胶质瘤细胞端粒酶基因表达对其增殖及凋亡影响的研究

背景与目的：端粒酶逆转录酶（hTERT）和端粒酶相关蛋白1（hTP1）是人端粒酶的重要组成部分。已知胶质瘤细胞有端粒酶异常再活化，而hTERT和hTP1基因表达是否也相应增加，尚不清楚。本研究是为了探讨胶质瘤细胞hTERT和hTP1基因表达、增殖活性及凋亡程度变化的相互关系及其在胶质瘤发生、发展中的作用。方法：采用mRNA原位杂交、免疫组织化学染色及原位细胞凋亡检测（TUNEL）等方法观察了70例不同级别的人胶质瘤组织标本。结果：本组70例胶质瘤hTERT mRNA和蛋白的阳性表达率分别为88．6％和82．9％．WHO Ⅰ～Ⅱ级组、Ⅲ级组及Ⅳ级组间比较二者的阳性表达率均无显著性差异（P〉0．05），hTP1 mRNA和蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的阳性表达率均为100％。以上五种阳性肿瘤细胞的密度彼此间均呈显著性正相关（r=0．589～0．882，P〈0．0005），并均随肿瘤级别升高而相应增加，不同级别组间比较差异均有显著性（P〈0．05～0．01）。凋亡肿瘤细胞的检出率也为100％，但凋亡肿瘤细胞密度随肿瘤级别升高而相应减少，不同级别组间比较差异均有显著性（P〈0．01），且与前五种阳性肿瘤细胞密度间均呈显著性负相关（r=-0．551 ～-0．775，P〈0．0005）。结论：以上指标对评价胶质瘤的生物学行为均有重要参考价值，胶质瘤细胞hTERT和hTP1基因异常表达是其端粒酶再活化的先头条件，后者通过抑制肿瘤细胞衰老凋亡和促进其增殖在胶质瘤的发生、发展过程中均起重要作用。     

人脑胶质瘤中凋亡相关基因survivin和p53的表达研究

目的探讨凋亡相关基因survivin和p53在人脑胶质瘤发生发展中的作用及其相互关系。方法采用免疫组化S-P法检测10例正常脑组织及75例脑胶质瘤标本中survivin、p53的表达情况并分析二者之间的关系。结果survivin在正常对照组和胶质瘤组中的阳性表达率为0％和45．3％，差异有显著性（P〈0．05）。胶质瘤Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ，Ⅳ级，survivin的阳性表达率分别为15．0％、33．3％、74．2％，差异有极显著性（P〈0．001）。p53在正常脑组织和人脑胶质瘤组织中阳性表达率为0％和41、3％，差异有显著性（P〈0．05）。胶质瘤Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ-Ⅳ级，p53的阳性表达率0％、41．7％、67．7％，差异有极显著性（P〈0．001）。75例胶质瘤组织中survivin与p53共阳性23例，共阴性33例，二者的表达呈正相关（rs=0．438，P〈0．01）。结论1）survivin的阳性表达率随胶质瘤恶性程度而升高；2）突变型p53蛋白的活性表达与肿瘤的组织病理类型、分化程度有关，p53基因的突变参与脑胶质瘤的发生发展；3）p53的突变与survivin的激活在胶质瘤的发生发展中可能起协同作用。     

胶质瘤细胞ING1基因表达水平与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系研究

目的探讨胶质瘤细胞ING1基因表达水平及其与肿瘤细胞增殖活性和凋亡程度的关系.方法采用原位杂交及免疫组织化学染色方法,分别检测71例不同级别的人胶质瘤组织ING1 mRNA及ING1、PCNA蛋白,并采用TUNEL法检测原位细胞凋亡的情况.结果ING1 mRNA的阳性表达率为94.6%(35/37),ING1蛋白的阳性表达率为90.1%(64/71),两者的表达水平呈正相关(γ=0.714,P＜0.01),均随肿瘤恶性程度的增高而降低,具有显著性差异(P＜0.05).ING1表达水平降低时伴随着凋亡程度的降低及增殖活性的增强.结论胶质瘤细胞中ING1基因的表达水平与肿瘤恶性程度密切相关,并随肿瘤恶性程度的增加而相应降低.其表达异常的改变主要是转录水平调控异常的结果,并可能通过促进细胞增殖和抑制细胞凋亡,在胶质瘤的发生、发展中发挥重要作用.     

