以S2-R2为引物PCR检测石蜡切片中的孢子丝菌

目的 探讨应用特异性引物PCR方法检测石蜡切片中孢子丝菌的可行性。方法 选取30份大连及10份长春地区临床疑诊孢子丝菌病的石蜡切片标本,采用改良的微波脱蜡、液氮研磨-CTAB破壁法提取DNA,以特异性引物S2-R2进行PCR扩增,与真菌培养结果进行比对。结果 30份大连地区标本中22份见阳性PCR扩增产物（73.33%）。真菌培养阳性的22份标本中20份PCR出现阳性扩增产物（91%）,真菌培养阴性的8份标本中2 份PCR出现阳性扩增产物。10份长春地区标本7份见阳性PCR扩增产物（70%）。结论 以S2-R2为引物的 PCR适用于孢子丝菌病石蜡切片中病原菌的检测。     

办班消息

由冉玉平教授负责的国家继续医学教育项目班《皮肤真菌病基础和临床研究新进展》将在成都举办。主要内容：真菌的分类与命名；酵母菌的鉴定、分型、分子生物学及念珠菌的临床和实验研究进展；浅部真菌病、隐球菌病、镰刀菌病、孢子丝菌病、着色真菌病、马尔尼菲青霉病的临床表现及治疗；马拉色菌的研究进展，包括最新的命名、分类及鉴定方法；与马拉色菌有关疾病的临床表现和治疗；甲真菌病的诊断、鉴别诊断、病理学及治疗；真菌与性传播疾病；皮肤癣菌、马拉色菌取材、镜检、染色、培养及鉴定；念珠菌、孢子丝菌、污染菌的小培养及菌落观察…     

皮肤真菌病基础和临床研究新进展学习班通知

由冉玉平教授负责的国家级医学继续教育项目“皮肤真菌病基础和临床研究新进展”定于2011年3月30日至4月4日在成都市举行。培训对象：皮肤性病科医师、综合医院医师和检验科技术人员、在读研究生等。培训主要内容：真菌的分类与命名；酵母菌的鉴定、分型、分子生物学及念珠菌病的临床和实验研究进展；浅部真菌病、念珠菌病、隐球菌病、镰刀菌病、孢子丝菌病、着色真菌病、马尔尼菲青霉病、组织胞浆菌病、皮炎芽生菌病、球孢子菌病、曲霉病、结合菌病；马拉色菌的研究进展，包括最新的命名、分类及鉴定方法；     

基于28S rRNA基因序列的巢式PCR方法快速检测甲真菌病病原菌种

目的应用基于28S rRNA基因序列的巢式PCR的方法快速诊断甲真菌病。方法液氮冷冻甲标本,微量法提取DNA,应用特异性引物,巢式PCR方法扩增DNA。结果本组共收集180例直接镜检和培养均为阳性的甲标本,First PCR 144例阳性,Nest PCR 168例阳性。其中127例标本经PCR扩增可产生约137bp目的片段,为红色毛癣菌;26例标本经PCR扩增可产生约102bp目的片段,为须癣毛癣菌;10例标本经PCR扩增可产生约445bp目的片段,为白念珠菌;5例标本经PCR扩增可产生约170bp目的片段,为曲霉。巢式PCR敏感性为93.33%(168/180),特异性为100%(168/168)。结论此方法是一种快速、敏感、特异的诊断甲真菌病的方法。     

从石蜡包埋组织中检测巴西副球孢子菌gp43和ITS1-5.8S-ITS2rRNA基因

巴西副球孢子菌病是由巴西副球孢子菌引起的一种地方性深部真菌病 ,主要流行于拉美国家 ,在日本被列为输入性真菌感染。为准确诊断本病 ,要求更敏感的方法检测病原真菌。作者报道应用两种套式ＰＣＲ检测实验感染巴西副球孢子菌的小鼠石蜡包埋组织中巴西副球孢子菌ｇｐ4 3及ＩＴＳ1 5 8Ｓ ＩＴＳ2ｒＲＮＡ基因。方法 :选择 9株巴西副球孢子菌 ,静脉注射孢子感染小鼠 ,2 8天后取主要脏器固定包埋成蜡块 ,分别切成 5 μｍ厚切片作组织病理检查和 10 μｍ厚切片提取ＤＮＡ。用ＰＡＳ和苏木精染色后计数切片中的真菌细胞数。以氯化苄法提取的该…     

