阻断Kv1.3和Kir2.1抑制人巨噬细胞源性泡沫细胞分化

目的:研究泡沫细胞分化过程中离子通道Kv1.3和Kir2.1的表达及作用。方法:用30mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育巨噬细胞60h建立泡沫细胞模型。采用免疫细胞化学、RT-PCR和Western印迹检测人单核细胞源性巨噬细胞和泡沫细胞上Kv1.3和Kir2.1的表达。观察Kv1.3和Kir2.1特异性阻断剂rMargatoxin和BaCl2对巨噬细胞胆固醇代谢的影响。结果:ox-LDL(30mg/L)孵育巨噬细胞60h后,细胞内总胆固醇(TC),游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)显著增加,CE/TC从(14.4±6.8)%提高到(57.9±3.5)%(P<0.05);但Kv1.3和Kir2.1的表达水平在巨噬细胞组和泡沫细胞组无明显区别(P>0.05)。Kv1.3和Kir2.1分别被rMargatoxin(0.1,10nmol/L)和BaCl2(75,125μmol/L)阻断后,细胞内TC和CE水平显著降低,CE/TC低于50%(P<0.05)。结论:Kv1.3和Kir2.1对泡沫细胞的分化均起关键作用,特异性阻断后能够抑制人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化。     

人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中MaxiK通道α-亚单位的表达

目的研究人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中MaxiK通道α-亚单位的表达.方法采用密度梯度离心法从男性健康志愿者外周血中分离单核细胞,经培养后分化为巨噬细胞,并通过加氧化型低密度脂蛋白(OxLDL),建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型,采用RT-PCR、蛋白质印迹及免疫细胞化学方法研究MaxiK 通道α-亚单位的表达.结果巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后,细胞内总胆固醇(TC),游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)显著增加,并且CE/TC从(14.437±6.781)%提高到(57.946±3.507)%.同时,MaxiK通道α-亚单位表达被下调,但同巨噬细胞相比差异无统计学意义(P>0.05).结论人单核细胞源性巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后可分化为泡沫细胞,但MaxiK 通道α-亚单位的表达无明显改变.     

人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中Kir2.1通道的表达

目的 Kir2.1通道是控制骨髓源性巨噬细胞增殖、活化和凋亡的重要离子通道之一,并且还参与细胞分化。本研究观察Kir2.1通道mRNA及蛋白在人单核细胞源性巨噬细胞向泡沫细胞分化过程中的表达。方法 采用密度梯度离心加贴壁黏附法,从男性健康志愿者的外周血中分离单核细胞,经5d培养后分化为巨噬细胞。在建立人巨噬细胞源性泡沫细胞模型的基础上,采用RT-PCR,蛋白质印迹及免疫细胞化学方法研究Kir2.1通道的表达。结果 将巨噬细胞同30mg/L氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)于37℃孵育60h后,细胞体积增大,并有许多红色的脂质颗粒沉积于细胞质内,细胞内的总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)及胆固醇酯(CE)的含量分别从(54.79±28.304)mg/g、(47.968±26.787)mg/g和(6.822±3.437)mg/g增加至(229.775±57.453)mg/g、(96.241±24.003)mg/g和(133.535±36.292)mg/g,CE/TC从(14.437±6.781)%提高到[(57.946±3.507)%(n=7,P<0.05)]。但是,Kir2.1通道mRNA的扩增量在巨噬细胞和分化的泡沫细胞之间无显著差异[(59.074±10.566)%vs(46.98±12.527)%,n=5,P＞0.05];同样,Kir2.1通道蛋白在巨噬细胞和分化的泡沫细胞之间亦无显著差异[(60.527±18.621)%vs(50.243±11.583)%,n=6,P＞0.05]。结论 人单核细胞源性巨噬细胞同30mg/LOxLDL孵育60h后可分化为泡沫细胞,但Kir2.1通道的表达无明显改变。     

双氯芬酸对人巨噬细胞钾通道Kv1.3、Kir2.1表达的抑制作用及其对膜电位和泡沫细胞形成的影响(英文)

