交链孢酚诱发人胚食管上皮鳞癌的研究

互隔交链孢霉是食管癌高发区林县粮食中的优势污染菌,我们曾证明该菌产生的毒素之一交链孢酚(Alternariol,AOH)能引起大鼠肝细胞的DNA单链断裂,激活人胚食管上皮的H-ras和myc癌基因,与人食管上皮DNA的各种碱基呈共价结合。为研究AOH能否引起人食管上皮癌,将水囊引产的胎儿食管在体外培养一周后,用AOH处理,再培养2周,     

简讯

最近,我们和中国医学科学院肿瘤研究所陆士新教授协作,用林县分离的优势污染霉菌互隔交链孢霉代谢物交链孢酚单甲醚(AME)和交链孢酚(AOH)和人胎儿食管上皮作短期培养后,观察了二者对人食管上皮癌基因的作用。两轮转染NIH/3T 3细胞已获成功,     

交链孢酚和交链孢酚单甲醚诱发人淋巴细胞DNA损伤的研究

用从食管癌高发区林县严重污染粮食的链格孢(Alternaria alternata)培养物中分离纯化的交链孢酚(AOH)和交链孢酚单甲醚(AME)诱发正常人外周血淋巴细胞程序外DNA合成(UDS)。结果表明:AOH及AME均可不同程度地诱发UDS,并发现AOH比AME作用更强。结果提示,AOH及AME可引起人外周血淋巴细胞DNA损伤,其提示与食管癌发生可能有关。     

交链孢酚单甲醚对鼠肝脂质过氧化及谷胱甘肽过氧化物酶的影响

用食管癌高发区林县的粮食中分离出的互隔交链孢霉的代谢物之一——交链孢酚单甲醚(AME)注入小鼠体内,观察对鼠肝中脂质过氧化及谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响。试验结果显示:AME可以导致丙二醇含量增加(P<0.01),谷胱甘肽过氧化物酶活性降低(P<0.01)。丙二醛含量的增高与AME剂量呈显著正相关(r=0.957,P<0.05),酶活性与丙二醛水平呈明显负相关(r=-0.973,P<0.05)。结果表明:AME可以引发脂质过氧化反应,谷胱甘肽过氧化物酶活性下降,本实验结果为该霉菌极可能是引起食管癌病因之一学说提供的积极佐证。     

交链孢酚和交链孢酚单甲醚对大鼠不同器官细胞DNA损伤的器官亲和性研究

用污染食管癌高发现场粮食的优势菌互隔交链孢霉(Alternaria alternata)的主要毒素交链孢酚(AOH)和交链孢酚单甲醚(AME),诱发大鼠不同器官细胞的程序外DNA合成(UDS)。结果表明,AOH及AME在最高有效浓度时,诱发肝细胞掺入指数分别为0.45及0.55;诱发食管上皮细胞掺入指数分别为2.32和1.75;诱发肺细胞掺入指数分别为1.7和1.05;该结果提示,AOH及AME对食管上皮细胞具有显著的器官亲和性,大鼠食管可能为AOH及AME的重要靶器官之一。     

饮用水与肿瘤发生关系的研究 Ⅱ、食管癌高发区居民饮用水诱发大鼠食管和前胃肿瘤的实验

实验用Wistar大鼠147只,分为7组:1.林县自来水;2.浓缩5倍林县自来水;3.0.02%肌氨酸乙酯盐酸盐林县自来水溶液;4.林县井头大队池水;5.浓缩5倍池水;6.0.02%肌氨酸乙酯盐酸盐池水溶液;7.井头大队井水。分别以上述饮水或溶液加等量玉米面混合作为动物饲料进行诱癌实验。结果,除第1组前胃上皮未发现病变外,其余各组前胃上皮均呈现不同程度的瘤前病变和癌病前变。林县自来水和池水分别加入肌氨酸乙酯盐酸盐并诱发了大鼠食管上皮乳头状增生或乳头状瘤(3组和6组)。作者认为以上几种饮用水可能含有致瘤成份,与人食管癌的发生可能有关。     

