电针对胰岛素抵抗大鼠认知功能与下丘脑PI3K、Akt2蛋白表达的影响

目的:观察电针对胰岛素抵抗模型大鼠学习记忆能力与下丘脑中PI3K、Akt2及其磷酸化蛋白表达的影响。方法:将60只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、预防组和电针组,以标本配穴法电针治疗。检测各组大鼠FBG、FIN;空间学习记忆能力;下丘脑Aβ1-42阳性表达、PI3K、Akt2及其磷酸化蛋白表达。结果:(1)较正常组大鼠,模型组大鼠FBG、FINS、ISI升高,IRI降低(P0.01);定位航行与空间探索时间延迟,跨越次数减少(P0.01);下丘脑Aβ1-42阳性表达减少,PI3K、Akt2及其磷酸化蛋白表达减少(P0.01)。(2)较模型组大鼠,预防组和电针组大鼠FBG、FIN、IRI降低,ISI升高(P0.01);定位航行与空间探索时间缩短,跨越平台次数增加(P0.01);下丘脑Aβ1-42阳性表达增加,PI3K、Akt2及其磷酸化蛋白表达增加(P0.01)。(3)较电针组大鼠,预防组大鼠FBG、FIN、IRI降低,ISI升高(P0.01);定位航行时间缩短(P0.01);下丘脑PI3K、Akt2及其磷酸化蛋白表达增加(P0.01)。结论:电针改善胰岛素抵抗模型大鼠学习记忆能力的作用机制可能与改善中枢胰岛素抵抗状态相关。     

中药复方糖耐康干预KKAy小鼠胰岛素信号转导受体后通路作用机制研究

目的观察中药复方糖耐康对自发性2型糖尿病KKAy小鼠胰岛素信号转导受体后通路的影响。方法将KKAy小鼠40只采用随机数字表法分为模型组、糖耐康高剂量组、糖耐康低剂量组、吡格列酮组各10只,另取10只C57bl/6J小鼠作为正常对照组。各药物组灌胃相应剂量药物,正常对照组及模型组灌胃无菌水,连续给药60天。给药期间每周测量小鼠随机血糖、饮水量及体重变化,60天后测定小鼠空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FIns),计算胰岛素敏感指数(ISI),Western blot法测定小鼠骨骼肌和脂肪组织中蛋白激酶B(PKB/Akt1αSer 473)磷酸化、糖元合成激酶3β(GSK-3β)蛋白的表达。结果随给药时间的延长,糖耐康对多饮症状的改善逐渐明显,对体重无明显影响。糖耐康高剂量组FPG、FIns、ISI水平均较模型组显著降低(P0.05),PKB/Akt1αSer 473蛋白磷酸化水平较模型组明显升高(P0.05),GSK-3β蛋白表达较模型组明显下降(P0.05)。结论调节胰岛素信号转导受体后途径中PKB/Akt1αSer 473磷酸化、GSK-3β蛋白表达,可能是中药复方糖耐康改善胰岛素抵抗状态的作用机制之一。     

痰脂消汤调控PCOS-IR模型大鼠卵巢PI3K/Akt途径探讨

目的:观察痰脂消汤对来曲唑灌胃联合高脂膳食诱导的多囊卵巢综合征胰岛素抵抗(PCOS-IR)模型大鼠卵巢胰岛素信号转导途径的影响。方法:来曲唑灌胃联合高脂膳食喂养SD大鼠建立PCOS-IR模型,大鼠随机分为模型组、痰脂消汤组(35 g·kg~(-1)·d~(-1))、二甲双胍组(200 mg·kg~(-1)·d~(-1)),连续灌胃20 d;另设正常组。实验结束后,腹主动脉采血,测定血清空腹血糖(FPG)和空腹胰岛素(FINS)浓度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测大鼠卵巢胰岛素受体(INSR),胰岛素受体底物(IRS)-1,酯酰肌醇-3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt)mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织INSR,IRS-1,PI3K,Akt蛋白及其相应磷酸化水平表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠空腹胰岛素(FINS),HOMA-IR水平均显著升高(P0.01),FPG无明显升高;模型组大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平明显降低(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显降低(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显降低(P0.05)。与模型组比较,中药和二甲双胍治疗后大鼠FINS,HOMA-IR均显著降低(P0.01);大鼠卵巢INSR,IRS,PI3K,Akt mRNA表达水平均明显升高(P0.05);INSR,p-INSR,IRS,p-IRS,PI3K,p-PI3K,Akt,p-Akt等蛋白表达水平明显升高(P0.05);INSR,IRS,PI3K及Akt磷酸化比例明显升高(P0.05)。结论:PCOS大鼠存在IR,卵巢内PI3K/Akt信号途径转导存在异常。痰脂消汤能够显著改善大鼠胰岛素抵抗,可能与调控胰岛素信号转导通路中关键的蛋白表达有关。     

