分泌抗HIVp24单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其初步鉴定

以含人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）核心抗朱ｐ２４全部氨基酸序列的重组蛋白ｐＧ１免疫小鼠，用免疫脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合，成功地建立了５株分泌抗ＨＩＶｐ２４单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株。经鉴定，这５株ＭｃＡｂ与乙肝核心抗原（ＨＢｃＡｇ），丙肝Ｃ区，ＮＳ－３区抗原不发生交叉反应，而与重组ｐ２４抗原产生特异反应，本组单抗的研制成功为建立检测ＨＩＶｐ２４抗原的方法奠定了基础。     

白细胞介素12真核表达载体对DNA疫苗诱导免疫应答的影响

目的 观察白细胞介素１２真核表达载体（ｐＷＲＧ３１６９）对ＨＢＶ－ＳＤＮＡ疫苗（ｐＣＲ３．１－Ｓ）诱导Ｂａｌｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２ｄ）的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５细胞（Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ）成瘤性的影响。方法 肌肉注射ＤＮＡ疫苗主白细胞介素１２真核表达载体,背部皮下接种Ｐ８１５－ＨＢＶ－Ｓ细胞,观察成瘤情况,４ｈ＾５１Ｃｒ释放法检测小鼠脾细胞ＣＴＬ活性。结果：对     

受体导向药物L－HSA－AraAMP体外抗病毒效应的实验研究

以乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ转染的细胞株２．２．１５细胞培养上清液中ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ滴度及细胞内ＨＢＶＤＮＡ中间体的变化作为药物评价指标，应用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色分析法测定细胞毒性。结果表明：乳糖化人血清白蛋白单磷酸阿糖腺苷（Ｌ－ＨＳＡ－ＡｒａＡＭＰ简称交联物）与ＡｒａＡＭＰ具有相似的抗病毒效应。二者对ＨＢｓＡｇ最高抑制率分别为５０％，６３％，对ＨＢｅＡｓ最高抑制率分别为６２．６％，６７．２％，５００μｇ／ｍｌ交联物与１００μｇ／ｍＩＡｒａＡＭＰ对ＨＢＶＤＮＡ有相似的抑制作用。交联物无明显细胞毒性（ＣＤ５０＞２０００μｇ／ｍｌ），ＡｒａＡＭＰ有明显细胞毒性（ＣＤ为６５８．５±１８０μｇ／ｍｌ），对ＨＢｅＡｇ抑制的选择指数分别为＞４．８，１．７。展示了受体导向抗病毒药物的良好前景。     

病毒性角膜炎的病原学诊断新法--多聚酶链反应

目的：评价多聚酶链反应技术对病毒性角膜炎病原学诊断的价值。方法：应用多聚酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ ＰＣＲ）技术检测１２例患者眼结膜囊分泌物中有无单纯疱疹病毒（Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ Ｖｉｒｕｓ,ＨＳＶ）,巨细胞病毒（Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｙ Ｖｉｒｕｓ,ＣＭＶ）或ＥＢ病毒（Ｅｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ,ＥＢＶ）的脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）片段。     

