复制缺陷型腺病毒载体介导人血管内皮细胞生长因子cDNA促进静脉分叶皮瓣的成活

背景：静脉分叶皮瓣可修复多个手指皮肤软组织缺损,但静脉皮瓣普遍存在成活率不稳定,限制了其在临床上的应用。目的：观察以复制缺陷型腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因（cDNA）局部应用对兔静脉分叶皮瓣成活的影响。方法：用新西兰大白兔制作侧腹壁双蒂轴型静脉分叶皮瓣,分别皮下注射介导血管内皮细胞生长因子165基因（Ad-VEGF）的复制缺陷型腺病毒、携带β半乳糖苷酶基因的腺病毒（Ad-Gal）和生理盐水。术后7d对3组兔进行皮瓣存活率、免疫组织化学、新生血管计数和常规组织切片的检测。结果与结论：术后7d,Ad-VEGF165组皮瓣成活率和平均血管数目显著高于Ad-Gal组和生理盐水组（P〈0.01）,皮瓣中血管内皮细胞及毛囊旁细胞中有大量VEGF蛋白阳性表达细胞,皮瓣中出现肉芽组织增生,新生血管大量形成。结果证实,以复制缺陷型腺病毒为载体介导的人VEGFcDNA能促进新生血管的形成并提高静脉分叶皮瓣的成活率。     

腺病毒介导血管内皮生长因子基因促进大鼠随意皮瓣的早期断蒂

目的:探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣,对皮瓣早期断蒂的影响。方法:实验于2004-08/2005-09在安徽医科大学第一附属医院外科动物实验中心及中心实验室完成。健康SD雄性大鼠30只,随机分成3组:目的组、绿色荧光蛋白对照组、空白对照组,每组10只。所有实验大鼠背部设计2cm×6cm随意皮瓣,蒂位于髂脊水平。皮瓣形成后,术时即刻将磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因溶液(目的组)、磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带绿色荧光蛋白溶液(荧光蛋白对照组)、磷酸盐缓冲液溶液(空白对照组)1mL注射到大鼠皮瓣内,给药后即刻以3-0丝线原位缝合,继续单笼饲养。所有实验大鼠皮瓣4d后断蒂,断蒂后7d观测皮瓣存活面积,取皮瓣远端存活区组织苏木精-伊红染色,光镜下观察组织学变化,免疫组织化学染色检测血管内皮细胞生长因子165表达情况,用CD34免疫组织化学染色计算血管密度。结果:①断蒂后7d,所有实验动物全部存活,皮瓣存活区与坏死区已经明确。②皮瓣存活率、皮瓣血管断面密度目的组和对照组之间差异有显著性犤皮瓣存活率:目的组为(98.8±1.5)%,荧光蛋白对照组为(78.3±2.5)%,空白对照组为(79.2%±2.4)%;皮瓣血管断面密度:目的组为(49.6±6.3)个/高倍视野,荧光蛋白对照组为(37.5±3.0)个/高倍视野,空白对照组为(39.5±3.0)个/高倍视野,P<0.05犦,对照组之间差异没有显著性(P>0.05)。③免疫组织化学染色各组均可见棕黄色颗粒沉积,目的组比对照组染色深。④组织学观察,目的组皮瓣真皮、肉芽及肌肉中可见大量毛细血管,而对照组较少。结论:应用重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣具有促进皮瓣早期断蒂的作用。     

