神经干细胞与嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与嗅鞘细胞（OECs）移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响．方法SD大鼠行T11脊髓全横断术后，随机分为NSCs移植组、OECs移植组、联合移植组和对照组．术后将取自绿色荧光蛋白（GFP）转基因胚胎小鼠海马和新生小鼠嗅球的、经培养鉴定后的NSCs和OECs，以明胶海绵做载体分别或联合移植到各移植组动物脊髓损伤处，对照组不移植细胞，用BBB评分法评价1～8周大鼠后肢运动功能恢复的程度．8周后移植各组动物行左心室主动脉内4％多聚甲醛灌注，取横断处上下各约1mL脊髓，连续冰冻切片（片厚20tam），置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞，确定NSCs及OECs的存活情况．结果NSCs及OECs细胞在移植脊髓损伤后能存活，并向周围迁移；术后3和4周末，NSCs组、OECs组和联合移植组大鼠运动功能均较对照组有明显改善（P〈0．05）；且3周时，联合移植组和OECs组比NSCs组后肢运动功能变化显著（P〈0．05）；而联合移植组和OECs组比较后肢运动功能未见显著差别（P〉0．05）．绪论NSCs、OECs和联合移植在早期均可促进脊髓全横断大鼠运动功能恢复；OECs组、联合移植组效果均优于NSCs组；联合移植对大鼠运动功能恢复在早期没有显现最佳作用．     

嗅鞘细胞移植促进急性脊髓损伤的修复作用

目的研究嗅鞘细胞(OEG)移植后在体内存活情况以及对大鼠脊髓损伤长期的修复作用.方法用新生Wistar大鼠嗅球做OEG培养,大量增殖并标记.80只大鼠,随机分为4组,每组20只.A、B、C组以250 mm·g打击T13脊髓致运动诱发电位和体感诱发电位完全消失,A组在打击区中央用尖刀横行切断脊髓;D组仅做与A、B组相同节段的椎板减压,不挫伤脊髓.A、B组在脊髓远近断端距离挫伤区边缘1 mm的脊髓中线上,深度分别为1.75、1.5、1.0、0.5 mm处,各注入200 000个OEG;C组用同样的方法注射等量的DMEM培养液;D组不做处理.术后观察脊髓功能恢复情况(BBB运动功能评分法)和体重变化.术后24周取脊髓标本,做HE染色、嗜银染色、抗神经原纤维(NF)免疫组化染色、荧光显微镜下观察Hoechst标记的OEG在体内存活情况.结果手术后4周,A、B、C组开始有运动功能恢复,术后4～24周BBB运动功能评分A、B组均高于C组(P＜0.01),16周以后BBB评分变化较小.HE染色A、B两组脊髓损伤区结构紊乱,纤维走行方向扭曲不一致,细胞数目较多,C组大鼠脊髓损伤段常有明显空洞存在,纤维含量少且扭曲.嗜银染色和免疫组化抗NF染色显示无论在损伤区还是损伤头、尾端,A、B组神经纤维数量多于C组,但都少于相同节段的D组(P＜0.01).荧光显微镜下观察到Hoechst标记的OEG大量存在于脊髓损伤段周围.术后各组大鼠均出现体重减轻.术后2周,D组大鼠体重恢复至术前重量,此后逐渐增加.术后4周,A、B、C组大鼠体重降至最低,与D组(Sham组)比较差异有显著性(P＜0.01);此后,A、B组大鼠体重逐渐增加,而C组大鼠体重增加不明显;A、B组大鼠体重与C组比较差异有显著性(P＜0.05).结论OEG移植具有一定促进脊髓损伤神经纤维再生和功能恢复的作用.     

嗅粘膜源性嗅鞘细胞移植联合NGF对脊髓损伤的修复

目的：探讨大鼠嗅粘膜嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells， OECs）移植联合神经生长因子(nerve growth factor， NGF)修复脊髓急性损伤的可行性和疗效，并观察二者的协同作用。方法：自成年Wistar大鼠嗅粘膜取材，采用差速贴壁和阿糖胞苷抑制纯化相结合的方法培养纯化嗅鞘细胞。建立大鼠脊髓半切模型，并随机分成对照组（A组），OECs组（B组）和OECs＋NGF组（C组），在不同时段进行肢体活动的BBB评分。8周后取脊髓标本进行组织学检查，评价对脊髓损伤的修复作用。结果：B组和C组2周后BBB评分高于A组（P＜0.05），C组自4周后明显优于A组和B组（P＜0.01）。组织学检查表明，C组可明显促进轴突再生。结论:OECs联合NGF具有良好的脊髓损伤修复作用，且二者具有明显的协同作用。     

