原发性肝细胞癌患者血清中微小RNA-21、微小RNA-122和微小RNA-145的表达及临床意义

目的探讨原发性肝细胞癌(HCC)患者血清中微小RNA-21(miR-21)、微小RNA-122(miR-122)和微小RNA-145(miR-145)的表达及临床意义。方法选择2014年9月至2016年9月铜川矿务局中心医院收治的HCC患者100例为HCC组,并选择体检健康者100例作为对照组。采用实时定量荧光聚合酶链反应检测血清中miR-21、miR-122和miR-145的表达水平,分析miR-21、miR-122和miR-145的表达水平与HCC患者临床特征的关系。结果HCC组患者血清中miR-21、miR-122表达水平显著高于对照组(P<0.05),miR-145表达水平显著低于对照组(P<0.05)。HCC患者血清中miR-21、miR-122和miR-145表达水平与组织分化程度、临床分期、肿瘤大小及肝硬化有显著相关性(P<0.05),与性别、年龄、乙型肝炎病毒抗原、丙型肝炎病毒抗体无显著相关性(P>0.05)。与高分化和中分化程度、临床分期低、肿瘤直径<5 cm和无肝硬化的患者相比,低分化程度、临床分期高、肿瘤直径≥5 cm和有肝硬化的患者血清中miR-21和miR-122表达显著升高,miR-145表达显著降低(P<0.05)。手术后HCC患者血清中miR-21、miR-122表达水平显著低于手术前,miR-145表达水平显著高于手术前(P<0.05)。结论 miR-21和miR-122表达上调及miR-145表达下调可能与HCC的发生、发展有关,联合检测血清中miR-21、miR-122和miR-145表达对HCC的诊断和病情评估具有重要意义。     

微小RNA-7/124/155在帕金森病中的研究进展

帕金森病(PD)是继阿尔茨海默病之后的全球第二大神经退行性疾病，具有高发病率及高致残率，早期症状不典型，常与正常的老化或其他疾病表现类似，容易漏诊和误诊，严重影响该病的诊治，加重患病人群的生活负担。微小RNA(miRNA)是一类内源性的非编码RNA,通过结合信使RNA进行转录后调节，具有高度保守、短小、简单易获取等特点，并且可以在外周体液中稳定存在，已经被作为多种疾病的生物标志物。最新研究表明，miRNA在PD的发生发展中起重要作用。本文综述近年来国内外学者对miR-7/124/155这三种研究相对成熟的miRNA在PD中的研究进展，旨在为阐明PD的发病机制、指导PD的诊断及治疗提供参考。     

微小RNA-100在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨微小RNA-100(microRNA-100,miRNA-100)在胃癌患者组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法:提取50例胃癌及其癌旁非肿瘤组织标本的总RNA,采用TaqMan探针实时荧光定量PCR方法检测miRNA-100的表达量;并分析其与肿瘤分化程度、淋巴结转移等临床病理学特征的关系.结果:胃癌及配对癌旁非肿瘤组织中miRNA-100的相对表达量分别为1.31±0.69和0.74±0.36,差异有统计学意义(P<0.01).胃癌组织中miRNA-100的表达在年龄、性别、肿块大小、肿块位置、分化程度、淋巴结转移以及TNM分期中差异均无统计学意义(P>0.05).结论:miRNA-100在胃癌中的异常表达可能与胃癌的发生有关.     

老年克罗恩病患者血清微小RNA-215、微小RNA-335表达及与肠道菌群的相关性

目的探究老年克罗恩病患者血清微小RNA-215(miR-215)、微小RNA-335(miR-335)表达及与肠道菌群的相关性。方法选择2019年4月至2021年4月佳木斯市中心医院收治的126例克罗恩病患者为观察组,同期体检健康者100例为对照组,比较两组血清miR-215、miR-335相对表达量及肠道菌群数量,比较缓解期和活动期患者血清miR-215、miR-335相对表达量,采用Spearman检验分析miR-215、miR-335与克罗恩病疾病活动度的相关性,采用Pearson检验分析miR-215、miR-335与克罗恩病患者肠道菌群的相关性。结果血清miR-215、miR-335在观察组中的相对表达量较对照组均显著降低(P<0.05);观察组乳酸杆菌数量和双歧杆菌数量显著少于对照组(P<0.05),观察组肠球菌数量和大肠杆菌数量显著多于对照组(P<0.05);活动期患者血清miR-215相对表达量显著低于缓解期患者(P<0.05),活动期患者血清miR-335相对表达量显著低于缓解期患者(P<0.05);miR-215、miR-335与克罗恩病疾病活动度均呈负相关(P<0.05);miR-215、miR-335与克罗恩病患者乳酸杆菌数量和双歧杆菌数量均呈正相关(P<0.05),miR-215、miR-335与克罗恩病患者肠球菌数量和大肠杆菌数量均呈负相关(P<0.05)。结论老年克罗恩病患者血清miR-215、miR-335呈低表达水平,其水平与疾病活动度及肠道菌群具有一定相关性,这两项指标有望成为克罗恩病诊治的相关指标之一。     

