子中CatSper3、CatSper4的表达情况。加入10μmol/L的CatSper抑制剂NNC 55-0396与健康大鼠附睾成熟精子孵育24 h, ELISA法检测实验组和对照组精子中腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量。结果 精索静脉曲张大鼠模型中畸形精子比例较对照组增高,精子数量明显减少。qRT-PCR检测结果可见,实验组的CatSper3、CatSper4 mRNA水平较对照组升高;但Western-blot检测发现,CatSper3、CatSper 4蛋白相对表达量较对照组明显降低。通过CatSper抑制剂NNC 55-0396处理附睾精子后,其ATP含量无显著变化。结论 精索静脉曲张可导致精子数量减少和畸形精子产生,...     

鼠巨细胞病毒感染诱导小鼠精子凋亡及线粒体调控机制研究

目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)感染对小鼠精子凋亡的影响,探讨MCMV感染诱导小鼠精子凋亡的线粒体调控机制.方法 建立小鼠睾丸MCMV急性感染模型(n=15),以正常小鼠作为对照(n=15),采用流式细胞术(FCM)与激光扫描共聚焦显微术(LCSM)对不同感染时段的小鼠附睾尾部成熟精子进行凋亡与线粒体膜电位的检测,同时应用电镜观察不同感染时段的精子线粒体超微结构的改变.结果 MCMV感染第2天起精子凋亡率开始升高,第4天达最高值(39.3±1.0)%,随后逐渐下降(F=362.822,P＜0.05).而感染第1天的精子线粒体膜电位增加至74.0±1.4,第2天开始下降至63.0±2.2,第4天降至最低40.2±2.3,随后缓慢回升(F=32.257,P＜0.05).MCMV感染可引起精子线粒体超微结构的损伤,以感染第2～6天为重.结论 生殖器官MCMV急性感染可诱导附睾尾部成熟精子的凋亡;精子线粒体主动参与并调控了精子的凋亡过程.     

纳米硒化镉对小鼠精子毒作用

目的研究不同可溶性的2种纳米硒化镉对小鼠精子的毒性作用。方法昆明种小鼠60只,随机分为四组。试验组剂量为40mg/kg进行腹腔注射染毒,18d后取附睾观察精子存活率和精子畸形率。结果与CdSeⅡ相比,CdSeⅠ精子存活率低,而精子畸形率高（P〈0.05）。结论纳米硒化镉随着可溶性的升高,精子存活率增高,精子畸形率显著降低。