NTFs基因修饰的人胚OECs植入促进大鼠SCI神经再生及功能恢复的研究

目的探讨神经营养因子（NTF）基因修饰嗅鞘细胞（OECs）移植促进大鼠脊髓损伤后神经再生及功能恢复。方法SD大鼠制备成脊髓损伤动物模型。随机分为损伤对照组（A组）、OECs移植组（B组）和OECs神经营养因子基因修饰后移植组（C组）。治疗后2、4、6周,每组动物分别进行联合行为评分（GBS）、运动诱发电位（MEP）、感觉诱发电位（SEP）检查、双下肢功能测定（爬坡试验）,评价脊髓损伤功能恢复情况。结果随时间的延长,B组GBS、MEP、SEP及下肢功能明显改善。与其它组相比较,差异有显著性,P〈0.05。结论NTF基因修饰后移植在脊髓损伤区,能促进神经再生及功能恢复。     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤大鼠的作用

目的探讨嗅鞘细胞（OECs）移植治疗脊髓损伤的作用及其机制。方法 Wistar大鼠30只,随机分为3组,每组10只。A组仅行脊髓损伤,B组脊髓损伤1d后移植OECs,C组脊髓损伤7d后移植OECs,移植后8周进行组织学观察、电生理检查,并行脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养因子3（NT-3）、神经生长因子（NGF）蛋白、血管内皮生长因子（VEGF）水平测定以及BBB评分。结果伊红-苏木精染色可见B组和C组脊髓大量细胞增生,瘢痕组织及空洞明显少于A组;A组结构恢复不明显。A组大鼠的运动诱发电位波幅明显降低,B组和C组大鼠运动诱发电位较A组明显改善,差异有统计学意义（F=8.049,P<0.05,）。B组、C组BDNF、NGF、NT-3、VEGF蛋白表达量较A组明显增高,C组较B组各蛋白表达量增高,差异有统计学意义（F=46.317⁷8.000,P<0.05）。大鼠脊髓损伤后BBB评分明显下降,OECs移植后时间的长短、组别的不同以及两者之间的相互作用对OECs移植后脊髓损伤大鼠的BBB评分均有显著影响(F_时间=188.494,F_组别=183.919,F_交互=50.332,P<0.05)。结论 OECs移植治疗能够通过分泌神经营养因子和加速微血管再生改善微环境,促使大鼠损伤的轴突再生和部分神经功能恢复。     

嗅鞘细胞移植联合应用GDNF对大鼠脊髓损伤的治疗作用

目的：研究嗅鞘细胞（OECs)移植并联合应用胶质细胞源性神经营养因了（GDNF）对脊髓损伤的保护和促进再生作用。方法；建立成年SD大鼠脊髓T8半横断损伤模型，将体外培养纯化的OECs植入脊髓损伤处，同时局部应用GDNF，采用斜板试验和BBB联合功能评分观察大鼠运动功能恢复情况，并通过辣根过氧化物酶逆行示踪技术评价OECs和GDNF对神经元存活和纤维再生的影响。结果：（1）OECs和GDNF联合应用时对皮质和红核神经元有逆行性保护作用；可促进脊髓下行传导束再生，肢体运动功能恢复，（2）OECs和GDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强，高于GDNF或OECs单用组。结论：联合应用GDNF和OECs在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。     

嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤后水通道蛋白-4的影响

目的：探索大鼠嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injurySCI）后水通道蛋白-4（AQP-4）和后肢功能的影响。方法：取Wistar大鼠150只,随机分为正常组（50只）、模型组（50只）、OECs移植组（50只）,模型组和OECs移植组用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,造模成功后,其中OECs移植组在损伤处移植嗅鞘细胞,模型组移植DF-12培养液。于术后1、3、7、14、21、28 d进行BBB（Basso-Beattle-Bresnahan）运动功能评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织AQP-4的表达,并用图像分析仪进行定量分析。结果：术后3~28 d,OECs移植组的BBB评分较模型对照组明显提高,术后第1天,模型组和OECs移植组受损脊髓灰质、白质中AQP-4的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但OECs移植组低于模型组（P〈0.05）。第7、14、21、28天,与模型组比较,OECs移植组AQP-4表达也较低（P〈0.01）。结论：OECs移植使脊髓损伤后AQPa表达减少,这可能有利于抑制脊髓水肿、消除脊髓继发性损伤,保存残存正常脊髓组织并促进神经轴突再生,改善其肢体运动功能。     

