补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠移植瘤的抑瘤作用及MRP蛋白表达影响的研究

目的探讨补中益气汤对A549/DDP及A549细胞株荷瘤裸鼠移植瘤的的抑瘤作用及对MRP蛋白表达影响。方法体外培养A549/DDP及A549细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予低、中、高剂量补中益气汤治疗。测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织MRP蛋白的表达。结果顺铂使A549/DDP移植瘤体积无显著变化(P0.05),而A549移植瘤体积显著缩小(P0.05);联合补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P0.05),抑瘤率均增加(P0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积逐渐缩小,抑瘤率逐渐增加;顺铂上调A549/DDP移植瘤组织中MRP蛋白表达(P0.05),下调A549移植瘤组织中MRP蛋白表达(P0.05);联合补中益气汤使A549/DDP及A549移植瘤组织中MRP蛋白表达均下调(P0.05),随着中药剂量的增加,MRP蛋白水平越来越低。结论补中益气汤可有效减小移植瘤体积,增加顺铂的抑瘤率,下调MRP蛋白表达,且在顺铂敏感及顺铂耐药的肺癌组织中均有疗效。     

补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,mTOR表达的影响

探讨补中益气汤对A549/DDP移植瘤裸鼠中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,m TOR表达的影响。BALB/C裸鼠60只随机分为空白对照组、荷瘤对照组、顺铂组和补中益气汤高剂量+顺铂组(高联组)、补中益气汤中剂量+顺铂组(中联组)、补中益气汤低剂量+顺铂组(低联组),培养A549/DDP细胞(浓度为5×106个/m L),接种于各组,观察各组成瘤情况。给予相应治疗,14 d后取瘤组织固定、切片,免疫组织化学方法、Real-time PCR方法检测各组裸鼠移植瘤中Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,m TOR蛋白和mRNA的表达水平。结果显示补中益气汤联合顺铂可降低移植瘤体积,中联组和高联组的抑瘤率与顺铂组比较,差异有统计学意义(P0.05);与荷瘤对照组比较,中联组和高联组Bad,NF-κB,Survivin,m TOR的蛋白和mRNA的表达明显减少(P0.05),caspase-9的蛋白和mRNA在中联组和高联组的表达逐渐增多,与荷瘤对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);Bad,NF-κB,caspase-9的mRNA,中联组和高联组与顺铂组、低联组、荷瘤对照组比较有统计学意义(P0.05),低联组、顺铂组、荷瘤对照组两两比较,无统计学差异,各因子蛋白和mRNA的表达中联组和高联组比较,无统计学意义。结果表明补中益气汤与顺铂联合作用可抑制A549/DDP移植瘤的生长,补中益气汤抑制A549/DDP移植瘤的作用可能是通过调节Bad,NF-κB,caspase-9,Survivin,m TOR,促进细胞凋亡实现的。     

补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株裸鼠移植瘤作用及其机制的研究

目的探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP裸鼠移植瘤的作用机制。方法 60只裸鼠随机分为6组,空白对照组给予生理盐水0.5ml灌胃,其余5组以5×106/L的A549/DDP接种于裸鼠皮下,待成瘤后,分别给予生理盐水0.5ml灌胃,0.2ml顺铂腹腔注射同时生理盐水灌胃,0.2ml顺铂腹腔注射顺铂和高、中、低剂量的补中益气汤灌胃。观察A549/DDP细胞在各组裸鼠的致瘤率,计算抑瘤率;采用免疫组化方法、RT-PCR(real time PCR)检测移植瘤组织中PI3K、AKT的表达水平。结果补中益气汤高、中、低剂量组能不同程度的抑制移植瘤的生长,其中以高、中剂量组最显著,与顺铂组抑瘤率比较有明显的统计学差异(P0.05);移植瘤中PI3K、AKT蛋白表达和mRNA基因的表达在补中益气汤高、中、低剂量组中均有下降,高、中剂量组降低较多,与顺铂组和小剂量比较有统计学差异(P0.05)。结论补中益气汤联合顺铂对肺腺癌移植瘤的增殖有明显的抑制作用,补中益气汤能通过调控PI3K、AKT基因和蛋白的表达而干预顺铂的耐药机制,这种干预作用具有一定的量效关系。     

