SjAWMMcAb对吡喹酮杀虫效果的影响

目的：制备日本血吸虫成虫表膜单克隆抗体(SjAWMMcAb)，探讨其与吡喹酮在宿主体内的联合杀虫作用。方法：用SP2／0骨髓瘤细胞与日本血吸虫成虫表膜抗原免疫的BALB／c小鼠脾细胞融合，经筛选和克隆化后建立分泌日本血吸虫成虫表膜抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株，通过单层细胞培养法和小鼠体内接种法收集单克隆抗体；采用Western b1otting和免疫荧光测定(IFA)对其进行鉴定；小鼠实验观察单抗与吡喹酮的联合杀虫作用。结果：建立了3个分泌SjAWMMcAb的细胞株，Western blotting显示3个McAb可识别5种不同分子量的蛋白，IFA表明3个McAb均能与血吸虫成虫表膜发生特异性反应，386和1C2两株McAbs与吡喹酮联用杀虫率分别可提高41．78％和24．12％。结论：某些SjAWMMcAb与吡喹酮可发挥联合杀虫作用。     

抗日本血吸虫循环抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

为检测日本血吸虫宿主循环抗原提供有价值的McAb,用小鼠骨髓瘤细胞SP2/O株与日本血吸虫循环抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞进行融合,融合率90.20%。经用ELISA和IFA检测,总阳性率34.13%。经多次筛选和克隆化后,获得2株分泌McAb的细胞株:G-A12和H-E9。它们均属IgG2a亚类。Western blot结果表明G-A 12所针对的靶抗原为sjCAg31KD,H-E9为SjAW 31 KD。IFA检测发现H-E9主要定位于成虫表膜;G-A12主要定位于成虫肠道。这2株杂交瘤细胞在体外培养下稳定地分泌特异性抗体迄今已达6个月。     

具有保护性及诊断价值的弓形虫单克隆抗体的研制

目的 :寻找具有保护性的弓形虫功能性表位 ,为疫苗制备和免疫诊断提供科学依据。方法 :通过杂交瘤技术建立了抗弓形虫单克隆抗体的细胞株 ,观察了体内、外单克隆抗体的保护性效果 ;用夹心ELISA法检测了感染兔血清中的CAg ,并观察了其与日本血吸虫抗原和弓形虫ME4 9株抗原的交叉反应。结果 :建立了 7个分泌弓形虫McAb的细胞株 ,Western blot显示 7个McAb可识别 4种不同分子量的抗原 ,体外保护性实验证明这些单抗均可明显抑制弓形虫对细胞的侵袭及在细胞内的繁殖。在感染后第 3d即可检测到CAg,未发现其与日本血吸虫抗原间的交叉反应 ,但是与弓形虫ME4 9株出现了交叉反应带。结论 :7个McAb对弓形虫感染具有一定的保护力 ,有潜在的诊断价值     

抗日本血吸虫童虫表膜单克隆抗体的制备

目的为制备分泌抗日本血吸虫感染保护性单克隆抗体细胞株。方法应用杂交瘤技术，将照射致弱尾蚴免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤的细胞融合。结果经两次以上有限稀释克隆化后，抗日本血吸虫童虫表膜抗原阳性率为１００％，建立了５株稳定分泌抗童虫表膜单抗的细胞株。杂交瘤细胞诱生腹水，ＥＬＩＳＡ效价达１０．６４×１０５～１１．２８×１０５。初步鉴定单克隆抗体类型分别为ＩｇＭ、ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ２ｂ。抗原抗体定位于童虫表膜。结论该单抗的制备为进一步研制抗日本血吸虫童虫表膜分子疫苗奠定基础。     

具有保护性及诊断价值的弓形虫单克隆抗体的研制

目的：寻找具有保护性的弓形虫功能性表位。为疫苗制备和免疫诊断提供科学依据。方法：通过杂交瘤技术建立了抗弓形虫单克隆抗体的细胞株，观察了体内，外单克隆抗体的保护性效果；用夹心ELISA法检测了感染兔血清中的CAg，并观察了其与日本血吸虫抗原和弓形虫ME49株抗原的交叉反应。结果：建立了7个分泌弓形虫McAb的细胞株，Western-blot显示7个McAb可识别4种不同分子量的抗原，体外保护性实验证明这些单抗均可明显抑制弓形虫对细胞的侵袭及在细胞内的繁殖，在感染后第3d即可检测到CAg，未发现其与日本血吸虫抗原间的交叉反应，但是与弓形虫ME49株出现了交叉反应带。结论：7个McAb对弓形虫感染具有一定的保护力，有潜在的诊断价值。     

