聚合酶链反应及其在病毒性疾病中的应用

聚合酶链反应是近年来发展起来的体外基因扩增的应用。在耐热聚合酶，底物及引物的参与下能在短时间的内使 异的DNA序列大量扩增。聚合酶链反应具有特异性强、敏感性高的优点，现已被广泛应用于基因遗传性疾病等的研究，本文简要介绍其原理及在病情性疾病诊断领域中的应用。     

多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应快速检出含漱液中的乙型流感病毒

目的 建立特异敏感的快速检测含漱液中的流感病毒的分子生物学方法。方法 用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增甲1、甲3和乙型流感病毒HA基因的HA1片段,得到各病毒与特异性大小的扩增产物的对应关系。用同样的方法扩增含漱液中流感病毒的HA基因的HA1片段。根据这对应关系检测含漱液中的流感病毒。结果 以流感病毒的HA基因为模板设计的三对引物,用多重逆转聚合酶链反应能特异性地扩增出942bp、1117bp和751bp的核酸片段,它们分别和甲1、甲3和乙型流感病毒有稳定对应关系。用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增含漱液中流感病毒HA基因的HA1片段,根据扩增产物的大小检出含漱液中的乙型流感疾病。结论 多重逆转聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应能特异敏感地检出含漱液中的乙型流感病毒。     

DNA扩增制备探针并用于临床白色念珠菌感染鉴定

目的应用聚合酶链反应技术扩增特异DNA片段,并制备成为可应用于临床鉴定白色念珠菌的基因探针. 方法采用聚合酶链反应技术特异地扩增白色念珠菌标准株DNA EO3 125 bp基因片段,然后用半抗原地高辛配基标记,在完成基因探针显色敏感度检测之后,应用该基因探针分别对血液病病房分离的白色念珠菌、热带念珠菌及大肠埃希菌等多种细菌进行斑点杂交测试. 结果基因扩增制备Dig-125 bp DNA探针显色敏感度为0.01 pg,具有白色念珠菌特异性,与其他念珠菌和细菌不发生杂交. 结论基因扩增制备EO3 125 bp DNA探针方法简便可靠,具有很强特异性,可应用于临床鉴定白色念珠菌感染.     

用两种聚合酶链反应方法检测流感病毒

目的：建立特异敏感的快速检测流感病毒的分子生物学方法。方法：用多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应扩增甲1、甲3和乙型流感病毒的HA基因的HA1片段。根据扩增产物的大小检测流感病毒。结果：以流感病毒的H基因为模板设计的3对引物能特异性地扩增出942bp,1117bp和751bp的核酸片段，它们分别和甲1，甲3和乙型流感病毒有稳定对应的关系。根据扩增产物的大小可以检测流感病毒。用这个方法能检测病毒浓度为0．1TCID50的样品。结论：多重逆转录聚合酶链反应和半巢式多重聚合酶链反应是检测流感病毒的特异敏感的方法。     

多重逆转录聚合酶链反应检测流感病毒

目的：建立特异敏感的热速检测流感病毒的分子生物学方法。方法：用多重逆转录聚合酶链反应连接多重聚合酶链反应扩增甲1、甲3和乙型流感病毒的HA基因的HA1片段。根据扩增产物的大小检测流感病毒。结果：以流感病毒的HA基因为模板设计的三对引物能特异性地扩增出942bp、1117bp和751bp的核酸片段，它们分别和甲1、甲3和乙型流感病毒有稳定对应关系。根据扩增产物的大小可以检测流感病毒。用这个方法能检测病毒浓度为0．1TCID50的样品。还可以直接从疑似流感病人的含漱液中检测到乙型流感病毒。结论：多重逆转录聚合酶链反应连接多重聚合酶链反应是检测流感病毒的特异敏感的方法，此法还能直接从疑似流感病人的含漱液中检测到乙型流感病毒。     

