周期性应力条件下整合素过表达对大鼠软骨细胞的影响

目的：探讨周期性应力条件下整合素过表达对大鼠软骨细胞的影响。方法体外分离培养大鼠软骨细胞,随机分为上调组（A组,整合素过表达质粒的慢病毒转染）和对照组（B组,空白质粒的慢病毒转染）。将细胞置于周期性应力场中培养,采用Western blot法检测细胞外调节蛋白激酶1／2（ERK1／2）蛋白表达和磷酸化水平,实时定量荧光PCR检测蛋白聚糖和Ⅱ型胶原基因表达水平,细胞计数试剂盒（CCK‐8）检测软骨细胞增殖情况。结果 A组整合素表达高于B组（0.824±0.029 vs ．0.419±0.014）（P＜0．05）。与B组相比,在周期性应力作用下,A组ERK1／2磷酸化水平、蛋白聚糖和Ⅱ型胶原基因表达、细胞增殖均增加（P＜0．05）。结论整合素过表达可以促进周期性应力作用下软骨细胞的增殖和基质合成。     

IGF-Ⅰ与TGF-β2单独及联合应用对软骨细胞培养的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-Ⅰ）与转化生长因子-β2（TGF-β2）单独及联合应用对软骨细胞形态、增殖速度、黏多糖含量、Ⅱ型胶原含量及表型的影响.方法 采用酶消化法取兔软骨细胞并培养,于第2代时分别加IGF-Ⅰ及 TGF-β2.分为A（空白对照）、B（含IGF-Ⅰ）、C（含TGF-β2）、D（含IGF-Ⅰ及TGF-β2）组.用苏木精-伊红染色法、甲苯胺蓝染色观察软骨细胞形态,MTT法检测增殖速度,阿尔新蓝比色法检测黏多糖含量,免疫组化法检测Ⅱ型胶原含量及表型.结果 在维持细胞形态、细胞增殖速度、Ⅱ型胶原含量及表型方面,D组优于B组,C组次之,A组最差,差异均有统计学意义（P＜0.05）.在促进细胞外基质及黏多糖分泌方面,D组优于C组,B组次之,A组最差（P＜0.05）.结论 IGF-Ⅰ、TGF-β2能维持软骨细胞形态,促进其增殖及Ⅱ型胶原的分泌,并维持其表型,增加细胞外基质及黏多糖的分泌,联合应用有协同作用,可抑制软骨细胞在体外培养过程中的老化.     

人胰岛素样生长因子Ⅰ基因对兔关节软骨细胞的有效转染及表达

目的 研究人胰岛素样生长因子Ⅰ(hIGF-Ⅰ)基因构建的真核表达载体质粒对兔关节软骨细胞的有效转染和表达.方法 将hIGF-Ⅰ基因构建在pcDNA 3.1质粒上,经FuGENE 6介导转入兔关节软骨细胞;设未转hIGF-Ⅰ基因软骨细胞作对照.转染后第3天用RT-PCR技术检测hIGF-Ⅰ、Ⅱ型胶原和聚合素在mRNA水平的表达,用细胞爬片免疫组织化学和Western blot测定hIGF-Ⅰ在蛋白水平的表达.结果 RT-PCR显示hIGF-Ⅰ在转染组中琼脂糖电泳318 bp处见到相应的目的 条带,而对照组未出现目的 条带;Ⅱ型胶原和聚合素在转染和对照组中以β-actin为参照半定量检测分别增加到1.3倍和1.4倍(P<0.05).免疫组织化学显示转染组细胞爬片有hIGF-Ⅰ表达的棕黄色颗粒,对照组胞浆中未见棕黄色颗粒,转染组胞浆中出现大量的Ⅱ型胶原棕黄色颗粒.Western blot显示转染组细胞在7.6 KDa标记处有hIGF-Ⅰ的蛋白条带出现对照组则没有.结论 FuGENE 6介导的重组hIGF-Ⅰ基因真核表达载体质粒可有效转染兔关节软骨细胞,在mRNA和蛋白水平上有效表达hIGF-Ⅰ及Ⅱ型胶原,表达的hIGF-Ⅰ能在mRNA水平上增加Ⅱ型胶原和聚合素的合成,保持软骨细胞表型的稳定.     