McAb-ELISA检测血吸虫循环抗原——Ⅰ.McAb的制备、筛选及初步试验

将感染日本血吸虫或曼氏血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,制备了30余株分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤,其靶抗原分别为血吸虫成虫表面膜、肠道、体细胞和虫卵。预试验结果表明,抗血吸虫成虫肠道多糖抗原McAb活性最强,将其用于夹心ELISA检测血吸虫成虫三氯醋酸可溶性抗原,敏感度达1ng/ml。用夹心ELISA测定正常兔血清呈阴性反应;测定感染兔血清呈阳性反应,且抗原水平与感染度呈正相关;8只感染兔治疗后3个月,除2份兔血清外,其余血清均转为阴性。提示本方法优于一般抗体测定法,是一种有潜力的免疫诊断方法。     

日本血吸虫组织蛋白酶B2在小鼠抗血吸虫再感染中的作用

目的 构建日本血吸虫组织蛋白酶B（Sjcb2）真核表达载体,检测日本血吸虫组织蛋白酶B2单独和联合吡喹酮（PZQ）在小鼠抗血吸虫再感染中的作用.方法 将60只BALB/c雌性小鼠随机均分为六组,建立日本血吸虫感染动物模型：感染组、感染攻击组、空质粒处理组、Sjcb2免疫组、吡喹酮处理组、Sjcb2联合吡喹酮处理组.Sjcb2免疫组和Sjcb2联合吡喹酮组分别在初次尾蚴感染前第21天、14天及7天接种pcDNA3.1（＋）/Sjcb2重组质粒,空质粒处理组接种pcDNA3.1（＋）空质粒.初次尾蚴感染后第六周,对吡喹酮处理组和Sjcb2联合吡喹酮处理组小鼠给予PZQ治疗.除感染组外其它各组在第八周再次进行尾蚴攻击感染.分别于第8周和第14周取各组小鼠肝脏组织做病理切片,观察虫卵肉芽肿大小;采用间接ELISA法检测血清中特异性IgE和IgG亚型（IgG1,IgG2和IgG3）;检测各组小鼠荷成虫数,计算抗血吸虫再感染率.结果 Sjcb2免疫组、联合组与其它组分别比较,小鼠荷虫数显著性减少,抗血吸虫再感染率显著升高,虫卵肉芽肿直径显著减小,IgG1水平显著下降和IgE水平显著升高（P〈0.01）.结论 Sjcb2在小鼠模型中具有抗日本血吸虫再感染作用,抗血吸虫再感染率为70.3%,抗再感染作用机制可能与特异性IgE水平升高和IgG1水平下降有关.     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp）单克隆抗体（McAb）,并对其特异性进行鉴定,用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westen blotting试验分析其特导性。结果,制备出2A5和 1H10两株能稳定分泌抗LDHp　McAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水效价分别为1:25600和1:12800,两株单抗与间日疟、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

左旋吡喹酮对日本血吸虫皮层损害的扫描电镜观察

感染血吸虫小鼠用左旋吡喹酮75mg/kg、吡喹酮150mg/kg灌胃给药,经不同时间收集成虫,作扫描电镜观察。虫体出现皮层肿胀、褶嵴融合、糜烂、剥脱及白细胞粘附等病变。结果提示,用药初期,葡萄糖的吸收障碍可能是影响虫体的主要因素。在后期,抗原暴露所致宿主免疫反应,可能在左旋吡喹酮杀虫机理中起主要作用。     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文用呼吸道合胞病毒(RSV)作抗原免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立3株分泌抗RSV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经鉴定所产生的McAb确系抗RSV的McAb。     

SUSCEPTIBILITY OF SCHISTOSOMA JAPONICUM OF DIFFERENT DEVELOPMENTAL STAGES TO PRAZIQUANTEL

The susceptibility of Schistosoma japonicum of different developmental stages to praziquantel has been studied by several methods. The results showed that praziquantel was more effective against 3-h old schistosomule (d 0) and 2&day old t0 42-day old adult worms (d 28 to d 42), but had no effect on 3-day old t0 21-day old schistosomules (d 3 to d 21). Since praziquantel could be excreted and secreted from the skin of mouse after administration, the drug exhibited a prophylactic effect when it was given to the host before infectiom The susceptibility of 12-h old t0 48-h old schistosomules to praziquantel was much lower than that of 3-h old schistosomule. This difference may be ascribed to varied immuno- reaction on the worm surface within 2 days after infection. Besides, d-21 worms lodging in rabbits with higher specific antibody level could be killed by praziquantel.     