腺病毒介导血管内皮生长因子基因促进大鼠随意皮瓣的早期断蒂

目的：探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣，对皮瓣早期断蒂的影响。 方法：实验于2004-08／2005-09在安徽医科大学第一附属医院外科动物实验中心及中心实验室完成。健康SD雄性大鼠30只，随机分成3组：目的组．绿色荧光蛋白对照组、空白对照组，每组10只。所有实验大鼠背部设计2cm&;#215;6cm随意皮瓣，蒂位于髂脊水平。皮瓣形成后，术时即刻将磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因溶液（目的组）、磷酸盐缓冲液稀释的重组复制缺陷型腺病毒携带绿色荧光蛋白溶液（荧光蛋白对照组）、磷酸盐缓冲液溶液（空白对照组）1mL注射到大鼠皮瓣内，给药后即刻以3-0丝线原位缝合，继续单笼饲养。所有实验大鼠皮瓣4d后断蒂，断蒂后7d观测皮瓣存活面积，取皮瓣远端存活区组织苏木精一伊红染色，光镜下观察组织学变化，免疫组织化学染色检测血管内皮细胞生长因子165表达情况，用CD34免疫组织化学染色计算血管密度。 结果：①断蒂后7d，所有实验动物全部存活，皮瓣存活区与坏死区已经明确。②皮瓣存活率、皮瓣血管断面密度目的组和对照组之间差异有显著性[皮瓣存活率：目的组为（98.8&;#177;1．5）％，荧光蛋白对照组为（78．3&;#177;2．5）%，空白对照组为（79．2％&;#177;2．4）％；皮瓣血管断面密度：目的组为（49．6&;#177;6．3）个／高倍视野，荧光蛋白对照组为（37．5&;#177;3．0）个／高倍视野，空白对照组为（39．5&;#177;3．0）个／高倍视野，P〈0．05]，对照组之间差异没有显著性（P〉0．05）。③免疫组织化学染色各组均可见棕黄色颗粒沉积，目的组比对照组染色深。④组织学观察，目的组皮瓣真皮、肉芽及肌肉中可见大量毛细血管，而对照组较少。 结论：应用重组复制缺陷型腺病毒携带血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠皮瓣具有促进皮瓣早期断蒂的作用。     

天然、重组水蛭素对随意皮瓣淤血模型血管内皮细胞生长因子的影响

背景:随意皮瓣移植后易发生皮瓣静脉淤血,甚至坏死,临床与动物实验证明水蛭素能够提高淤血皮瓣的成活率。目的:观察水蛭素对大鼠随意皮瓣淤血模型成活保护作用。方法:Wistar大鼠30只背部设计随意皮瓣10cm×3cm制成淤血模型,随机分为天然水蛭素组、重组水蛭素组和对照组,分别于皮下注射5U天然水蛭素、5U重组水蛭素和生理盐水。术后测定血管内皮细胞生长因子含量及血管内皮细胞生长因子mRNA表达量,计算皮瓣成活率。结果与结论:天然水蛭素组与重组水蛭素组皮瓣成活率比对照组高(P<0.05)。天然水蛭素组与重组水蛭素组比对照组新生毛细血管血管内皮细胞生长因子表达多(P<0.05),且天然水蛭素组最多。提示天然、重组水蛭素均能够促进随意皮瓣血管内皮细胞生长因子表达,有利于新生血管的生成,能够提高随意皮瓣的成活率,且天然水蛭素效果优于重组水蛭素。     

天然、重组水蛭素对随意皮瓣淤血模型血管内皮细胞生长因子的影响

背景：随意皮瓣移植后易发生皮瓣静脉淤血,甚至坏死,临床与动物实验证明水蛭素能够提高淤血皮瓣的成活率。目的：观察水蛭素对大鼠随意皮瓣淤血模型成活保护作用。方法：Wistar大鼠30只背部设计随意皮瓣10cm×3cm制成淤血模型,随机分为天然水蛭素组、重组水蛭素组和对照组,分别于皮下注射5U天然水蛭素、5U重组水蛭素和生理盐水。术后测定血管内皮细胞生长因子含量及血管内皮细胞生长因子mRNA表达量,计算皮瓣成活率。结果与结论：天然水蛭素组与重组水蛭素组皮瓣成活率比对照组高（P〈0.05）。天然水蛭素组与重组水蛭素组比对照组新生毛细血管血管内皮细胞生长因子表达多（P〈0.05）,且天然水蛭素组最多。提示天然、重组水蛭素均能够促进随意皮瓣血管内皮细胞生长因子表达,有利于新生血管的生成,能够提高随意皮瓣的成活率,且天然水蛭素效果优于重组水蛭素。     