互隔交链孢霉毒素诱发人胎食管上皮组织c-Ha-ras点突变的研究

体外培养的人胎儿食管上皮组织经互隔交链孢霉毒素AME或AOH短时间(4h)处理后,提取该组织高分子量DNA;同时提取未经处理的人胎儿食管上皮组织DNA(空白对照)以及食管癌组织和癌旁组织DNA。提取的高分子量DNA作为模板进行PCR反应,扩增含c-Ha-ras癌基因第12位密码子的104bp片段。该片段中第12位密码子处存在限制性内切酶     

林县互隔交链孢霉素x_4结构鉴定

从林县粮食中分离的优势菌株互隔交链孢霉培养物中提取出七种代谢物,对其中成份之一x_4,经质谱、红外光谱、核磁共振光谱测定,同时与标准品及人工合成品作比较,证明x_4成份是交链孢酚(Alternariol AOH)。     

互隔交链孢霉诱发大鼠前胃和食管乳头状瘤的实验研究

我们从食管癌高发区林县粮食中分离到互隔交链孢霉[Alternaria alternata(Fr) Keissler],以此霉菌发霉食物,用Wistar大鼠进行诱癌实验。实验组动物喂饲该菌发霉的食物,时间62～363天,诱发了大鼠前胃上皮乳头状增生(15/39),前胃乳头状瘤(10/39)和前胃乳头状癌(1/39)。39例中还发现食管上皮乳头状增生和乳头状瘤各2例。对照组动物食管和前胃未发现上述病变。结果表明:该互隔交链孢霉发霉的食物对大鼠前胃和食管上皮有致瘤作用,对前胃可能有较弱的致癌作用。互隔交链孢霉霉食的70％乙醇提取物灌喂小鼠,LD_(50)为115.95克霉食/公斤体重。70％乙醇提取后的乙醚提取物,LD_(50)为273.66克/公斤体重。毒性物质具有耐热性。     

梗阻性黄疸引起的大鼠肾脏病理学、氧自由基的改变及山莨菪碱的干预效应

目的：探讨梗阻性黄疸时氧自由基与肾脏病理损害的关系。方法：对３组大鼠肾脏组织中丙二醛及超氧化物歧化酶含量进行测定，并对肾组织进行病理学观察。结果：梗阻性黄疸组肾组织内脂质过氧化反应明显增强，肾近曲小管上皮广泛变性、坏死；山莨菪碱治疗的梗阻性黄疸组大鼠肾组织内脂质过氧化反应明显减轻，仅见肾脏部分近曲小管上皮轻度变性。结论：氧自由基及其引发的脂质过氧化反应参与了梗阻性黄疸时肾脏的病理损害过程。     

Etiological role of Alternaria alternata in human esophageal cancer.

In this paper, the mutagenicity and carcinogenicity of alternariol monomethyl ether (AME), alternariol (AOH), and their relevance to the etiology of human esophageal cancer were studied. These mycotoxins were produced by Alternaria alternata which was the main contaminating fungi isolated from the grain in Linxian County, an area with high incidence of esophageal cancer. This study demonstrated that: 1. AME and AOH might cause cell mutagenicity and transformation; 2. AME and AOH could combine with the DNA isolated from human fetal esophageal epithelium, activate the oncogens, c-H-ras and c-mys in it, and promote proliferation of human fetal esophageal epithelium in vitro; 3. squamous cell carcinoma of the fetal esophagus could be induced by AOH. According to the results of the studies of AME and AOH mentioned above, we consider that Alternaria alternata plays an important role in the etiology of human esophageal cancer.

     

食管癌前病变的肿瘤抑制基因蛋白P_(53)的免疫组化研究

研究目的目前对食管癌前病变的形态学研究很广泛,但对其分子生物学基础尚不清楚。P_(53)作为肿瘤抑制基因已被接受和重视。本文旨在进一步探讨食管癌前病变肿瘤抑制基因P_(53)的表达状况对食管癌发病学的意义。处理方法将食管癌手术切除标本经酒精固定,常规石腊包埋、切片。H-E染色作组织病理学诊断;另一连续切片作免疫组化染色。第一抗体分别采用兔多克隆血清免疫球蛋白CM-1和小鼠举克隆抗体PAb1801。结果研究的10例食管癌切除标本中,免疫组化结果显示除正常食管上皮外,基底细胞过度增生、间变和原位癌组织均表现不同程度的P_(53)免疫阳性反应。P免疫阳性细胞的数量及其在上皮内的分布与细胞的增生状态密切相关。结论在食管癌变的早期即有明显的肿瘤抑制基因蛋白P_(53)的表达。提示可能在食管病变早期阶段已发生P_(53)基因突变。     