肝糖异方通过上调肝脏IRS2/PI3K信号通路改善肝硬化大鼠的胰岛素抵抗

目的:探讨肝糖异方对肝硬化大鼠胰岛素抵抗的影响以及对肝脏中胰岛素受体底物2/磷脂酰肌醇-3-激酶(IRS2/PI3K)信号通路的影响。方法:40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、肝糖异方组和二甲双胍组,每组各10只。制备四氯化碳和高脂高糖饮食复合肝硬化大鼠模型,肝糖异方组大鼠予肝糖异方灌胃(1 m L/100 g),二甲双胍组大鼠予二甲双胍(200 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃。对肝组织进行苏木素-伊红染色,口服葡萄糖耐量试验,检测空腹血清胰岛素,计算胰岛素抵抗指数HOMA-IR,免疫印迹法检测肝组织中IRβ和IRS2的表达,比色法检测PI3K活性。结果:四氯化碳和高脂高糖饮食复合肝硬化模型大鼠中检测到显著的葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗。肝糖异方和二甲双胍显著减轻模型大鼠的肝纤维化程度和脂肪样变,改善葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗。正常组大鼠肝组织中IRβ的蛋白表达量是模型组的3.13倍(P0.001),肝糖异方组和二甲双胍组的肝脏中IRβ的表达量分别是模型组1.71倍和1.92倍(均P0.001),有统计学差异。各组大鼠肝脏中的IRS2含量无显著差异,但正常组的IRS2磷酸化水平显著高于模型组,是模型组的2.02倍(P0.001)。肝糖异方组和二甲双胍组的IRS2磷酸化水平与模型组相比显著增高,分别是模型组的2.30倍和2.25倍(均P0.001)。与正常组相比较,模型组大鼠肝组织的PI3K活性显著下降(P0.01),而肝糖异方组和二甲双胍组的PI3K活性比模型组显著增加(P0.01)。结论:肝糖异方汤能显著减轻肝硬化大鼠的肝脏损害,减轻葡萄糖不耐受和胰岛素抵抗,上调肝脏中IRβ的表达及其下游的IRS2/PI3K信号通路。     

电针对单纯性肥胖大鼠胰岛素抵抗及下丘脑胰岛素信号分子的影响

目的:观察电针对饮食诱导的单纯性肥胖(diet induced obesity,DIO)大鼠的体质量、胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)及下丘脑胰岛素信号分子等的影响,探讨电针治疗肥胖症的机制。方法:50只SD雄性大鼠随机分为低脂组(10只)和高脂组(40只),分别以低脂饲料、高脂饲料喂养,高脂饲料组制造DIO大鼠模型。造模成功的30只大鼠,随机分为模型组、电针组、西药组,每组10只。电针组电针"后三里"和"曲池",每次20min,每日1次,连续治疗28d;西药组予以奥利司他灌胃,每日1次,共28d;低脂组和模型组不做治疗。治疗结束后,HE染色观察肝脏组织形态学改变,采用生化和放射免疫法分别检测空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)和空腹胰岛素(fasting insulin,FINS),Western Blot法检测磷脂酰肌醇3激酶之亚基p85(phosphatidylinositol-3kinase p85subunit,PI3K-p85)和胰岛素受体底物2(insulin receptor substrate 2,IRS2)蛋白表达水平。结果:光镜下电针组和西药组较模型组脂变细胞在1/2以下,胞浆内脂滴变小,轻度水肿,无炎细胞浸润。电针组大鼠体质量、FPG、FINS、胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-insulin resistance index,HOMA-IR)和PI3K-p85蛋白表达均低于模型组(P0.01,P0.05),IRS2蛋白表达与模型组比较差异无统计学意义(P0.05);西药组大鼠体质量、HOMA-IR和PI3K-p85蛋白均低于模型组(P0.01,P0.05),IRS2蛋白表达高于模型组(P0.05);电针组和西药组各指标比较差异均无统计学意义(均P0.05)。西药组大鼠大便溏稀不成形,活动减少,精神萎靡,毛色枯黄,电针组大鼠大便正常,毛色有光泽。结论:电针可通过降低下丘脑PI3K-p85蛋白的表达,改善DIO大鼠的IR情况,抑制大鼠体质量的增长,同时改善肝脏脂变情况,这可能是电针减肥的作用机制之一。且可避免西药组大鼠表现出来的不良反应。     

