石蜡切片用于免疫组化SPTM实验的体会

免疫组化方法已越来越广泛的应用于科研和临床工作。我们在应用这一方法的过程中有一些体会 ,现报告如下。1　材料与方法1 1　试剂　ＳＰＴＭ 药盒北京中山生物技术公司提供。1 2　标本　胃癌患者胃部石蜡切片。1 3　方法　标本经石蜡切片脱蜡 ,经各级酒精后水洗 ,3%过氧化氢孵育 5～ 1 0分钟 ,以消除内源性过氧化物酶的活性。蒸馏水冲洗 ,ＰＢＳ浸泡 5分钟 ,加胰酶 37℃孵育 1 0～ 40分钟。 5%～ 1 0 %正常山羊血清室温 1 0分钟 ,倾去血清 ,滴加适当比例稀释的一抗 ,37℃孵育 60分钟或 4℃过夜。ＰＢＳ洗 3次 ,每次 5分钟。滴加生物素标…     

褪黑素受体亚型蛋白的免疫组化检测方法

1　方法介绍1.1　组织标本制备　新鲜待检组织立即用 4%多聚甲醇固定 ,常规脱水、透明、浸蜡 ,石蜡包埋组织 ,4℃冰箱贮存待检测。1.2　主要步骤　将石蜡包埋组织作 4μm的连续切片 ,在 37℃烘箱过夜。石蜡切片用二甲苯脱腊 10 min× 3,梯度乙醇洗 2min× 3,3%过氧化氢溶液处理 10 m in,以阻断内源性过氧化物酶活性。蒸馏水洗 2 min× 3,0 .0 1mol/ L ,p H 6 .0柠檬酸缓冲液微波修复抗原 10 min,冷却后蒸馏水洗 2 m in× 3,PBS洗 2 m in× 3。每张切片加 5 0 ml非免疫性动物血清温室孵育 10 min,每张切片加 5 0 ml鼠抗人 mt1 和 MT2 受体…     

偶氮桃红法染肌组织的探讨

染肌上皮细胞的偶氮桃红法是Holde Puchter于1966年发表在“Stain Technol”上的,其方法如下: 1、取新鲜组织用Carnoy氏液固定。 2、石蜡切片,用Mayer氏苏木精染细胞核。 3、流水洗后入5％鞣酸水溶液10分钟。 4、蒸馏水洗3次,入1％磷钼酸水溶液10分钟。 5、蒸馏水洗3次。 6、入下列偶氮桃红液染5～10分钟:     

HBV阳性血清体外感染HepG2细胞的实验研究

目的 :建立HBV阳性血清体外感染HepG2细胞的实验方法 .方法 :培养HepG2细胞传至 6孔板中 1 2h后 ,加2 0mL·L-1 DMSO继续孵育 1 2h .而后进行HBV阳性血清体外感染HepG2的实验 .感染组用HBV阳性血清 ,阴性对照组用HBV阴性血清 ,空白对照组用DMEM培养基 .实验开始后HepG2细胞在 2 0mL·L-1 DMSO的浓度下继续孵育 2 4h ,而后用PBS清洗 ,洗 8次 ,PBS洗后每隔 1 2h收集一次细胞培养上清 .ELISA检测细胞培养上清中的HBsAg.PCR检测细胞培养上清和HepG2细胞中的HBVDNA .结果 :HBV阳性血清感染组 ,在PBS洗后 1 2h的细胞培养上清中ELISA检测到HBsAg阳性 (A =0 .8) .PCR检测显示HBV阳性血清感染组细胞培养上清和HepG2细胞中HBVDNA阳性 ,阴性对照组和空白对照组HBVDNA阴性 .结论 :在一定条件下用HBV阳性血清进行HBV感染体外培养的HepG2细胞是可行的     

快速石蜡包埋切片法代替冰冻切片法的初步体会

近几年来我科采用提高温度的方法 ,进行快速石蜡包埋切片法 ,以替代冰冻切片法。经 10 0多例的病理检验证明 ,结果满意 ,一般 30～ 40分钟可出诊断结果 ,而反复切多块检验约需 40～ 6 0分钟。1　方法要点1 1　试剂　 (1)混合固定液 :含 40 %甲醛液 10ｍｌ,95 %酒精 85ｍｌ,冰乙酸 5ｍｌ,三种药液混合而成 ;(2 )无水乙醇 ;(3)纯丙酮 ;(4)二甲苯。1 2　方法　 (1)试剂置温箱预热温度为 80℃～ 90。℃ ;(2 )标本取材 :①快检手术标本与普通石蜡切片取材大小相似 ,煮沸固定 1分钟 (混合固定液 ) ,取出后修整 (因高温固定 ,组织块变形 )比普通石…     

