受体型蛋白酪氨酸磷酸酶在大鼠肝星状细胞表达及在肝纤维化发生中的意义

目的:受体型蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPRJ)在多种组织包括肝内表达.目前认为其作为一种潜在抑癌基因对于细胞增殖及迁徙具有抑制作用.文章通过观察PTPRJ在大鼠肝星状细胞中的表达及功能,探讨PTPRJ在肝纤维化发生中的意义.方法:四氯化碳(CCl4)皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,用Western技术检测PTPRJ在肝纤维化组织中的表达变化,采用Percoll梯度离心法分离培养原代大鼠肝星状细胞,采用细胞免疫荧光法观察PTPRJ表达情况,RT-PCR法测定其mRNA在肝星状细胞体外活化过程中的表达变化. 结果:免疫荧光及RT-PCR显示肝星状细胞中PTPRJ表达呈阳性;在CCl4诱导的实验性大鼠肝纤维化模型中随着不同时间段纤维化程度加重,PTPRJ表达减少;原代大鼠肝星状细胞体外培养自活化过程中,RT-PCR测定的PTPRJ表达逐步减少. 结论:PTPRJ在原代肝星状细胞中表达为阳性,并在肝星状细胞活化及肝纤维化过程中表达减少,提示PTPRJ可能对于肝纤维化发生发展起负性调控作用.     

柴胡皂苷-D对乙醇损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的:研究柴胡皂苷-d(SS-d)对乙醇损伤大鼠肝细胞的保护作用.方法:采用胰蛋白酶消化、分离大鼠肝细胞进行原代培养,乙醇体外诱导肝细胞损伤,以不同浓度的SS-d对肝细胞保护,检测培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性,肝细胞内丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)的活性,MTT法检测肝细胞存活率.结果:SS-d可明显提高肝细胞存活率、抑制乙醇引起的ALT活性和MDA含量的升高以及GSH-px活性的降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:SS-d对乙醇损伤大鼠肝细胞有明显的保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关.     

中医药抗肝纤维化实验研究进展

中医药抗肝纤维化的实验研究从动物体内实验到细胞体外实验均取得了较大进展，随着分子生物学技术的广泛应用及血清药理方法学、肝星状细胞分离培养技术的引入，中医药抗肝纤维化的机制研究已经接近国际先进水平。现从实验模型研究和实验技术方法2个方面就近5a来中医药抗肝纤维化实验研究作一综述。     

柴胡皂苷d对肝星状细胞内雌激素受体转录激活的影响

【目的】观察柴胡皂苷d对大鼠肝星状细胞内的雌激素受体转录激活的调节作用,探讨柴胡皂苷d的药理机制。【方法】体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,将雌激素受体的特异性报告基因ERE-tk-Luc用人工细胞膜介导细胞瞬时转染法转入HSC-T6细胞中,在不同药物浓度、不同时间作用点及加用雌激素受体抑制剂ICI182.780等条件下,采用双荧光素酶报告基因检测系统观察柴胡皂苷d及雌二醇对转染细胞荧光素酶(Luc)表达的影响。【结果】柴胡皂苷d浓度为0.01~5μmol/L、雌二醇浓度为0.01~1μmol/L时,荧光素酶活性呈剂量依赖性递增;柴胡皂苷d为5μmol/L,而雌二醇为1μmol/L时,荧光素酶活性最高;当雌二醇浓度到达5μmol/L时,效应减弱。且以5μmol/L柴胡皂苷D、1μmol/L雌二醇分别诱导细胞24 h时,荧光素酶表达活性最高。ICI182.780可明显抑制柴胡皂苷d、雌二醇对荧光素酶活性的诱导作用。【结论】柴胡皂苷d可促进HSC-T6细胞内雌激素受体转录激活。     

乙醛刺激大鼠肝星状细胞株HSC-T6增殖的体外研究

肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的活化增殖与酒精性肝纤维化的形成密切相关,是酒精性肝损伤发展至肝纤维化的中心环节[1]。乙醇的代谢产物乙醛是刺激HSC活化增殖,导致酒精性肝纤维化发生的关键因子[2]。本研究以乙醛作为刺激物,观察乙醛刺激大鼠肝星状细胞增殖的最佳浓度和最佳时间,为后期酒精性肝纤维化的的相关研究提供实验数据。     