血管内皮细胞生长因子165基因重组腺病毒的构建及其鉴定

目的:基因重组腺病毒具有较高的转染率,且宿主范围广.实验拟构建携带人血管内皮细胞生长因子165基因的重组腺病毒载体(Ad.VEGF165),为后续基因转染、微囊化基因工程细胞及其动物模型研究提供实验基础.方法:实验于2007-01/05在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所实验室完成(国家级重点实验室).①实验材料:pAxCAwt.VEGF165由长海医院胸心外科研究所惠赠.②实验方法:采用脂质体转染法,将pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC共转染人胚肾293细胞,扩增后获得载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷犁重组腺病毒.⑧实验评估:应用聚合酶链反应及酶切证实重组腺病毒中的目的基因.并根据50%组织培养感染剂量法计算病毒滴度.结果:①重组腺病毒Ad.VEGF165的构建:采用脂质体法可使pAxCAwt.VEGF165与DNA-TIC有效转染人胚肾293细胞,扩增出载人血管内皮细胞生长因子165基因的复制缺陷型重组腺病毒.②重组腺病毒Ad.VEGFl65的鉴定:聚合酶链反应的产物进行Nco I酶切鉴定,可得到597 bp、146 bp 2个片段,与GeneTool软件理论上计算的结果完全一致,计算病毒滴度为2.2×1015pfa/L.结论:采用pAxCAwt.VEGF165与DNA-TPC系统经脂质体转染法成功构建的复制缺陷的重组腺病毒Ad.VEGF165滴度高、毒性低、效率高、体外转染安全.     

大鼠缺血下肢血管新生过程中人血管内皮细胞生长因子165和人血管形成素的协同效应

目的:观察肌肉转染腺病毒(adenovirus,Ad-)携带的人血管内皮细胞生长因子-165(vascularendothelialgrowfactor,Ad-VEGF165)和人血管形成素-1(angiopoietin-1,Ad-Ang-1)基因对大鼠缺血下肢的生血管效应。方法:用SD雄性大鼠84只,分为7个组,每组12只,分别为正常组、假手术组、结扎组、绿色荧光蛋白(greenfluorescenceprotein,GFP)组(作为病毒对照组)、Ang1组、VEGF165组、Ang1+VEGF165组。制作大鼠下肢血管闭塞模型,肌肉内注射Ad-VEGF165或/和Ad-Ang-1,以Western法检测生长因子蛋白表达、免疫组化检测基因导入后在缺血肌肉引起的效应。结果:①肌肉经注射Ad-VEGF165和Ad-Ang1后高表达人VEGF165蛋白和人Ang1蛋白。②术后7d处理组与对照组新生毛细血管数目无明显差别。但术后14d和21dAng1和VEGF165组的毛细血管/骨骼肌纤维数目比明显高于对照组(F=24.53,P<0.01),VEGF165+Ang1两因子合用组明显高于单用组(F=12.22,P<0.01)。③VEGF165组及VEGF165+Ang1合用组出现大量包围着一厚层平滑肌肌动蛋白α(smoothmuscleactin,α-SMA)阳性平滑肌细胞的血管,其数量与肌肉数比值明显高于对照组(F=9.73,P<0.01)。④因子单用组和合用组肌肉内出现大量BrdU阳性细胞浸润,部分细胞表面呈现C-Kit阳性,新生血管内皮细胞中也有C-Kit     

人血管生成素-1和血管内皮生长因子VEGF_(165)腺病毒载体构建

目的:克隆人血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor165,VEGF165)和血管生成素-1(angiopoietin-1)的全长编码基因,构建表达该基因的复制缺陷型腺病毒载体Ad-Ang1和Ad-VEGF165。方法:通过RT-PCR方法克隆人VEGF165和Ang1全长编码基因。Ad-VEGF165和Ad-Ang1通过同源重组方法构建。将Ad-VEGF165和/或Ad-Ang1转染大鼠胚胎心脏成肌细胞(H9C2)24h后,Westernblot方法分析VEGF165和Ang1蛋白表达量;核酸电泳分析细胞基因组降解检测凋亡水平。结果:测序显示VEGF165序列与基因库序列相同;Ang1序列与基因库序列存在一个碱基的差异,但编码氨基酸无改变。VEGF165和Ang1蛋白表达分别为对照组的11.65倍和3.53倍。Ad-VEGF165和/或Ad-Ang1转染后的H9C2细胞对过氧化氢诱导的细胞凋亡具有明显的抵抗能力。结论:所构建的Ad-Ang1和Ad-VEGF165能有效转染心脏成肌细胞,表达出功能性目的蛋白,具有抗细胞凋亡作用。     

