肠道菌群代谢产物琥珀酸对非酒精性脂肪性肝病小鼠的影响

目的观察肠道菌群代谢产物琥珀酸对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠血脂、葡萄糖耐量及肝脏病理形态的影响。方法2021年9月—2022年3月于贵州医科大学实验室进行实验。将雄性C57小鼠40只按随机数字表法分为正常饮食组(ND组)、正常饮食+琥珀酸处理组(ND+Suc组)、高脂饮食组(HFD组)、高脂饮食组+琥珀酸处理组(HFD+Suc组),每组10只,ND组给予正常饮食,ND+Suc组在ND组基础上加用2.5%琥珀酸喂养,HFD组采用高脂饲料喂养建立NAFLD模型,HFD+Suc组另加用2.5%琥珀酸喂养,每周监测小鼠体质量,喂养15周后检测葡萄糖耐量,血清三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平,肝组织苏木素—伊红(HE)染色、油红O染色,观察肝脏脂质沉积及肝细胞病理形态变化。结果实验15周后,与ND组比较,HFD组体质量、OGTT试验各时间点(0、15、30、60、120min)血糖、血清TG和TC水平均升高(P<0.01);与HFD组比较,HFD+Suc组体质量、OGTT试验各时间点(0、15、30、60、120min)血糖、血清TG和TC水平均降低(P<0.01);ND组与ND+Suc组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色、油红O染色显示,ND组、ND+Suc组小鼠肝脏组织中肝细胞排列整齐,细胞核大而圆,小叶结构清晰可见,未观察到明显脂质沉积;HFD组小鼠可见肝细胞弥漫分布脂肪沉积,以大小泡混合性肝细胞脂肪变性为主,部分细胞核被挤压变形甚至消失,肝细胞排列紊乱;HFD+Suc组肝细胞脂肪变性及肝脏脂质沉积较HFD组明显减轻。结论肠道菌群代谢产物琥珀酸能降低NAFLD小鼠体质量及血清TG、TC水平,减轻葡萄糖调节受损及肝脏脂质沉积,对于NAFLD具有潜在治疗作用。     

Roux-en-Y胃旁路术对肥胖大鼠脂肪肝的影响及机制研究

目的探讨Roux-en-Y胃旁路术(Roux-en-Y gastric bypass surgery, RYGB)对肥胖大鼠脂肪肝的影响及可能的机制。方法 将30只8周龄雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食组(ND组)、高脂饮食组(HFD组)及高脂饮食且接受RYGB组(HFD+RYGB组),每组10只,分别给予正常饮食、高脂饮食。饲养16周后,对HFD+RYGB组大鼠行RYGB,对ND组及HFD组行假手术。术后,ND组大鼠继续给予正常饮食,HFD组与HFD+RYGB组大鼠接受高脂饮食。术后第4周,处死大鼠,收集血样,采用ELISA法测定大鼠血清TG、TC、游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)浓度。观察大鼠肝脏外形,取肝脏组织,行H-E染色及油红O染色,显微镜下观察肝脏组织的病理学变化。采用real-time PCR检测肝组织糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)、固醇调节原件结合蛋白-1c(SREBP-1c)和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA表达水平。结果 HFD组大鼠体质量、肝脏湿重及内脏脂肪总量高于ND组(P＜0.05),HFD+RYGB组大鼠体质量、肝脏湿重及内脏脂肪总量低于HFD组(P＜0.05);HFD大鼠血清TG、TC、FFA水平高于ND组(P＜0.05),HFD+RYGB组大鼠血清TG、TC、FFA水平低于HFD组(P＜0.05);HFD组肝脏TG、TC含量高于ND组(P＜0.05),HFD+RYGB组大鼠肝脏TG、TC低于HDF组(P＜0.05);H-E及油红O染色结果显示,HFD+RYGB组干细胞脂质沉积、脂滴空泡减少;术后第4周,HFD+RYGB组大鼠肝脏中的ChREBP和SREBP-1c的mRNA的表达量较HFD组均显著降低(P＜0.05)。结论 RYGB能显著缓解肝脏脂肪沉积及血脂,其机制可能与抑制脂肪酸合成途径的关键分子ChREBP和SREBP-1c有关。     