补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠A549/DDP细胞顺铂耐药的影响

目的:探讨补中益气汤对肺腺癌荷瘤裸鼠肿瘤细胞A549/DDP顺铂耐药的影响,并确定最佳用药浓度。方法:36只BALB/C裸鼠随机分为空载组,模型组,顺铂组,补中益气汤低、中、高剂量(1.46,2.92,5.84 g·kg~(-1))组。空载组接种转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)空载慢病毒转染的A549/DDP细胞,余接种TGF-β_1稳定过表达的A549/DDP细胞。药物干预后处死裸鼠。称量小鼠瘤重,计算抑瘤率;镜下计数肿瘤肝、脾、肺转移情况;病理观察肺组织形态学改变;免疫组化、蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测移植瘤中肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein,LRP),多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-related protein,MRP),P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达情况。结果:与模型组比较,补中益气汤组瘤重降低,肺转移结节数量减少,随着补中益气汤剂量增加,瘤重逐渐减小,抑瘤率上升,高剂量组效果最为明显(P0.05)。肝、脾未见明显转移结节。病理切片显示,模型组肺部结构紊乱,出现明显肺损伤,补中益气汤组肺泡、肺泡囊、肺间隔形态逐渐恢复,高剂量组效果最好。与空载组比较,模型组LRP,MRP,P-gp蛋白和mRNA表达均明显上调(P0.05);与模型组和顺铂组比较,补中益气汤中、高剂量组LRP,MRP,P-gp蛋白和mRNA表达明显下调(P0.05);高剂量组下调效果最为明显。结论:补中益气汤能抑制肺腺癌移植瘤生长及转移,减轻肺损伤,改善A549/DDP顺铂耐药,该作用有一定的量效关系,高剂量(5.84 g·kg~(-1))为最佳裸鼠体内用药浓度。     

补中益气汤含药血清逆转A549/DDP的顺铂耐药及对mTOR表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清对肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药的逆转作用及对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)表达的影响.方法:动物随机分组,制备补中益气汤高、中、低剂量血清(给药剂量分别为11.34,5.67,2.83 g·kg-1 ·d-1),将A549,A549/DDP细胞体外分为顺铂(DDP)组,空白血清+DDP组,含药血清高剂量+DDP组,含药血清中剂量+DDP组,含药血清低剂量+DDP组,细胞对照组,经过15％各组血清联合DDP不同浓度(10,20,40,80,100,200μmol·L-1)作用48 h,采用MTT法检测补中益气汤不同浓度含药血清对A549/DDP顺铂耐药的逆转作用;采用免疫荧光,免疫细胞化学,Western-blot方法检测mTOR的表达.结果:与DDP组比较,补中益气汤不同浓度含药血清作用于A549/DDP后IC50和耐药倍数均有显著降低(P＜0.05),以补中益气汤中剂量组(等临床剂量组)作用最为显著(P＜0.01),A549/DDP中mTOR的染色吸光度及荧光强度均明显减弱(P＜0.01),蛋白表达水平明显降低(P＜0.01).结论:补中益气汤能增强A549/DDP对顺铂的敏感性,并能通过降低细胞生存通路中mTOR的表达而有效逆转肺腺癌细胞的顺铂耐药.     

补中益气汤含药血清对A549/DDP中p-Akt和P-gp表达的影响

目的:研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)耐顺铂(DDP)作用及其对磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt)和P-糖蛋白(P-gp)表达的影响.方法:采用血清药理学方法制备含药血清,随机对照法将24只SD大鼠分为空白对照组(给生理盐水10 mL·kg-1),补中益气汤高、中、低剂量组(11.34,5.67,2.84 g·kg-1,10 mL·kg-1),每日ig给药1次,连续7d后提取血清.将A549/DDP分为空白血清组,补中益气汤高、中、低剂量含药血清组,阻滞剂组,高剂量含药血清联合阻滞剂(LY294002)组,MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,并计算耐药逆转倍数.免疫细胞化学法检测各组细胞中p-Akt和P-gp蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中Akt和P-gp的mRNA表达.结果:与空白血清组比较,补中益气汤中剂量以上的含药血清可明显降低A549/DDP对DDP的IC50(P＜0.05),并呈浓度依赖效应,与阻滞剂联合效果最佳(P＜0.05);与A549/DDP空白血清组相比,补中益气汤中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的p-Akt和P-gp的表达显著下降(P ＜0.01,P＜0.05),其中以高剂量联合阻滞剂组下降最多(P＜0.01);与A549/DDP空白血清组相比,中、高剂量含药血清组,阻滞剂组和高剂量联合阻滞剂组的P-gp的mRNA表达量都显著减少(P＜0.01,P＜0.05),中、高剂量含药血清组,高剂量联合阻滞剂组的p-Akt的mRNA表达量也显著减少(P＜0.05).结论:补中益气汤含药血清可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,与LY294002联合应用效果更佳,其逆转机制可能与减少细胞内p-Akt和P-gp的表达,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关.     