目的分研究双氯芬酸对人巨噬细胞电压依赖性钾通道Kv1.3、内向整流钾通道Kir2.1表达的影响及意义。方法以健康人外周血单核细胞源性巨噬细胞为对象,采用Real-time RT-PCR及Western blot技术研究双氯芬酸对Kv1.3和Kir2.1表达的影响;电压敏感染料膜电位标测技术分析膜电位的变化,并用酶荧光化学法检测摄取氧化修饰低密度脂蛋白(OxLDL)的巨噬细胞内胆固醇酯(CE)的构成比率。结果双氯芬酸(1.5和15μmol/L)抑制巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1的表达。同对照组相比,Kv1.3mRNA下降分别超过80%和90%(P<0.05),Kir2.1 mRNA下降分别超过20%和30%(P>0.05);两种钾通道蛋白水平的下降均分别超过10%和60%,且存在明显的剂量依赖性(P<0.05)。同时,双氯芬酸可剂量依赖性减弱巨噬细胞表面的荧光强度,使膜电位分别下降约28%和54%(P<0.05)。巨噬细胞同30 mg/L OxLDL孵育60 h后,细胞体积明显增大,且有许多红色的脂质颗粒沉积于细胞质内,CE/TC的百分比超过50%。1.5和15μmol/L双氯芬酸分别使摄取OxLDL的巨噬细胞内CE的百分比显著减少到(23.624±3.34)%和(13.601±2.916)%,但缺乏明显的量效关系(P>0.05)。结论双氯芬酸显著下调人巨噬细胞Kv1.3和Kir2.1的表达,降低细胞膜电位,并抑制泡沫细胞形成。     

三七总皂苷对泡沫细胞内ABCA1和LXRα mRNA表达的影响

目的 观察三七总皂苷(Panat notoginseng saponins,PNS)对泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达及脂质沉积的影响.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬细胞纯化后,与高、中、低剂量PNS(80、40、20μg/ml)及氧化低密度脂蛋白共孵育48 h.油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值.采用RT-PCR法检测泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达情况.结果 模型组细胞中TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.05);与模型组相比,PNS高、中剂量组细胞内TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低(P<0.05).PNS高、中剂量组中ABCA1及LXRα mRNA的表达均显著高于模型组(P<0.01).结论 PNS可以上调ABCA1和LXRα mRNA表达并减少巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质沉积.     

苦参碱对单核细胞源性泡沫细胞形成及PPAR-γ,caveolin-1表达的影响

目的:观察苦参碱对ox-LDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇脂和PPAR-γ,小凹蛋白-1表达的影响.方法:用荧光分光光度法测定胆固醇浓度;采用TBARS法检测细胞内脂质过氧化产物;用油红O染色法检测泡沫细胞的形成;用荧光RT-PCR和Western Blot检测PPARγ,caveolin-1的表达.结果:单核细胞经PMA及oxLDL共同孵育后,细胞内形成大量脂滴,胆固醇酯(CE)和细胞内脂质过氧化产物(MDA)含量由(3.4±0.6) mg/L,(0.43±0.07) nmol/L升至(64.8±6.8) mg/L,(8.50±1.23) nmol/L (P＜0.05),泡沫细胞由(4.7±2.2)%升至(77.8±7.0)% (P＜0.05),而PPAR-γ mRNA和PPAR-γ,小凹蛋白-1蛋白表达由(4.4±0.8),(0.5±0.09),(0.6±0.09)降至(1.6±0.4),(0.33±0.09),(0.33±0.09)(P＜0.05),苦参碱低、中、高干预组细胞内积聚的CE和MDA含量分别为 (29.7±4.9) mg/L,(1.92±0.46) nmol/L,(5.8±1.3) mg/L,(0.6±0.08) nmol/L,(3.4±0.6) mg/L,(0.43±0.07) nmol/L;泡沫细胞为(46.2±5.8)%,(16.3±3.4)%,(4.8±1.5)%,PPAR-γ mRNA和PPAR-γ,小凹蛋白-1蛋白表达为(6.4±2.2),(0.6±0.08),(0.5±0.09),(7.4±2.2),(0.6±0.08),(0.6±0.07),(8.6±2.7),(0.6±0.06),(0.7±0.06),与ox-LDL PMA组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:苦参碱减少ox-LDL诱导的单核细胞源性泡沫细胞的形成及细胞内胆固醇聚集,增加泡沫细胞内PPAR-γ,小凹蛋白-1的表达.     

Visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制研究

目的观察内脂素(visfatin)对人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞胆固醇代谢相关基因ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)表达的影响,探讨visfatin诱导THP-1源性泡沫细胞形成的机制。方法 THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度和不同作用时间的visfatin进行干预,分别运用油红O染色观察细胞质脂滴变化,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞ABCA1及ACAT1 mRNA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果与对照组比较,visfatin干预组细胞质脂滴明显增多,细胞内FC和CE含量增加(均P<0.05),CE与TC的比值明显增加(>50%),ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05),ACAT1 mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.05)。相关分析显示,visfatin呈浓度和时间依赖性下调ABCA1 mRNA和蛋白的表达,上调ACAT1 mRNA和蛋白的表达。结论 visfatin下调巨噬细胞ABCA1的表达,上调ACAT1的表达,使细胞内FC流出减少,CE合成增加,从而诱导THP-1源性泡沫细胞的形成,这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供一个新的理论依据。     

脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 通过研究脂联素对细胞内胆固醇的影响,探讨其抗动脉粥样硬化作用的可能机制.方法 以人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1细胞株)来源的泡沫细胞模型为研究对象,用不同浓度的脂联素(1 mg/L,5 mg/L和10 mg/L)进行体外干预.采用油红O观察泡沫细胞形成,用胆固醇氧化酶法检测细胞内胆固醇含量的变化,用荧光显微镜观察巨噬细胞对Dil标记的氧化低密度脂蛋白(Dil-Ox-LDL)的摄取率.结果 脂联素(1 mg/L,5 mg/L和10 mg/L)干预对巨噬细胞内总胆固醇(TC)无显著影响,却能促进胆固醇酯(CE)转化为游离胆固醇(FC),CE/TC比值明显降低(P<0.05);同时观察到脂联素(10 mg/L)干预后可抑制巨噬细胞对Dil-Ox-LDL的摄取.结论 脂联素能减少巨噬细胞对Ox-LDL的摄取和促进巨噬细胞内胆固醇酯的水解,这可能是脂联素抑制胆固醇沉着从而发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一.     

扇贝糖胺聚糖对平滑肌源性泡沫细胞形成及其功能的影响

目的:研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS- GAG)对氧化低密度脂蛋白(Ox- LDL)诱导的猪血管平滑肌细胞泡沫化过程及其表达的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- PX)和一氧化氮 (NO)分泌含量的影响,以探讨SS GAG抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。　方法:采用猪血管平滑肌细胞与 15mg/L的Ox -LDL孵育 72h,建立平滑肌源性泡沫细胞模型。将培养的平滑肌细胞分为 6组: 正常细胞对照组、模型组、肝素对照组和低、中、高浓度的SS GAG药物组。通过酶法测定不同处理组细胞内总胆固醇 (TC)、游离胆固醇 (FC)、胆固醇酯 (CE)含量及CE/TC,观察不同浓度SS- GAG对平滑肌细胞泡沫化过程中细胞内脂质代谢的影响。通过黄嘌呤氧化酶法、过氧化氢还原法、硝酸还原酶法,分别检测不同处理组细胞分泌的SOD、GSH- PX和NO的含量。　结果:培养的平滑肌源性泡沫细胞中TC、FC、CE和CE/TC均明显高于正常平滑肌细胞 (P<0. 01),CE/TC超过 50%,高达 62. 99%。而加入SS GAG的 3个药物组和肝素对照组则有不同程度降低,CE/TC均在 50%以下,抑制了泡沫细胞的形成,以800mg/LSS GAG组降低最为明显(P<0. 01)。SOD在各组中的表达差异无显著性意义 (P>0. 05)。泡沫细胞中GSH PX和NO的表达量明显低于正常平滑肌细胞(P<0. 01),而加入SS GAG的 3个组     

