3种咪唑类抗真菌乳膏剂微生物限度检查方法学研究

目的建立硝酸咪康唑、酮康唑、曲安奈德益康唑3种咪唑类抗真菌乳膏剂的微生物限度检查方法。方法采用含5%聚山梨酯80的pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制备3种乳膏剂1：10供试液,并稀释至1：20和1：50,分别加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉接种无菌平皿中,按照《中国药典》2015年版四部1105考察平皿法及稀释-平皿法计数方法适用性;分别取3种乳膏剂加入无菌pH 7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液和十四烷酸异丙酯两相系统中萃取,取萃取后的下层水相的上清液薄膜过滤处理后,分别加入5种试验菌,进行萃取-薄膜过滤法计数法适用性试验;分别取未经萃取-薄膜过滤处理和经过萃取-薄膜过滤的1：10供试液,接种至不同体积的胰酪大豆胨液体培养基中,按照《中国药典》2015年版四部1106进行控制菌检查适用性试验。结果通过平皿法或稀释处理,3种乳膏剂的3种细菌类试验菌回收率即符合要求;3种乳膏剂对白色念珠菌、黑曲霉均有较强的抑菌作用,无论是平皿法还是稀释处理后的平皿法,2种试验菌回收率均远小于0.5,不符合方法适用性要求。萃取-薄膜过滤法可有效去除3种咪唑类抗真菌乳膏剂对各试验菌的抑菌作用,3种乳膏剂的试验菌回收率均在0.5~2.0,符合计数方法适用性要求。经过萃取-薄膜过滤处理的供试液控制菌检出优于未经处理的供试液。结论采用萃取-薄膜过滤法可解决样品抑菌性的去除和滤膜堵塞的问题,适用于3种咪唑类抗真菌类乳膏剂的微生物限度检查。     

无菌工艺模拟试验中存在的问题与对策

目的：了解企业在无菌工艺模拟试验中存在的问题,把握《无菌工艺模拟试验指南》技术要求,促进企业规范开展无菌工艺模拟试验,提高无菌药品的无菌保障水平。方法：统计分析2016-2018年山东省药品GMP认证中无菌工艺模拟试验开展情况,对缺陷项目进行分类归纳,并结合《无菌工艺模拟试验指南》的要求提出解决对策。结果：无菌工艺模拟试验中的问题集中在培养与观察、最差条件选择、干预设计、记录、模拟介质评价、人员培训与操作6个方面。结论：建议企业关注灌装产品的培养与观察、合理设计最差条件和干预、充分评价模拟介质、重视人员培训与操作,确保规范开展无菌工艺模拟试验。     

一种新型胃癌治疗性疫苗的无菌检查

目的：建立一种新型胃癌治疗性疫苗的无菌检查方法。方法：依据《中国药典》2015年版三部要求,采用薄膜过滤法和吐温80溶解及梯度冲洗的方法进行无菌检查并进行方法适用性试验。结果与结论：通过方法适用性试验说明建立的无菌检查法适用于该疫苗的无菌检查,并对其他黏性供试品的无菌检查具有借鉴意义。     

地拉罗司分散片微生物限度检查方法研究

目的 建立地拉罗司分散片的微生物限度检查方法。方法 根据中国药典2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查中的微生物计数法,通则1106非无菌产品微生物限度检查中的控制菌检查法和通则1107非无菌药品微生物限度标准进行方法适用性试验。微生物限度检查方法学适用性试验采用常规法筛查了抑菌性,然后利用稀释和中和原理改进供试液的制备,即将中和剂3%聚山梨酯-80、0.3%卵磷脂添加至pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液作为稀释液,需氧菌总数计数（稀释成1：500）及霉菌和酵母菌总数计数（稀释成1：50）均采用平皿法,控制菌检查法采用培养基稀释法（500 mLTSB）。结果 5种试验菌的回收试验结果均在0.5~2.0之间。结论 该方法适用于地拉罗司分散片微生物限度的检查。     

胰酪胨大豆培养基和改良马丁培养基药品无菌检查效果的比对研究

目的: 比较药品无菌检查用的胰酪胨大豆培养基(TSB)和改良马丁培养基(MMB)对细菌和真菌的检测灵敏度和促生长能力。方法: 选用3株细菌和3株霉菌试验菌株,分别采用《中国药典》无菌检查法规定的培养基适用性检查中半定量检测方法和以平板菌落计数法为基础计算试验菌株生长率的定量方法,分别测试培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度。结果: 6株试验菌株在不同生产厂家的受试TSB和MMB中,其生长管数和生长率经统计学分析,差异均无显著性(P>0.05),灵敏度可达到 < 0.1 cfu·mL^-1;不同生产厂家间两受试培养基对6株试验菌株的促生长能力和检测灵敏度差异也无显著性(P>0.05)。结论: 在一定的接种和培养条件下,TSB可替代MMB用于药品无菌检查中的需氧菌和真菌检测。     