大蒜素对大鼠肝星状细胞单胺氧化酶表达的影响

目的观察大蒜素对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖及细胞外基质合成酶-单胺氧化酶(MAO)的影响,探讨大蒜素抗肝纤维化的作用及其机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6。以MTT法检测大蒜素作用下对大鼠肝星状细胞增殖的影响,real time RT-PCR检测肝星状细胞的MAO m RNA的表达水平、Western blot检测肝星状细胞的MAO蛋白的表达水平。结果 HSC-T6大蒜素处理组与空白对照组比较,增殖抑制率明显提高,差异有统计学意义(P0.05);MAO的m RNA及蛋白表达水平均明显下调,并且大蒜素浓度增高时,MAO的m RNA及蛋白表达水平则逐渐下调,DATS高浓度实验组(24μg/ml)对MAO的抑制作用明显强于溶剂对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论大蒜素对HSC-T6的增殖和MAO的表达均有抑制作用,且对MAO的表达抑制作用具有剂量依赖性,可为临床开发抗肝纤维化的新药物提供理论基础。     

益肝康的药物血清对大鼠HSCs增殖及PDGF基因表达的影响

目的探讨中药复方益肝康抗肝纤维化的作用机制.方法给正常大鼠灌服益肝康,提取药物血清,温育体外培养的肝星状细胞.3H-TdR掺入法测定细胞增殖,流式细胞技术分析细胞周期,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学法检测PDGF-BB蛋白表达.结果益肝康药物血清显著抑制肝星状细胞的增殖,可使细胞生长周期延长,细胞增殖、活力受抑,并明显抑制PDGF-BB蛋白表达.结论益肝康可抑制肝星状细胞增殖,对PDGF-BB表达的抑制作用可能是该方抗肝纤维化的主要机制之一.     

柴胡皂苷d预防实验大鼠肝纤维化的作用观察

目的：观察柴胡皂苷d抗实验大鼠肝纤维化的作用和可能的作用机理。方法：本实验将18只雄性SD大鼠随机分为正常组，模型组和柴胡皂苷d（saikosaponin d，SSd）预防组。模型组和SSd预防组大鼠均腹腔注射二甲基亚硝胺（DMN），建立大鼠肝纤维化模型。在造模的同时予以SSd腹腔注射预防，1次／d，共4周。正常组大鼠只相应注射生理盐水。检测肝功和血清肝纤维化指标Ⅳ型胶原（IV—C）水平。病理学观察HE和天狼星红染色切片。免疫组化法测定α—SMA和TGF—β，在肝组织中的表达。结果：和模型组相比SSd预防组大鼠血清ALT和肝纤维化标志物IV—C的水平显著下降（P〈0．01），表明SSd对肝脏具有保护作用；HE和天狼星红染色观察到肝纤维化程度改善，胶原沉积面积明显减少（P〈0．01）；免疫组化结果表明SSd显著抑制α—SMA和TGF—β在大鼠肝组织中的表达（P〈0、01）。结论：SSd具有预防DMN诱导的肝纤维化作用，能够预防肝纤维化的发展，可能和它调节胶原沉积，抑制肝星状细胞活化作用有关。     

调肝理脾方对肝脏星状细胞增殖的影响

目的:研究调肝理脾方抗酒精性肝纤维化的分子药理学机制,主要探讨调肝理脾方对体外培养肝脏星状细胞增殖的影响。方法:应用调肝理脾方煎剂给大鼠两次灌胃后不同时间(1h、2h、3h)获得的药理血清作用于培养的传代肝脏星状细胞(HSC),采用MTT法观察不同浓度和取血时相药理血清对传代HSC活化和增殖的影响。结果:给大鼠第二次灌胃后1h获得的药理血清对HSC的存活没有明显的影响,而对其增殖的抑制作用较强;乙醛可以刺激HSC的活化和增殖,调肝理脾方可以抑制乙醛作用下HSC的增殖。结论:HSC的活化和过度增殖是酒精性肝纤维化形成的主要原因,调肝理脾方是通过抑制HSC的活化和增殖,从而抑制胶原纤维的合成而起到了预防和治疗酒精性肝纤维化的作用。     