花旗泽仁对胰岛素抵抗大鼠肌肉组织中CaSR基因、蛋白表达及AKT活性的影响

目的:通过观察花旗泽仁对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠肌肉组织中钙敏感受体(CaSR)基因、蛋白表达及AKT活性的影响,探究花旗泽仁治疗胰岛素抵抗的作用机制。方法:取雄性Wistar大鼠持续灌胃脂肪乳、腹腔注射链脲佐菌素的方式复制2型糖尿病胰岛素抵抗模型。将造模成功的胰岛素抵抗大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组、花旗泽仁组。花旗泽仁组给予花旗泽仁水煎液,阳性对照组给予罗格列酮药液。给药结束后,分别检测各组大鼠空腹血糖(FBG)及空腹血清胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI),并且取大鼠肌肉组织,采用qRT-PCR和Western blot技术检测钙敏感受体CaSR mRNA、CaSR蛋白和磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平。结果:胰岛素抵抗大鼠模型被成功建立。CaSR mRNA、CaSR蛋白表达水平明显降低(P0.001),磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白含量明显下降(P0.001,P0.01);花旗泽仁组与模型组比较,FBG及FINS水平明显降低(P0.01),ISI显著升高(P0.01),CaSR mRNA、CaSR蛋白和磷酸化AKT(Ser473和Thr308)蛋白表达水平均明显增加(P0.01,P0.05)。结论:花旗泽仁可能通过上调CaSR表达水平,上调与胰岛素抵抗关系密切的PI3K/AKT信号通路中的AKT蛋白(Ser473、Thr308位点)磷酸化水平,从而改善胰岛素抵抗。     

电针对PCOS大鼠胰岛素抵抗的下丘脑NFκB通路影响

摘要：目的 探讨电针治疗多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗(IR)的下丘脑微炎症机制,为临床应用电针治疗PCOS-IR提供实验依据。方法 6周龄雌性SD大鼠40只,随机取6只为正常组,剩余大鼠经来曲唑连续灌胃21 d后,筛选出造模成功的PCOS-IR共12只,模型组、电针组各6只。电针组双侧“带脉”穴连接2 Hz/100 Hz电针,干预20min,共治疗2周。治疗结束后测定各组HE染色切片、大鼠腹围(WC)、体长、体质量,计算Lee’s指数及体重增加率,氧化酶法检测空腹血糖(FPG),ELISA法测定空腹胰岛素(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(IAI),Werstern blot法检测下丘脑NFκB、IKBα、PI3K蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组HE切片出现多囊样改变,WC、Lee’s指数、体重增加率、血清FPG、FINS及HOMA-IR升高(P＜0.01),下丘脑NFκB蛋白表达增加(P＜0.01)、IKBα及PI3K蛋白表达下降(P＜0.01);与模型组比较,电针组大鼠卵巢结构有所改善, WC、体重增加率、血清FPG、FINS及HOMA-IR下降(P＜0.05,P＜0.01),下丘脑NFκB蛋白表达降低(P＜0.01)、IKBα及PI3K蛋白表达升高(P＜0.01)。结论 电针可改善PCOS-IR大鼠胰岛素抵抗,其机制可能与调整下丘脑NFκB信号通路蛋白表达有关。     

