检测CK19 mRNA和MUC1 mRNA诊断非小细胞肺癌淋巴结微转移

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结微转移的基因诊断方法，并分析CK19mRNA、MUC1mRNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法应用巢式逆转录聚合酶链反应(nestedRT-PCR)，对31例NSCLC的119枚淋巴结中的粘蛋白1(MUC1)mRNA、角蛋白19(CK19)mRNA表达情况进行检测；对照组为10例肺良性病变患者的35枚淋巴结。结果 31例NSCLC患者的119枚淋巴结中，66枚(55.5％)淋巴结存在CK19mRNA阳性表达，65枚(54.5％)存在MUC1mRNA阳性表达；肺良性病变患者35枚淋巴结中CK19mRNA和MUC1mRNA表达均为阴性，与肺癌组比较均有显著性差异。结论 MUC1、CK19基因均可作为RT-PcR法检测NSCLC患者淋巴结微转移的分子标志物，两者联合检测可能有助于早期诊断肺癌转移。     

非小细胞肺癌患者骨髓CK19和LUNX mRNA的实时荧光定量检测和意义

目的：检测非小细胞肺癌患者CK19mRNA和LUNXmRNA的表达情况，探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性．方法：选择初治的非小细胞肺癌（NSCLC）患者62例，以肺部良性疾病10例作为对照组，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）和普通RT—PCR技术，检测肺癌、良性病变肺组织和骨髓的CK19mRNA和LUNXmRNA的表达。结果：肺癌和良性病变肺组织RT—PCR检测结果显示CK19mRNA和LUNXmRNA表达阳性率为100％：62例NSCLC患者骨髓标本FQ—RT—PCR检测结果显示，NSCLC患者中骨髓CK19mRNA表达阳性率45．2％（28／62），明显高于肺良性病变组10％（1／10）（P=0．037），NSCLC组骨髓LUNXmRNA表达阳性率38．7％（24／62）明显高于肺良性病变组0％（0／10）（P=0．017）；骨髓CK19mRNA表达阳性率随病理分期升高，接近统计学意义（P=0．06），而与病理类型、肿瘤分化程度无关；骨髓LUNXmRNA表达阳性率随分期升高且有统计学意义（P=0．02），而与病理类型、肿瘤分化程度无关：骨髓CK19mRNA和LUNXmRNA表达明显相关（P〈0．001）结论：CK19mRNA和LUNXmRNA可作为检测非小细胞肺癌患者微转移特异、敏感的分子标志物，可能有助于早期诊断肺癌转移，从而指导临床分期和治疗、     

检测LUNX mRNA表达诊断非小细胞肺癌微转移的可行性及其临床意义

背景与目的 微转移的检测对非小细胞肺癌的个体化治疗和指示预后具有重要意义。LUNX为近年新发现的人类肺组织特异性基因。本研究的目的是检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者LUNX mRNA的表达情况，探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性。方法 选择初治的NSCLC患者62例，以肺部良性疾病10例与健康人10例作为对照组，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT—PCR）和普通RT—PCR技术，检测肺癌、良性病变肺组织、骨髓和外周血LUNX mRNA的表达。结果肺癌和良性病变肺组织中LUNX mRNA阳性表达率均为100％。肺良性病变组骨髓及外周血标本和健康对照组外周血标本中LUNX mRNA表达皆为阴性。62例NSCLC患者骨髓LUNX mRNA阳性表达率为38．7％（24／62），外周血LUNX mRNA阳性表达率为29．0％（18／62），至少一项阳性表达者占45．2％（28／62）；骨髓LUNX mRNA阳性表达率随分期升高且有统计学意义（P=0．02），与病理类型、肿瘤分化程度无明显关系；外周血LUNX mRNA表达与病理分期、病理类型、肿瘤分化程度均无明显关系。NSCLC患者骨髓和外周血LUNX mRNA表达有相关性（P〈0．001）。结论 LUNX mRNA可作为检测NSCLC患者微转移的特异、敏感的分子标志物，可能有助于早期诊断肺癌转移，从而指导临床分期和治疗。     

