胶质瘤egr-1基因表达水平与其细胞增殖和凋亡关系的研究

目的：探讨胶质瘤细胞egr-1基因表达水平与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性及凋亡程度的关系。方法：用原位杂交、原位细胞凋亡检测和免疫组化染色方法观察了73例不同级别的胶质瘤。结果：73例胶质瘤egr-1mRNA和EGR-1蛋白阳性表达率均为100％．这两种阳性肿瘤细胞密度均随肿瘤恶性程度升高而相应增加，不同级别组间比较差异均有显著性（P〈0．01）。73例胶质瘤增殖细胞核抗原（PCNA）阳性肿瘤细胞和凋亡肿瘤细胞检出率均为100％。随肿瘤恶性程度升高，PCNA阳性肿瘤细胞密度增加而凋亡肿瘤细胞密度减少，不同级别组间比较差异均有显著性（心0．05～0．01）。经直线相关分析证实，egr-1mRNA、EGR-1蛋白和PCNA阳性肿瘤细胞密度彼此间均呈显著性正相关（r=0．685～0．999，P〈0．01），前三种阳性肿瘤细胞密度均与凋亡肿瘤细胞密度呈显著性负相关（r=-0．758—0．775，P〈0．01）。结论：egr-1基因表达水平对评价胶质瘤生物学行为有重要参考价值。胶质瘤细胞egr-1基因表达异常增加可能是促进肿瘤细胞增殖和抑制其凋亡的重要因素，并在胶质瘤发生及恶性进展过程中均起重要作用。     

RNA干扰对肾癌细胞端粒酶活性及增殖、凋亡的影响

目的 探讨针对人端粒酶RNA（hTR）及其催化亚基（hTERT）的小干扰RNA（siRNA）对肾癌细胞端粒酶活性及其增殖、凋亡的影响。方法 将hTR-siRNA、hTERT-siRNA（100nmol／L）单独或联合转染人肾癌786—0细胞,采用RT-PCR法检测hTR、hTERT mRNA表达,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫组化TUNEL法检测细胞凋亡。结果 （1）hTR-siRNA可显著降低786—0细胞hTR mRNA表达（P〈0．01）,hTERT-siRNA可显著降低hTERT mRNA表达（P〈0．01）,但彼此互不影响。（2）二者均能显著抑制端粒酶活性（P〈0．01,P〈0．01）,并增加786—0细胞增殖抑制率及凋亡细胞阳性率（P〈0．01,P〈0．01）。二者联合应用与单独应用差异亦无显著性（P〉0．05）。结论 hTR、hTERT siRNA通过抑制各自基因表达,抑制人肾癌细胞端粒酶活性,进而抑制增殖、促进凋亡。     

HPV感染与非小细胞肺癌的相关性

背景与目的：人乳头瘤病毒（HPV）是宫颈癌的主要病因，但近来发现在非小细胞肺癌（NSCLC）中能检测到HPV，两者间的关系已经引起了人们的重视。本研究探讨人乳头瘤病毒（HPV）16、18型感染与非小细胞肺癌（NSCLC）是否存在相关性及其意义。方法：应用PCR、免疫组化和TUNEL分别检测76例NSCLC及13例肺良性病变中HPV16、18型DNA及其原癌蛋白E6 E7、端粒酶hTERT、P53、MDM2、桩蛋白（paxillin）和细胞凋亡的表达。结果：NSCLC中HPV16、18型总阳性率为40．8％（31／76），而肺良性病变组阳性率为7．7％（1／13），差异有显著性（P〈0．05）。NSCLC中HPV阳性组与阴性组之间细胞凋亡、P53、MDM2、paxillin的表达均有显著性差异（P〈0．05），而端粒酶hTERT无显著性差异。HPV感染与组织学类型及淋巴结转移无关，而与组织分化程度有显著性差异（P〈0．05）。结论：HPV16、18型感染在NSCLC发生中可能有病因学意义，其致癌机制可能与细胞凋亡、P53、MDM2及paxillin表达变化有关。     