电针对PCOS大鼠子宫内膜IRS1和IRS2 mRNA表达及胰岛素敏感性的影响

目的观察电针对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠子宫内膜胰岛素受体底物(IRS)1和IRS2基因表达及胰岛素敏感性的影响,为电针提高PCOS患者妊娠率,减少流产率的临床应用提供实验依据。方法24日龄雌性SD大鼠皮下注射脱氢表雄酮(DHEA)的麻油溶液结合高脂饮食造模,正常组同期皮下注射麻油,喂以普通饲料;PCOS大鼠模型随机分为模型组、电针组,各组均于80日龄起进行干预,其中电针组电针治疗,1周3次,连续5周,而正常组、模型组每天只捆绑不针刺,1周3次,连续5周。治疗前后尾静脉取血,氧化酶法测定空腹血糖(FPG)水平,罗氏电化学发光法测定空腹胰岛素(FINS)水平,计算稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR指数),治疗结束后,各组大鼠断头处死,留取子宫内膜标本,用实时定量荧光PCR法检测子宫内膜组织IRS1、IRS2 mRNA表达。结果各组治疗前后的FPG水平变化差异均无统计学意义(P0.05);治疗前,模型组FINS水平、HOMA-IR指数均显著高于正常组(P0.05);治疗后,电针组FINS、HOMA-lR水平显著低于模型组(P0.05);与正常组比较,模型组子宫内膜组织IRS1、IRS2 mRNA表达升高(P0.05);与模型组比较,电针组子宫内膜组织IRS1、IRS2 mRNA表达降低(P0.05)。结论电针具有改善PCOS大鼠胰岛素敏感性,提高子宫内膜组织IRS1、IRS2 mRNA表达的作用,这可能是其改善子宫内膜胰岛素抵抗的机制之一。     

加减逍遥散对慢性心理应激2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗的影响

目的 观察慢性心理应激对2型糖尿病(T2DM)小鼠糖脂代谢及胰岛素抵抗(IR)的影响及加减逍遥散的作用效果。方法 102只自发性糖尿病(KK)小鼠随机分为5组:正常对照(WC)组,模型(SC)组,加减逍遥散对照(XYS)组,应激+加减逍遥散低剂量(LXYS)组及应激+加减逍遥散高剂量(HXYS)组。KK小鼠用高糖高脂饲料喂养8周,采用电击、夹尾、禁食、禁水、合笼饲养等方法复制慢性心理应激模型。检测各组小鼠空腹血糖(FPG)、血清胰岛素(FINS)以及血脂的胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)4项等指标,计算胰岛素敏感指数(ISI)。结果 与WC组比较,SC组的ISI明显降低(P <0.01),体质量明显下降(P < 0.01),XYS组的FPG明显降低(P < 0.01)、ISI明显增强(P < 0.05);与SC组比较,LXYS组及HXYS组的ISI明显增强(P < 0.01),HXYS组体质量明显升高(P < 0.05),TG,CHO,LDL-C,明显降低(P < 0.01,P < 0.05),HDL-C,明显升高(P < 0.05)。结论 慢性心理应激能降低T2DM小鼠的胰岛素敏感性,从而加剧其IR以及糖脂代谢的紊乱;加减逍遥散不仅能提高T2DM小鼠的胰岛素敏感性,减轻IR,同时也能对抗慢性心理应激对T2DM小鼠IR的不良影响。     