固相血细胞吸附试验检测流行性出血热患者血清中IgM抗体

<正> 主要步骤: 取羊抗人μ链IgG抗体(5μg/ml)包被96孔聚氯乙烯U形软板,100μl/孔,4℃孵育过夜。在各孔内加入被检血清和对照血清(阳性、阴性血清均经IFAT、RPHI证实)100μl/孔,37℃孵育2小时。每孔加入32u/50μl的EHFV血凝素25μl,37℃孵育2小时。上述每次孵育后,均用0.05M、pH7.4的PBS(含0.5‰吐温20)洗涤三次,每次5分钟。     

石蜡包埋标本电镜观察的制备

近年来随着透射电镜研究手段的应用和普及 ,应用超微病理诊断也日益引起临床病理工作者的重视。但往往在常规光镜下发现一些疑难诊断的病理切片 ,需进一步透射电镜协助诊断 ,所以需将石蜡包埋标本制作成电镜标本。1　标本制作步骤1.1　取材　将ＨＥ切片在光镜观察中认为有意义的部位 ,准确地从该蜡块中取下。1.2　脱蜡　将蜡块分切成 1ｍｍ3 左右小条 ,然后再切成小方块 ,用氯仿或二甲苯进行脱蜡共 2次 ,每次 15分钟 ,再用 10 0 %→95 %→ 70 %→ 5 0 %→ 35 %乙醇脱水各 2次 ,每次 15分钟。1.3　浸洗　无论经过脱蜡或直接由甲醛液取出的小…     

免疫抑制剂对白细胞糖皮质激素受体的调节作用

1　材料和方法1.1　材料　取女性献血员静脉血 2 0 0 ml,肝素抗凝 ,弃血浆 ,加 2倍体积的 PBS、1.5倍体积的 Dextran T5 0 0混匀静置 15min,上清液 2 0 0 0 r/min离心 5 min,取沉渣加 Tris- NH4Cl溶液 37℃温育 10 m in,使残余的红细胞破裂 ,2 0 0 0 r/m in离心 5min,取沉淀物 ,用 PBS洗 2次 ,即可得到白细胞悬液。1.2　方法　 Dex、CTX、Cs A均设有 0 .0 1、0 .0 5、0 .1、0 .5、1.0、5 .0 mg/m l共 6种浓度 ,选择三药单用及三药合用 ,分别加入上述白细胞悬液中作用一定时间后进行白细胞 GR特异结合测定 ,采用放射配体结合法 ,3 H…     

原位细胞凋亡TUNEL法的改进及其应用

目的 :寻找一种能快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料的原位细胞凋亡的 TUNEL法。方法 :在原已建立的 TUNEL技术基础上作了如下改进 :1石蜡切片用微波修复技术替代蛋白酶 K的消化作用 ;冰冻切片与细胞爬片或涂片用含 0 .1 % Triton X- 1 0 0和 0 .1 %枸橼酸三钠混合液作穿透处理。 2在滴加反应混合物前 ,切片用 0 .1 %焦碳酸二乙酯 ( DEPC)浸泡 ,抑制内源性核酸内切酶活性。 3在 POD转换剂前 ,切片用 3% H2 O2 -甲醇液阻断内源性过氧化物酶活性 ,并用正常山羊血清封闭非特异结合位点。4苏木素套染细胞核。结果 :改进后的 TUNEL法能特异地显示凋亡细胞为棕黄色 ,其他细胞核为蓝色 ,且对比明显 ,背景浅 ,组织结构完整清晰 ,便于显微照相等特点。结论 :改进后的 TUNEL法是一种快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料细胞凋亡的有效方法。     

用短膜虫酶联免疫吸附试验(CL-ELISA)检测抗天然脱氧核糖核酸抗体(AnDA)的实验报告

鉴于检测血中AnDA对系统性红斑狼疮(SLE)等有重要临床意义,常规放免法及免疫荧光法还未能普遍应用,而ELISA方法相对简便,所以本文对用CL-ELISA检测AnDA的效果进行了研究。 CL-ELISA:短膜虫底片由生研所提供。待检血清用PBS(0.01 M pH 7.6)1/5稀释,取20μl滴在虫斑上,经孵育、PBS洗泡、甩干,滴加0.0125mg(Ab)/12.5 ml的辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG抗体(E/Ab=1,生研所1984.1批,最佳工作稀释度经方阵试验选择)20μl,再孵育洗泡甩干,滴加0.1ml含0.003％H_O_2的Karnovsky液染色7～8分钟,用Tris-HCI缓冲液(0.05 M,pH 7.6)     