电穿孔介导基因治疗下颌骨牵引过程中血管内皮细胞生长因子的表达

背景:课题组前期实验已证明基因治疗能促进下颌骨牵引区新骨的生成。目的:探索电穿孔介导的基因治疗对兔下颌骨牵引成骨过程中血管内皮细胞生长因子表达的影响。方法:45只新西兰大白兔双侧下颌骨截骨,建立下颌骨牵引模型。牵引7d后将模型兔随机摸球法均分为pIRES-hVEGF165-hBMP2组、pIRES-hBMP2组、pIRES-hVEGF165组、空质粒载体pIRES组、生理盐水对照组,分别于牵引区注射相应质粒或生理盐水。各组动物均施加电穿孔刺激。结果与结论:血管内皮细胞生长因子主要在骨周围结缔组织成纤维细胞、血管内皮细胞、骨组织成骨细胞和骨细胞表达,也可见炎细胞如单核细胞表达。各组均在固定期第7天表达最强,14d下降,28d时表达较弱,但在各时点基因治疗组明显强于对照组。说明电穿孔介导的基因治疗能使血管内皮细胞生长因子持续表达,并使其表达时限延长,促进牵引区新生血管生成和新骨形成。     

血管内皮生长因子对大鼠皮瓣断蒂时间的影响

目的:观察血管内皮细胞生长因子对大鼠任意皮瓣断蒂时间的影响。方法:实验于2003-04/2004-04在华北煤炭医学院中心实验室完成。采用SD大鼠背部3cm×7.5cm单蒂任意皮瓣为模型,皮下局部注射内皮细胞生长因子后,通过计算机图像分析技术对不同断蒂时间皮瓣成活率的测定、微血管密度的测定、组织学检查、碱性成纤维细胞生长因子免疫组织化学染色等手段来观察内皮细胞生长因子对皮瓣断蒂时间的影响并探讨其机制。结果:局部应用内皮细胞生长因子后,皮瓣断蒂时间由7d缩短为5d;组织学检查发现内皮细胞生长因子能促进皮瓣毛细血管新生;生理盐水组微血管密度中1/3段为(26.83±1.96)个/cm2,远1/3段为(26.96±2.11)个/cm2,内皮细胞生长因子组中1/3段为(30.99±1.93)个/cm2,远1/3段为(36.11±2.32)个/cm2,表明内皮细胞生长因子能增加皮瓣中远段微血管密度。生理盐水组碱性成纤维细胞生长因子阳性细胞数中1/3段为(22.2±3.5)个,远1/3段为(18.4±4.5)个,内皮细胞生长因子组中1/3段为(30.8±3.2)个,远1/3段为(33.2±5.1)个,表明内皮细胞生长因子能增加皮瓣中远段碱性成纤维细胞生长因子的表达。结论:内皮细胞生长因子能促进大鼠任意皮瓣早期断蒂,其机制可能与内皮细胞生长因子直接促进血管再生及通过增强另一血管生成因子碱性成纤维细胞生长因子的表达间接促进血管新生有关。     

不同蒂型静脉皮瓣的成活力

背景:静脉皮瓣在临床应用方面有着动脉皮瓣所不具备的优点,但其一直存在着成活率较差的缺点,限制了其在临床上的应用.目的:构建不同模式静脉蒂的静脉皮瓣模型,以选择最佳蒂型,使皮瓣微循环得到有效灌注以及充分静脉回流,维持皮瓣内血液良好的灌流平衡,以得到有效提高静脉皮瓣成活率的可能方法和途径.设计、时间及地点:细胞形态学水平的对比实验,于2008-03/06在南华大学实验动物部完成.材料:选用健康雄性新西兰大白兔48只,按随机数字表法分为4组,即单蒂无输出型组、双蒂主干输出型组、双蒂属支输出型组及三蒂属支输出型组,每组12只.方法:在侧腹壁设计大小为8 cm×5 cm的一椭圆形皮瓣,分别制成4种不同类型的静脉皮瓣.各组皮瓣均保留腹壁浅静脉远端对皮瓣进行灌注,单蒂无输出型组所有输出静脉均切断、结扎,仅有1个静脉输入端:双蒂主干输出型组保留近心端浅静脉干输出;双蒂属支输出型组在近心端保留1支属支静脉输出;三蒂属支输出型组保留2支属支静脉输出.主要观察指标:皮瓣的成活情况,皮瓣组织学及细胞超微结构观察结果.结果:单蒂无输出型组、双蒂主干输出型组、双蒂属支输出型组、三蒂属支输出型组皮瓣成活率依次增高,除双蒂属支输出型组、三蒂属支输出型组之间差异无显著性意义外,其余各组问差异均有显著性意义(P＜0.05).三蒂属支输出型组皮瓣光镜下组织结构基本正常;透射电镜检查,大部分细胞结构趋于正常,胞浆内线粒体、内质网结构较清楚,细胞间连接较清楚,偶见线立体的空泡样变,数量少,核正常.三蒂属支输出型组皮瓣与其他各组组织学及细胞超微结构观察结果比较,均有明显差异.结论:静脉蒂直接影响皮瓣的成活,采用静脉干属支输出能够明显提高静脉皮瓣的成活率.保留合适的蒂型能保持静脉皮瓣的灌流平衡,进而提高静脉皮瓣的成活率.     