电针对阿尔茨海默病小鼠海马胰岛素信号通路相关蛋白表达的影响

目的:观察电针对阿尔茨海默病(AD)小鼠海马胰岛素磷脂酰肌醇-3激酶/糖原合成酶激酶-3α(PI3K/GSK3α)信号通路相关蛋白表达的影响,探讨电针改善AD病理特征的调节机制。方法:将12只雄性APP/PS1双转基因小鼠随机分为模型组和治疗组,每组6只;另以6只雄性野生型小鼠作为对照组。治疗组小鼠电针"百会"及双侧"肾俞",连续波,频率2 Hz,每天1次,7 d为一疗程,共治疗2个疗程。采用免疫组化法及Western blot检测各组小鼠海马PI3K/GSK3α信号通路相关蛋白P85α、P110α、GSK3α及pS~(21)GSK3α分布和表达水平,并观察海马老年斑(SP)数量的变化。结果:P85α、P110α、GSK3α及p S~(21)GSK3α蛋白均主要分布于海马神经元的细胞质内,模型组和治疗组GSK3α蛋白还分布于神经元轴突上。免疫组化结果显示,与对照组比较,模型组小鼠海马GSK3α分布水平明显升高(P0.001),p S~(21)GSK3α、P85α及P110α的分布水平明显降低(P0.01,P0.001);与模型组比较,治疗组小鼠海马GSK3α分布水平明显降低(P0.001),p S~(21)GSK3α、P85α及P110α分布水平明显升高(P0.05,P0.001)。Western blot结果显示,与对照组比较,模型组小鼠海马p S~(21)GSK3α、P85α、P110α蛋白表达量及p S~(21)GSK3α/GSK3α比值均明显降低(P0.001),GSK3α蛋白表达量升高(P0.05);与模型组比较,治疗组小鼠海马p S~(21)GSK3α、P85α、P110α蛋白表达量及p S~(21)GSK3α/GSK3α比值均明显升高(P0.01,P0.001),GSK3α表达量降低(P0.05)。与对照组比较,模型组小鼠海马SP数量明显增多(P0.001);与模型组比较,治疗组小鼠海马SP数量明显减少(P0.01)。结论:电针刺激能够有效调节AD模型小鼠海马内胰岛素PI3K/GSK3α信号通路上相关蛋白的表达,从而减少老年斑的形成和沉积。     

尿石素A激活自噬改善糖尿病小鼠肝脏胰岛素抵抗研究

目的研究尿石素A(UA)对2型糖尿病模型小鼠肝脏胰岛素信号通路的影响及与自噬的关系。方法将C57BL/6小鼠按体质量随机分成4组,即对照组、模型组、尿石素A(50 mg/kg)组、尿石素A(50 mg/kg)联合氯喹(50 mg/kg)组,高脂饲料喂养6周后,ip链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病模型。各组小鼠ig给药7周,检测小鼠体质量、饮水量、血脂、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(ISI);HE染色观察小鼠肝组织病理变化;蛋白免疫印迹法检测小鼠肝组织磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、葡萄糖转运蛋白2(Glut2)、磷酸化糖原合酶激酶-3β(p-GSK3β)及自噬相关蛋白微管相关蛋白质1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3 Ⅱ/Ⅰ)、选择性自噬接头蛋白(p62)表达水平。结果与模型组比较,UA能够显著改善糖尿病模型小鼠肝组织脂肪变和水肿;显著降低血浆三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、FBG、FINS水平,升高高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平(P0.01);显著降低HOMA-IR,升高ISI(P0.01);上调肝组织p-Akt、Glut2、p-GSK3β、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达,抑制p62蛋白表达(P0.01)。联合氯喹后,小鼠FBG、FINS、HOMA-IR增加,ISI降低(P0.05);肝组织水肿和脂肪病变明显加重;肝组织p-Akt、Glut2、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平降低,p62蛋白表达水平升高(P0.05),显示自噬抑制剂氯喹明显削弱了UA的作用。结论 UA可能是通过激活肝脏自噬改善糖尿病小鼠肝脏胰岛素抵抗。     

尿石素A对2型糖尿病小鼠脂肪组织胰岛素抵抗的影响

目的探讨尿石素A对2型糖尿病小鼠脂肪组织胰岛素抵抗的影响。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、尿石素A组、尿石素A+氯喹组,给药2月后检测各组小鼠体质量、体脂比、血浆TG、LDL、HDL、FINS、FFA、ADPN、Resistin水平,计算脂肪组织胰岛素抵抗指数(FIRI),HE染色观察脂肪组织病理学改变,Western blot法检测脂肪组织胰岛素信号通路蛋白和自噬蛋白表达。结果与模型组比较,尿石素A组小鼠血浆LDL、FFA、Resistin水平及FIRI降低(P0.01),HDL、ADPN水平增高(P0.01),脂肪细胞不饱满,细胞膜皱缩,IRS1、p-Akt、Glut4及p62蛋白表达增强(P0.01),LC3II/I、Beclin1表达减弱(P0.05)。与单独尿石素A组比较,尿石素A+氯喹组小鼠终体质量、TG水平降低(P0.01),IRS1、p-Akt、Glut4表达更弱(P0.05),Beclin1、p62蛋白表达更弱(P0.05)。结论尿石素A可改善脂肪组织病理状态,调节脂肪细胞因子及血脂紊乱,可能通过纠正脂肪组织过度自噬和激活胰岛素信号通路来改善2型糖尿病小鼠胰岛素抵抗。     