高压氧对人血淋巴细胞DNA氧化损伤的影响

目的　探讨高压氧（ＨＢＯ）治疗对人体血液淋巴细胞ＤＮＡ氧化损伤的影响。方法　１６ 名健康男性志愿者随机分为甲、乙两组,均置于ＨＢＯ（０．２５ ＭＰａ）治疗环境中,每天暴露２０ 分钟３次,中间吸空气５分钟,共３ 天。甲组单纯ＨＢＯ处理,乙组在ＨＢＯ暴露前三天开始静脉滴注维生素Ｃ１ ｇ,每日１ 次。分别于第一天ＨＢＯ暴露前和暴露后即刻、１２ 小时、２４ 小时,第２ 天和第３ 天ＨＢＯ暴露前和暴露后即刻采集静脉血样,经单细胞凝胶电泳分析结合ＦＰＧ定量检测ＤＮＡ碱基的氧化损害。结果　第一天ＨＢＯ 暴露后即刻、１２ 小时较暴露前明显存在氧化损害（Ｐ＜ ０．０１）,第一天ＨＢＯ 后２４ 小时未见明显ＤＮＡ氧化损害（Ｐ＞ ０．０５）;第２天和第３天ＨＢＯ暴露后即刻未见明显ＤＮＡ 氧化损害（Ｐ＞ ０．０５）;预先注射维生素Ｃ的乙组第一天ＨＢＯ暴露前、后均未见明显ＤＮＡ 氧化损害（Ｐ＞ ０．０５）。结论　ＨＢＯ治疗后立即对ＤＮＡ碱基产生氧化损害;２４小时内机体抗氧化防御系统能力提高,ＤＮＡ 碱基氧化损害消失;抗氧化剂维生素Ｃ可以防止这种损害。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCVRNA检测及其临床意义

应用套式ＰＣＲ检测了８８例丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ；结果发现：慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙肝患者（Ｐ＜０．００１）；急、慢性丙肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性者（Ｐ＜０．００１）；少数患者血清中ＨＣＶＲＮＡ阴性，ＰＢＭＣ中可测及，部分患者血清抗一ＨＣＶ阴性，而血清ＨＣＶＲＮＡ阳性．提示：血清ＨＣＶＲＮＡ检测有助于抗－ＨＣＶ阴性丙肝的诊断和早期诊断；丙肝的肝损害可能与ＨＣＶＲＮＡ血症有关；ＰＢＭＣ中ＨＣＶ感染在丙肝的慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用；ＰＢＭＣ中可贮存ＨＣＶＲＮＡ。     

戊型肝炎病毒F86株的某些生物学性状及分子生物学特征的鉴定

目的：对法国赠送的戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ,ＨＥＶ）Ｆ８６株进行生物学性状与基因特征的鉴定,并与我国分离的８７Ａ株病毒进行比较。方法：用常量法测定病毒的血凝滴度;微量滴定法测定在２ＢＳ、Ａ５４９、ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中的病毒滴度;腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,３周后取血清进行抗体检测;利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从接种病毒的细胞培养液中直接检测病毒ＲＮＡ,ＰＣＲ阳性产物纯化回收后克隆并测序。结果：Ｆ８６株病毒血凝试验阴性;在２ＢＳ、Ａ５４９细胞中连传３代,病毒滴度稳定,在ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中病毒滴度稍低;在接种Ｆ８６株病毒的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠中可检出特异性抗体;在其细胞培养物中检出ＨＥＶ聚合酶区一段核苷酸序列,测序结果与我国８７Ａ株的同源性为９８．７％。结论：Ｆ８６株病毒不能凝集人Ｏ型红细胞,对２ＢＳ、Ａ５４９及ＬＬＣ－ＭＫ２细胞均敏感,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠不致病。部分序列的测定结果表明该株病毒确为ＨＥＶ,从而由国外实验室证实ＨＥＶ可用人源性细胞分离。     

我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA体外RNA转录物感染性的研究

目的：研究我国登革２型病毒４３株（Ｄ２－４３）基因组全长ｃＤＮＡ体外ＲＮＡ转录物的感染性,为进一步阐明登革２型病毒的致病机制及探索其新型疫苗奠定基础。方法：用ＳＰ６ＲＮＡ聚合酶系统制备Ｄ２－４３基因组全长ｃＤＮＡ的体外ＲＮＡ转录物,纯化后经电穿孔法转染Ｃ６／３６细胞,观察致细胞病变作用以判断其感染性。从病变的细胞和培养上清中提取总ＲＮＡ,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增及克隆测序的方法证实细胞病变确为ＲＮＡ转录物感染所致;同时收集可产生细胞病变的培养上清,再感染Ｃ６／３６细胞以进一步证实该体外ＲＮＡ转录物感染的稳定性。结果：以我国Ｄ２－４３病毒株基因组全长ｃＤＮＡ为模板制备的体外ＲＮＡ转录物可使Ｃ６／３６细胞产生病变,从病变细胞和培养上清中可扩增获得病毒特异的基因片段。在培养细胞中进行连续传代仍可产生细胞病变作用。结论：构     