石蜡包埋组织中麻风菌基因扩增试验初探

目的建立用石蜡包埋组织中麻风菌DNA进行基因扩增的试验.方法用Texpat试盒将石蜡切片脱蜡、破壁和释放麻风菌DNA并用100%乙醇沉淀纯化DNA,用引物RPOT(F)和RPUT (R)进行PCR.结果细菌指数大于1+的33份石蜡包埋标本,28份PCR阳性,细菌指数为0的标本PCR阴性.阴性对照呈阴性反应,阳性对照呈阳性反应,方法敏感度达0.04pgDNA水平.结论用本法可从福尔马林固定的石蜡包埋组织切片中释放麻风菌DNA,并获得满意基因扩增结果.     

巢式PCR诊断甲真菌病中红色毛癣菌和须癣毛癣菌

目的：评价巢式PCR诊断甲真菌病中红色毛癣菌和须癣毛癣菌的敏感性和特异性。方法：液氮冷冻甲标本,微量法提取DNA,应用特异性引物,巢式PCR方法扩增DNA。结果：36例直接镜检和培养均为阳性的甲标本,培养显示24例为红色毛癣菌,12例为须癣毛癣菌。巢式PCR中FirstPCR34例阳性,34例标本均产生了650bp目的片段;NestPCR32例阳性,32例中有22例标本产生了137bp的片段,为红色毛癣菌;10例标本产生了102bp的片段,为须癣毛癣菌。PCR敏感性为88．9％,特异性为100％。结论：巢式PCR是一种快速、特异和敏感的诊断甲真菌病中红色毛癣菌和须癣毛癣菌的方法。     

着色真菌病中色素沉着的病理意义

目的　探讨着色真菌病组织病理中色素沉着的意义。方法　取 3 5例着色真菌病 ,与临床和病理均相近的孢子丝菌病 2 6例、皮肤结核 14例对比分析。结果　着色真菌病组织病理的色素沉着与孢子丝菌病和皮肤结核的比较 ,差异均有显著性 (P均 <0 .0 0 5 )。结论　色素沉着对诊断着色真菌病有一定的意义 ,其原因可能与经皮排出现象有关。     

应用PCR技术快速鉴定申克孢子丝菌的实验研究

采用Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,用申克孢子丝菌种特异性引物分别对21株申克孢子丝菌的基因组DNA进行PCR扩增.成功提取21株申克孢子丝菌基因组DNA,并用申克孢子丝菌种特异性引物分别从21株申克孢子丝菌基因组DNA中获得长度为320 bp的扩增产物.以申克孢子丝菌特异引物为基础的聚合酶链反应法鉴定申克孢子丝菌简便、快捷、特异,可用于临床诊断.     

对几种皮下真菌病的新认识

真菌感染好发于具有免疫功能抑制者 ,正逐渐成为一个公共卫生问题。近来还出现了一些鲜为人知的真菌感染。通过对着色芽生菌病、孢子丝菌病、暗色丝孢霉病、皮下接合菌病、链状芽生菌病和马内菲青霉病等临床上较少见的 6种皮下真菌病的文献复习 ,就其病原体、临床表现、诊断及治疗等方面的进展进行了综述。     

手背深部真菌感染2例

报告2例手背深部真菌感染。例1女,46岁。右手背红斑、肿胀、脓疱半年余,脓液真菌培养鉴定为申克孢子丝菌。诊断:孢子丝菌病。例2女,53岁。左手背红斑、丘疹、脓疱4月,脓液真菌培养鉴定为裴氏着色真菌。诊断:着色芽生菌病。     