微小RNA-21在乳腺癌细胞中的作用

目的:探讨微小RNA(miR)-21在乳腺癌细胞(MCF7)中的作用。方法:对MCF7细胞转染miR-21,采用免疫组织化学法检测转染后程序性细胞凋亡4(PDCD4)表达;用噻唑蓝(MTT)比色法测转染miR-21后MCF7细胞增殖;流式细胞术检测转染后MCF7细胞凋亡。结果:经免疫组织化学检测,转染组未见染色,对照组细胞胞质呈棕褐色,转染组PDCD4的表达明显低于对照组,MTT法检测转染组细胞活力增加(P0.05)。转染组的凋亡率为(3.14±0.24)%,明显低于空白组、空质粒组的(8.04±0.02)%、(9.41±0.53)%,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:PDCD4是miR-21的靶基因之一,miR-21的高表达可促进乳腺癌的发展。     

结直肠癌患者血清微小RNA-107和微小RNA-34a的表达情况及其诊断结直肠癌的价值

目的 分析结直肠癌患者血清微小RNA-107(miR-107)和微小RNA-34a(miR-34a)的表达情况及其诊断结直肠癌的价值。方法 选取50例经病理诊断为结直肠癌的患者作为结直肠癌组，50例健康人群作为对照组。应用荧光定量PCR法检测两组受试者血清miR-107和miR-34a的相对表达量。比较不同临床病理特征的结直肠癌患者的血清miR-107和miR-34a相对表达量。采用受试者工作特征曲线分析血清miR-107和miR-34a的相对表达量对结直肠癌的诊断价值。结果 (1)结直肠癌组血清miR-107的相对表达量高于对照组，而miR-34a的相对表达量低于对照组(均P<0.05)。(2)Ⅰ期结直肠癌患者的血清miR-107相对表达量低于Ⅳ期患者，而血清miR-34a的相对表达量高于Ⅳ期患者(均P<0.05);高分化结直肠癌患者的血清miR-34a相对表达量高于低分化患者(P<0.05);有淋巴结转移的结直肠癌患者的血清miR-34a相对表达量低于无淋巴结转移患者(P<0.05)。结直肠癌患者的血清miR-107相对表达量与TNM分期呈正相关，血清miR...     

微小RNA-132转染对体内外肝癌生长和凋亡的作用

目的观察转染微小RNA-132(miR-132)对体内外人肝癌细胞株MHCC97H生长和凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-q PCR)检测45例肝癌组织及癌旁正常组织中miR-132的表达,CCK-8法、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验和TUNEL实验检验转染miR-132后对体内外MHCC97H细胞生长和凋亡的作用,Western blot法检测体外MHCC97H细胞中p-AKT、Survivin和Caspase 3蛋白的表达,免疫组织化学法检测体内肿瘤组织中Ki-67、Survivin和Caspase 3的表达。结果 miR-132在肝癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织(P<0.05)。在体外实验中,与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞中miR-132的表达明显升高,细胞増殖明显被抑制,G0/G1期细胞比例明显上升,S期细胞比例明显下降,凋亡细胞显著增加(P均<0.05)。转染组细胞中Survivin和p-AKT的表达下调,Caspase 3的表达上调,与空白对照组和阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05)。在体内实验中,转染组裸鼠皮下移植瘤生长明显被抑制,凋亡肿瘤细胞明显增加,Survivin和Ki-67蛋白表达下调,而Caspase 3表达增加(P均<0.05)。结论转染miR-132对体内外肝癌细胞有增殖抑制和凋亡诱导作用,miR-132有望成为肝癌治疗的新靶点。     