电针对阿尔茨海默病模型大鼠海马形态及胰岛素抵抗的影响

目的观察电针对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠认知功能的影响及可能的作用机制。方法LETO大鼠8只为正常组;胰岛素抵抗OLETF大鼠23只采用腹腔注射D-半乳糖和灌胃Al Cl3溶液的方法建立AD模型后,随机分为模型组12只和电针组11只。电针组给予电针干预,连续3周,模型组与正常组无干预。干预结束后,采用Morris水迷宫实验观察各组大鼠行为学变化,检测各组大鼠空腹血糖(FPG)、血浆胰岛素(FINS)、血清C肽水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并检测各组大鼠海马组织中的β-淀粉样蛋白(Aβ)及tau蛋白含量。结果 Morris水迷宫实验中,与模型组比较,电针组各时间定位航行实验的逃避潜伏期均显著缩短,空间探索实验的穿越平台象限时间延长(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠FPG、FINS、HOMA-IR、C肽及海马Aβ和tau蛋白含量含量较正常组显著升高(P0.01);与模型组比较,电针组大鼠海马FPG、FINS、HOMA-IR、C肽及海马Aβ和tau蛋白肽含量均降低(P0.01)。结论电针可改善AD模型大鼠认知行为功能及脑AD样病理改变,其机制可能与改善期胰岛素抵抗状态有关。     

金钗石斛总生物碱对侧脑室注射链脲佐菌素所致痴呆大鼠脑内胰岛素信号的影响

目的:观察金钗石斛总生物碱对散发型老年痴呆动物脑内胰岛素信号的影响。方法:采用双侧侧脑室注射链脲佐菌素制备大鼠散发型老年痴呆模型,空白对照组大鼠侧脑室注射溶媒。术后动物分为:模型对照组、金钗石斛总生物碱20 mg/kg、40 mg/kg组,另设空白对照组、空白+总生物碱(40 mg/kg)组。治疗组大鼠灌胃相应剂量的总生物碱,空白对照和模型对照组大鼠灌胃等体积蒸馏水,每天1次,连续28 d。灌胃结束前6 d采用Morris水迷宫检测大鼠行为学功能;麻醉处死大鼠并收集大脑,HE染色观察海马神经元形态及数量,Western blot法检测海马胰岛素受体(IR)、胰岛素底物-1(IRS-1)、蛋白激酶B(Akt)的蛋白表达水平及磷酸化程度。结果:水迷宫结果提示,与空白对照组大鼠相比,模型对照组大鼠逃避潜伏期明显延长;与模型对照组相比,给予金钗石斛总生物碱后大鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)。HE染色发现模型对照组大鼠海马CA3区神经元层次减少、排列紊乱、细胞深染,且神经元密度下降;给予金钗石斛总生物碱后部分改善了神经元的形态并提高了神经元密度(P<0.01)。模型对照大鼠海马组织IR的磷酸化水平较空白对照组大鼠明显下调,而IRS和Akt的磷酸化水平则显著下调,给予金钗石斛总生物碱40 mg/kg后显著上调了IR磷酸化、下调了IRS和Akt的磷酸化水平(P<0.01)。结论:金钗石斛总生物碱能减轻链脲佐菌素所致痴呆大鼠学习记忆功能的损害,可能与调节脑内异常的IR/IRS-1/Akt通路中关键靶点的作用有关。     