曼氏血吸虫与日本血吸虫交叉免疫原性的血清学实验研究

以曼氏血吸虫的虫卵和成虫免疫家兔后所产生的特异性抗体,可用以日本血吸虫虫卵、尾蚴和成虫为抗原分别进行的COP,CHR和ELACIEP测出,表明两种人体血吸虫存有显著的交叉抗原成分。应用此种血清交叉反应性,以检测抗异种人体血吸虫的抗体,似有效而可取的,可用以辅助诊断援外回国人员是否感染国外人体血吸虫病。     

Isolation and specific detection of two major schistosoma gut-associated circulating antigens

目的　为探讨血吸虫肠相关循环抗原CAA与CCA诊断靶微粒上表位特异性的差别 ,并试探获取其纯化制品用于定量检测的标准系列。方法　对两组分进行了亲和层析及阴离子交换剂高压液相纯化分离 ,并应用单抗检测系统进行同相和异相交互测试。结果　Mono QHPLC梯度洗脱分离AWAj-TCA可溶组分 ,可获得一个带阳离子活性的非结合CCA - 1峰及 3个大小不等的 ,带阳离子活性的CCA - 2 ,CCA - 3,CCA - 4非结合洗脱峰 ,以及一个带阴离子活性CAA - 1洗脱峰。CAA活性峰在峰谱上与CCA - 3有部分重叠。与单抗亲和层析纯品的活性对比测定显示CCA - 1与CCA - 2为该组分的主要构成 ,但CCA - 2及CAA - 1在本实验条件下均有微量的相互杂染。同相和异相双位点ELISA的 4种组合交互检测 ,展示CCA只能在捕获与检测抗体同为抗CCA单抗的一种组合中被检示 ,而另 3种组合都只能测出CAA组分。结论　血吸虫肠相关CCA组分为一兼含两性电荷的分子混合体 ;而CAA分子上具有一个可被抗CCA单抗识别的活性表位位点 ,从而可能影响纯化分离和特异检测。     

中药免疫增强剂用于提高吡喹酮杀血吸虫效果的实验研究

目的观察两种中药免疫增强剂对吡喹酮杀血吸虫效果的影响.方法将昆明小鼠感染日本血吸虫后,第28天开始用两不同中药制剂(即中药1号和中药2号)分别灌胃C组和D组小鼠,0.5 ml/只/d,连续1周.感染后第35天给予吡喹酮半剂量进行治疗.同时设单用吡喹酮半剂量治疗对照组,吡喹酮全剂量治疗对照组和不用药感染对照组.感染后第49天剖杀小鼠灌注收集虫体.计算杀虫率、观察小鼠肝切片中虫卵肉芽肿大小并测定小鼠血清中特异性抗体动态水平.结果两种中药制剂分别将吡喹酮的杀虫率提高了33.97%和41.18%:虫卵肉芽肿大小与对照组比差异无显著性;在给中药前各组小鼠血清中特异性抗体水平无显著差别,给中药后,中药组小鼠血清中特异性抗体水平逐渐升高,直到给吡喹酮治疗前的抗体水平均显著高于对照组.结论本研究选用的两种中药刺剂均能在不加重虫卵内芽肿病变的同时提高吡喹酮杀日本血吸虫效果,其作用机制可能与中药增强剂促进宿主免疫应答,增强血吸虫特异性抗体生成有关.     

抗登革Ⅱ型病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立与鉴定

采用登革Ⅱ型病毒免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞,在40％PEG1000的作用下进行融合,获得6株分泌抗登革Ⅱ型病毒单克隆抗体的杂交瘤,用间接免疫荧光法鉴定其单克隆抗体(McAb)对登革Ⅱ型病毒均有特异性。HIA和CF试验有5株McAb为CF型特异的。5株具有HIA抑制活性。     

DEN2重组E蛋白单克隆抗体的制备及其生物学活性

[目的]研制登革病毒E蛋白特异性单克隆抗体,鉴定其各种生物学特性.[方法]用纯化的Pichia pastoris酵母表达的DEN2重组E蛋白作为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的细胞融合、有限稀释法克隆化杂交瘤细胞,制备稳定分泌McAbs的细胞株.采用硫酸铵沉淀法纯化腹水中的McAbs,用ELISA、IFA、Western Blot和空斑减数中和实验等鉴定McAbs的各种生物学活性.[结果]用ELISA、IFA检测证实5株杂交瘤细胞产生的McAbs与DEN2重组E蛋白和DEN全病毒均有较高的亲和力;Western Blot分析发现其中3株杂交瘤细胞(3G3,6G11,4E3)分泌的McAbs能与其相对分子质量Mr=(66～69)×103的DEN2重组E蛋白结合.空斑减数中和实验证实所获得的单克隆抗体具有中和登革病毒感染C6/36细胞的作用.[结论]成功地制备了5株抗登革病毒E蛋白特异性的McAbs,为进一步研究E蛋白的结构和功能及临床诊断试剂盒研发打下了基础.