XIAP反义寡核苷酸抑制胶质瘤细胞增殖和诱导凋亡的体外实验研究

目的观察X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系BT325的增殖及凋亡的影响。方法将XIAP全硫代反义寡核苷酸，通过脂质体途径转染BT325脑胶质瘤细胞。用CCK-8实验检测细胞杀伤率，RT-PCR和Western blot技术检测XIAP的mRNA和蛋白表达，JC—1检测细胞线粒体膜电位，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测Caspase-3活性。结果XIAP反义寡核苷酸能够抑制BT325脑胶质瘤细胞的增殖；XIAP反义寡核苷酸使XIAP的mRNA和蛋白表达均明显下调，mRNA较对照组减少了67．8％，蛋白较对照组减少了63．3％；反义寡核苷酸使线粒体膜电位下降，诱导BT325细胞凋亡，反义寡核苷酸组的凋亡率为54．7％，错义链组为14．O％，两组比较，差异具有显著性（P〈0．05）；反义寡核苷酸使BT325细胞Caspase-3活性明显增高，与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论XIAP可能参与了脑胶质瘤细胞BT325的增殖和凋亡，下调XIAP可抑制BT325细胞增殖及促进其凋亡。     

人端粒酶催化亚单位及其相关蛋白在骨肿瘤中的表达

目的：研究骨肿瘤中端粒酶相关基因中,人端粒酶催化亚单位（human elomerase catalytic subunit,hTERT)和人端粒酶相关蛋白（human telomerase associated protein,TP1)两个重要成分的表达及对评估肿瘤良、恶性的意义。方法：提取50例手术切除骨肿瘤组织、2种人成骨内瘤细胞系Saos－2、OS732和原代培养人成骨细胞的总RNA。用一步RT－PCR方法检测hTERT和TP1mRNA的表达。结果：所有骨肿瘤标本及细胞系均检测到TP1的表达。hTERT在17例良性骨肿瘤、33例骨肉瘤、2种人成骨肉瘤细胞系和人成骨细胞的表达率分别为64．7％、57．6％、0％和0％。良、恶性肌肿瘤间hTERT表达的差异不具有显著性（P＞0．05）,不同分化程度骨肉瘤间hTERT表达的差异也不具有显著性（P＞0．05）。结论：一步RT－PCR是检测端粒酶亚单位的有效方法。hTERT和TP1表达水平的上调在骨肿瘤恶性进展中可能不起主要作用,在骨肿瘤发展和维持中可能有替代性（ALT）机制导致细胞永生化。     

hTERT 短发夹状RNA 抑制前列腺癌细胞生长的研究

 目的 研究靶向端粒酶逆转录酶（hTERT）的短发夹状RNA（shRNA）基因转染对前列腺癌细胞体外生长的抑制效应及其促细胞凋亡作用。方法 在脂质体介导下将针对hTERT基因的shRNA表达载体psilencer-TRT转染前列腺癌细胞PC-3m，得到稳定细胞株PC-3m／shRNA-TRT。采用RT-PCR检测hTERT基因表迭情况，western blot分析各组细胞hTERT及c-myc蛋白表达变化，细胞计数并绘制细胞生长曲线，Hoechst33258染色、透射电镜、流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果 重组质粒psilencer-TRT转录生成的shRNA使实验组细胞的hTERT基因表达显著下调，抑制率约为89．02％；同时实验组细胞hTERT及c-myc蛋白水平较对照组有明显下降，细胞的生长增殖能力也显著降低（P〈0．05），生长速率明显变慢，部分细胞呈现凋亡形态学改变，凋亡率为（19．69±4．75）％。结论 hTERT短发夹状RNA能有效抑制前列腺癌细胞中hTERT表达及癌细胞生长，诱导PC-3m细胞凋亡，可望为前列腺癌的基因治疗提供新方法。     