胶质瘤失活蛋白在星形细胞瘤中的表达及临床意义

背景与目的：胶质瘤是最常见的恶性原发脑肿瘤，又以星形细胞瘤为最常见的胶质瘤。LGI1基因（1eucihe-rich glioma inactivated gene 1，LGI1）被发现在成神经胶质瘤细胞株上出现了基因重排现象，从而被认为是可以抑制肿瘤的候选基因，其结构和功能的异常将导致LGI1蛋白表达的缺失，可能是肿瘤细胞发生浸润转移和逃逸机体免疫监视的重要机制之一。本研究通过检测星形细胞瘤组织中胶质瘤失活蛋白的表达水平。探讨其与星形细胞瘤发生、发展、恶性程度及预后的关系。方法：应用免疫组织化学技术对50例星形细胞瘤患者肿瘤组织和12例来自于脑外伤内减压手术、高血压脑出血及脑血管畸形手术中所取的正常脑组织中LGI1蛋白的表达进行了检测。结果：肿瘤组与正常组LGI1蛋白阳性细胞百分率（0．283±0．271）vs（0．573±0．229）比较有显著性差异（P〈0．05）；低级别星形细胞瘤和高级别胶质瘤中LGI1蛋白阳性细胞百分率（0．383±0．279）vs（0．165±0．212）]比较有显著性差异（P〈0．05）。50例星形细胞瘤患者中肿瘤复发组与未复发组的LGI1蛋白表达阳性率（8/27vs18／23）比较有显著性差异（P〈0．05）；死亡组与未死亡组中的LGI1蛋白表达阳性率（4／21vs22／29）比较有显著性差异（P〈0．05）。50例星形细胞瘤患者中LGI1蛋白表达阳性组与表达阴性组GOS评分[（1．85±1．46）vs（3．92＋1．64）比较有显著性差异（P〈0．05）。结论：星形细胞瘤患者存在LGI1蛋白分子低表达，推测LGI1蛋白缺失率有可能成为预测脑胶质瘤恶性程度及预后的指标之一。     

胶质瘤p27Kip1、bcl-2和PCNA蛋白的表达

目的　探讨胶质瘤p2 7Kip1,bcl 2和PCNA蛋白表达与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性、凋亡程度的关系。方法　采用免疫组化染色S P法检测 66例不同级别的胶质瘤 p2 7Kip1,bcl 2和PCNA蛋白的表达。结果　在 66例胶质瘤中 ,p2 7Kip1表达 18例(2 7% ) ,bcl 2表达 2 0例 (3 0 % ) ,PCNA表达 5 1例 (77% )。p2 7Kip1蛋白表达率随着胶质瘤级别升高而减少 ;bcl 2蛋白表达率随肿瘤级别升高而相应增加 ;PCNA表达随胶质瘤级别升高阳性反应强度增加 ;但Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ级和Ⅳ级组间无显著性差异。结论　p2 7Kip1蛋白表达的缺失可能与胶质瘤的发生有关 ;bcl 2基因可能间接抑制细胞凋亡而与胶质瘤的分型、细胞的增殖活性以及潜在的临床行为无直接关系 ;PCNA的表达与星形胶质细胞瘤的恶性行为有关     

PTTG蛋白表达与胶质瘤病理分级及预后的相关性研究

目的探讨垂体瘤转化基因（Pituitary Tumor Transforming Gene，vriG）蛋白表达与胶质瘤病理分级及预后的相关性。方法回顾性研究手术切除的胶质瘤标本80例，病理学分级低度恶性组工级16例、Ⅱ级22例，高度恶性组Ⅲ级26例、Ⅳ级16例；患者生存时间〈12月22例，12-36月41例，〉36月17例；复发时间〈12月18例，12-36月39例，〉36月23例。采用免疫组化s-P法检测vriG的表达情况。结果vriG蛋白表达随肿瘤病理级别的增高而增加，组间比较差异有显著性（P〈0．01）；生存时间及复发时间各组间差异有显著性（P〈0．01）。结论vrIG蛋白表达与胶质瘤的病理学分级及预后密切相关，可以作为判断恶性程度及预后的指标。     

P16蛋白与PCNA表达在胶质瘤中的临床意义

目的 探讨P16蛋白缺失与脑胶质瘤的恶性进展、增殖能力及预后的关系。方法 应用免疫组织化学方法，检测了96例不同级别脑胶质瘤存档标本P16蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。结果 P16蛋白缺失频率随脑胶质瘤级别的增高而增高（P〈0．01）；4对复发时级别增高的肿瘤组织均发生了P16蛋白缺失，而另3对复发时仍保持原来级别者无一发生P16蛋白缺失。同一级别的脑胶质瘤，P16蛋白缺失者的PCNA指数明显高于无P16蛋白缺失者（P〈0．05）。结论 P16蛋白缺失与脑胶质瘤的恶性进展及增殖能力有关，P16蛋白免疫组织化学检测可作为反映脑胶质瘤预后的一个指标。     