Roux-en-Y胃旁路手术对肥胖大鼠脑组织炎症和脂质蓄积的影响

目的:探讨Roux-en-Y胃旁路(RYGB)手术对高脂饮食诱导的肥胖大鼠脑组织炎症和脂质蓄积的影响.方法:将30只4周龄雄性Wistar大鼠随机分为正常饮食组(ND组)、高脂饮食组(HFD组)及高脂饮食且接受RYGB手术组(HFD+RYGB组),各10只.ND组大鼠给予正常饮食,HFD组和HFD+RYGB组给予高脂饮食.饲养16周后,HFD + RYGB组大鼠行RYGB术,ND组和HFD组行假手术.术后ND组继续正常饮食,HFD组和HFD+RYGB组继续高脂饮食,术后第4周处死大鼠,收集血样,ELISA法测定大鼠血清三酰甘油 (TG)、胆固醇 (TC)和游离脂肪酸(FFA)水平;并取大鼠脑组织,ELISA法检测大鼠脑组织匀浆二酰基甘油(DAG)和FFA及肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1、IL-6水平,免疫组织化学法检测大鼠下丘脑离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达,电镜观察大鼠下丘脑神经元形态学变化.结果:HFD组大鼠血清TG、TC、FFA水平均高于ND组和HFD+RYGB组(P<0.05~P<0.01);HFD+RYGB组FFA水平明显高于ND组(P<0.01),2组TG、TC水平差异均无统计学意义(P>0.05).HFD组大鼠脑组织DAG、FFA水平均显著高于HFD+RYGB组和ND组(P<0.01);HFD+RYGB组脑组织DAG、FFA水平亦均显著高于ND组(P<0.01).ND组和HFD+RYGB组大鼠脑组织中TNF-α、IL-1和IL-6水平均显著低于HFD组(P<0.01);HFD+RYGB组TNF-α水平亦明显高于ND组(P<0.01),但2组IL-1和IL-6水平差异均无统计学意义(P>0.05).免疫组织化学检测显示,HFD组和HFD+RYGB组大鼠下丘脑Iba-1和GFAP阳性星形胶质细胞数量增多,胞体增大,突起增粗变长;与HFD组比较,HFD+RYGB组Iba-1和GFAP阳性表达减少.电镜下可见HFD组大鼠下丘脑神经元线粒体水肿、空泡形成及大量自噬体形成,HFD+RYGB组大鼠下丘脑神经元病变减轻.结论:RYGB可以下调高脂饮食的诱导肥胖大鼠下丘脑脑组织中TNF-α、IL-1、IL-6的表达,减轻下丘脑神经元病变,改善脑组织的炎症状态,降低脑组织中脂质含量.     

上皮紧密连接与炎性肠病的研究进展

炎症性肠病(IBD)主要是一组反复发作的慢性非特异性肠道炎症性疾病,包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。IBD发病时,肠黏膜屏障功能异常,抗原移位刺激免疫细胞,产生大量炎性细胞因子及介质,炎性分子破坏紧密连接,加剧损伤肠黏膜屏障功能。通过保护肠上皮细胞骨架、修复上皮细胞及细胞间紧密连接能改善肠上皮屏障功能,这也是当前临床治疗IBD的新策略和新思路。     

高脂饮食对非酒精性脂肪性肝炎小鼠肠肝免疫及肠道菌群的影响

目的研究高脂饮食对遗传易感小鼠肠肝免疫及肠道菌群的影响。方法高脂或正常饮食喂饲野生型(WT)小鼠和肝脏特异性PTEN基因缺失（PtenCKO）小鼠10周,构建非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）模型。获取不同小鼠肝脏组织进行组织病理染色,采用荧光定量PCR法检测紧密连接蛋白基因Claudin-1、ZO-1的表达量,采用ELISA法检测血浆D-乳酸（D-LA）的浓度,采用流式细胞术检测调节性T细胞（Tregs）并分析其比例,采用16SrDNA高通量测序检测小鼠肠道菌群组成及结构。结果高脂饮食下,PtenCKO小鼠肝脏呈典型的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）病理表现,肝细胞脂肪变性、小叶内炎症及肝细胞气球样变;回肠绒毛损伤并伴有炎症细胞浸润,紧密连接蛋白Claudin-1下调,ZO-1异常上调,肠黏膜屏障功能指标D-LA上调。肝脏、肠系膜淋巴结Tregs比例均上调;肠道菌群丰富度及多样性降低,肠道致病菌和条件致病菌丰度增加,肠道有益菌丰度减少,总体表现为肠道菌群失调;相同饮食组的小鼠肠道菌群构成较为相似。结论高脂饮食加重PtenCKO小鼠的肝脏损伤,引起肠道屏障受损、肠道菌群失调和免疫细胞Tregs比例失衡,加剧遗传易感小鼠肝脏炎症反应,加快NASH病程进展。     