172例皮下组织真菌感染分析

目的了解近年来广东地区皮下组织真菌感染的临床流行病学特征及菌学动态变化。方法回顾分析了1991年1月-2004年12月间我科门诊172例皮下组织真菌病患者。结果①真菌学变化:申克孢子丝菌仍是皮下组织真菌感染最常见的致病菌,其次为念珠菌属、裴氏着色霉。但近7年孢子丝菌病病例数明显减少,由70．3％减少至50．6％。马尔尼菲青霉所致皮下组织感染迅速增多,由2．2％增长至9．9％,②年龄构成:患病数最多的为60岁以上患者,构成比为34．9％,近年15岁以下患者明显增多,由6．5％增至18．5％。③易感因子:仅74例(43．0％)患者有明确诱因,外伤最常见,蚊虫叮咬伤、HIV感染逐年增多。结论申克孢子丝菌仍是最常见致病菌,但近年发病人数明显减少。马尔尼菲青霉引起的皮下组织感染、儿童皮下组织真菌病近年日益增多。     

254例皮下组织真菌感染回顾性分析（1990-2019年）

 目的:了解广东地区皮下真菌感染的临床流行病学特征及致病菌菌学动态变化。方法：回顾分析1990年1月-2019年12月近30年我院皮肤科254例皮下组织真菌感染患者的一般特征、皮损组织病理、诊断及菌种分析。结果：平均每年确诊8.47例，患者平均年龄为47.78岁，男女患病率为1.46 ∶1，最常见感染部位为上肢（31.10%），31~60岁患者为主要感染人群（46.12%）。孢子丝菌病仍是最常见的皮下组织真菌感染（55.91%），但近20年其病例数有下降趋势。着色芽生菌病病例数近10年发病较前20年明显升高（P<0.05）。球形孢子丝菌和Fonsecaea monophora分别为孢子丝菌病及着色芽生菌病主要致病菌。结论：孢子丝菌病为最常见皮下真菌感染，着色芽生菌病例有增多趋势。基于原发与继发免疫缺陷疾病发病率的增高，少见菌种引起的感染在近10年明显增多。分子鉴定可为发现新致病菌、疾病的流行病学调查提供可靠依据。     

经呼吸道感染马尔尼菲青霉菌的动物实验研究

目的对不同来源马尔尼菲青霉菌(penicillium marneffei,PM)的致病力情况进行初步探讨。方法将实验组小鼠分为R组和H组,分别经呼吸道吸入接种分离自广西野生银星竹鼠的PM菌株(竹鼠寄生株)及广西地区马尔尼菲青霉病(peniciliosis marneffei,PSM)患者血液的PM菌株(人感染株)活菌悬液,7天后处死并解剖,肉眼观察肺脏感染情况;取左肺下叶组织行真菌培养并比较阳性率差异;取左肺上叶组织行病理切片观察了解其病理改变;取右肺组织匀浆接种PDA平板培养基25℃培养48h后计数菌落,比较二者肺组织菌载量,同时分析安慰剂组和空白对照组小鼠的情况。结果实验组小鼠(R组和H组)感染PM后发病率100%;两种不同来源的PM感染小鼠后肺脏肉眼观察无明显差异;感染不同来源PM的小鼠肺组织菌载量无差异;不同来源PM感染的小鼠肺脏病理改变无明显差异;安慰剂组小鼠有轻微病理改变;空白对照组小鼠无病理改变。结论两种不同来源的PM菌株经呼吸道吸入感染途径均可引起小鼠肺部致病;竹鼠寄生株PM与人感染株PM对小鼠的致病力无差异。     

Rapid identification of Sporothrix schenckii in biopsy tissue by PCR

Background The dimorphic fungus Sporothrix schenckii is the etiological agent of sporotrichosis, an important cutaneous mycosis with a worldwide distribution. At present, it is challenging to rapidly discover and identify Sporothrix schenckii in biopsy tissues nowadays. Aims To explore new methods for rapid diagnosis of sporotrichosis. Materials and Methods We screened specific primers for Sporothrix schenckii using 50 clinical isolates from patients with sporotrichosis. DNA was extracted from the lesions of 30 cases of clinically suspected sporotrichosis using the Graham s method of CTAB and amplified by PCR using the screened specific primers. Results The primer S2‐R2 was applicable for the identification of S. schenckii from different geographic areas and clinical types with high specificity and sensitivity. Twenty‐five out of the thirty cases (83.3%) amplified using the primer S2‐R2 showed positive bands. Further positive bands were observed in 95.6% of cases tested positive by fungal culture. Conclusions Using the PCR technique and specific primers, we developed a new diagnostic method that can rapidly diagnose sporotrichosis with tissues obtained from clinical biopsies.     