RT-PCR法检测MUC1 mRNA诊断肺癌纵隔淋巴结隐匿转移

目的：探讨对常规病理检查漏诊的肺癌纵隔淋巴结转移病灶的诊断方法。方法：应用逆转录聚合酶链反应法（RT－PCR），检测pN0.1期非小细胞肺癌患者（NSCLC）纵隔淋巴结中MUC1基因mRNA的表达。结果：5枚肺良性疾病的局部淋巴结无MUC1基因mRNA表达，5枚经病理检查证实有淋巴结转移癌的NSCLC纵隔淋巴结中均检测中MUC1mRNA表达，实验组19例患者的78例枚纵隔淋巴结中有6枚检测到MUC1mRNA表达，从而诊断为纵隔淋巴结隐匿转移。结论：应用RT－PCR法检测纵隔淋巴结中MUC1基因mRNA的表达可以提高临床对肺癌纵隔淋巴结转移诊断的准确性。     

肺特异性X蛋白角蛋白19及癌胚抗原基因在非小细胞肺癌淋巴结微转移中的比较

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中肺特异性X蛋白(LUNX)mRNA、角蛋白19(CK19)mRNA和癌胚抗原(CEA)mRNA的表达及与NSCLC淋巴结转移和分期的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测56例NSCLC患者的肺癌组织和103枚区域性淋巴结的LUNX mRNA、CK19 mRNA和CEA mRNA的表达情况.对所有淋巴结做常规病理切片并行HE染色,观察转移情况.结果 (1)LUNX mRNA、CK19 mRNA和CEA mRNA在肺癌患者淋巴结中的表达明显高于肺良性病变者(P＜0.05).(2)与常规病理学方法检查淋巴结相比,RT-PCR技术的敏感性显著增高(P＜0.05).(3)LUNX mRNA、CK19 mRNA在淋巴结中的阳性表达率与肺癌病理类型之间无明显相关性(P＞0.05),但CEA mRNA在肺腺癌组织中的表达明显增高(P＜0.05).(4)区域淋巴结中,LUNX mRNA表达的阳性率随TNM分期的升高而增加(P＜0.05).结论 LUNX mRNA与CK19mRNA均可作为RT-PCR检测肺癌患者区域性淋巴结微转移的分子标志物;在特异性和敏感性上,LUNX mRNA优于CK19 mRNA.采用RT-PCR方法,有利于早期诊断肺癌转移.     

肺特异性X蛋白与细胞角蛋白19在非小细胞肺癌中的表达及意义

背景与目的: 常规细胞学诊断肺癌患者淋巴结中的癌细胞具有重要的应用价值,然而对淋巴结和癌旁组织内微转移的诊断有限.本研究探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中肺特异性X蛋白(LUNX)mRNA和细胞角蛋白19(CK19)mRNA的表达及其在NSCLC发生、转移和预后中的意义.方法:采用实时定量反转录(real-timeRT-PCR)方法检测20例经病理诊断为非小细胞肺癌(NSCLC)组织及42枚区域性淋巴结中LUNX mRNA和CK19 mRNA的表达情况并进行定量分析.以9例肺良性病变患者标本及6枚淋巴结作为对照组.对所有淋巴结进行常规病理切片并行HE染色,观察转移情况.结果: ①癌组织中LUNX mRNA水平显著高于对照组,但与患者淋巴结转移、肿瘤大小及TNM分期无关.②癌旁组织中LUNX mRNA水平明显高于对照组,与淋巴结转移、肿瘤大小及TNM分期有关.③淋巴结组织中CK19 mRNA水平接近对照组,与淋巴结转移及TNM分期有关,但与患者肿瘤大小无关.④淋巴结组织中LUNX mRNA水平接近对照组,但与患者淋巴结转移、肿瘤大小及TNM分期无关.⑤LUNX mRNA和CK19 mRNA均与患者年龄、性别、组织学分型无关.⑥real-time RT-PCR法和常规病理方法检测肺癌淋巴结转移的差异有显著性. 结论: LUNX mRNA与CK19 mRNA均可作为real-time RT-PCR检测NSCLC患者癌旁组织、区域性淋巴结微转移的分子标志物,但前者在特异性和敏感性上优于后者.本方法的建立可能有利于提高肺癌淋巴转移的检出率,从而指导临床分期和治疗.     