硫化氢上调ABCA1表达促进泡沫细胞胆固醇流出的实验研究

目的探讨外源性硫化氢(H2S)对泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法氧化低密度脂蛋白孵育RAW264.7细胞诱导泡沫化,H2S供体硫氢化钠处理细胞,测定胆固醇流出率,高效液相色谱测定细胞内游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)和总胆固醇(TC)浓度。实时定量PCR和蛋白印迹法检测泡沫细胞中ABCA1mRNA和蛋白表达。结果与泡沫细胞组相比,外源性H2S以时间和浓度依赖的方式增加泡沫细胞胆固醇流出(P<0.05),降低细胞中TC、FC和CE及CE/TC水平(P<0.05),上调细胞中ABCA1表达。结论外源性H2S上调泡沫细胞中ABCA1表达,促进胆固醇流出。     

人巨噬细胞源性泡沫细胞分化中Kir2．1通道的表达

OBJECTIVE: Detected in non-transformed bone marrow-derived macrophages (BMDM) and identified as one of the key channels in modulating macrophage proliferation, activation and apoptosis, Kir2.1 channel is also characterized to play a crucial role in cell differentiation. The purpose of this study was to investigate the expression of Kir2.1 channel mRNA and protein during human monocyte-derived macrophage differentiation into foam cells. METHODS: Human peripheral blood monocytes were isolated from healthy male volunteers by density gradient centrifugation and then by adherence method. The macrophages identified as a homogeneous population of adherent cells were obtained after 5 days of culture. Expression of Kir2.1 channel during human macrophage differentiation into foam cells was investigated by RT-PCR, Western blotting and immunocytochemistry, respectively. RESULTS: After incubation of the macrophages with 30 mg/L OxLDL at 37 degrees C for 60 h, the cells were obviously enlarged in size and numerous red lipid granules observed under optical microscope. The cellular contents of the total cholesterol (TC), free cholesterol (FC) and cholesterol ester (CE) were markedly increased from 54.79+/-28.304 mg/g, 47.968+/-26.787 mg/g and 6.822+/-3.437 mg/g to 229.775+/-57.453 mg/g, 96.241+/-24.003 mg/g and 133.535+/-36.292 mg/g, respectively; the CE/TC ratio rose from (14.437+/-6.781)% to (57.946+/-3.507)% (n=7, P<0.05), suggesting the phenotype of foam cells. However, there was no significant difference in the relative expression of Kir2.1 channel mRNA between the macrophages and foam cells [(59.074+/-10.566)% vs (46.98+/-12.527)%, n=5, P>0.05], nor was there significant difference in the relative expression of Kir2.1 channel protein between them [(60.527+/-18.621)% vs (50.243+/-11.583)%, n=6, P>0.05]. CONCLUSION: Incubation of human monocyte-derived macrophages with 30 mg/L OxLDL for 60 h induces the differentiation of the cells into foam cells, but the expression of Kir2.1 channel does not change obviously.     

姜黄素对脂变肝细胞胆固醇流出及ABCA1表达的影响

目的研究姜黄素对脂变肝细胞胆固醇的转运机制。方法取正常人肝L-02细胞作为研究对象。用10%（V/V）医用脂肪乳注射液和10%（V/V）胎牛血清的RPM I-1640完全培养基孵育24 h建立的脂肪变性肝细胞模型。实验分为为6个组,即正常肝细胞组、人肝L-02细胞脂肪变性模型组、姜黄素处理组（脂变细胞模型建立后,分别加入不等量姜黄素,使其终浓度分别为12.5、25、50、100μmol/L）。RT-PCR检测细胞ABCA1表达;高效液相色谱法定量检测细胞内外胆固醇含量。结果姜黄素呈浓度依赖性地减少细胞内脂变肝细胞内总胆固醇（TC）、胆固醇酯（CE）含量,增加培养基中游离胆固醇（FC）含量,同时增加ABCA1的表达。结论姜黄素能降低脂变人肝L-02细胞TC及CE含量,增加FC的外流;姜黄素增加脂变肝细胞胆固醇转运可能与AB-CA1的上调有关。     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达MIF和分泌TNF-α、IL-8的影响(英文)