抗纤Ⅰ号复方药物血清对肝星状细胞内钙离子的影响

体内外研究表明活化的肝星状细胞收缩和舒张可调节肝微循环,Ca^2 在介导肝星状细胞舒缩中发挥重要作用。本研究用激光扫描共聚焦显微镜观测抗纤Ⅰ号复方药物血清(简称中药血清)对体外培养的肝星状细胞内Ca^2 的影响,从肝细胞信号转导途径探讨抗纤Ⅰ号防治肝纤维化门脉高压的作用机制。     

柴胡对肝星状细胞胶原蛋白分泌的影响

目的观察柴胡对肝星状细胞胶原蛋白分泌的影响.方法体外培养肝星状细胞,选择48h细胞存活率＞90%的药物浓度作为下述实验浓度,ELISA法检测细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量.结果与对照组比较,柴胡组细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量明显降低(P＜0.01).结论柴胡可抑制肝星状细胞胶原蛋白的分泌,具有抗肝纤维化的作用.     

罗汉果甜苷对肝纤维化大鼠肝组织病理学和细胞的影响

摘要：目的研究罗汉果甜苷对复合因素所致肝纤维化病理组织改变及肝脏主要细胞肝细胞和肝星状细胞的影响。方法通过给予大鼠高脂、乙醇和四氯化碳三种因素建立复合因素所致肝纤维化模型,观察罗汉果甜苷对肝纤维化大鼠肝脏病理组织学、肝星状细胞活化标志a～平滑肌肌动蛋白（a—smoothmuscleactin,a—SMA）表达和肝细胞凋亡的影响。结果不同剂量罗汉果甜苷对肝组织纤维化病变有一定程度的改善作用,可抑制肝脏a—SMA表达,减少肝细胞凋亡的作用。结论罗汉果甜苷对肝纤维化大鼠肝星状细胞活化和肝细胞凋亡有一定的抑制作用,可能为其抗纤维化的机制之一。     

大蒜素对大鼠肝星状细胞基质金属蛋白酶抑制剂-1表达的影响

目的 观察大蒜素对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）增殖及细胞外基质降解酶-金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的影响,探讨大蒜素抗肝纤维化的作用及其机制.方法 体外培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6.MTT法检测大蒜素作用下对大鼠肝星状细胞增殖的影响、Real-time RT-PCR检测肝星状细胞的TIMP-1mRNA水平、Western blot检测肝星状细胞的TIMP-1蛋白的表达水平.结果 HSC-T6大蒜素处理组与空白对照组比较,增殖抑制率明显提高,差异有统计学意义（P ＜0.01）;TIMP-1的mRNA及蛋白表达水平均明显下降,并且大蒜素浓度增高时,TIMP-1的mRNA及蛋白表达水平则逐渐下降,大蒜素高浓度（24μg/mL）组对TIMP-1的抑制作用明显高于空白对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 大蒜素对HSC-T6增殖和TIMP-1的表达均有抑制作用,为临床开发抗肝纤维化的新药物提供了理论基础.     

桃红四物汤加丹参对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨桃红四物汤加丹参时活化的人肝星形细胞（HSC）增殖和凋亡的影响，阐明其时肝纤维化的防治作用。方法将人肝星状细胞体外培养，加入不同浓度桃红四物汤加丹参干预48h后，采用MTT法以及流式细胞仪检测其增殖及凋亡情况。结果桃红四物汤加丹参0．4mg／mL、0．2mg／mL两种浓度均能抑制肝星状细胞增殖，并能促进其凋亡。结论桃红四物汤加丹参具有抑制人肝星状细胞的增殖，诱导肝星状细胞凋亡的作用。可能为肝纤维化的中医药防治研究提供新的思路。     

玉郎伞多糖对肝星状细胞增殖和Ⅰ型胶原合成的影响

目的 研究玉郎伞多糖(YLS)对肝星状细胞(HSC)增殖和Ⅰ型胶原合成的影响.方法 选择肝星状细胞系作为体外研究对象,MTT法测定肝星状细胞的增殖,LDH法检测YLS对肝星状细胞的毒性作用,ELISA法测定Ⅰ型胶原含量.结果 YLS(12.5～100μg/mL)可明显降低培养上清液中Ⅰ型胶原水平,抑制肝星状细胞的增殖,并呈剂量依赖性.结论 YLS可能通过抑制HSC的增殖及Ⅰ型胶原的合成等机制从而抑制肝纤维化的形成.     