用Warthin-Starry法显示胃幽门弯曲菌

我们用Warthin—Starry银染法显示石蜡切片幽门弯曲杆菌(CP),效果较好,现报告如下。慢性活动性胃炎胃粘膜活检标本之切片。醋酸盐缓冲液(pH3.6～3.8):无水醋酸钠1.64g,醋酸2.5ml,加蒸馏水至200ml。硝酸银液:硝酸银1g,醋酸盐缓冲液100ml。显影液:A液,对苯二酚3g,醋酸盐缓冲液100ml;B液,明胶5g,醋酸盐缓冲液100ml;C液,硝酸银2g,蒸馏水100ml。用前取A液3ml,加入预热的B液45ml,C液9ml,充分搅拌,置入60℃恒温箱中。切片脱蜡至水;入醋酸盐缓冲液3min;入2％硝酸银液中置60℃恒温箱中1h;不经水洗,入显影液中于60℃恒温箱中3～5min;取出切片后用60℃水冲洗两次,每次1～2min;继用     

褪黑素受体mRNA检测方法的建立

1　方法介绍1.1　组织标本制备　待检新鲜组织标本立即用 4%多聚甲醇 DEPC液固定 ,梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋组织 ,置4℃冰箱贮存待检测。1.2　原位杂交检测方法1.2 .1　载玻片的预处理　载玻片盐酸浸泡 2 4h,流水洗净 ,蒸馏水洗后晾干 ,用 95 %乙醇浸泡 30 min,180℃烘干过夜 ,室温冷却 ,涂切片粘合剂。1.2 .2　探针制备　 L B培养基各 5 0 ml,分别加入 mt1 、和 MT2 受体探针大肠杆菌菌株甘油保存液各 15 μl,37℃ ,2 0 0 r/ m in培养过夜。 10 0 0 0× g离心 5 min回收大肠杆菌 ,按照华舜公司质粒抽提纯化试剂盒说明抽提纯…     

骨骼肌铁苏木精块染法

传统的骨骼肌铁苏木精染色 ,均采用片染 ,而且染色步骤繁琐、时间长 ,标本容易脱落 ,难以制作大量的教学切片。为了解决这一难题 ,我室经过多年探讨 ,模索出以下两种方法 ,供同行们参考 :1　方法一①取材及固定 :家兔舌肌或狗膈肌 ,固定于任何常用固定液 2 4ｈ。 (若是Ｂｏｕｉｎ液 ,染色前应先用 70 %酒精溶液去掉黄色 ,若是含有升汞的固定液 ,则先行“脱汞”处理后才染色 )。②组织块用蒸馏水洗后入Ｗｅｉｇｅｒｔ铁苏木精 1～ 2天。③水洗后 ,用 0 .5 %冰乙酸酒精 (70 %酒精 )液分色约 2ｈ。④流水冲洗2 4ｈ。⑤常规脱水 ,石蜡切片 4～ 6…     

预输平衡液减轻异丙酚麻醉诱导时心血管抑制反应

目的:预输平衡液减轻异丙酚麻醉诱导时心血管抑制反应。方法:4 0例择期全麻病人,随机分为对照组(C组)及平衡液组(P组) ,每组各2 0例。平衡液组在诱导前经颈内静脉15分钟内注入平衡液10ml/kg。两组均用异丙酚、芬太尼和琥珀胆碱静脉注射诱导。两组分别记录入手术室时的基础值、诱导前、用异丙酚后1、2分钟、插管即刻及插管后1、3、5分钟时的HR、SBP、DBP及CVP变化。结果:对照组SBP、DBP、HR、CVP在给异丙酚1min、2min后下降,插管后SBP、DBP、HR升高(P <0 .0 5 )。P组CVP在给异丙酚1min、2min后升高,插管即刻SBP升高(P <0 .0 5 )。组间比较P组在给异丙酚1min、2min后SBP、DBP、CVP要高于对照组(P <0 .0 5 ) ,插管后3min、5min的血压值明显高于对照组(P <0 .0 5 )。结论:诱导前预输平衡液能明显减轻异丙酚麻醉诱导时心血管的抑制反应。     

富含脂肪组织标本制片方法的改进

在病理制片过程中 ,发现富含脂肪组织的标本按常规的脱水程序处理所制取的包埋块 ,切片不顺利 ,经常出现破碎、挤压或切片不完整等现象 ,甚至经脱脂处理的标本切片仍出现上述问题。因此 ,笔者对这类标本的制片方法进行摸索与改进 ,使这类组织切片的质量得以提高 ,介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　 10 %福尔马林液固定的脂肪瘤组织标本 8例 ,每例取材 6块 ,大小为 2 .5 cm× 2 cm× 0 .3cm ,并分为 6组。德国莱卡 TP10 2 0型全自动脱水机。1.2　方法1.2 .1　组织按常规方法脱水透明。1.2 .2　石蜡 (熔点为 5 6～ 5 8℃ ) 6 0℃ 1h× 3。1…     