非甾体抗炎药对人骨关节炎软骨细胞生长代谢的影响

目的观察非甾体抗炎药对人骨关节炎（OA）软骨细胞增殖和基质代谢的影响。方法培养原代人膝OA软骨细胞,实验设立对照组、塞来昔布组、双氯芬酸组、布洛芬组。药物对细胞增殖的影响应用免疫荧光法测定5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞内和培养上清液中蛋白多糖（PG）、Ⅱ型胶原的含量,并比较各组间水平差异。结果布洛芬组BrdU阳性率较其他组增高（P＜0.05）。双氯芬酸组软骨细胞上清液中Ⅱ型胶原含量较其他组增加（P＜0.05或P＜0.01）;布洛芬组软骨细胞上清液中PG含量较其他组增高（P＜0.05或P＜0.01）;诸药物组软骨细胞内Ⅱ型胶原和PG含量差异无统计学意义（P＞0.05）。结论布洛芬可刺激人OA软骨细胞增殖和促进细胞分泌PG,双氯芬酸可促进人OA软骨细胞分泌Ⅱ型胶原,未观察到塞来昔布对人OA软骨细胞增殖和基质代谢存在影响。     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏AT2受体及细胞因子mRNA表达的影响

目的研究氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏AT2受体及细胞因子mRNA表达影响.方法SD大鼠随机分成3组对照组、糖尿病组、氯沙坦治疗组(30 mg·kg-1·d-1,ig).实验第8周,应用RT-PCR技术检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍化生长因子-B(PDGF-B)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及Ⅳ型胶原的mRNA表达.同时用放免法检测大鼠肾皮质血管紧张素II(Ang II)含量.结果糖尿病大鼠尿蛋白排泄率(P＜0.01)、肾皮质Ang II水平(P＜0.05)较对照组明显升高;糖尿病组大鼠肾皮质TGF-β1、PDGF-B、TNF-α及Ⅳ型胶原的mRNA表达较对照组大鼠显著增加(P＜0.01);然而,糖尿病组大鼠肾皮质AT2mRNA表达却较对照组显著下降(P＜0.05),氯沙坦治疗能明显降低糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1、PDGF-B、TNF-α及Ⅳ型胶原的mRNA表达(均P＜0.05).治疗组AT2的mRNA表达则明显高于对照组(P<0.05)与糖尿病组(P＜0.01).结论糖尿病大鼠肾皮质AT2受体mRNA表达的下调可能与肾组织TGF-β1、PDGF-B、TNF-α及血管紧张素Ⅱ表达的增加有关.氯沙坦激活AT2受体的表达的机制可能与下调肾脏系列细胞生长因子的表达有关.     

细胞骨架中间纤维破坏对体外软骨细胞代谢功能的影响

目的探讨破坏中间纤维对体外软骨细胞代谢功能的影响。方法 2个月龄新西兰大白兔双膝关节全层软骨消化为原代软骨细胞,培养3d贴壁后,分为对照组和实验组,对照组用原代培养基继续培养,实验组在原代培养基中加入中间纤维破坏剂丙烯酰胺(终浓度为2.5mmol/L)。加药后第1、2天利用磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞早期凋亡率,第6天用细胞爬片苏木素-伊红(HE)染色观察细胞形态的改变,第3、6、9天用实时定量聚合酶链反应法测定软骨细胞Ⅱ型胶原、糖胺多糖以及基质金属蛋白酶(MMP)-13mRNA的表达量。结果实验组在加药后第2天软骨细胞的早期凋亡率高于对照组(P<0.05);和对照组相比较,实验组在加药后第6天HE染色观察到细胞形态不规则,呈多角形,胞核深染且分裂像增多,细胞基质减少;在加药后第3、6、9天检测到实验组Ⅱ型胶原和糖胺多糖的mRNA表达相对于对照组下降(P<0.05);在加药后第6、9天MMP-13mRNA表达显著增加(P<0.01)。结论中间纤维破坏后可以诱导软骨细胞的早期凋亡,致Ⅱ型胶原和糖胺多糖产生减少,而炎性因子MMP-13表达增多,可能是骨关节炎产生的一个重要环节。     