CK19 mRNA,MUC1 mRNA,LUNX mRNA在非小细胞肺癌微转移中的表达及临床意义

目的：检测非小细胞肺癌（NSCLC）和非肿瘤患者骨髓和外周血中肿瘤特异性标志物细胞角蛋白19（CK19）、黏蛋白1（MUC1）和肺特异性蛋白X（LUMX）mRNA表达情况,探讨微转移与肿瘤的病理类型、分期的关系。方法：选取肺癌患者30例,健康对照组15例,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测CK19、MUC1和LUNX三项标志物。结果：患者骨髓和外周血中CK19 mRNA阳性率分别为36.7%和30%,其表达状况与患者的肿瘤病理类型、吸烟史无明显关系,而与肿瘤的病理分期关系密切;MUC1 mRNA阳性率分别为6.7%、6.7%,其表达与肿瘤的分期、病理类型、患者的吸烟史均无显著关系,与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定;LUNX mRNA阳性率分别为16.7%和13.3%,可以作为指示NSCLC微转移的敏感特异的指标。结论：三种检测标志物中CK19 mRNA对微转移的诊断敏感性较高,但存在假阳性的可能;LUNX mRNA作为一个新的检测指标对微转移的诊断有一定的作用,但特异性和敏感性不高;MUC1 mRNA与骨髓及外周血中微转移的关系尚待确定。     

肺癌患者三种微转移标志物临床意义的比较研究

目的评价肺癌患者外周血LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA诊断微转移的特异性、敏感性,探索肺癌患者微转移的早期诊断.方法以肺部良性疾病30例、健康人10例的外周血为对照,以LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA的表达为指标,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例肺癌患者外周血、手术切除区域44个淋巴结的微转移,并根据淋巴结病理切片、临床分期、随访过程中复发转移率评价微转移的临床意义.结果①LUNX mRNA、CK19 mRNA、CEA mRNA在肺癌组织的表达率均为100%(35/35).②48例肺癌患者外周血中LUNX mRNA阳性30例(62.5%),CK19 mRNA阳性24例(50.0%),CEA mRNA阳性32例(66.7%);44枚肺癌患者手术切除的区域淋巴结,LUNX mRNA阳性16枚(36.4%),CK19 mRNA阳性12枚(27.3%),CEA mRNA阳性18枚(40.9%).③30例肺部良性疾病患者外周血中,CK19 mRNA表达阳性2例(6.7%),LUNX mRNA或CEA mRNA表达均阴性;10例健康人外周血和11枚取自肺良性疾病患者的淋巴结,3个指标检测结果均为阴性.④44枚肺癌区域淋巴结中,普通病理组织学检出6枚(13.6%)有癌转移,阳性率明显低于RT-PCR检测结果(P<0.05).⑤3种微转移指标的阳性率均随TNM分期的增加而升高(P=0.01).⑥随访发现外周血微转移阳性患者的复发率高于阴性患者.结论 LUNX mRNA、CK19 mRNA 、CEA mRNA有可能成为监测肺癌微转移的分子标志.     