16SrRNA基因在新生儿败血症诊断中的应用

目的:应用聚合酶链反应(PCR)检测细菌16SrRNA基因,研究其在新生儿败血症中的应用。方法:抽取临床疑为细菌感染的265例新生儿的静脉血,分别做血培养和细菌16SrRNA的基因检测。于血标本中抽提DNA后用聚合酶链反应(PCR)扩增,将扩增产物电泳后经凝胶成像系统扫描。结果:PCR检测阳性率为6.4%(17/265),明显高于血培养的阳性率〔3.4%(9/265)〕,差异有统计学意义(P0.05)。结论:与血培养相比,检测细菌16SrRNA基因对新生儿败血症诊断的特异性和敏感度更高。     

聚合酶链反应技术分析家蝇抗性基因的研究

目的：家蝇对拟除虫菊酯抗药性与细胞色素Ｐ４５０的ＣＹＰ６Ｄ１基因有关,采用分子生物学的特异性基因聚合酶链反应技术分析家蝇抗药性的发生、发展规律,探讨早期预测及防治策略。方法：提取雄性家蝇腹部ＤＮＡ作为反应模板,根据ＣＹＰ６Ｄ１基因序列设计特异性基因引物,进行３０个循环扩增,电泳分析扩增产物与生物测试结果比较。结果：Ｄ－Ｒ品系扩增阳性率１００％,敏感品系扩增阳性率为０,深圳、汕头、韶关、广州、茂名品系扩增阳性率分别为５９％、５６．３％、５４％、５５％及２５％。扩增阳性率与家蝇对拟除虫菊酯抗性倍数呈正相关（ｒ＝０．８３４４,Ｐ＜０．０５）。结论：聚合酶链反应技术应用于家蝇抗性发生、发展规律分析,早期诊断及抗药性发生机理研究有重要意义。     

PCR技术在HBV感染诊治中的应用与评价

聚合酶链反应(Polymerase ChainReaction,PCR)是一种在体外模拟自然DNA复制过程,用聚合酶催化物扩增核酸分子的新技术。由美国Cetus公司的Kary Mullis于1984年发明,Saiki等人于1985年首先在《Science》杂志上完整地描述了PCR技术。应用PCR技术进行体外基因扩增,可使极微量的单拷贝特定核苷酸片段在数小     

应用聚合酶链反应检测粪便中的轮状病毒

应用聚合酶链反应(PCR)进行体外基因扩增,可使极微量的单拷贝特定核苷酸片段在短时间内扩增至100万倍而用于临床检测。该法具有快速简便、特异性强和敏感性高的优点,因此已用于某些病毒的检测。本文以PCR检测粪便中的轮状病毒,并与聚丙烯     

应用自动改良的聚合酶链反应系统检测HBV DNA

本文作者曾报道用聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒HBV DNA。本文在上述研究的基础上,进一步筛选PCR所需的引物,探索Taq聚合酶用于引物杂交和基因扩增的温度.     

应用逆转录-聚合酶链反应方法检测孕妇外周血中胎儿ε/γ血红蛋白基因

目的：探索检测孕妇外周血中胎儿特异血红蛋白基因表达的方法。方法：提取孕妇全血mRNA,经体外逆转录后,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,应用ε/γ特异引物引导扩增胎儿特异血红蛋白基因片段,经琼脂糖凝胶电泳后,在凝胶成像系统下观察。结果：在7名妊娠妇女中,6名扩增出ε/γ基因片段,1名为阴性。结论：应用RT-PCR方法可直接从孕妇全血中扩增出胎儿特异血红蛋白基因片段,孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求。利用孕妇外周血进行的无创性产前诊断具有可行性。     

多重PCR-RFLP检测XRCC1基因两位点多态性

目的 探讨多重聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(多重PCR-RFLP)技术在单核苷酸多态性检测中的应用.方法 应用多重聚合酶链反应(Multiplex)(多重PCR)原理设计人类X射线交错互补修复基因1(XRCC1基因)194、399位点引物,通过PCR-RFLP技术判断XRCC1基因2个SNP位点多态性.结果 设计的两对引物可同时PCR扩增分别含2个多态位点的DNA片段,MspI限制性内切酶酶切可判断2位点多态性,PCR和酶切效果均较好.结论 多重PCR-RFLP技术可应用于单核苷酸多态位点的检测,并节省时间和费用,提高检测效率.     