结肠癌患者血清微小RNA-193a-5p和微小RNA-139-5p表达检测及其对预后的影响

目的:检测结肠癌患者血清微小RNA-193a-5p(miR-193a-5p)和微小RNA-139-5p(miR-139-5p)表达水平,分析其对预后的影响。方法:选取结肠癌患者109例为结肠癌组,选取同期体检健康者100例为健康组。收集两组临床资料,采用实时荧光定量PCR检测血清miR-193a-5p和miR-139-5p的表达。分析miR-193a-5p和miR-139-5p表达与结肠癌患者临床病理特征的关系。采用Cox风险比例模型分析结肠癌患者预后的影响因素。绘制Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果:结肠癌组miR-193a-5p和miR-139-5p表达明显低于健康组(均P<0.001)。结肠癌患者血清miR-193a-5p和miR-139-5p表达与性别、年龄、病理分型、肿瘤部位、肿瘤直径无明显相关性(均P>0.05),与临床分期、分化程度、局部浸润深度和淋巴结转移具有明显相关性(均P<0.001)。Cox风险比例模型分析结果显示,临床分期、分化程度、局部浸润深度、淋巴结转移、miR-193a-5p和miR-139-5p是结肠癌患者预后的影响因素(均...     

微小RNA-132转染对体内外肝癌生长和凋亡的作用

目的 观察转染微小RNA-132(miR-132)对体内外人肝癌细胞株MHCC97H生长和凋亡的影响,初步探讨其作用机制。方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测45例肝癌组织及癌旁正常组织中miR-132的表达,CCK-8法、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验和TUNEL实验检验转染miR-132后对体内外MHCC97H细胞生长和凋亡的作用,Western blot法检测体外MHCC97H细胞中p-AKT、Survivin和Caspase 3蛋白的表达,免疫组织化学法检测体内肿瘤组织中Ki-67、Survivin和Caspase 3的表达。结果 miR-132在肝癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织(P＜0.05)。在体外实验中,与空白对照组和阴性对照组相比,转染组细胞中miR-132的表达明显升高,细胞増殖明显被抑制,G₀/G₁期细胞比例明显上升,S期细胞比例明显下降,凋亡细胞显著增加(P均＜0.05)。转染组细胞中Survivin和p-AKT的表达下调,Caspase 3的表达上调,与空白对照组和阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P均＜0.05)。在体内实验中,转染组裸鼠皮下移植瘤生长明显被抑制,凋亡肿瘤细胞明显增加,Survivin和Ki-67蛋白表达下调,而Caspase 3表达增加(P均＜0.05)。结论 转染miR-132对体内外肝癌细胞有增殖抑制和凋亡诱导作用,miR-132有望成为肝癌治疗的新靶点。     

依普利酮通过靶向微小RNA-192和微小RNA-29a/b/c 减轻糖尿病肾病模型大鼠肾损伤机制研究

目的:探讨依普利酮通过靶向微小RNA(miR)-192和miR-29a/b/c减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的机制。方法:将30只成年雄性SD大鼠分为对照组、模型组、依普利酮组,每组10只。通过实时定量PCR(RT-qPCR)分析各实验组大鼠肾脏组织中miR-192和miR-29a/b/c的mRNA表达水平。使用血糖仪检测大鼠血糖,并对大鼠整体和肾脏组织样本进行称重。通过相关商用试剂盒检测大鼠尿蛋白、肌酐和血尿素氮的浓度。通过蛋白印迹分析大鼠肾脏组织中转化生长因子β₁(TGF-β₁)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Smad家族蛋白3(Smad3)的蛋白表达。通过免疫组化分析大鼠肾脏切片中TGF-β₁、Smad3和α-SMA的表达。结果:模型组miR-29a、miR-29b、miR-29c的mRNA表达水平低于对照组,miR-192的mRNA表达水平高于对照组(均P<0.05)。依普利酮组miR-29a、miR-29b、miR-29c的mRNA表达水平高于模型组,miR-192的mRNA...     