重组人IL—2激活外周血干细胞移植物的抗白血病细胞毒 …

目的：观察重组人ＩＬ－２体外激活Ｇ－ＣＳＦ动员的健康供者外周血干细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ，ＰＢＳＣ）移植物的抗白血病细胞毒作用，以及ｒｈＩＬ－２处理对ＰＢＳＣ移植物造血功能的影响。方法：细胞培养条件下，ＰＢＳＣ移植物与不同浓度ｒｈＩＬ－２（１０００，５００和２５０Ｕ／ｍｌ）共培养２４及７２ｈ，采用乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放法测定激活的ＰＢＳＣ移植物细胞毒作用，并应     

血啉甲醚PDT处理后血管平滑肌细胞增殖特性的研究

本研究通过固定平滑肌细胞ＰＤＴ作用后的存活率 ,测定了ＰＤＴ作用后第 2 4小时的平滑肌细胞的增殖细胞核抗原(ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＰＣＮＡ)表达情况 ,拟对血啉甲醚的ＰＤＴ作用于存活细胞的特点作一初步分析。方法 :平滑肌细胞培养经 0 2 5 %胰酶消化接种于 2 5ｍｌ培养瓶中 ,用ＤＭＥＭ培养基将血啉甲醚分别稀释成 15 μｇ/ｍｌ和 6 0 μｇ/ｍｌ,用其置换掉含 10 %新生牛血清ＤＭＥＭ培养液 ,置于ＣＯ2 培养箱 1ｈ。去掉含血啉甲醚的ＤＭＥＭ液 ,Ｈａｎｋ氏液冲洗两遍 ,加入新的培养液。…     

与HIV-1共感染的HHV-6毒株的分离、传代培养与鉴定

目的：对一株从中国河南省一名艾滋病患者体内分离的、可在MT4细胞上稳定传代的未知病毒29A进行鉴定，确定该病毒种类及型别。方法：用从该患者外周血单核细胞中分离的病毒株感染MT4细胞，获得可在该细胞上稳定传代的病毒株29A。通过细胞病变特征、电镜观察结果、HIV-1 p24抗原检测以及HIV-1 pol区基因扩增结果，对该毒株是否为HIV-1进行鉴别。在电镜下对病毒感染细胞的超薄切片进行观察，发现该病毒呈现疱疹病毒形态特征，因此设计人类疱疹病毒6型（HHV-6）U69、U16／U17、U60／U66三个不同基因片段的特异性引物并进行巢式PCR扩增，对扩增产物进行序列测定和结果分析。结果：该毒株HIV-1 p24抗原检测为阴性；用HIV-1 pol区特异性引物未扩增出目的片段；细胞病变形态不同于HIV-1引起的病变；电镜观察该病毒直径为160～200nm，明显大于HIV—1，表明该传代株不是HIV-1。用人类疱疹病毒6型（HHV-6）U69、U16／U17、U60／U66等基因的特异性引物均扩增出了目的片段，序列分析的结果表明该毒株为HHV-6病毒B亚型。结论：在国内首次从艾滋病患者的外周血淋巴细胞中分离出HHV-6，为进一步研究HHV-6和HIV-1的相互作用奠定了基础。     

抗-HIV单克隆抗体的筛选与鉴定

我们用HIV抗体阳性者血浆包被聚苯乙烯条,加入纯化的HIV组织培养抗原,通过夹心ELISA法,筛选出3株能分泌抗HIV单克隆抗体杂交瘤细胞,传代稳定。培养上清经Western blot染色鉴定含有抗-HIV gag蛋白。夹心ELISA法测得杂交瘤细胞培养上清中单克隆抗体滴度达到1∶6400,接种BALB/C小鼠获腹水抗体效价为1∶2430000。实验表明,用此单克隆抗体检测HIV病人血清抗体敏感、特异、稳定、重复性好,是一种良好的试剂。     