目的观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和分泌TNF-α、IL-8的影响。方法用PMA诱导单核细胞THP-1分化为巨噬细胞。将分化后的THP-1源性巨噬细胞用不同浓度的ADMA作用24 h后,分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测MIF mRNA和蛋白表达水平及培养上清中TNF-α与IL-8的含量。结果 ADMA剂量依赖性的上调了THP-1源性巨噬细胞内MIF mRNA和蛋白表达,15μmol/L ADMA对MIFmRNA和蛋白表达的上调作用最明显。随着ADMA浓度增加,THP-1源性巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-8的水平逐渐升高,在15μmol/LADMA作用时达到峰值。结论 ADMA能够上调巨噬细胞内MIF的表达,促进TNF-α和IL-8的分泌。     

氧化性低密度脂蛋白诱导浓度和时间对肝癌HepG2细胞胆固醇积累的影响

目的 探讨氧化性低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)促进肝癌HepG2细胞中胆固醇蓄积的最适浓度和最适作用时间。方法 将肝癌HepG2细胞接种于含10%的胎牛血清和1%双抗(青霉素、链霉素)的高糖DMEM培养基中,置于5%浓度的CO₂培养箱中培养,每3天进行一次细胞传代,取对数增长期的细胞用于实验研究。实验分为5组,空白对照组和ox-LDL组(75 mg/L、50 mg/L、25 mg/L、12.5 mg/L)。每组9个样,分3个小组,每个小组3个样,3个小组分别培养24 h、48 h和72 h后测定细胞内胆固醇的积累并用油红O染色法定性观察。应用统计学软件SPSS Statistics 17.0进行t检验分析,数据以均数±标准差表示,对胆固醇定量检测结果进行统计分析,当P<0.05时认为差异具有统计学意义。结果 与空白对照组比较,经过ox-LDL不同浓度和不同时间诱导后,总胆固醇含量(total cholesterol,TC)、游离胆固醇含量(free cholesterol,FC)及胆固醇酯与总胆固醇比值(the ratio of cholesterol ester and total cholesterol,CE/TC)均有一定程度的升高。尤以50 mg/L ox-LDL诱导48 h时[空白对照组：TC (98.21±2.85) mmol/L、FC (56.25±0.55)mmol/L、CE/TC 42.64±1.50; ox-LDL组：TC (146.7±3.59)mmol/L、FC (79.9±0.55) mmol/L、CE/TC 49.9±3.49]变化最明显。与空白对照组比较,ox-LDL组胞浆内有不同程度红色脂滴存在,且发现ox-LDL 50 mg/L作用48 h时,因含有过多脂滴而形成了红色聚集的脂团,而未加ox-LDL的空白对照组细胞内无明显脂滴颗粒。结论 ox-LDL不同诱导浓度和不同诱导时间对肝癌HepG2细胞内胆固醇(TC 、FC 、CE/TC)积累都有促进作用,而ox-LDL对肝癌HepG2细胞内胆固醇积累的影响最适浓度和时间为50 mg/L诱导48 h。     

家兔β-VLDL和VLDL对巨噬细胞内胆固醇水平的影响

本实验用 AS 模型家兔β-VLDL 和 VLDL 分别与小鼠腹腔巨噬细胞一起培养,测定细胞内 Ap(?)-B,TC、FC 和 CE 水平变化并观察细胞形态学改变。结果表明:β-VLDL 使巨噬细胞内脂质含量增加并使其转化为泡沫细胞,培养前后两者细胞内 Apo-B,TC,FC 和 CE 含量分别为30.6±3.4,148.6±6.1,49.8±2.8和98.8±10.7μg/mg,细胞蛋白质,差别均有高度显著性(P<0.01);VLDL 组培养前后的差别相应为12.3±2.5,24.0±2.4,11.24±1.6和12.9±2.7μg/mg·细胞蛋白质,差别亦均有高度显著性(P<0.01).两组问差异亦同样均有高度显著性(P<0.01).文中对两种脂蛋白与泡沫细胞的关系进行了讨论。