类胰蛋白酶对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的 观察类胰蛋白酶对肝星状细胞(HSC)增殖及I型胶原mRNA表达的影响,探讨类胰蛋白酶在肝纤维化中的作用.方法 用Percoll密度梯度离心法分离、培养大鼠HSC,经系列浓度类胰蛋白酶作用后,分组进行如下实验:用噻唑兰比色法(MTT)检测HSC的增殖:用RT-PCR法检测I型胶原mRNA的表达.结果 肥大细胞(MC)类胰蛋白酶(1～100ng/ml)能够促进HSC增殖及I型胶原mRNA的表达,此作用呈剂量依赖性(各实验组与对照组比较,P＜0.05).结论 肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于HSC,参与肝纤维化过程.     

不同氟浓度对大鼠原代软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响

目的：观察不同氟浓度对大鼠原代软骨细胞Ⅱ型胶原（ColⅡ）表达的影响，探明ColⅡ在染氟软骨细胞的表达意义。方法取1周龄健康SD大鼠，用机械‐酶消化法分离膝关节软骨细胞，经甲苯胺蓝鉴定后，取第三代细胞将实验分为对照组和染氟组（5mg／L、10mg／L、20mg／L、40mg／L）五组，培养3d后，经MTT检测各组细胞活力，并采用Westernblot、免疫组化检测各组细胞ColⅡ蛋白表达。结果NaF培养3d后，细胞活力在5mg／L、10mg／L组较正常组高，在40mg／L组较正常组低，ColⅡ蛋白的表达在10mg／L组较正常组高，在40mg／L组较正常组低，差异有有统计学意义（P＜0．05）。结论低浓度的氟对大鼠原代软骨细胞具有促进增殖作用，而高浓度具有抑制增殖作用，其机制可能与ColⅡ的分泌有关。     

DNA-PKcs影响肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu增殖及机制的研究

目的 检测DNA-PKcs对肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu增殖的影响及其相关机制,探讨DNA-PKcs在肝癌多药耐药的发生发展中的作用.方法 采用阳离子脂质体法将siDNA-PKcs转染Bel-7402/5-Fu细胞,cck-8法检测细胞增殖情况;流式细胞技术检测细胞周期;Western blot检测DNA-PKcs、TS蛋白的表达情况.结果 实验组与对照组比较,细胞增殖减少(P＜0.05);实验组S期细胞与对照组比较,细胞数减少(P＜0.05);DNA-PKcs、TS蛋白表达结果显示,实验组相比对照组蛋白表达下调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 DNA-PKcs的表达沉默能抑制肝癌耐药细胞Bel-7402/5-Fu的细胞增殖;其机制可能与沉默DNA-PKcs蛋白表达后,TS蛋白表达下调有关.     

瘦素对大鼠关节软骨细胞转化生长因子-β1表达的影响

目的探讨瘦素对大鼠关节软骨细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法培养大鼠关节软骨细胞,按实验方法将瘦素(浓度为10ng/ml)作用条件下培养的软骨细胞作为实验组、将单纯培养的软骨细胞作为对照组;于不同时间(12、24、36、48、72h)检测2组TGF-β1水平。结果 (1)采用细胞体外培养方法成功培养出大鼠关节软骨细胞,并通过形态观察和特殊染色得到证实。(2)实验组TGF-β1基因表达明显高于对照组,最佳时间为作用24～48h;继续瘦素刺激细胞增殖不明显,并有抑制作用的趋势。结论 (1)低浓度瘦素可显著提高软骨细胞的活性;(2)低浓度瘦素能有效维持大鼠关节软骨细胞的表型,抑制软骨细胞"去分化"和退变,并通过上调TGF-β1的mRNA表达促进细胞外基质II型胶原和蛋白多糖的合成分泌;(3)瘦素可加强TGF-β1的mRNA表达,以防止细胞外基质降解,有修复软骨的潜能。     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。