微囊化异种嗅球组织移植对脊髓损伤大鼠细胞凋亡及功能恢复的影响

目的 观察微囊化异种嗅球组织细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后细胞凋亡及功能恢复的影响,探讨其对脊髓继发性损伤的保护作用.方法 横断SD大鼠T10节段脊髓,建立脊髓全横断损伤动物模型.在无菌条件下取家兔双侧嗅球,制备成细胞悬液及微囊化的细胞悬液.实验大鼠随机分为4组:正常组(A组)仅打开椎管,暴露脊髓;损伤组(B组)仅用明胶海绵填塞脊髓损伤腔隙;细胞悬液组(C组)用明胶海绵吸附的兔嗅球组织细胞悬液植入;微囊组(D组)植入明胶海绵吸附的微囊化兔嗅球组织细胞悬液.实验大鼠分别于术后12 h、1 d、3 d、7 d、21 d进行神经功能评分(BBB法)评分评价大鼠运动功能的恢复情况,并行TUNEL染色,观察凋亡细胞的数量及分布变化.结果 A组少见凋亡细胞;B组凋亡细胞最多,并于损伤后1d、7d形成两个高峰;C组凋亡细胞数量较B组有所减少,差别具有显著性(P＜0.05).C组BBB评分较B组明显提高,有显著性差别(P＜0.05);D组凋亡细胞数量较B组明显减少,差别非常显著(P＜0.01),较C组有所减少,差别具有显著性(P＜0.05).D组BBB评分较B组明显提高,差别非常显著(P＜0.01),较C组有所增加,差别具有显著性(P＜0.05).结论 异种嗅球组织细胞悬液移植能够抑制细胞凋亡的发生,能够促进脊髓损伤大鼠的功能恢复,用微囊化异种嗅球组织细胞移植效果更佳.     

排斥导向分子B对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响

目的：探讨排斥导向分子（repulsive guidance molecule,RGM）Ｂ在大鼠脊髓损伤后的表达规律及其与脊髓功能恢复的相关性。方法：成年雄性SD大鼠65只,随机分成３组,A组：不应用硫酸软骨素酶ABC（chondroitinase ABC,ChABC）降解25只;B组：应用硫酸软骨素酶降解20只;C组：假手术组只暴露脊髓20只。A、B、C 3组分别在术后相同时间位点观察记录动物肢体运动情况并处死动物进行标本检测。采用BBB（Basso-Beattie-Bresnahan）评分法评价大鼠后肢的感觉、运动功能;HE染色计算损伤区总面积;Real-time PCR检测RGMB mRNA的表达;应用免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic pro－tein,GFAP）及神经丝蛋白-200（neurofilament-200,NF-200）双标表达情况。结果：伤后2~4周同一时间段B组BBB评分显著高于A组（P＜0.05）;伤后2周HE染色结果表明,2组损伤区均有空洞形成,B组损伤区面积显著小于A组（P＜0.05）;伤后2到4周GFAP/NF-200双重免疫荧光染色示B组GFAP表达逐渐下调,A组荧光强度值显著高于B组（P＜0.05）;NF-200免疫组化染色阳性纤维穿过损伤区,B组荧光强度值显著高于A组（P＜0.05）;RGMB mRNA表达量B组显著较A组下降（P＜0.05）。结论：微环境中的RGMB浓度在大鼠脊髓损伤后与其后期脊髓功能恢复呈负相关,RGMB抑制剂可能对临床治疗脊髓损伤有一定作用。     

肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的OECs修复大鼠脊髓损伤

目的探讨自体肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的嗅神经鞘细胞（OECs）修复大鼠脊髓损伤（Spinal cord injury，SCI）。方法SD大鼠72只，经T11、T12间隙平面切取2mm的半侧脊髓，制成半切伤模型。动物分为A、B、C三组，每组24只。A组：将自体肋间神经纤维损伤脊髓近端前角灰质与远端前索白质桥接连接，伤侧L1、L2、L3、L4脊神经节与近端后索白质及远端后角灰质与近端后索白质桥接连接，并植入NGF、BDNF基因修饰的OECs；B组：同上述方法移植肋间神经，不植入OECs；C组：单纯脊髓损伤，脊髓半切缺损处填充明胶海棉，术后4、8周对各组动物进行神经功能检查（斜板实验检查，BBB评分），感觉诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检测以及组织学检查。结果术后4周时，A、B组和动物神经功能，斜板试验，BBB评分及SFP、MEP检测结果均优于C组，8周时，A组动物神经功能，斜板试验，BBB评分，SEP、MEP检测结果均优于B组和C组，镜下见移植组织存活，充填于缺损处，部分脊髓组织融合，结论肋间神经移植加NGF、BDNF基因修饰的OECs对SCI的修复有一定的疗效。     

环孢A处理对脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1表达的影响

目的探讨环孢霉素A处理对脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1 mRNA表达的影响.方法成年SD大鼠分SCT组（T9横断）,和SCT后给予环孢霉素A处理组.脊髓横断组用环孢霉素A处理（1 mg/200 g）7 d后处死动物.取后肢骨骼肌用免疫组化染色（n=5）确定RAF-1 mRNA在后肢骨骼肌的定位分布.RT-PCR技术检测RAF-1 mRNA在损伤脊髓大鼠后肢骨骼肌的表达变化（n=8）.结果与手术组比较（0.95±0.13）,环孢霉素A处理（0.75±0.14）导致RAF-1 mRNA在损伤脊髓大鼠后肢骨骼肌的表达明显下调（P〈0.05）;RAF-1蛋白产物主要分布在细胞浆.结论环孢霉素A处理能有效下调脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1 mRNA表达水平.     

嗅鞘细胞复合细胞外基质凝胶移植对损伤脊髓细胞的保护作用

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)和细胞外基质(ECM)凝胶复合移植对损伤脊髓细胞的保护作用。方法:将脊髓半横断伤SD大鼠模型,随机分为嗅鞘细胞移植组(A组)、损伤对照组(B组)和正常组(C组),24h每组8只动物取伤段标本测水离子含量。其余动物第6周、第12周每组8只动物爬坡试验,评价下肢运动功能及运动诱发电位(MEP)检测。结果:脊髓损伤(SCI)后组织水肿,Na+、Ca2+离子浓度升高,K+、Mg2+离子浓度降低。嗅鞘细胞复合细胞外基质凝胶脊髓内移植后显著改善这些变化,使损伤细胞功能有显著恢复。结论:嗅鞘细胞复合细胞外基质凝胶脊髓内移植对SCI有保护作用,其机制可能与改善细胞内环境有关。     

超早期高压氧治疗对脊髓全横断大鼠脊髓水肿及后肢运动功能的影响

目的 探讨超早期高压氧治疗对脊髓全横断损伤大鼠脊髓水肿及后肢运动功能的影响.方法 (1)55只3月龄健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,15只)、模型组(CSCT组,20只)及高压氧组(HBO组,20只).Sham组仅行椎板切除术,其余2组均行T10椎板水平脊髓完全横向切断术.(2)HBO组于术后第3小时置于动物舱内开始高压氧治疗,10天1疗程,共3疗程,其中第1疗程每天2次,第2、3疗程均每天1次,每疗程休息6 d.(3)分别于建模型后第1～6周末.采用BBB运动功能评分法评价并比较两组大鼠后肢运动功能恢复程度;术后6周末取材,观察各组受损脊髓节段组织含水量变化.结果 CSCT组及HBO组大鼠术后第1-6周末BBB运动功能评分逐渐增高,HBO组在2～6周末的BBB运动功能评分均明显高于CSCT组(P<0.05);术后6周末,CSCT组受损脊髓节段组织含水量较Sham组明显增加(P<0.01),HBO组受损脊髓节段组织含水蛩较CSCT组有所减少(P<0.05).结论 超早期高压氧治疗可可减轻脊髓全横断损伤大鼠脊髓组织水肿,促进后肢运动功能的部分恢复,对脊髓有保护作用.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of ultra-early hyperbaric oxygenation on spinal edema and hind limb motor function in rats with complete spinal cord transection. Methods Fifty-five healthy 3-month-old female SD rats were randomly divided into sham-operated group (n=15), complete spinal cord transection group (CSCT group, n=20) and hyperbaric oxygen group (HBO group, n=20). The rats in the sham-operated group underwent only laminectomy, while those in the other 2 groups underwent CSCT at the T10 level. The rats in HBO group were placed in an oxygen chamber 3 h after the operation for 10 days as a treatment course, and 3 treatment courses were administered at the interval of 6 days. In the first treatment course, 2 hyperbaric oxygenation sessions were given daily, and in the following 2 course, only 1 session was given daily. The recovery of hindlimb motor function was evaluated using the open-field Basso-Beattie-Bresnahan (BBB) scoring system once a week for 6 weeks. All the rats were sacrificed 6 weeks after the operation to measure the water content in the injured tissues. Results The BBB scores of CSCT group and HBO group gradually increased with the passage of time after the operation, and from week 2 to week 6, HBO group had significantly higher scores than CSCT group (P<0.05). The water content was markedly increased in CSCT group at 6 weeks after the operation as compared with that in the sham-operated group (P<0.01), and significantly reduced in HBO group in comparison with that in the CSCT group (P<0.05). Conclusion Ultra-early HBO can suppress spinal cord edema and promote hindlimb locomotor recovery in rats with complete spinal cord transection.     