成人骨髓间充质干细胞培养上清对人脐血间充质干细胞体外培养及扩增的支持作用

目的：研究人骨髓间充质干细胞培养上清对人脐带血（HUCB）中所含有间充质干细胞（MSCs）的影响。方法：取脐带血，肝素抗凝，Percoll淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，低糖DMEM培养获得贴壁细胞层。与人骨髓间充质干细胞培养上清共孵育。流式细胞仪检测表面抗原。结果：脐带血的单个核细胞与人骨髓间充质干细胞培养上清共孵育经体外培养贴壁后出现形似纤维状细胞形态并表达与MSCs相关的抗原（CD13，CD44，CD71，CD166）。但不表达造血细胞抗原（CD34，CD45），这与源于骨髓的MSCs一致。结论：人脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞培养上清共孵育，对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。     

Static magnetic fields generated by a 0.5 T MRI unit affects in vitro expression of activation markers and interleukin release in human peripheral blood mononuclear cells (PBMC).

PURPOSE: To investigate the effects of the static magnetic field (SMF) generated by a 0.5 T superconducting MRI unit on in vitro activation marker expression and interleukin release in human peripheral blood mononuclear cell (PBMC) samples from healthy volunteers. MATERIALS AND METHODS: PBMC samples were split into two groups: exposed and sham-exposed under isothermal conditions. PBMC were exposed for 2 h at 24 degrees C to the SMF of a 0.5 T superconducting MRI unit. Immediately after exposure, both samples were cultured for 24 h at 37 degrees C with or without mitogenic stimulation by phytohaemagglutinin (PHA). PBMC were examined for expression of CD25, CD69 and CD71 by immunofluorescence analysis and supernatants were assayed to quantify IFN-gamma, TNF-alpha and IL-4 by ELISA. RESULTS: The 0.5 T SMF produced, after 24 h of culture, a reduced expression of CD69 from PBMC in vitro, that was enhanced after PHA stimulation. An increased release of IFN-gamma and IL-4 was also found, which was reduced after PHA stimulation. The release of TNF-alpha, IL-6 and IL-10 was not modified. CONCLUSIONS: The SMF generated by a 0.5 T superconducting MRI unit modified in vitro activation marker expression and interleukin release from human PBMC.     

重组人血清白蛋白在酵母中的表达及分析鉴定

目的：实现重组人白蛋白（rHSA)在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高效表达,方法：将本室构建的rHSA表达载体转化毕赤酵母,用G418筛选抗性克隆,SDS－PAGE与Western印迹检测并鉴定表达产物;采用生化法、电泳扫描及Brodford法、竞争ELISA3种方法测定摇瓶培养条件下rHSA的表达量。结果：Western印迹分析发现转移至膜上的酵母表达产物能与抗人血清白蛋白单克隆抗体结合,相对分子质量与人血白蛋白一致,证明在酵母中成功地表达了rHSA。在甲醇诱导下摇瓶培养,rHSA表达量随诱导表达时间的延长而增加,第8天产量约为3．5g/L。结论：人血清白蛋白表达载体与毕赤酵母基因组整合,获得酵母表达株,摇瓶培养,该株表达量为3．5g/L。     

我国戊型肝炎病毒87A株实验感染恒河猴的研究

用组织培养分离的戊型炎病毒（ＨＥＶ）８７Ａ株病毒液，以后腿静脉内接种４只恒河猴，其中２只在感染后第５周血清转氨酶（ＡＬＴ）开始升高，最高值达到染前猴的将近２倍，升主后肝活检可见特征性病理学改变，并从混合粪便液中分离出相同的病毒；感染的动物ＨＥＶ特异性抗体全部转阳。而２只对照猴无上述感染症状。表明８７Ａ株是一种直病毒。