精蛋白胰岛素注射液无菌检查方法的建立

目的 建立精蛋白胰岛素注射液的无菌检查方法。方法 根据中国药典2015年版四部通则1101无菌检查法进行方法适用性试验,对药典收载的精蛋白胰岛素注射液无菌检查方法进行优化,使用无微生物毒性的肝素钠溶液中和胰岛素注射液中的精蛋白,使精蛋白胰岛素注射液由白色混悬液变为澄清透明液体,便于薄膜过滤法处理。结果 使用薄膜过滤法,无菌检查方法适用性试验中6株阳性对照菌均可正常生长。结论 建立了可行的精蛋白胰岛素注射液的无菌检查方法,为下一版中国药典修订已收载的精蛋白胰岛素注射液无菌检查方法提供了实验依据。     

乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液无菌检查方法的建立及验证

目的 建立乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液的无菌检查方法。 方法 根据《中华人民共和国药典(二部)》2010年版所列方法,通过增加冲洗液用量和加入中和剂,采用薄膜过滤法进行实验研究。 结果 以0.1%蛋白胨水溶液作为冲洗液,每管冲洗液容量为700 ml,每次冲洗100 ml,金黄色葡萄球菌不能正常生长。然而,使用含中和剂的培养基时,冲洗量每管300 ml,所有阳性对照菌均生长良好。 结论 本法简单方便,适用于乳酸左氧氟沙星氯化钠注射液的无菌检查。     

两种除菌级疏水性过滤器完整性测试方法的比较

目的：比较两种除菌级疏水性过滤器完整性测试方法,提出适用性的建议及需要把握的要点,旨在为同行开展此类工作提供参考。方法：阐述无菌制剂生产过程中除菌级过滤器的法规要求,较全面地比较起泡点测试法与水侵入测试法的基本原理、影响因素及其在应用中的优劣性。结果：两种方法基于相同测试原理,适用限制条件略有不同,均能有效保证除菌过滤系统的完整性,降低制药质量风险。结论：水侵入测试法不需要引入有机溶剂等低表面张力溶液进行润湿,操作简便,更适宜于医院无菌制剂生产过程除菌级疏水性过滤器的完整性测试。     

自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂孢子计数方法的考察

摘 要 目的： 研究自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂孢子计数方法。方法: 采用活菌计数法,将不同厂家产品在不同洗脱液、不同平皿计数方式下的回收菌数进行计数,并利用单因素方差分析方法(ANOVA)对不同处理组回收菌数的几何均数进行统计学检验。结果: 洗脱液为灭菌纯化水,培养基为胰酪胨大豆琼脂培养基,纸片破碎形式为涡旋振荡法（加入玻璃珠）,平皿计数形式采用浇碟法的操作方法能获得较好的实验结果。结论: 在保证自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂的孢子计数菌数回收率的情况下采用上述操作能降低实验成本且易于操作。     

生物制品无菌制剂污染菌风险及无菌检查法培养条件调查

目的 调查中国药典无菌检查法中保留生物制品特殊培养条件的必要性。方法 对全国范围内的生物制品生产企业开展为期2年的产品和高等级洁净区中捕获污染菌种属和频数调查,并对污染菌培养条件进行核实。结果 在生产企业上报的有明确鉴定结果的污染菌中,未发现必须采用硫乙醇酸盐流体培养基低温(20~25 ℃)培养的需求。结论 从培养谱角度,在基于风险的前提下,建议中国药典无菌检查法对生物制品特殊培养要求进行修订。     

BFS基础输液微生物负荷实验研究

目的：考察BFS基础输液微生物负荷,并与其他包装工艺进行比较。方法：根据BFS,软袋、塑瓶3种不同包装工艺的特点,选择容器、过滤终端和灌装过程3个取样点,对某公司生产的上述3种不同包装的5%葡萄糖注射液共计61批样品,采用TSA培养基两个温度点培养的方法检测微生物负荷;采用沸水浴30min,薄膜过滤法处理,硫乙醇酸盐肉汤培养基30~35℃培养7d的方法,检测耐热微生物。结果：20批次BFS样品中均未检出耐热微生物;BFS样品灭菌前药液微生物污染水平低于软袋、塑瓶样品。结论：BFS基础输液在微生物负荷控制方面较其他包装工艺产品具有优势。     

复方氨基酸注射液（20AA）包装材料改进及其稳定性的研究

目的：研究复方氨基酸注射液（20AA）在非PVC五层共挤膜软袋包装基础上,另加外阻隔袋内置抗氧剂并抽真空封口包装条件下的稳定性。方法：根据《药物稳定性研究指导原则》和复方氨基酸注射液（20AA）的质量标准,对样品进行光照试验、加速试验和长期试验。结果与结论：复方氨基酸注射液（20AA）在非PVC五层共挤膜软袋包装基础上,另加外阻隔袋内置抗氧剂并抽真空封口包装条件下,与非PVC五层共挤膜软袋包装比较,其性状、透光率、含量明显改善,但pH值有所下降。     