嗅神经鞘细胞移植治疗实验性脊髓损伤的研究

目的:观察移植体外培养的嗅神经鞘细胞(OEC)对大鼠脊髓左半侧横断伤的治疗作用。方法:将应用改良Nash法培养的OECs移植到成年大鼠T10脊髓左半侧横断处,8周后分别采用改良Tarlov法运动学功能评分、辣根过氧化物酶(HRP)顺行示踪、透射电镜观察、P75免疫组织化学染色及HE染色等方法,观察动物的运动功能、脊髓再生的轴突和髓鞘、OEC的存活和脊髓损伤程度。结果:8周时治疗组运动学功能评分高于对照组(P<0.05);治疗组再生轴突穿越损伤区,对照组则无再生轴突穿越;超微结构显示治疗组轴突数量多于对照组,且髓鞘的完整性强于对照组,OEC表现为星形胶质细胞样和雪旺氏细胞样两种,包绕轴突髓鞘;免疫组化染色显示移植后8周OECs仍然存活,在损伤区均匀、散在分布;损伤后8周脊髓损伤区有胶质瘢痕及空洞形成。结论:移植的嗅神经鞘细胞可促进大鼠运动功能的恢复、脊髓轴突的再生和髓鞘的重塑。     

电针对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖表达的影响

目的观察电针对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响,探讨电针对脊髓损伤修复的可能作用机制。方法将成年SD大鼠40只分为正常对照组、模型组和电针组。建立成年大鼠T9～T10段脊髓全横断损伤模型。除电针组于术后当天进行电针治疗外,3个组均分别于术后7、14、28 d取材,用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测脊髓内CSPGs的表达。结果术后7～28 d,与正常对照组相比模型组脊髓损伤邻近组织内CSPGs表达明显增强(P<0.05);与模型组相比,电针组脊髓损伤邻近组织内CSPGs表达明显受到抑制,差异显著(P<0.05)。结论电针能显著降低脊髓损伤后CSPGs的表达,从而减弱CSPGs对轴突再生的抑制作用,这可能是其促进脊髓损伤修复的可能机制之一。     

神经胶质纤维酸性蛋白在电针治疗大鼠脊髓损伤中的变化及意义

目的：探讨神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP）在电针治疗大鼠脊髓损伤（SCI）中的变化及意义。方法：以2月龄Wistar大鼠（96只）为受试对象,随机分为对照组（A组）、SCI组（B组）、治疗对照组（C组）和电流刺激治疗组（D组）,B、C、D组于T9处行脊髓全横断,D组予电针治疗,用Western blot测定各组损伤段脊髓中GFAP不同时相点表达量及其变化,并以苏木精一伊红和免疫组化染色对受损脊髓进行形态学观察。结果：SCI后GFAP表达显著增多,于损伤后2周达顶峰;经电针治疗,GFAP袅扶减少。结论：GFAP县SCI后脊髓神终纤维再毕的雷萼阳碍因子。直针治疗对GFAP的嘉扶且右明显的柳制作用。