大鼠胰星状细胞体外分离培养的实验研究

目的体外分离培养胰星状细胞(PSC)以建立合适的体外模型，为进一步研究胰纤维化的分子发生机制打下实验基础。方法采用改良Apte MV酶消化法体外分离培养PSC，胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化染色和荧光倒置显微镜观察自发绿色荧光对原代培养的PSC加以鉴定。结果PSC与肝星状细胞(HSC)具有相似的特征，细胞呈梭形或星形，细胞骨架蛋白GFAP染色阳性，由于胞质内含维生素A脂滴，在荧光倒置显微镜下于328nm波长处可见自发绿色荧光。结论改良酶消化法可用于体外分离培养PSC，PSC分离培养的成功为进一步研究PSC活化与抑制信号通路的分子机制提供了体外模型。     

玉郎伞多糖对肝星状细胞增殖和I型胶原合成的影响

目的研究玉郎伞多糖（YLS）对肝星状细胞（HSC）增殖和I型胶原合成的影响。方法选择肝星状细胞系作为体外研究对象，MTT法测定肝星状细胞的增殖，LDH法检测YLS对肝星状细胞的毒性作用，ELISA法测定I型胶原含量。结果YLS（12．5-100μg／mL）可明显降低培养上清液中I型胶原水平，抑制肝星状细胞的增殖，并呈剂量依赖性。结论YLS可能通过抑制HSC的增殖及I型胶原的合成等机制从而抑制肝纤维化的形成。     

长爪沙鼠肝星状细胞的分离培养与鉴定

目的探索长爪沙鼠稳定、经济的肝星状细胞分离和培养方法,为深入探讨长爪沙鼠肝纤维化的细胞机制提供技术支撑。方法取成年雄性长爪沙鼠,用链蛋白酶、胶原酶及DNA酶体内门静脉灌注消化长爪沙鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心,分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,α-SMA,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞性质。结果肝星状细胞得率为0.5~1×107/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。原代培养3 dα-SMA阳性细胞达75%以上,传代培养后,α-SMA,Desmin阳性达100%。结论成功建立了稳定可靠的长爪沙鼠肝星状细胞分离培养方法,为肝脏相关疾病研究和防治药物的开发提供了技术支持。     

鳖甲煎丸药物血清对PDGF诱导大鼠肝星状细胞增殖及迁移的影响

[目的]研究鳖甲煎丸药物血清对PDGF诱导的肝星状细胞(HSC)增殖和迁移的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制。[方法]通过大鼠整体给药,制备浓度分别为1.5 g·kg-1、3 g·kg-1、6 g·kg-1的鳖甲煎丸药物血清,分别处理大鼠肝星状细胞HSC-T6和由PDGF-BB干预的HSC-T6,MTT法观察细胞体外增殖情况,采用Transwell小室检测细胞迁移。[结果]MTT检测结果显示,浓度分别为1.5 g·kg-1、3 g·kg-1、6 g·kg-1的鳖甲煎丸药物血清在不同血清百分比(5%、10%、20%)对HSC细胞体外增殖均有显著的抑制作用(P0.05,P0.01),在不同血清百分比(10%、15%、20%)对10 ng·m L-1PDGF干预24 h的HSC细胞增殖有显著的抑制作用(P0.05,P0.01),未呈现浓度依赖关系;Transwell小室实验结果显示,10%各剂量药物血清对10 ng·m L-1 PDGF诱导的HSC细胞迁移有显著的抑制作用(P0.05)。[结论]鳖甲煎丸药物血清对HSC-T6细胞体外增殖及PDGF诱导的HSC增殖、迁移均有显著的抑制作用,推测鳖甲煎丸可能通过抑制肝星状细胞增殖和迁移发挥抗肝纤维化作用。