微小RNA-148b在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨微小RNA(miRNA)-148b在乳腺癌中的表达及意义。方法选取2008年3月—2010年3月我院肿瘤外科乳腺癌患者手术切除标本80例(乳腺肿瘤组织)、乳腺癌旁组织标本80例及正常乳腺组织标本20例。采用real-time PCR技术检测miRNA-148b水平;乳腺肿瘤细胞培养,分为空白对照组不加任何药物,阴性对照组加入安慰剂处理细胞,抑制剂组加入5-氟尿嘧啶10μg/ml预先处理细胞48 h,进行MDA-MB-231细胞培养与转染。结果正常乳腺组织、乳腺癌旁组织、乳腺肿瘤组织中miRNA-148b表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001);其中乳腺肿瘤组织中miRNA-148b表达量较正常乳腺组织和乳腺癌旁组织均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。转染24 h后,空白对照组、阴性对照组、抑制剂组中miRNA-148b表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001);其中抑制剂组中miRNA-148b表达量较空白对照组和阴性对照组均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。3组转染24 h后MDA-MB-231细胞增殖比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组转染48、72 h后MDA-MB-231细胞增殖比较,差异均有统计学意义(P<0.01);其中转染48、72 h后抑制剂组较空白对照组和阴性对照组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miRNA-148b在人乳腺癌组织及MDA-MB-231细胞株中的表达较正常及癌旁组织低,并且在高表达水平的同时也伴有细胞增殖升高的特点。通过转染miRNA-148b抑制剂后,miRNA-148b表达水平明显上调,细胞增殖现象下降。miRNA-148b可能在乳腺癌的发生及发展阶段都发挥着重要的作用。     

微小RNA-144上调Rb抑制骨肉瘤细胞增殖及诱导凋亡

目的探讨微小RNA-144(miR-144)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及相关蛋白影响。方法运用脂质体转染的方法,在骨肉瘤细胞株MG-63中转染不同浓度miR-144类似物(miR-144组),随机miR-144片段作为阴性对照组。实时定量PCR检测miR-144表达水平。DAPI染色观察miR-144对细胞形态的影响,用MTT检测细胞增殖,Annexin/PI双染确定细胞凋亡比例。免疫印迹检测PTEN以及Rb等抑癌基因编码蛋白和凋亡相关蛋白表达情况。结果实时定量PCR结果显示,miR-144组miR-144的表达(1128.54±738.52)明显高于空白对照组(1.00±0.00)和阴性对照组(2.06±0.73)(P<0.01)。与阴性对照组和空白对照组比较,miR-144组细胞数量明显减少,增殖受抑制,流式细胞检测显示,细胞凋亡率明显增加。免疫印迹检测显示,Rb和PTEN表达水平有所增加,而凋亡相关的Caspase-3活化,线粒体膜上Cyto C释放。而阴性对照组与空白对照组以上数值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论合成的miR-144片段(miR-144 mimic)能顺利进入细胞并上调miR-144的表达,对骨肉瘤细胞都有一定程度的抑制作用,并有浓度依赖性,对MG-63的抑制效果最强,并通过活化Caspase-3促进凋亡,上调PTEN和Rb的表达实现对细胞的抑制作用。未来可以基于miR-144进行骨肉瘤治疗的短核苷酸类药物开发。     

微小RNA-451对结肠癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究微小RNA-451(miR-451)对结肠癌细胞系SW480侵袭能力的影响.方法 用荧光染料标记的siRNA片段转染,优化转染条件,观察转染效率;通过化学方法合成miR-451 mimics,以脂质体包裹转染SW480细胞,并设单独脂质体转染组、无关序列转染组、未处理组(对照组),采用细胞计数试剂盒-8检测miR-451对细胞增殖的影响,流式分析检测miR-451对细胞凋亡的影响,Transwell小室检测miR-451对细胞侵袭能力的影响.结果 化学合成的miR-451 mimics(100 nM)转染对结肠癌细胞系SW480的增殖和凋亡无明显影响,但对SW480的侵袭能力有抑制作用.结论 转染miR-451 mimics能抑制结肠癌细胞系SW480的侵袭能力.     