尼美舒利对人SGC-7901细胞系增殖及hTERT-mRNA表达的研究

目的探讨选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和端粒酶hTERT—mRNA表达的作用。方法体外培养人胃癌细胞系SGC-7901后，加入不同浓度的尼美舒利（0、50、100、200、400μmol／L）进行共同培养。用相差显微镜动态地观察经尼美舒利处理后细胞的形态变化；MTT法检测人胃癌细胞系SGC-7901的增殖；RT—PCR法检测细胞端粒酶hTERT—mRNA表达。结果选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利作用于人胃癌细胞系SGC-7901后，细胞增殖受到明显的抑制，呈时间和剂量依赖性，并且端粒酶hTERT-mRNA的表达降低呈剂量依赖关系，与对照组比较差异有显著性（P〈0．05）．结论尼美舒利能够抑制人胃癌细胞系的hTERT—mRNA的表达，从而抑制其生长，这表明尼美舒利可能是种新的端粒酶抑制剂。     

乳腺良恶性病变组织中ER、c-myc和hTERT的表达

[目的]探讨ER、c—myc和hTERT在乳腺良恶性病变组织中的表达及意义。[方法]用免疫组化SP法检测25例乳腺腺病和79例乳腺癌组织中ER、c—myc和hTERT的表达。[结果]ER、c—myc和hTERT在乳腺腺病组织中的阳性表达率分别为28．0％、12．0％和20．0％；在乳腺癌中的阳性率分别为72．2％、70．1％和92．4％．均明显高于乳腺腺病组，差异有显著性（P〈0．01）。乳腺癌组中，c—myc和hTERT、ER和hTERT、ER和c—myc均呈显著正相关（r值分别为0．382、0．388和0．632，P〈0．01），而hTERT和患者年龄、肿瘤大小（最大径）、淋巴结转移情况均无相关性（P〉0．05）。[结论]在乳腺癌中ER、c—myc、hTERT均高表达，可能参与了乳腺癌的发生、发展，其中ER和c-myc的过表达可能和hTERT转录激活进而激活端粒酶有关。     

肺鳞癌与人乳头瘤病毒相关性研究

目的:了解肺鳞癌组织中人乳头瘤病毒存在情况,并分析人乳头瘤病毒与肺癌发生部位、性别因素、角化程度、吸烟因素的关系.方法:采用地高辛标记的DNA探针对肺癌组织进行原位杂交检测,同时结合临床资料分析多种因素的相关性.结果:肺鳞癌组织,鳞状上皮生化组织、粘膜慢性炎组织HPV检出率分别为48.4%,27.4%,5.6%,各组比较差异显著(P＜0.01),中心型肺癌与周围型肺癌组织HPV检出率分别为50.6%和4.4%,两组比较差异显著(P＜0.01).男女两组HPV检出率分别为46.1%和54.3%,差异无显著性(P＞0.05).吸烟组HPV检出率为50.6%,非吸烟组为43.9%,差异不显著(P＞0.05).结论:肺癌组织中存在一定比例HPV感染,HPV感染与肺鳞癌关系密切,中心型肺癌与HPV感染密切相关,HPV感染与性别及吸烟因素未发现明显相关性.人乳头瘤病毒感染可能与肺癌发生发展有关.     

重组人血管内皮抑制素抑制内皮细胞血管生成的实验研究

目的:观察国产重组人血管内皮抑制素(Endostar,恩度)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的抗血管生成作用,并对其机制进行初步探讨.方法:采用MTS/PMS系统测定不同浓度恩度对HUVECs和人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用;流式细胞术检测恩度在相同时间内诱导HUVECs和HepG2细胞早期凋亡和晚期凋亡情况;通过迁移/侵袭实验、体外管腔形成实验和鸡胚尿囊膜(CAM)实验观察恩度对HUVECs迁移/侵袭和体内外管腔形成及功能的影响.结果:不同浓度的恩度持续作用72h,对HUVECs具有抑制增殖,且在50～200ng/ml的剂量范围内呈现浓度依赖关系;而对HepG2细胞未见明显作用.药物处理方式的不同,恩度对HUVECs诱导凋亡和迁移/侵袭作用差异显著;对HepG2细胞的迁移/侵袭未见明显影响.高剂量的恩度对HUVECs体外管腔形成和鸡胚尿囊膜的血管发生及成熟具有显著影响.结论:重组人血管内皮抑制素(恩度)能够有效地抑制血管内皮细胞形成复杂的管腔,并显著影响血管的成熟;对人肝癌细胞系HepG2生长及迁移/侵袭未见明显影响.     