酶联免疫吸附试验检测食管癌高、低发区粮食中交链孢酚单甲醚的研究

用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）方法，分别对食管癌高发区林县和低发区商丘各６４份粮食（玉米３２份、小麦３２份）中交链孢酚单甲醚（ＡＭＥ）进行检测。结果：林县６４份粮食中检出ＡＭＥ２５份，阳性率为４０．３％；商丘６４份粮食中有１５份阳性，阳性率为２３．４％。两者比较有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。不论是小麦还是玉米，ＡＭＥ含量林县均高于商丘，这与粮食中互隔交链孢霉污染情况相符。结果提示：ＡＭＥ可能是人食管癌的病因之一。     

食管癌患者化疗对机体抗氧化作用及免疫功能的影响

目的：研究食管癌患者化疗对脂质过氧化反应、抗氧化作用及免疫功能的影响。方法：选取食管癌化疗患者79例作为研究资料,对照研究所有患者化疗前后的免疫功能、脂质过氧化反应以及抗氧化作用各指标,并分析其相关性。结果：患者化疗后的丙二醛（MDA）、可溶性白介素-2受体（aIL-2R）水平显著高于治疗前（P〈0.05）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和白介素-6（IL-6）水平显著低于治疗前（P〈0.05）,超氧化物歧化酶（T-SOD）化疗前后无显著差异（P〉0.05）。化疗前aIL-2R水平与T-SOD和MDA无显著相关性,与GSH-Px存在负相关性;化疗前IL-6水平与MDA存在负相关性,与T-SOD存在正相关性,与GSH-Px无显著相关性。而aIL-2R的化疗前后差值与GSH-Px差值存在负相关性,与MDA差值存在正相关性,与T-SOD差值无显著差异相关性;IL-6的化疗前后差值与T-SOD差值存在正相关性,与MDA差值和GHS-Px差值无显著相关性。结论：食管癌患者化疗对脂质过氧化反应和抗氧化作用影响显著,从而对患者的免疫功能造成显著影响。     

交链孢酚单甲醚对人胚食管上皮的作用

用人胚食管上皮体外培养,经交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl ether,AME)处理后,食管上皮底层细胞比对照组的层次明显增多,细胞排列紧密紊乱,细胞核浆比增加,核不规则,大小不等.浓染,可见核分裂相,且有乳头状向内增生。该变化与甲基硝基亚硝基胍(MNNG)和甲基苯基亚硝胺(MPNA)所诱发的人胚食管上皮癌前病变相类似。结果提示,AME与人的食管癌发生很可能有关。     

Studies on pickled vegetables and cause of esophageal cancer in Linxian. I. Experiments on carcinogenicity of pickled vegetables

Pickled vegetables are a traditional daily food served in several parts of China where esophageal cancer is prevalent, and the mortality rate due to this cancer appears to be correlated with the time span of consumption and the amount consumed. For the present study epithelial hyperplasia and papillomas of the esophagus and forestomach were induced in mice and rats following administration of condensed juice from or extract of pickled vegetables from Linxian County, Henan Province. Only one case of forestomach carcinoma was observed in a rat subsequent to prolonged treatment with pickled extract, indicating that carcinogens in pickled vegetables alone are probably incapable of inducing carcinogenesis.     

林县酸菜在食管癌病因中作用的研究：Ⅰ,酸菜的诱癌实验

在小鼠和大鼠体内用酸菜浓缩液和提取液作诱癌实验,结果发现动物食管与前胃上皮出现增生和乳头状瘤,其中仅1只大鼠发生前胃鳞癌,表明酸菜的致癌性很弱。     

食管癌标本中人乳头状瘤病毒(HPV)DNA序列的检测

鉴于HPV与人类一些部位的肿瘤有关,我们在国内外首次开展了HPV与人食管癌关系的研究,初步的研究结果显示:27%(25/90)的食管癌标本中含HPV—DNA序列;另有一株食管鳞状上皮癌细胞(Ecal09)中,也含HPV—DNA序列。此外,四例胎儿的食管HPV—DNA全部阳性,其意义目前尚难评价,有待于进一步研究。HPV—DNA序列在食管癌中的检出,给食管癌的病因探讨带来了新的课题。