腺苷酸A2A受体对小鼠小肠急性缺血再灌注损伤中肠屏障功能的影响

目的 探讨腺苷酸A2A受体(A2AR)在小鼠小肠急性缺血再灌注(I/R)刺激所致肠黏膜屏障损伤机制中的作用.方法 6～8周龄雄性C57BL/6小鼠12只,分为假手术组和I/R组;A2AR基因敲除雄性C57BL/6(A2AR-/-)小鼠12只,分为A2AR-/-+假手术组和A2AR-/-+I/R组(n=6).采用夹闭肠系膜上动脉30 min,再灌注6h建立小鼠肠I/R模型.HE染色观察小肠黏膜的形态学变化;免疫荧光及蛋白质印迹检测肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1蛋白变化,尤斯灌流仪检测肠上皮通透性变化.结果 HE染色显示假手术组和A2AR-/-+假手术组小肠黏膜完整、无水肿,两组无明显差异;而I/R组和A2AR-/-+I/R组小肠黏膜明显水肿、绒毛断裂、部分脱落,且A2AR-/-+I/R组损伤程度明显重于L/R组.小肠黏膜上皮通透性检测发现,假手术组和A2AR-/-+假手术组没有显著性差异;与假手术组相比,I/R组和A2AR-/-+ I/R组小肠黏膜跨上皮电阻(trans-epithelium electrical resistant,TER)值均显著下降(P＜0.01),且A2AR-/-+I/R组相比I/R组TER值下降更为明显(P＜0.05).免疫荧光及蛋白定量分析显示假手术组与A2AR-/-+假手术组肠上皮高表达ZO-1,而在I/R组和A2AR-/-+I/R组中ZO-1表达明显减少,同时A2AR-/-+I/R组中ZO-1的表达显著低于I/R组(P＜0.05).结论小肠I/R刺激可诱导肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1表达与分布异常,造成肠黏膜屏障损伤;而A2AR可通过调控肠上皮细胞ZO-1表达加强肠黏膜屏障功能,在肠I/R损伤中发挥潜在的保护作用.     

霍山石斛减轻高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝损伤

目的 研究霍山石斛(Dendrobium huoshanense C.Z.Tang et S.J.Cheng)是否能减轻高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪肝损伤。方法 采用高脂饮食方法建立小鼠非酒精性脂肪肝损伤模型,并使用霍山石斛进行治疗。使用ELISA试剂盒检测各组小鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。用HE染色法观察肝脏组织的损伤情况。使用油红O染色法检测肝脏的脂质蓄积。使用天狼星红染色法观察肝脏纤维化。通过检测血清中炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-ɑ)水平和肝脏组织中CD68的表达来分析炎症状态。结果 与正常组比较,非酒精性脂肪肝模型组小鼠血清中AST、ALT、TG、TC和LDL-C的含量显著升高,肝脏组织出现严重的肝脏损伤、脂质蓄积和肝脏纤维化。并且非酒精性脂肪肝模型组小鼠也出现了严重的炎症反应,主要表现为：血清中IL-1β、IL-6和TNF-ɑ含量显著升高,肝脏组织中CD68表达显著升高。与非酒精性脂肪肝模型组比较,霍山石斛治疗可以显著减轻非酒精性脂肪肝小鼠的这些肝损伤表现。结论...     

褪黑素对非酒精性脂肪性肝病中NLRP3炎症小体和肝脏纤维化的影响及机制研究

目的 观察褪黑素(melatonin,MLT)对NLRP3炎症小体和肝脏纤维化的影响,阐明其对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)防治作用及相关的分子机制.方法 利用高脂饮食(high-fat diet,HFD)喂养的方法构建NAFLD动物模型,分为正常饮食组(NFD组)、HFD组、褪黑素干预组(HFD+ MLT组);采用游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)干预HepG2细胞的方法构建NAFLD细胞模型,分为未处理组(ctl组)、模型组(FFA组)、褪黑素干预组(FFA+ MLT组)、褪黑素干预同时过表达lncRNA MALAT1组(FFA+ MLT+ MALAT1组);分别检测NLRP3炎症小体、纤维化、lncRNA MALAT1等相关指标.结果 HFD+ MLT组小鼠血清中TG、TC和LDL的水平低于HFD组(P＜0.05);HFD组小鼠肝脏组织中NLRP3、ASC、活化caspase-1、TGF-β1和p-Smad2蛋白相对表达量高于NFD组(P＜0.05)和HFD+ MLT组(P＜0.05);与HFD组相比,HFD+ MLT组小鼠肝脏组织中lncRNA MALAT1、col-lage Ⅰ和collage Ⅲ mRNA水平明显降低(P＜0.05);与FFA组相比,FFA+ MLT组中NLRP3、ASC、活化caspase-1、TGF-β1、p-Smad2和lncRNA MALAT1表达明显降低(P＜0.05).与FFA+ MLT组相比,FFA+ MLT+ MALAT1组中NLRP3、ASC、活化caspase-1、TGF-β1和p-Smad2蛋白相对表达量减少现象得到逆转(P＜0.05).结论 褪黑素通过抑制NLRP3炎症小体介导的炎症反应和TGF-β1/Smad介导的纤维化,改善NAFLD,其与下调lncRNA MALAT1有关.     