淋球菌PCR检测技术研究进展

聚合酶链反应（PCR）检测技术是一种体外DNA扩增技术。其基本原理是酶促DNA合成反应，即在模板DNA、引物和脱氧核糖核酸存在及DNA聚合酶的作用下，使DNA链扩增。由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。随着微生物基因组学的发展，对淋球菌的基因结构越来越清楚。1985年Korch等克隆出隐蔽性质粒基因（cppB），1988年Rossau等发现淋球菌16SrRNA存在着另一个独立的基因区域，这个基因区域的核苷酸系列靶目标较多，且较稳定，能把淋球菌与其它非淋球菌区别开来。     

1992—2008年深圳HIV-1CRF01_AE重组株的流行趋势与进化规律

目的 了解HIV-1 CRF01_AE重组株在深圳地区的流行情况,并分析其流行趋势及进化规律.方法 收集深圳地区1992-2008年HIV确认阳性血液样本489份,应用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)技术,对样本膜蛋白(Env)基因进行扩增,并对其基因区核苷酸序列进行测定,判定亚型结果.对获得的CRF01_AE...     

荧光探针定量聚合酶链反应检测结核分支杆菌比较研究

关于结核病的实验室诊断,近年来报道了一些新的快速诊断方法:如荧光探针定量聚合酶链反应,连接酶链反应,基因探针扩增检测结核分支杆菌复合物等新技术方法,提高了结核分支杆菌(MTB)的检出率.     

聚合酶链反应在肺结核病诊断和肺癌鉴别诊断中临床意义探讨

聚合酶链反应在肺结核病诊断和肺癌鉴别诊断中临床意义探讨北京市结核病、胸部肿瘤研究所孙怡芬，陈辉，胡培安广泛应用于研究微生物学技术的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）的基因扩增技术已被许多作者介绍为结核病诊断中的重大进展，并对其快速、特异、灵敏和无培养依赖性等特...     

聚合酶链反应扩增弓形虫B1基因检测孕妇弓形虫感染

用聚合酶链反应技术扩增弓形虫Ｂ１基因特定序列，对１７２６例孕妇外周血作弓形虫检测。结果：扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析示片段长度为１９４ｂｐ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交鉴定其系靶序列，孕妇外周血弓形虫检出阳性率为１．０４％。提示：Ｂ１基因扩增是诊断弓形虫病的有效方法。孕妇弓形虫感染状况应引起重视。     

聚合酶链反应扩增弓形虫B_1基因检测孕妇弓形虫感染

用聚合酶链反应技术扩增弓形虫B_1基因特定序列。对1726例孕妇外周血作弓形虫检测。结果:扩增产物琼脂糖凝胶电泳分析示片段长度为194bp,经Southern blot杂交鉴定其系靶序列,孕妇外周血弓形虫检出阳性率为1.04％。提示:B_1基因扩增是诊断弓形虫病的有效方法。孕妇弓形虫感染状况应引起重视。     

鼠疫耶尔森菌的多重PCR检测方法

目的研究一种快速、特异的检测鼠疫耶尔森菌(鼠疫菌)的多重聚合酶链反应(PCR)方法。方法选用针对鼠疫菌F1抗原基因、pla基因、inv基因和一段鼠疫特异染色体序列设计的4对引物,以鼠疫菌及其他肠道致病菌DNA为模板并加入内部对照模板,在同一扩增体系中进行PCR扩增。结果鼠疫菌DNA模板可扩增出预期产物,而其他菌株只能扩增出内部对照模板的片段。结论多重PCR方法具有较高的特异性。可迅速、有效地将鼠疫菌与其他肠道致病菌相鉴别,也可应用于鼠疫监测。     

聚合酶链反应在乙肝病毒检测中的应用

聚合酶链反应(Polymerase China Reaction,PCR)是近年建立的一种体外基因扩增技术。其原理是:靶DNA变性解链后与特异性引物杂交,在DNA聚合酶作用下使引物延伸,合成新的DNA。上述步骤反复进行,DNA就大量扩增,以指数递增放大。它具有简便、快速、灵敏度高、特异性强等优点,故受到广大科学工作者普遍重视。该技术目前已广泛应用