碱性成纤维细胞生长因子-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球的体外释药规律:具有促进兔静脉皮辦成活的作用?

背景:与正常生理性皮辦相比,静脉皮辦的主要优点在于摆脱了动脉血管分布区域对传统轴型皮辦的供区与受区的限制,但其成活率不稳定.目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(bFGF-polylactic-co-glycolic acid.bFGF-PLGA)缓释微球对兔静脉皮辦成活的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-05/10在南华大学完成.材料:健康新西兰大白兔24只,随机分为3组:bFGF-PLGA缓释微球组、空微球组、空白对照组,8只/组.方法:应用正交设计试验进一步优化碱性成纤维细胞生长因子微球的制备工艺,采用优化处方制备bFGF-PLGA微球.3组兔均制作侧腹壁静脉皮辦,术前5 d,bFGF-PLGA缓释微球组向皮辦皮内注射28.85 g/L优化处方后的bFGF-PLGA微球3 mL(含碱性成纤维细胞生长因子20 μg),空微球组同法注射同等质量空微球+等量碱性成纤维细胞生长因子混合溶液,空白对照组注射等量生理盐水.主要观察指标:考察bFGF-PLGA微球外观形态和粒径分布,检测其载药量、包封率、体外释药性质.术后7 d检测皮辦成活率,取兔皮肤标本行CD34~+免疫组化染色,检测CD34~+的表达及皮辦内微血管密度.结果:所制微球表面光滑圆整,球体均匀度好,无粘连现象;微球粒径98%分布在12.50~43.49μm,平均粒径26.93μm,径距0.611+6.60,载药量为[(23.11±0.44)×10~(-3)]%,包封率为(86.51±0.83)%;突释期内微球的体外释放度为27.78%,30d后体外累积释放度高达81.56%,微球的体外释药规律符合Higuichi方程(r=0.997).空微球组、空白对照组的静脉皮辦成活率及皮辦内微血管密度基本相似(P=0.597,P=0.336),但均明显低于bFGF-PLGA缓释微球组(P=0.000).免疫组化染色结果显示,bFGF-PLGA能够促进皮辦与周围建立血供关系,改善皮辦的成活,并表达较为丰富的CD34~+.结论:应用W/O/W复乳.干燥法可成功制备表征良好、载药量和包封率高的bFGF-PLGA微球,该微球通过较长时间地持续释放活性碱性成纤维细胞生长因子,可明显促进兔静脉皮辦的存活.     

低分子肝素和重组水蛭素对兔耳静脉淤血皮瓣成活的影响

背景:低分子肝素和水蛭素都有活血化淤作用。目的:观察局部注射低分子肝素或重组水蛭素对静脉淤血皮瓣成活的影响。方法:在24只兔左耳背制作3cm×6cm静脉淤血皮瓣模型,随机分组:对照组皮瓣下多点注射生理盐水;肝素组皮瓣下多点注射低分子肝素625U/mL,水蛭素组皮瓣下多点注射重组水蛭素1U/mL。结果与结论:①大体观察:术后水蛭素组和肝素组较对照组淤血程度轻,血肿消散快。②皮瓣成活面积百分比:水蛭素组、肝素组明显高于对照组(P<0.01),水蛭素组和肝素组比较差异无显著性意义(P>0.05)。③苏木精-伊红染色结果:对照组术后同期微血管淤血程度较水蛭素组和肝素组严重,微血管计数明显少于水蛭素组和肝素组(P<0.05,P<0.01),水蛭素组微血管计数明显高于肝素组(P<0.01)。说明局部应用低分子肝素或重组水蛭素可较快改善皮瓣的淤血,提高皮瓣成活,重组水蛭素效果优于低分子肝素。     