胃癌8号染色体等位基因杂合性缺失及其临床相关性研究

近年来，人们认为染色体上等位基因缺失或失活是肿瘤形成和演进的一个重要机制。应用从人类染色体上分离出的克隆──Ｄ８Ｓ７作为探针，采用ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法检测了２０例胃癌病员的癌组织及其相应的癌旁组织基因组ＤＮＡ８号染色体等位基因杂合性丢失（ＬＯＨ），结果发现，２５％（５／２０）的胃癌组织以及１５％（３／２０）的癌旁组织中存在染色体８Ｐ上等位基因缺失或丢失，早期和晚期胃癌均存在这种分子遗传学改变，提示人类８号染色体短臂上存在肿瘤抑制基因，此基因正常等位基因缺失或丢失参与胃粘膜细胞癌变及其胃癌的演化和进程。     

大蒜素与细胞周期特异性化疗药联合应用抗肿瘤的实验研究

目的:探讨大蒜素对人胃癌细胞株BGC-823、SGC7901生长的影响及其与细胞周期特异性化疗药联合应用抗肿瘤作用.方法:M丌法测定细胞增殖抑制率并测定药物半数抑制率(IC50);流式细胞仪检测细胞周期的改变,大蒜素与NVB、5-FU、MMC、PDD四种化疗药联合应用,观察细胞毒活性的改变.结果:大蒜素对BGC-823和SGC-7901两种细胞的生长均有明显的抑制作用,72h IC50分别为:30μg/ml和20μg/ml.以72h IC50浓度大蒜素分别作用于两种胃癌细胞株24h、48h后,流式细胞仪检测与对照组比G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞明显增加,提示两种胃癌细胞株经大蒜素处理后,细胞周期阻滞于G2/M期.大蒜素与四种化疗药联合应用,结果发现作用于BGC823细胞,NVB72h的IC50值由原来单独应用时的9.0μg/ml降至2.25μg/ml.作用于SGC-7901细胞,NVB72h的IC50值由原来单独应用时的43.0μg/ml降至12.5μg/ml,显示大蒜素与作用于G2/M期的细胞周期特异性化疗药NVB联合应用时可增强其对肿瘤细胞的杀伤作用.结论:大蒜素可使BGC-823和SGC-7901两种细胞的增殖受到抑制,细胞周期被阻滞在G2/M期.大蒜素与G2/M期特异性化疗药联合应用,可能具有协同抗肿瘤作用.     

新型钙调素拮抗剂EBB抗人脑胶质瘤细胞增殖作用的研究

本文报告采用生长曲线、集落形成试验及蛋白含量测定方法，观察新型钙调素拮抗剂ＥＢＢ的抗人脑胶质瘤细胞增殖作用。结果表明，ＥＢＢ对体外培养的人脑胶质瘤细胞有明显的生长抑制作用。     