参芪扶正注射液对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用研究

目的:探讨参芪扶正注射液对非小细胞肺癌细胞顺铂耐药性的逆转作用以及机制。方法:将A549/DDP细胞随机分组,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,计算顺铂对非小细胞肺癌细胞的IC_(50)以及参芪扶正注射液对A549/DDP的逆转倍数。采用流式细胞术测算细胞凋亡率,采用Western blot法检测A549/DDP细胞中LRP蛋白表达。结果:采用MTT法测算A549/DDP细胞增殖抑制率,顺铂+参芪扶正注射液组顺铂对A549/DDP的IC_(50)为(19.840±1.337)μmol/L,顺铂为(43.517±3.842)μmol/L,参芪扶正注射液的逆转耐药倍数为2.19,流式细胞术测得参芪扶正注射液联合顺铂组A549/DDP细胞细胞凋亡显著高于空白对照组及顺铂组(P0.05),参芪扶正注射液联合顺铂对LRP蛋白抑制程度显著高于空白对照组及顺铂组(P0.05)。结论:参芪扶正注射液可在一定程度上逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂的耐药性,作用机制与加速A549/DDP细胞凋亡、下调LRP蛋白的表达有关。     

补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响

目的研究补中益气汤含药血清逆转人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP耐顺铂作用及对Survivin表达的影响。方法采用随机对照法将24只SD大鼠分为高、中、低剂量组和空白对照组,制备补中益气汤高剂量（补中益气汤1.134 g/mL,2 mL）、中剂量（补中益气汤0.576 g/mL,2 mL）、低剂量（补中益气汤0.284 g/mL,2 mL）含药血清,采用MTT法检测不同剂量和浓度的补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制效应,计算耐药逆转倍数;采用免疫细胞化学法、Western blot技术、免疫荧光三种方法检测Survivin在两细胞株中的表达。结果补中益气汤含药血清对A549和A549/DDP细胞有明显抑制作用,10%各剂量组抑制率均高于5%相应剂量组,且随着剂量浓度的升高,抑制率也逐渐升高;与10%空白组比较,10%中、低剂量组抑制率升高（P〈0.05）;10%中剂量含药血清作用后,A549和A549/DDP IC50均降低（P〈0.05）,逆转倍数均升高,对A549/DDP细胞的逆转倍数达到2.46,使A549/DDP对顺铂的耐药性下降;与本组A549比较,免疫细胞化学法、Western blot法、免疫荧光法均检测到A549/DDP细胞中Survivin的表达量均降低（P〈0.05）,与10%空白组比较,10%中剂量组A549/DDP均降低（P〈0.05）。结论 10%中剂量补中益气汤含药血清对A549及A549/DDP细胞都有抑制作用,并可逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药,其逆转机制可能与减少细胞内Survivin的表达,增强A549/DDP对化疗药物的敏感性有关。     

补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株移植瘤裸鼠脾、胃和肺中PI3K和AKT表达的影响

目的：探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株移植瘤裸鼠脾、胃、肺中PI3K/AKT信号通路的影响。 方法：60只裸鼠随机分为：空白对照组、荷瘤对照组、顺铂组、补中益气汤低、中、高剂量组。分别给予相应干预后,测量移植瘤体积,计算抑瘤率。应用免疫组化,Real-time PCR方法检测裸鼠脾、胃、肺组织中PI3K,AKT蛋白和基因的表达水平。 结果：不同浓度的补中益气汤联合顺铂能抑制移植瘤的生长,其中以中、高剂量组的抑制作用最强;荷瘤裸鼠的脾、胃、肺中PI3K,AKT蛋白和基因的表达均升高,以荷瘤对照组升高最显著,随着应用顺铂和补中益气汤浓度的增加,PI3K,AKT的表达逐渐降低,在脾、胃组织中与荷瘤对照组比较有统计学差异（P<0.05）,补中益气汤中、高剂量组与顺铂组比较有统计学差异（P<0.05）,与空白对照组比较无统计学差异。 结论：在肺腺癌移植瘤裸鼠中,脾、胃、肺组织中PI3K,AKT的蛋白和基因的表达增加,顺铂和补中益气汤可以降低PI3K,AKT表达,其降低程度与补中益气汤浓度可能存在一定关系;顺铂联合补中益气汤可降低脾、胃、肺中PI3K和AKT蛋白和基因的表达而使该通路接近正常,从而保护脾、胃、肺的功能,PI3K/AKT信号通路上可能有补中益气汤作用的靶点。     