经皮血氧饱和度测定对游离皮瓣移植后血管危象动态监测的实验研究

目的评价经皮血氧饱和度(SPO2)监测法在动态监测游离皮瓣移植后血管危象中的作用。方法30只新西兰兔制作双侧下腹部腹壁浅动脉皮瓣模型,随机分为3组:动脉阻断组,静脉阻断组,动静脉阻断组。阻断及复通血管,动态测定皮瓣经皮SPO2,并与皮瓣颜色、温度变化时间作比较。结果动脉阻断后(106±37)s皮瓣经皮SPO2降至最低阈值,复通后(178±17)s回升达到正常水平。静脉阻断后,皮瓣SPO2开始表现为紊乱和波动,(198±26)s后SPO2达到最低阈值,复通后(635±37)s平缓回升到正常水平。静脉阻断组的下降和回升的时间差明显长于动脉阻断组(P<0.01)。全血管阻断后SPO2下降时间与复通时间与动脉阻断组相似。皮瓣温度、颜色的变化时间明显长于皮瓣SPO2变化时间。结论经皮的SPO2监测法能够早期敏感、客观和快捷反映皮瓣的灌注情况,是游离皮瓣血管危象动态监测的理想手段之一。     

骨形态发生蛋白复合带血供肌瓣修复骨缺损成骨过程中骨骼肌的转归

背景局部软组织条件不好的难治性骨缺损修复是临床的重大难题和亟待解决的问题.目的探讨带血供肌瓣作为骨形态发生蛋白载体修复骨缺损成骨过程中骨骼肌的变化.设计观察对比实验.单位南方医科大学南方医院实验动物中心.对象重组人骨形态发生蛋白2;清洁级健康新西兰大白兔20只,1.5～2.5 kg,雌雄不拘.方法实验于2000-01/2002-08在南方医科大学南方医院实验动物中心完成.取10只兔,制作兔桡骨下段15 mm骨缺损,将指深屈肌肌瓣去神经后,转位至缺损区,将纤维蛋白与重组人骨形态发生蛋白2复合物植入肌瓣中.分别于1,2,4,6,8周麻醉状态下各处死4只兔,进行骨缺损区肌瓣大体观察、组织学、原位末端标记及超微结构观察.主要观察指标兔桡骨缺损区肌瓣大体观察、组织学检查、原位末端标记法染色结果及超微结构.结果20只兔均进入结果分析.①兔桡骨缺损区肌瓣大体观察结果骨骼肌逐渐发生萎缩,8周时肌纤维几乎完全消失,新生骨组织呈条索状桥接两断端.②兔桡骨缺损区肌瓣组织学检查结果组织学显示骨骼肌萎缩的同时,部分细胞核出现崩解,并有凋亡小体出现.③兔桡骨缺损区肌瓣细胞凋亡情况原位末端标记法染色萎缩的骨骼肌纤维内大量显色阳性的细胞核或核碎片.④兔桡骨缺损区肌瓣超微结构骨骼肌肌丝随时间延长逐渐消失,细胞核出现染色质边集、固缩、碎裂,呈典型的凋亡改变.结论带血供肌瓣复合骨形态发生蛋白修复骨缺损成骨过程中,肌纤维逐渐发生萎缩、凋亡,最终被骨组织所替代.     

碱性成纤维细胞生长因子-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物微球的体外释药规律：具有促进兔静脉皮瓣成活的作用？