内脂素通过PI3K/Akt/FoxO1信号通路对糖尿病KKAy小鼠骨骼肌糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响

目的探讨内脂素对糖尿病KKAy小鼠骨骼肌糖脂代谢及胰岛素抵抗的影响,初步分析其通过PI3K/Akt/FoxO1途径对糖尿病小鼠骨骼肌组织可能的作用机制。方法 8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为普食(ND)组、普食+内脂素(ND+V)组、高脂(HFD)组和高脂+内脂素(HFD+V)组,同周龄雄性KKAy小鼠成模后随机分为糖尿病(DM)组和糖尿病+内脂素(DM+V)组,其中ND+V组、HFD+V组和DM+V组连续3 d腹腔注射内脂素重组蛋白。检测各组小鼠空腹血糖(FBG)、餐后血糖(PBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)及空腹胰岛素(FIns),并进行葡萄糖耐量实验(GTT)、胰岛素耐量实验(ITT),计算曲线下面积(AUC)及稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR); RT-qPCR及Western blot检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、叉头框转录因子1(FoxO1)、丙酮酸脱氢酶激酶4(PDK4)和磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)等相关分子的表达水平。结果分别与ND组和HFD组比较,DM组小鼠的体重、摄食、FBG、PBG、TC、TG、FFA、FIns、AUC_(GTT)、AUC_(ITT)及HOMA-IR水平均显著增高(P0.05)。与DM组相比,DM+V组FBG、TC、TG、AUC_(GTT)、AUC_(ITT)及HOMA-IR水平均显著降低(P0.05)。分别与ND组和HFD组比较,DM组PI3K、Akt的mRNA表达水平均显著降低(P0.001),而FoxO1的mRNA表达水平显著增高(P0.05);与DM组比较,DM+V组PI3K及Akt的mRNA表达均显著增高,FoxO1的mRNA表达显著降低(P0.01)。与ND组比较,DM组PI3K_(110α)、p-Akt蛋白表达水平显著降低,FoxO1、p-FoxO1和PDK4的蛋白表达水平均显著增高(P0.05);与HFD组相比,DM组的p-Akt、p-FoxO1的蛋白表达水平均显著降低,FoxO1、PDK4和PEPCK的蛋白表达水平均显著增高(P0.05);与DM组比较,DM+V组中PI3K_(110α)、p-Akt及p-FoxO1的蛋白表达均显著增高,而FoxO1、PDK4和PEPCK的蛋白表达水平均显著降低(P0.05)。结论内脂素可能通过PI3K/Akt/FoxO1途径下调糖尿病小鼠骨骼肌PDK4的表达,发挥改善糖脂代谢和胰岛素抵抗的作用。     