HJJB复方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠胰岛素信号转导环节的影响

目的观察红景天苷、姜黄素、绞股蓝总苷、白术多糖(HJJB)复方对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠胰岛素信号转导环节的干预作用。方法采用高脂饮食14周诱导的大鼠胰岛素抵抗NASH模型。在造模第9周起,随机分为模型组、西药组(罗格列酮,0.4 mg/kg)和中药组(HJJB)。干预6周后,观察肝组织病理变化(HE染色),检测肝组织TG含量、ALT活性、血清空腹胰岛素(FINS)含量、空腹血糖(FBG)含量、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测肝组织胰岛素受体底物1(IRS1)、磷酸化IRS1(p IRS1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、磷酸化PKB(p PKB)蛋白含量;检测肝组织IRS1、PI3K、PKB mRNA水平。结果与正常组比较,模型组出现肝细胞脂肪变性,TG、ALT、FINS、FBG及HOMA-IR升高(P0.01),IRS1、p IRS1、PI3K、p PI3K、PKB、p PKB蛋白及IRS1、PI3K、PKB mRNA降低(P0.01)。与模型组比较,中药组和西药组上述病理改变明显减轻,血清TG、ALT、FINS、FBG及HOMA-IR含量降低(P0.05)。中药组IRS1、p IRS1、PI3K、p PI3K、PKB、p PKB蛋白及IRS1、PI3K、PKB mRNA水平较模型组及西药组升高(P0.01,P0.05),TG及ALT较西药组降低(P0.01)。结论 HJJB复方可上调NASH大鼠肝脏IRS1基因表达和蛋白含量,改善PI3K/PKB信号通路。     

六味地黄丸对妊娠期糖尿病胰岛素抵抗的miR-103调控机制研究

目的:探讨六味地黄丸对妊娠期糖尿病(GDM)胰岛素抵抗的miR-103调控机制。方法:随机数字表法将60只雌性大鼠分为对照组、GDM模型组、六味地黄丸低剂量组、六味地黄丸高剂量组,每组各15只,比较四组血糖水平、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)、荧光定量PCR、蛋白质印迹法(Western blot)等方法检测四组miR-103、小窝结构(Caveolae1)-胰岛素受体底物(IRS)-磷酸化蛋白激酶B (p Akt)信号通路相关基因和蛋白表达水平。结果:六味地黄丸高剂量组FBG、INS、HOMA-IR和miR-103表达水平较GDM模型组和六味地黄丸低剂量组明显低,差异显著(P0. 05);六味地黄丸高剂量组Caveolae1、IRS、p Akt相关基因表达水平和其蛋白表达活性较GDM模型组和六味地黄丸低剂量组明显高,差异显著(P0. 05);六味地黄丸高剂量组上述各项指标与对照组相比较差异无统计学意义(P0. 05)。结论:六味地黄丸对GDM临床疗效明确,作用机制可能与其有效下调miR-103水平,从而抑制miR-103调控靶基因Caveolae1、IRS和p Akt有关。     

抗脂方改善大鼠非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

目的研究中药抗脂方调节糖脂代谢,改善非酒精性脂肪性肝炎的作用。方法将SD大鼠随机分为正常对照组(A组)、脂肪性肝炎模型组(B组)、脂肪性肝炎给予易善复组(C组)和脂肪性肝炎给予抗脂方组(D组)。除正常对照组外,其余各组以高脂饲料喂养,同时皮下注射CCl4造模。造模同时灌胃给药8周。以常规方法检测肝功能、生化指标、肝组织病理染色和HOMA-IR;采用ELISA法检测脂联素(ADP/Acrp3)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)和蛋白酪氨酸激酶(PTK);用Western blotting法检测胰岛素信号通路相关蛋白表达。结果与脂肪性肝炎模型组比较,脂肪性肝炎给予抗脂方组明显改善了非酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝功能,逆转了其相关的病理特征及生化指数,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);同时,脂肪性肝炎给予抗脂方组大鼠FPG、FINS、HOMA-IR降低(P0.01),PTK、PPAR-α、ADP升高(P0.01),TNF-α降低(P0.01),胰岛素受体IR增加(P0.01),IRS1、IRS2升高(P0.05),PI3K表达及Akt的磷酸化表达明显升高(P0.05),p38的磷酸化水平明显降低(P0.01),从而增加了大鼠肝细胞对胰岛素的敏感性,改善了胰岛素信号转导。结论中药抗脂方具有明显改善非酒精性脂肪性肝炎的作用,其相关的机制可能与抗脂方调节肝脏的糖脂代谢、改善胰岛素信号通路有关。     