宫颈癌患者淋巴结CK19 mRNA的检测及其临床意义

背景与目的：采用RT—PCR技术检测CK19（cytokeratin 19）mRNA的转录，可在部分恶性肿瘤患者中检测到常规病理学方法不能检测到的隐性微转移。本研究旨在检测宫颈癌患者盆腔淋巴结组织特异性标志物（CK19mRNA）的表达，并探讨其临床意义。方法：采用RT—PCR技术检测Ⅰ～Ⅱ期宫颈癌患者盆腔淋巴结CK19 mRNA的转录。生存曲线用Kaplan—Meier转录。生存率比较采用Log—rank检验。结果：32例宫颈癌患者共检测淋巴结标本206枚，经常规病理组织学方法检测到24枚淋巴结有癌转移，阳性率为12％（24／206）；经RT—PCR法检测到44枚淋巴结表达CK19 mRNA，检出率为21％（44／206）。RT—PCR法与常规病理组织学方法比较，差异有显著性（P〈0．01）。常规HE染色阴性的182枚淋巴结中，29枚检测到CK19mRNA的特异性条带，微转移的检出率为15．9％（29／182）。低分化患者的淋巴结CK19检出率为87．5％（7／8）显著高于中～高分化患者的检出率33．3％（8／24）（P〈0．05）。而淋巴结CK19的检出率与年龄、临床分期、组织学类型、宫颈肿瘤大小、肌层浸润深度、宫旁浸润、脉管癌栓均无明显关系（P〉0．05）。淋巴结CK19 mRNA阳性患者的4年无瘤生存率为58％；而淋巴结CK19 mRNA阴性患者的4年无瘤生存率为76．5％，差异无显著性（P〉0．05）。结论：与传统的病理组织学比较，采用RT—PCR技术检测CK19 mRNA转录能显著提高淋巴结微转移的检出率，预后判断有待增大病例数进一步研究。     

非小细胞肺癌患者淋巴结、外周血及骨髓微转移分子诊断在肺癌外科治疗中的作用

目的 探讨检测肺癌患者区域淋巴结、外周血和骨髓中微转移在肺癌外科治疗中的临床意义,以及区域淋巴结、外周血和骨髓肺癌微转移三者之间的相关性。方法 应用巢式RT－PCR技术,对29例肺癌患者和11例肺良性病变患者的淋巴结、外周血和骨髓中CK19基因mRNA表达进行联合检测。结果 本实验建立的巢式RT－PCR技术的敏感性可达到10^-6。术前10例患者检测到外周血微转移,6例患者检测到骨髓肺癌微转移,101枚纵隔淋巴结中55枚检测到肺癌微转移。肺癌患者淋巴结、外周血和骨髓中微转移阳性检出率分别为54．5％、34．5％和20．7％,三者之间存在显著正相关（P＜0．05）,外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P－TNM分期均存在密切关系（P＜0．05或P＜0．01）。结论 RT－PCR法是一种特异性,敏感性均较高的肿瘤微转移检测方法;检测CK19 mRNA表达应用于肺癌微转移的分子诊断有助于选择外科手术适应证,并具有广阔的临床应用前景。     

Isolation of a novel human lung-specific gene, LUNX, a potential molecular marker for detection of micrometastasis in non-small-cell lung cancer

We have isolated a novel human lung-specific gene, LUNX (lung-specific X protein), by differential-display mRNA analysis. The full-length cDNA contained 1,015 nucleotides including an open reading frame of 768 nucleotides encoding 256 amino acids. We localized the gene to chromosomal region 20p11.1-q12 by radiation hybrid mapping. Using an RT-PCR assay specific for LUNX mRNA, 35 non-small-cell lung-cancer (NSCLC) tumors and 0 of 16 normal lymph nodes were positive. Furthermore, LUNX mRNA expression was enhanced in 26 (84%) of 31 NSCLC tumors vs. corresponding cancer-free lung tissues by semi-quantitative analyses with multiplex RT-PCR. We assessed the possibility of LUNX mRNA as a molecular marker for detection of micrometastasis in dissected lymph nodes obtained from 20 patients with NSCLC tumors. LUNX mRNA was detected in 16 (80%) of 20 histologically positive lymph nodes and 21 (25%) of 84 histologically negative lymph nodes. Comparative analyses of the conventional histological examination and the RT-PCR detection assay for LUNX mRNA showed that the detection rate of metastases in lymph nodes by the RT-PCR assay was higher in 12 and consistent in 6 of the total 20 NSCLC patients. We demonstrate that the LUNX RT-PCR assay is a potential diagnostic method for detection of micrometastases in lymph nodes of NSCLC patients.     