成纤维细胞生长因子21参与调控非诺贝特对肝脏脂质代谢的改善作用

目的：探讨成纤维细胞生长因子21（FGF21）介导非诺贝特对小鼠肝脏脂质代谢的调控。方法：将实验小鼠分为4组,均予高脂饮食喂养：野生型对照组（WT+HFD+CTL）、野生型非诺贝特治疗组（WT+HFD+FF）、FGF21基因敲除对照组（FGF21 KO+HFD+CTL）、FGF21基因敲除非诺贝特治疗组（FGF21KO+HFD+FF）。ELISA法检测小鼠血清的FGF21及Adiponectin含量;HE与油红O染色分别用于检测肝脏组织形态学变化和脂质堆积情况;TG和TC检测试剂盒用于检测血清TG及TC的变化;qRT-PCR检测PPARα、FGF21、肝脏胆固醇调节元件结合蛋白Srebp-2、脂质氧化、分解、转运等代谢调节基因（Acaca、Acacb ABCG5、ABCG8、Cyp7a1）、PPARγ、脂联素的mRNA表达。结果：非诺贝特处理4周能显著上调小鼠肝脏PPARα和FGF21表达水平,抑制小鼠体质量增加,下调血清异常血脂水平,减轻肝脏脂质沉积状况（P ＜0.05）。非诺贝特引发的保护作用在FGF21基因缺失后出现一定程度的减弱。HE和油红O染色结果显示,敲除FGF21基因减弱非诺贝特对高脂饮食喂养小鼠肝脏脂质堆积的改善作用。在分子机制方面,非诺贝特处理能显著上调脂质氧化、分解、转运等代谢调节基因（Acacb、ABCG5、Cyp7a1等）的表达,下调Srebp-2的表达（P ＜0.05）,然而,FGF21基因缺失时,这些效应被显著抑制（P ＜0.05）。同时,FGF21基因敲除可显著抑制非诺贝特诱导的PPARγ和Adiponectin的mRNA表达上调及血清水平的Adiponectin含量升高现象（P ＜0.05）。结论：FGF21介导非诺贝特发挥抗脂肪肝病变的生物学效应。     

血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶9与胃癌的侵袭和转移

胃癌的侵袭和转移依赖于肿瘤间质中的血管生成和细胞外基质的降解。血管内皮生长因子(VEGF)是目前所知的作用最强的促血管生成因子之一,它可以直接或间接地参与血管生成的每个环节。基质金属蛋白酶9(MMP-9)是一种与胃癌侵袭和转移密切相关的蛋白酶,它通过降解细胞外基质引起胃癌的侵袭和转移。现以VEGF、MMP-9的主要生物学效应、与肿瘤侵袭转移(尤其是胃癌)的关系及可能机制进行综述。     

血管内皮细胞生长因子及其受体与白血病

血管新生在白血病发生、发展过程中起着重要的作用,血清血管内皮生长因子(VEGF)水平能够在一定程度上解释白血病血管新生现象,VEGF是作用最强、特异性最高的血管新生调节因子,白血病细胞不仅分泌VEGF还不同程度的表达VEGF受体,VEGF在刺激白血病细胞增殖、迁移中发挥重要作用。动态检测血清VEGF水平可在一定程度上了解白血病的状态和体内白血病细胞的总负荷量,对白血病的疗效及预后判断有一定的指导意义。文章综述VEGF及其受体与白血病的关系。     

浅谈治肺癌兼顾治风

[目的]探讨治疗肺癌兼顾治风的临床意义.[方法]通过对中医基础理论的分析、中医文献的阅读,以及结合导师奚肇庆教授临证治疗肺癌的经验,初步探析治疗肺癌兼顾治风的运用.[结果]无论外风还是内风,在肺虚情况下,均可侵袭肺脏,同时与气滞、血瘀、痰结、湿聚、热毒等相互胶结,日久积滞而成肺癌,并可导致肺癌的发展及转移.[结论]肺癌的发病机理复杂,风邪在肺癌发病、发展过程中均有促进的作用.在治疗时兼顾治风,可延缓疾病进程,缓解临床症状,提高临床疗效.     

电子健康及其发展研究

近几年电子健康体系建设引起广泛关注并取得成效。系统介绍电子健康发展历程,结合存在的一些问题探讨如何完善电子健康体系。通过现状分析对电子健康未来发展趋势进行展望,即发展人本电子健康,并就如何发展人本电子健康事业提出建议。     

象牙塔里的人们依旧如故

我有一个叫Betty的病人，她今年75岁。从我认识她以来，她就一直患有严重的类风湿关节炎，到现在已经快30年。尽管做了髋关节和膝关节的置换，她还是痛得很厉害。而最近丈夫的去世使她的病情更糟了。现在，她又面临一个新的问题：过去对她最有效的止痛剂即将从市场上消失。     

The ivory towers are as resilient as ever

I have a patient called Betty. Betty is 75 and is weighed down by more than her share of troubles. She has had severe rheumatoid arthritis for as long as I have known her - which is approaching 30 years. Her pains, which are still severe despite hip and knee replacements, have been augmented by the recent death of her husband. Now she faces a further hurdle： the painkiller that is most effective for her is about to be withdrawn.     

脑瘫患儿和正常儿童一样快乐

欧洲的一项横断面调查报告称，脑瘫儿童和正常儿童的生活质量相近。500名年龄在8到12岁之间的脑瘫儿童通过一种最近起用的Kidscreen评分系统给自己生活的10个方面打分。他们的答案与一般的健康儿童不相上下，并且在某项领域—对学校环境方面，脑瘫患儿似乎比健康儿童更快乐。