温郁金挥发油通过PI3K/Akt信号途径对阿尔茨海默模型小鼠tau蛋白磷酸化表达的影响

目的观察温郁金挥发油对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠tau蛋白磷酸化的影响,探讨其相关作用机制。方法 60只昆明种小鼠随机分为假手术组、模型组、温郁金挥发油低剂量组、温郁金挥发油高剂量组、盐酸多奈哌齐组和参枝苓组,海马组织注射Aβ25-35制作AD小鼠模型,各给药组给予相应药物灌胃,连续15 d。末次给药后,免疫组化检测小鼠tau蛋白磷酸化位点(Ser 404和Thr 231)的蛋白表达,Western blot检测tau蛋白磷酸化位点及磷脂酰肌醇-3-激酶信号/蛋白激酶B(PI3K/Akt)的蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组tau蛋白磷酸化位点蛋白表达增加(P0.05),PI3K及Akt磷酸化水平明显降低(P0.05);与模型组比较,温郁金挥发油高剂量组tau蛋白(Thr231和Ser404)磷酸化水平明显降低(P0.05),PI3K及Akt磷酸化水平明显增加(P0.05,P0.01)。结论温郁金挥发油可降低模型小鼠tau蛋白磷酸化水平,其作用机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。     

电针预处理对急性心肌缺血小鼠心功能及免疫炎性反应的影响

目的:观察电针预处理对急性心肌缺血模型小鼠心脏射血分数(EF),脾脏、心脏巨噬细胞数量及心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨电针预处理促心肌保护的可能机制。方法:30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和电针预处理组,每组10只。模型组和电针预处理组通过结扎小鼠心脏冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血模型,对照组仅在小鼠心脏冠状动脉左前降支穿线不做结扎。电针预处理组电针小鼠双侧"内关",疏密波,频率2 Hz/15 Hz,强度2 m A,每次电针20min,每天1次,共干预3d后造模。采用超声心动图M图EF值评价心功能;流式细胞计数法检测脾脏、心脏巨噬细胞数量;免疫印迹法检测小鼠心肌组织NLRP3、IL-1β蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠EF值下降(P0.001),心脏、脾脏巨噬细胞数量增加(P0.001),心肌组织NLRP3、IL-1β蛋白表达水平上升(P0.001,P0.01);与模型组比较,电针预处理组小鼠EF值上升(P0.01),心脏、脾脏巨噬细胞数量下降(P0.01),心肌组织NLRP3、IL-1β蛋白表达水平下降(P0.01,P0.05)。结论:电针预处理可减少急性心肌缺血小鼠脾脏、心脏巨噬细胞数量,下调心肌组织NLRP3、IL-1β蛋白表达,减轻心肌局部炎性反应,从而实现心肌保护效应。     

基于胰岛素受体信号通路的中药降糖活性成分研究进展

胰岛素抵抗是2型糖尿病发病的主要环节,贯穿于其发生、发展的整个过程,而胰岛素抵抗与胰岛素受体信号通路有密切关系。胰岛素刺激引起胰岛素受体(IR)自身磷酸化,然后激活胰岛素受体底物(IRS)的酪氨酸磷酸化,IRS磷酸化能诱导并活化磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),随之激活下游的3-磷酸肌醇依赖性蛋白酶1(PDK1)以及Akt/PKB,最后促进葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的表达和转位,提高胰岛素敏感组织对葡萄糖的摄取,缓解胰岛素抵抗而起到降糖作用。目前,临床上用于治疗2型糖尿病的口服降糖药对人体有着不同程度的副作用,中药不仅来源广泛、种类丰富,而且具有多成分、多环节、多靶点综合作用,在复杂的糖尿病治疗方面有着独特的优势。近年来,从中药中发现具有缓解胰岛素抵抗的活性成分越来越受到国内外研究者的关注。该文概述了胰岛素受体信号通路,总结与之相关的具有缓解胰岛素抵抗作用的中药降糖活性成分,为中药在糖尿病治疗方面的药物开发提供参考。