背景：与正常生理性皮瓣相比,静脉皮瓣的主要优点在于摆脱了动脉血管分布区域对传统轴型皮瓣的供区与受区的限制,但其成活率不稳定。目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子-聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物（bFGF-polylactic-co-glycolicacid,bFGF-PLGA）缓释微球对兔静脉皮瓣成活的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-05/10在南华大学完成。材料：健康新西兰大白兔24只,随机分为3组：bFGF-PLGA缓释微球组、空微球组、空白对照组,8只/组。方法：应用正交设计试验进一步优化碱性成纤维细胞生长因子微球的制备工艺,采用优化处方制备bFGF-PLGA微球。3组兔均制作侧腹壁静脉皮瓣,术前5d,bFGF-PLGA缓释微球组向皮瓣皮内注射28.85g/L优化处方后的bFGF-PLGA微球3mL（含碱性成纤维细胞生长因子20μg）,空微球组同法注射同等质量空微球＋等量碱性成纤维细胞生长因子混合溶液,空白对照组注射等量生理盐水。主要观察指标：考察bFGF-PLGA微球外观形态和粒径分布,检测其载药量、包封率、体外释药性质。术后7d检测皮瓣成活率,取兔皮肤标本行CD34＋免疫组化染色,检测CD34＋的表达及皮瓣内微血管密度。结果：所制微球表面光滑圆整,球体均匀度好,无粘连现象;微球粒径98%分布在12.50～43.49μm,平均粒径26.93μm,径距0.611±6.60;载药量为[（23.11±0.44）×10-3]%,包封率为（86.51±0.83）%;突释期内微球的体外释放度为27.78%,30d后体外累积释放度高达81.56%,微球的体外释药规律符合Higuichi方程（r=0.997）。空微球组、空白对照组的静脉皮瓣成活率及皮瓣内微血管密度基本相似（P=0.597,P=0.336）,但均明显低于bFGF-PLGA缓释微球组（P=0.000）。免疫组化染色结果显示,bFGF-PLGA能够促进皮瓣与周围建立血供关系,改善皮瓣的成活,并表达较为丰富的CD34＋。结论：应用W/O/W复乳-干燥法可成功制备表征良好、载药量和包封率高的bFGF-PLGA微球,该微球通过较长时间地持续释放活性碱性成纤维细胞生长因子,可明显促进兔静脉皮瓣的存活。     

腓肠神经伴行血管为蒂的逆行筋膜皮瓣的临床应用

目的探索改善腓肠神经伴行血管为蒂的逆行筋膜皮瓣静脉回流、恢复腓肠神经供区皮肤感觉的有效手术方法.方法行小隐静脉-大隐静脉端-端吻合(VA)、腓肠神经-隐神经端-侧吻合(NR).结果本组8例患者,其中5例如行VA、2例加行NR.3例未行VA者术后皮瓣均发生水泡等静脉回流障碍现象;5例加行VA者除1例因手术意外发生皮瓣远端干性坏死外均无静脉回流障碍;2例加行NR者,1例术后2个月皮瓣和足外缘皮肤感觉重现(另1例随访中).结论加行VA可解决皮瓣静脉回流问题;加行NR既不影响隐神经供区皮肤感觉,又可恢复腓肠神经供区的皮肤感觉.     

游离组织瓣移植监测与预防血管危象中静脉留置管的应用

背景:血管吻合口局部血栓形成仍是导致游离组织瓣移植失败和坏死的主要原因。目的:评价静脉留置管在游离组织瓣移植监测与预防血管危象中的临床应用价值。方法:应用前臂皮瓣、腓骨肌(皮)瓣、髂骨肌骨瓣等游离移植修复舌、颊、下颌等部位组织缺损患者102例。实验组(n=50)组织瓣静脉远心端留置静脉管,术中根据需要灌注稀释肝素生理盐水,术后通过静脉留置管输注低分子右旋糖酐,20mL/h,持续7d。对照组(n=52)术后全身给予低分子右旋糖酐500mL静脉滴注,1次/d。结果与结论:实验组50例组织瓣全部存活,未出现血管危象;对照组52例中有3例出现静脉危象,其中2例抢救无效组织瓣坏死。提示静脉留置管能持续监测游离组织瓣移植后组织瓣血管通畅状况,有效预防血管危象,提高组织瓣的成活率。     

间歇式正压对静脉动脉化皮瓣成活的影响

目的探讨间歇式正压对静脉动脉化皮瓣成活面积、成活质量及血液循环的影响。方法于家兔腹部设计以腹壁浅血管为蒂的静脉动脉化皮瓣,并施以正压4kP,1min,间歇4min,测量实验组与对照组皮瓣成活面积、每单位拉力延伸率,用荧光血流仪计数比较实验组与对照组局部血液循环。结果(1)实验组与对照组成活面积比较,差异有显著性意义。(2)实验组与对照组皮瓣单位拉力延伸率比较,差异有显著性意义。(3)实验组与对照组荧光血流仪计数比较,差异有显著性意义,术后早期尤其明显。结论间歇式正压可提高静脉动脉化皮瓣的成活面积及成活质量,对静脉动脉化皮瓣血液循环尤其早期有改善作用。