Nogo-B在人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤病理分级的相关性

目的：探讨Nogo—B基因在人脑胶质瘤组织中的表达及其与胶质瘤病理分级的相关性。方法：收集上海长征医院神经外科2005—2008年手术获得的经病理证实的人脑胶质瘤组织标本36份，另取其他手术切除的正常脑组织标本10份。以免疫组化技术、Real—timePCR和Western blotting等方法检测这些标本中Nogo—B在基因和蛋白质层面的表达水平，结合病理资料分析Nogo—B的表达和病理分级的相关性。结果：Real—timePCR检测发现，恶性程度高的胶质瘤组织中Nogo—B基因表达明显下调，Ⅲ级的胶质瘤组织中Nogo—B基因表达水平与正常脑组织相比下降了90％左右（P〈0．01），Nogo—B基因表达水平与肿瘤的恶性度成相关。Westernblotting检测显示，正常脑组织中Nogo—B蛋白表达相对恒定；在高恶性级别的胶质瘤中No—go—B的蛋白表达显著下调，其下降程度与肿瘤的恶性程度呈负相关。免疫组织化学检测显示，Nogo-B主要在人正常脑组织中弥漫性阳性表达（100％），在人胶质瘤组织中表达显著降低；36例胶质瘤组织中Nogo-B染色阳性程度随着肿瘤恶性程度增加而显著降低（在Ⅰ-Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级中阳性表达分别为88．2％，42．9％，25．0％），各组间比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：在人脑胶质瘤中Nogo—B在mRNA和蛋白质水平上表达均出现下调，其下调程度与病理分级呈负相关。     

胶质瘤p^27Kipl、bcl-2和PCNA蛋白的表达

目的：探讨胶质瘤p^27Kipl，bcl-2和PCNA蛋白表达与肿瘤恶性程度、细胞增殖活性、凋亡程度的关系。声去采用免疫组化染色S-P法检测66例不同级别的胶质瘤p^27Kipl，bcl-2和PCNA蛋白的表达。结果：在66例胶质瘤甲，p^27Kipl表达18例(27％)，bcl-2表达20例(30％)，PCNA表达51例(77％)。p^27Kipl蛋白表达率随着胶质瘤级别升高而减少．bcl-2蛋白表达率随肿瘤级别升高而相应增加；PCNA表达随胶质瘤级别升高阳性反应强度增加；但Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ级和Ⅳ级组间无显著性差异。结论：p^27Kipl蛋白表达的缺失可能与胶质瘤的发生有关；bcl-2基因可能间接抑制细胞凋亡而与胶质瘤的分型、细胞的增殖活性以及潜在的临床行为无直接关系；PCNA的表达与星形胶质细胞瘤的恶性行为有关。     

EphA2在脑胶质瘤中的表达及意义

目的：探讨酪氨酸蛋白激酶受体EphA2在人脑胶质瘤中的表达及其与胶质瘤微血管生成之间的相关性。方法：用免疫组化方法检测66例人脑胶质瘤组织，2株成胶质细胞瘤细胞系（U251和U87）和10例正常脑组织中EphA2蛋白的表达情况。并用Western blot方法进一步验证高级别成胶质细胞瘤组织和正常脑组织中EphA2的表达情况。通过CD34免疫组化染色方法来计算胶质瘤组织中的微血管数（MVC），探讨EphA2的表达水平与胶质瘤的微血管生成之间可能存在的关系。结果：免疫组化结果表明：在所有检测的66例胶质瘤中，除3例低级别胶质瘤（Ⅰ～Ⅱ）未检测到EphA2表达外，其余均有不同程度的EphA2表达，阳性率为95．5％（63／66）；而10例正常脑组织中EphA2蛋白表达均为阴性，二者差异显著（P〈0．01）。并且高级别脑胶质瘤（Ⅲ～Ⅳ）中EphA2强阳性表达率为63％（29／46），明显高于低级别胶质瘤30％（6／20）的阳性表达率，二者差异显著（P〈0．01）。此外，肿瘤组织内微血管内皮细胞也有EphA2蛋白表达。Westernblot结果也进一步证实了成胶质细胞瘤组织和细胞系U251高表达EphA2蛋白，且U87表达水平明显低于U251，正常脑组织中检测不到EphA2蛋白条带。胶质瘤的微血管密度与EphA2蛋白表达水平有显著相关性（r=0．713，P〈0．01），EphA2表达强阳性的肿瘤区域有较高的微血管密度。结论：EphA2特异地表达于高级别胶质瘤中，而正常脑组织中则检测不到EphA2表达，提示EphA2有可能是恶性胶质瘤的一个新的标志物，或可作为分子治疗的靶点，并且EphA2可能参与胶质瘤的血管生成，在胶质瘤的发病和恶性进展中起重要作用。