应用PCR-RFLP进行申克孢子丝菌的分子生物学鉴定

目的　探索一种简单、快速的申克孢子丝菌的鉴定方法。方法　应用真菌通用引物ITS1和ITS4对来源于不同地区及不同临床型别孢子丝菌病的 2 8株申克孢子丝菌以及 9种其他临床上重要的真菌进行PCR扩增 ,利用限制性内切酶HaeⅢ对PCR产物进行酶切分析鉴定。结果　所有 2 8株申克孢子丝菌和其他 9种真菌均扩增出一条约 3 5 0bp的片段 ,其中 2 8株申克孢子丝菌RFLP带型一致 ,与 9种其他临床上重要的真菌RFLP带型差异较明显。 结论　PCR RFLP可以为建立一种简单、快速鉴定申克孢子丝菌的方法提供依据。     

裴氏着色霉所致着色芽生菌病深圳首例报告及分析

目的　报告深圳首例裴氏着色霉 (Fonsecaeapedrosoi)所致着色芽生菌病 1例。方法　全面临床检查排除其他疾病 ;皮肤组织病理检查及皮损表面痂皮多次真菌培养、直接镜检证实为着色芽生菌病 ;菌种与标准菌株对照进行培养、鉴定确定为裴氏着色霉 ;临床系统抗真菌治疗观察。结果　组织病理HE染色于表皮角栓内和真皮浅层脓肿内见棕黄色厚壁孢子 (硬壳细胞 )。真菌学培养均为同一菌落生长 (3次 ) ,菌落呈暗棕色 ,绒毛状 ,紧凑感 ,镜下见喙枝孢型分生孢子梗和棕色分枝分隔菌丝。经伊曲康唑和特比萘芬联合治疗辅以高温灯照射 ,5个月后病情明显好转 ,各种真菌学检查阴性。结论　此例着色芽生菌病为深圳特区成立 2 0年来首次发现的病例 ,经联合治疗获成功     

淋巴管型孢子丝菌病1例

患者男,40岁,农民。右下肢可见线状浸润性斑块、结节、溃疡和结痂4个月。右下肢皮损组织病理示表皮下淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞和组织细胞浸润,可见多核巨细胞,有大量红细胞外溢。真菌培养可见孢子丝菌。     

Chromoblastomycosis

Chromoblastomycosis, together with phaeohyphomycosis and mycetoma, makes up the disease entities caused by the dematiaceous fungi. Most cases of chromoblastomycosis are caused by five genera of fungi: Fonsecaea compactum, Fonsecaea pedrosoi, Phialophora verrucosa, Cladosporium carrionii, and Rhino-cladiella aquaspersa. The disease has a cosmopolitan distribution but predominates in rural, agricultural settings. Clinically, chromoblastomycosis is hallmarked by verrucous nodules at the site of fungal implantation. Treatment involves surgical excision of the affected area, antimycotic agents, physical modalities such as temperature manipulation, or a combination of these.     

Epidemic cutaneous sporotrichosis: Report of 16 cases in Queensland due to mouldy hay

We report an epidemic of sporotrichosis in a south-east Queensland rural community. Sporotrichosis is a fungal infection due to the organism Sporothrix schenckii , typically presenting with cutaneous lesions. Sixteen cases of cutaneous sporotrichosis were seen over a 9 month period in the Darling Downs region of Queensland. All patients had had contact with a batch of mouldy hay presumed to be contaminated by Sporothrix schenckii . Nine of 16 patients were male; the youngest patient was aged 11 and the oldest was 67 years of age. Lymphocutaneous sporotrichosis was seen in 50% of patients; the rest demonstrated the fixed cutaneous form. No cases of disseminated cutaneous or systemic sporotrichosis were seen. One case demonstrated lymphangitis related to sporotrichosis. No apparent difference in the duration to diagnosis was demonstrated to exist between lymphocutaneous or fixed cutaneous types.