病理切片中松节油代替二甲苯脱蜡

目前一般医院对石蜡切片常用二甲苯脱蜡 ,但是二甲苯可引起部分人粒细胞减少 ,对人体健康有一定的影响 ,近3年来 ,我科采用松节油替代二甲苯脱蜡制片近 80 0 0张 ,取得了较满意的效果 ,现报告如下。方法与结果一、经自动脱水机处理的组织石蜡包埋制片。二、将石蜡切片放入 6 0℃恒温烘箱内烤 1～ 2小时 ,至脱蜡前 ,将烘箱温度提高至 75℃～ 85℃ ,烘烤 2～ 3分钟。三、烘好的切片放入松节油Ⅰ、Ⅱ两缺中各脱蜡 10分钟。四、自 10 0 %酒精 1分钟 ,95 %酒精 1分钟 ,80 %酒精 1分钟逐渐洗去松节油。五、自来水洗 1分钟后 ,放入苏木精中染色 3～…     

DNA聚合酶-I Klenow片段原位检测缺血性神经元的DNA早期断裂

1　材料和方法 1.1　材料　雄性4 mo龄左右SD大鼠36只,体质量250～350 g, 本校实验动物中心提 供 ;DNA聚合酶-I Klenow大片段、biotin-dATP, dGTP, dCTP, dTTP购自美国Gibco公司. 1.2　脑缺血模型　按文献［1］方法建立前脑缺血模型. 1.3　动物分组及组织切片制备　36只大鼠随机分组,实验组每组4只,假 手术对照组每组2 只,分缺血再灌注1, 2, 3, 6, 24和72 h 6个时间点,各组于相应时间点取脑,将其快速包 埋于干冰中,选择视交叉部位切片,片厚10 μm,储存于-70℃冰箱备用. 1.4　方法　玻片晾干,在40 g.L-1多聚甲醛固定30 min, 0.01 mol.L-1 PB S漂洗5 min×3次;在37℃湿温箱中,用含有10 μmol.L-1的dGTP, dCTP, dTTP标记 的dATP和40 U.mL-1的E.coli Klenow片段及50 mmol.L-1 Tris-HCl, 1 0 mmol.L-1 MgCl2, 50 mmol.L-1 NaCl的混合液(pH 8.0)孵育1 h, 0.01 mol.L-1的PBS液终止反应,然后在PBS/小牛血清白蛋白(0.5 g.L-1)中洗5 m in,再将生物素-卵白素-辣根过氧化物酶复合物(ABC 1∶300, Sigma)在PBS/小牛血清白 蛋白中孵育1 h,最后用0.5 g.L-1 DAB在PBS (0.01 mol.L-1 pH 7.4)和0.5 g.L-1 H2O2中显色.     

EDTA微波快速脱钙法

1材料和方法1．1材料固定后松质骨修成0．7cm×0．5cm×0．2cm；惠而浦微波炉AVM600型，功率900W，分七档；5种脱钙液：中性EDTA、PlankRycho液、10％硝酸．水溶液、Thoma’s液、Bouin＇s液。1．2方法微波设定在二档（160w），辐射smin，测量脱钙液温度，间隙Zmin，重复辐射3～4次后，以针顺利刺入骨组织为脱钙的标准。酸性脱钙液脱钙后，用5％硫酸钠水溶液碱化处理，微波辐射二档smin。中性EDTA脱钙无需碱化．常规石蜡制片，HE染色和免疫组化染色。2结果和讨论2．1经EDTA微波辐射脱钙的骨组织，石蜡切片完整，染色鲜艳，组织细胞…     

ASK SOLUTION染色液的应用评价

对新购置的ASK　SOLUTION网织红细胞染色液临床应用进行评价。方法 :收集 3 4例健康人标本经传统煌焦油蓝生理盐水溶液和ASK染色液染色后 ,在不同时间涂片计数网织红细胞百分数进行比较观察 ,传统煌焦油蓝盐水溶液染色 15～ 2 0分钟 ,ASK染色液染色 5～ 10分钟 ,经统计学处理两种方法P >0 .0 5无显著性差异 ,3 4例网织细胞百分数均值分别为 0 .86%、0 .88%。结果 :ASK染色时间短 ,红细胞内的RNA与新亚甲蓝染料作用充分 ,深蓝色颗粒清晰易见 ,不易漏检 ,背景清晰无杂质。结论 :ASK染色液可以取代传统煌焦油蓝染色液。     

硷变性试验(胎儿血红蛋白检查法)

(一)、操作: 1、静脉无菌采血3～4毫升加入一抗凝试管中。2、离心(2000转/分)5分钟,弃去血浆。3、用3～5倍生理盐水洗血细胞两次,每次离心(2000转/分)5分钟。4、用1·2%盐水洗血细胞一次,离心5分钟。