凋亡抑制蛋白XIAP基因对A549细胞凋亡和化疗敏感性的影响

背景与目的X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)是新发现的一个IAP家族中的主要成员,是IAP家族中最强的凋亡抑制因子,它可直接抑制caspases并可多途径调节细胞凋亡。XIAP基因在大多数的肿瘤细胞株中过表达,其表达与肿瘤的进展、复发、预后以及肿瘤化疗的耐药密切相关。研究通过RNAi方法下调非小细胞肺癌(NSCLC)细胞NIC-A549的XIAP基因表达后,研究XIAP siRNA特异序列在NSCLC细胞凋亡和化疗敏感性方面的作用。方法应用半定量RT-PCR法检测A549细胞中XIAP mRNA基因的表达,设计并构建XIAP干扰性小RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的表达载体,转染siRNA载体至A549中。荧光纤维镜确定转染效率,MTT法测定细胞增殖率及化疗药物对细胞杀伤率,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果酶切和DNA测序证实XIAP siRNA构建成功。荧光纤维镜显示阳性转染组及阴性转染组的细胞转染效率无差异。半定量RT-PCR法示阳性转染组较阴性转染组、未转染组细胞XIAP mRNA表达明显降低;与对照组相比,顺铂对阳性转染组XIAP mRNA表达的抑制作用明显增强、阳性转染组细胞增殖在24h、48h、72h、96h明显受抑制;细胞杀伤率、凋亡率明显增加。结论XIAP基因在NSCLC中表达增高,可抑制NSCLC细胞凋亡,导致NSCLC化疗耐药。XIAP siRNA序列可特异性地抑制NSCLC细胞增长,下调XIAP基因的表达,促进细胞凋亡,增加NSCLC化疗敏感性。XIAP siRNA序列有可能成为NSCLC治疗的靶标。     

脐带静脉移植建立髂内动脉化疗通道的实验研究

用醛化人脐带静脉移植犬髂内动脉建立可供长期穿刺的皮下给药通道。结果２６只犬移植的脐静脉，３个月通畅率为８８．５％（２３／２６），走行于皮下的脐静脉搏动感良好。病理检查显示，多数移植的脐静脉内壁光滑、平整，两端吻合口有内膜生长，并向脐静脉内壁延伸，逐渐替代纤维素膜。本研究表明，脐带静脉可作为动脉移植代用品，建立髂内动脉化疗通道是可行的。     

A comparison of the effect of hyperthermia on DNA polymerase in hamster and human glioma cells

The hyperthermia response of two human glioma cells lines (87MG and 373MG) was compared to the CHO cell line for cell killing and DNA polymerase inactivation. Glioma cells were found to be more thermally resistant than CHO cells over a temperature range of 41–46°C. Inactivation of polymerase α and β by hyperthermia was also more resistant in glioma cells than in CHO cells. The relative order of resistance for both killing and polymerase inactivation was 373MG >87MG>CHO. While polymerase inactivation correlated with cell killing at high thermal doses, such correlation at low doses was absent; i.e. thermal killing was characterized by survival curves with shoulders while polymerase inactivation was not. Thus at low thermal doses the mechanism of thermal cell killing is probably not related to the degree of polymerase inactivation. Arrhenius analysis of the survival data showed that the inactivation energy for the glioma cells was 133–135 kcal/mol. The inactivation energies of αand β polymerase were also evaluated and were 102–104 and 140–146 kcal/mol, respectively. Further analysis of the temperature-time relationship of hyperthermia treatment resulting in 50% cell kill showed the degree of polymerase β inactivation to be a good indicator of thermal dose.     

阿霉素诱导人肝癌细胞BEL—7402凋亡的观察

目的研究化疗药物阿霉素抗癌作用与癌细胞凋广的关系及意义。方法应用流式细胞仪、激光共聚焦扫描显微镜动态观察阿霉素对体外培养的人肝癌细胞BEL－7402的生长抑制作用与细胞凋亡的关系。结果阿霉素可阻滞人肝癌细胞BEL－7402从G0/G1期进入S期,诱导细胞凋亡。结论本研究显示阿霉素抗癌作用与诱导细胞凋亡有关。应用流式细胞仪、激光共聚焦扫描显微镜观察细胞凋亡是有效、可行的方法。     

肺癌异位HCG和环核苷酸的检测及其意义探讨

目的：探讨肿瘤性异位ＨＣＧ的作用机理。方法：应用放射免疫分析（ＲＩＡ）方法检测３０例原发性肺癌血浆及癌组织悬液中人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ和β－ＨＣＧ）和环核苷酸的含量。结果：肺癌患者血清ＨＣＧ和β－ＨＣＧ含量在术前组明显高于正常对照组，而术后组较术前组显著降低。癌组织悬液中ＨＣＧ和β－ＨＣＧ明显高于肿瘤远端正常肺组织。同时检测部分患者血浆和癌组织中环核式酸含量的结果显示肺血浆环鸟苷酸显著高于良性