微小RNA-133b对心肌纤维化的影响

目的 研究微小RNA-133b(miR-133b)对心肌纤维化的影响。方法 选取人心肌成纤维细胞(CFs),采用CCK8检测过表达及敲低miR-133b时细胞增殖情况,qRT-PCR及Western blot检测结缔组织生长因子(CTGF)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)及Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅲ)的表达水平;生物学软件预测miR-133b的靶基因,双荧光素酶报告实验证实miR-133b与靶基因的直接调控作用。 结果 qRT-PCR检测结果显示,转染miR-133b mimic后miR-133b的表达水平明显高于阴性对照组(t=26.219,P=0.000),转染miR-133b inhibitor后miR-133b的表达水平明显低于阴性对照组(t=6.738,P=0.003)。转染CFs 21、45、69、93和117 h后,与阴性对照组相比,miR-133b mimic组CFs增殖能力明显降低,而miR-133b inhibitor组CFs增殖水平明显上升(P均<0.05)。与阴性对照组相比,过表达miR-133b后,CTGF(t=9.213,P=0.001;t=8.195,P=0.001)、α-SMA(t=6.511,P=0.003;t=4.434,P=0.011)、collagenⅠ(t=3.172,P=0.034;t=4.053,P=0.015)及collagen Ⅲ(t=6.404,P=0.003;t=5.319,P=0.006)的mRNA和蛋白表达水平均明显下调;敲低miR-133b后,CTGF(t=9.439,P=0.001;t=14.100,P=0.000)、α-SMA(t=4.519,P=0.011;t=4.377,P=0.012)、collagenⅠ(t=5.966,P=0.004;t=5.514,P=0.005)及collagen Ⅲ(t=4.622,P=0.010;t=4.996,P=0.008)的mRNA和蛋白表达水平均明显上升。共转染miR-133b mimic和WT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性明显低于共转染mimic control和WT 3’UTR表达载体的细胞(t=5.654,P=0.005),共转染miR-133b mimic和MUT 3’UTR表达载体细胞的相对荧光素酶活性与共转染mimic control和MUT 3’UTR表达载体的细胞差异无统计学意义(t=0.380,P=0.724)。结论 miR-133b可能是通过靶向抑制CTGF来影响CFs的活化增殖,从而改善心肌纤维化。     

反义微小RNA-21对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨微小RNA-21（miRNA-21）反义寡核苷酸（ASOND）对人膀胱癌细胞株T24增殖和凋亡的影响,为膀胱癌的治疗提供理论依据。 方法：将脂质体介导的反义寡核苷酸（AS-miRNA-21）转染T24细胞,设转染无义序列组、对照组和AS-miRNA-21转染组,采用蛋白印迹(Western blotting)检测转染细胞miRNA-21表达水平,噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞仪（FCM）分别检测转染细胞的增殖和凋亡情况,转染无义序列组、对照组分别与AS-miRNA-21转染组比较。 结果：经过转染AS-miRNA-21的T24细胞miRNA-21表达水平下降,细胞增殖能力受抑。AS-miRNA-21组T24细胞增殖率为53.6%,转染无义序列组T24细胞增殖率为92.5%,对照组为100%;相对应的凋亡率分别为13.8%、1.9%和2.7%。上述3组间T24细胞的增殖率、凋亡率比较差异均有显著性（P<0.01）。 结论：反义miRNA-21对人膀胱癌细胞T24具有抑制增殖和促进凋亡的作用,抑制miRNA-21表达有望成为膀胱癌基因治疗的有效方法。     

微小RNA-200a在肝癌中的表达及其功能

目的观察miR-200a在肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的表达,以及对肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡、周期和侵袭能力的影响。方法运用荧光定量PCR检测肝癌细胞HepG2和正常肝细胞QSG-7701中的miR-200a的表达量。运用MTT法、流式细胞仪和Transwell试验分析miR-200a对细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。结果肝癌细胞HepG2中miR-200a表达水平为正常肝细胞4.79倍,癌细胞中miR-200a表达明显高于正常细胞(P<0.01)。在72 h浓度为150 nmol/L时,miR-200a对肝癌细胞增殖的促进作用最明显,促进率为38.40%。与空对照组和负对照组比较,G0/G1期细胞未见明显增多(57.13±0.02)%,S期无明显减少(26.55±0.8)%,早期凋亡细胞比例未见明显升高(0.5±0.06)%(P>0.05)。Transw ell实验结果显示100 nmol/L miR-200a mimics实验组相对穿出小室膜肿瘤细胞数为(0.348+0.005 657),与空对照组(0.296±0.006 364),负对照组(0.287±0.005 364)差异明显(P<0.05)。结论 miR-200a在肝癌细胞株中异常表达,癌细胞中的表达明显高于正常细胞,miR-200a对肝癌细胞株的增殖和侵袭能力有着明显的促进作用,其在肿瘤发生发展中可能担任着原癌基因的角色。