纳米免疫磁珠富集和检测非小细胞肺癌患者循环肿瘤细胞的临床意义

目的探讨利用自主研发的肺癌细胞富集检测试剂盒检测非小细胞肺癌(NSCLc)患者循环肿瘤细胞(CTCs)的可行性及临床价值。方法采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测4组标本(A组:Ⅰ期NSCLC组,18例;B组:Ⅱ～Ⅳ期NSCLC组,33例;C组:肺部良性病变组,20例;D组:健康志愿者组,20例)外周血中的肿瘤细胞;同时,采用单纯免疫细胞化学(ICC)法及巢式荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞角蛋白19(CK19 mRNA)、肺特异性X蛋白(LUNX mRNA)的表达作对照。结果采用肺癌细胞富集检测试剂盒检测,A、B、C、D组患者的CK阳性细胞检出率分别为33.3%、60.6%、0%和0%。采用巢式RT-PCR方法检测,A、B、C、D组患者CK19 mRNA表达的阳性率分别为38.9%、63.6%、20.0%和0%,A、B、C、D组患者LUNX mRNA表达的阳性率分别为44.4%、69.7%、10.0%和0%。采用单纯ICC法检测,4组患者的CTCs检出率均为0%。肺癌细胞富集检测试剂盒与单纯ICC法检测比较,差异有统计学意义(P<0.05);肺癌细胞富集检测试剂盒与巢式RT-PCR方法检测比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组与B、C、D组患者CK阳性细胞的检出率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);阳性率与病理类型、细胞分化程度和临床分期有密切关系(P<0.05)。结论开发的肺癌细胞富集检测试剂盒是检测早期NSCLC患者CTCs的敏感方法,有助于发现隐形微转移、重新确定临床分期及指导患者术后的个体化治疗。     

非小细胞肺癌患者外周血CD44V6 mRNA表达与微转移的相关性研究

目的 探讨CD44V6 mRNA表达与非小细胞肺癌(NSCLC)外周血微转移的关系及临床意义,及其与CK19 mRNA在外周血中联合检测的临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测56例NSCLC癌组织中CD44V6 mRNA的表达情况,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测外周血中CD44V6 mRNA与CK19 mRNA的表达情况.采集20例肺部良性病变患者正常肺组织和外周血作对照.结果 CD44V6 mRNA在NSCLC癌组织中表达明显高于良性病变正常肺组织(P<0.001),其阳性表达率在各病理分期间、有无淋巴结转移组间的差异具有统计学意义(P<0.05),而在各病理类型间差异无统计学意义(P>0.05).NSCLC患者外周血中CD44V6 mRNA阳性表达率高于对照组(P<0.05),其阳性表达率在各病理分期间、有无淋巴结转移间的差异具有统计学意义(P<0.05).CD44V6 mRNA在NSCLC组织中表达与外周血中表达呈正相关,NSCLC外周血中CD44V6 mRNA与CK19 mRNA表达呈正相关;CD44V6 mRNA与CK19 mRNA联合检测灵敏度为75.0%,优于单基因检测(P<0.05).结论 NSCLC外周血中CD44V6 mRNA的高表达与其侵袭转移有关,CD44V6 mRNA可作为检测NSCLC外周血微转移的分子肿瘤标志物,并有望成为判定NSCLC预后的分子标志物;CD44V6 mRNA与CK19 mRNA联合检测可提高NSCLC血行微转移诊断的敏感度.     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

非小细胞肺癌LUNX mRNA的表达及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血中肺特异性X蛋白（LUNX）mRNA的表达及其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测56例NSCLC患者（实验组）及34例肺良性病变患者（对照组）外周血中LUNXmRNA的表达情况,分析其与临床病理组织学特征的关系。结果①实验组NSCLC患者外周血中LUNXmRNA阳性表达率为58．93％,而对照组无表达（P〈0．05）。②NSCLC患者外周血LUNXmRNA阳性表达率与肿瘤淋巴结转移、分化程度和临床分期有关（P〈0．05）,而与患者年龄、性别、吸烟以及肿瘤部位、病理类型等均无关（P〉0．05）。结论外周血LUNXmRNA的检测可作为评价NSCLC发生、发展潜在指标,对判断病程和指导治疗具有重要的临床意义。