益肺汤逆转裸鼠移植瘤多药耐药实验研究

目的:研究益肺汤对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP裸鼠移植瘤多药耐药逆转作用的机理。方法:建立A549/DDP裸鼠移植瘤模型,分为6组,每组10只,分别以生理盐水(对照组)、益肺汤低、中、高剂量(益肺汤低、中、高剂量组)、益肺汤联合顺铂(联合组)、顺铂(顺铂组)进行干预,观察移植瘤的生长状况,隔天测量一次瘤块体积,给药21天后,处死小鼠取瘤组织,称重,实时荧光定量PCR检测多药耐药蛋白(MRP)基因的表达。结果:对照组的移植瘤体积最大,增长最快,与其他组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合组与其他药物组比较,移植瘤体积最小,抑瘤率最高,差异均有统计学意义(P<0.05)。益肺汤低剂量组与中、高剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),而后二者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。益肺汤低剂量组与顺铂组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。q=1.37,益肺汤与顺铂在抑制肿瘤生长上有协同作用。实时荧光定量PCR检测的结果显示,益肺汤低、中、高剂量组及联合组的MRP基因的表达量均低于对照组,而顺铂组MRP基因表达量却高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合组、中剂量组及高剂量组三者相互比较,差异均无统计学意义(P>0.05),三者与益肺汤低剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:益肺汤能逆转A549/DDP移植瘤的多药耐药性,其逆转机制可能是通过下调MRP基因的表达来实现的。     

消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药相关蛋白的调控作用

目的探讨消岩汤含药血清对耐顺铂人肺腺癌A545659/DDP细胞多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)及其m RNA表达水平的影响,发现消岩汤对化疗耐药的作用靶点,为肺癌化疗耐药的临床治疗提供理论基础。方法 A549裸鼠皮下移植瘤模型ip给予等量生理盐水,2 mg/kg顺铂,消岩汤低、高剂量(20、40 g/kg)获得含药血清,选择耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞系作为获得性耐药模型,采用Western blotting免疫印迹法及RT-PCR技术,检测各组含药血清作用下A549/DDP细胞多药耐药基因MRP1、LRP及其产物MRP1、LRP蛋白的表达水平。结果与对照组相比,随着血清中药物浓度的增加,消岩汤低、高剂量组LRP与MRP1蛋白表达逐渐减弱(P0.05)。LRP及MRP1 m RNA水平也有所下降(P0.05),且随着药物浓度的增加,基因表达抑制越明显。结论不同浓度的消岩汤含药血清对MRP1、LRP及其m RNA表达均具有不同程度的抑制作用,且浓度越高,抑制作用越明显,即与剂量呈正相关,揭示消岩汤逆转肺癌耐药可能与抑制MRP1和LRP蛋白功能有关。     

参芪扶正注射液对肺癌细胞A549/DDP顺铂耐药性的逆转作用研究

目的:探讨参芪扶正注射液对于顺铂的耐药性A549/DDP细胞的逆转作用。方法:应用细胞毒性检测(CCK-8)、实时荧光定量PCR及Western blot鉴定细胞A549/DDP对于顺铂的耐药性。进一步用不同浓度的参芪扶正注射液预处理A549/DDP,通过以上3种方法检测A549/DDP细胞对于顺铂耐药性的变化。最后通过裸鼠成瘤实验,检测参芪扶正注射液的逆转耐药性的作用。结果:A549/DDP对于顺铂有明显的耐药性,A549和A549/DDP对于顺铂的IC50分别为9.89μmol/L和176.2μmol/L。A549/DDP相比于A549,多药耐药基因(multidrug resistanct,MDR1)和肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)的蛋白表达有显著的升高(P0.05)。当用低浓度(0.1 m L/L)、中浓度(1 m L/L)、高浓度(10 m L/L)的参芪扶正注射液预处理A549/DDP后,该细胞对于顺铂的耐药性随其浓度提高而降低,其半抑制浓度(IC50)分别为11.6μmol/L、30.3μmol/L、104.7μmol/L,并且参芪扶正注射液的预处理抑制了耐药基因MDR1和LRP和蛋白的表达。用中浓度的参芪扶正注射液预处理细胞A549/DDP后,也显著抑制了该细胞在裸鼠体内的成瘤能力(P0.05)。结论:参芪扶正注射液能够逆转A549/DDP对于顺铂的耐药性。     