曲安奈德原料药微生物总数检查法验证

目的 建立曲安奈德的微生物限度检查法并进行验证。方法 按平皿法对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种试验菌分别进行3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌每次试验的回收率,以验证细菌、霉菌及酵母菌计数方法的可行性。结果 营养琼脂培养基中添加0.001% TTC菌体显色剂能有效地对细菌着色,保证细菌计数的准确性;用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100 mL加10 g聚山梨酯80的方法制备样品液,5种试验菌均取得了很好的回收率（>70%）。结论 所建立的曲安奈德原料药的细菌、霉菌及酵母菌的计数方法是可行的。     

Effect of two work practice changes on the microbial contamination rates of pharmacy-compounded sterile preparations.

PURPOSE: Using a multiple-step testing medium-risk-level compounding test procedure, the evaluation of two work-practice changes to determine if the changes could effectively reduce the potential for contamination occurrence was conducted. SUMMARY: Along with training and evaluation of aseptic sterile compounding techniques, each individual pharmacist and pharmacy technician at M. D. Anderson Cancer Center must successfully demonstrate aseptic preparation competency annually by performing the complicated multistep aseptic transfers of growth medium with no resulting growth of microorganisms. The multistep aseptic transfers are designed to simulate manual compounding of the most complicated medium-risk-level preparations anticipated as specified in the United States Pharmacopeia's chapter 797. An evaluation of two modest and simple work-practice changes was conducted: The use of bare hands and nonsterile gloves with only initial disinfection with 70% isopropyl alcohol (IPA) during years 1 and 2 (group A) was compared with the use of nonsterile chemotherapy gloves with initial and repeated disinfection with IPA for year 3 (group B) and the use of sterile gloves with initial and repeated disinfection with IPA for year 4 (group C). The process involved multiple discrete manipulations, including reconstitution of dry-growth medium; transfers of growth medium from vials and ampules using syringes, needles, a dispensing pin, and a filter straw; and transfers to an empty plastic i.v. bag. For groups B and C, significant reductions in contaminated samples were found compared with group A. CONCLUSION: The use of protective chemotherapy gloves that were repeatedly disinfected with IPA decreased the contamination rate of pharmacy-compounded sterile preparations.     

无菌工艺模拟试验中常见问题和检查要点分析研究

无菌工艺模拟试验的评估内容涵盖了无菌操作全过程,是对药品生产活动无菌保证能力评估的有效方法,对其检查的常见问题包括工艺模拟、报告与记录、干预、模拟范围、污染调查与处理、模拟的次数与频次、模拟介质（培养基）等方面。在对无菌工艺模拟试验设计与方案制定、实施与执行、持续评估与再验证3个不同阶段进行重点分析基础上,就如何从程序文件规定、无菌工艺模拟试验方案、无菌工艺模拟试验报告与记录、无菌工艺模拟试验实施过程的视频和相关记录、生产现场情况、人员和关联内容等7个方面对无菌工艺模拟试验的检查重点进行了阐述。从药品检查角度对无菌工艺模拟试验进行分析,就如何在无菌药品检查及各类自检和外部审计中做好无菌工艺模拟试验相关内容的检查进行研究,以期促进无菌工艺模拟试验在药品生产企业中更科学合理的开展,更好地保证药品质量。     

传统型血袋无菌检测新技术研究

目的:建立传统型血袋无菌检查新方法.方法:以传统型血袋为研究对象,采用"培养基冲洗法""培养基灌装法"2种新的无菌检查方法和传统薄膜过滤法进行方法适用性试验,以确定所设计方法对该产品的适用性;另选取萎缩芽孢杆菌(ATCC 9372)作为代表性菌株污染血袋,选取4个稀释梯度,进行3种方法的检出率对比研究以得到最优的无菌检...     

改进培养基制备的平皿法应用于芬太尼透皮贴剂微生物限度检查

目的 建立一种芬太尼透皮贴剂的微生物限度检查新方法.方法 按照《中国药典》2015年版要求,分别取2种规格相当于供试品100 cm2芬太尼透皮贴剂,加入100 mL供试液中制成1:10供试液(按10 cm2计).分别加入不大于100 cfu的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉试验菌,取供试液10 mL倾注直径150 mm平皿,按培养基处方量的1.25倍制备胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基,倾注平皿进行计数法的适用性试验,另取供试液10 mL加入100 mL胰酪胨大豆液体培养基中进行金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查方法适用性试验.结果 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验中各试验菌回收率均不小于0.70,控制菌方法适用性试验均检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌,符合《中国药典》要求.结论 所建立方法准确、简单、科学、经济,适用于芬太尼透皮贴剂的微生物限度检查.