补中益气汤对裸鼠肺腺癌移植瘤PI3K/AKT信号通路作用的研究

目的: 探讨补中益气汤对裸鼠肺腺癌移植瘤生长抑制作用及对磷脂酰肌醇3 激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase B,AKT)信号通路的影响。 方法: 50只裸鼠随机分为①正常对照组,②荷瘤对照组,③顺铂组,④顺铂联合补中益气汤组,⑤补中益气汤组。分别给予相应干预后,处死小鼠,计算抑瘤率;应用免疫组化方法、实时定量 PCR(real time PCR,RT-PCR)检测移植瘤组织中PI3K,AKT的表达水平。 结果: 顺铂联合补中益气汤组对移植瘤的抑制率最强,与其他各组比较有显著差异(P<0.05),顺铂和补中益气汤协同作用的q值1.201;移植瘤中PI3K,AKT蛋白和mRNA基因的表达在顺铂联合补中益气汤组显著降低(P<0.05)。 结论: 补中益气汤联合顺铂对耐顺铂肿瘤有协同抑制作用;补中益气汤能通过干预PI3K、AKT基因和蛋白的表达而增加顺铂对耐顺铂肿瘤的敏感性。     

浙贝母碱对A549/顺铂耐药肺癌细胞株核苷酸ERCC1基因及LRP表达的影响

目的观察浙贝母碱对肺癌A549/顺铂(DDP)耐药细胞切除修复互补基因1(excision repair cross-complementation 1,ERCC1)及肺耐药蛋白(lung resistant protein,LRP)表达的影响。方法体外培养肺癌A549/DDP细胞,将对数生长期的细胞分为空白对照组、DDP组、川芎嗪组(DDP加川芎嗪)及浙贝母碱组(DDP加浙贝母碱)。药物作用48 h后,采用RT-PCR法检测ERCC1 mRNA表达,细胞免疫荧光法检测细胞LRP表达水平。结果 DDP组与空白对照组ERCC-1 mRNA及LRP蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。与DDP组比较,川芎嗪及浙贝母碱组ERCC1 mRNA及LRP蛋白表达水平明显降低(P0.05);浙贝母碱组ERCC1 mRNA及LRP蛋白表达水平明显低于川芎嗪组(P0.05)。结论浙贝母碱可逆转肺癌A549/DDP细胞株的多药耐药,其作用机制可能与抑制ERCC1 mRNA表达及LRP表达有关。     

益肺汤对人肺腺癌耐顺铂细胞株移植瘤裸鼠P-gp基因表达和免疫功能影响的实验研究

目的:通过观察益肺汤对人肺腺癌耐顺铂细胞株(A549/DDP)移植瘤裸鼠脾脏指数和肺癌多药耐药P-糖蛋白(Pgp)基因表达的影响,探讨益肺汤对裸鼠免疫功能的影响和逆转肺癌多药耐药的作用机制。方法:建立A549/DDP裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组、顺铂组、益肺汤低剂量组、益肺汤中剂量组、益肺汤高剂量组、益肺汤中剂量+顺铂组,共6组,每组10只,分别给与相应的药物干预。给药21天后,处死小鼠取瘤组织和脾脏,称脾重,计算各组脾脏指数;检测瘤组织基因P-gp的表达情况。结果:与对照组比较,顺铂组的脾脏指数显著降低,益肺汤中、高剂量组的脾脏指数有所提高,差异均有统计学意义(P0.05);与顺铂组比较,益肺汤低、中、高各剂量组及益肺汤中剂量+顺铂组的脾脏指数均显著提高,差异均有统计学意义(P0.05)。益肺汤低、中、高各剂量组及益肺汤中剂量+顺铂组的P-gp基因的表达量均低于对照组,而顺铂组的表达量高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:益肺汤能提高裸鼠的免疫功能,逆转非小细胞肺癌多药耐药,其逆转机制是通过下调多药耐药基因P-gp的表达来实现的。     

补中益气汤含药血清干预A549/DDP细胞Bad、NF-κb、Caspase-9表达的实验研究

目的 探讨补中益气汤含药血清对A549/DDP细胞中Bad、NF-κb、caspase-9表达的影响。方法 用MTT法筛选最佳浓度的含药血清。用免疫印迹法、real time PCR方法检测A549、A549/DDP细胞各组中Bad、NF-κb、Caspase-9蛋白和mRNA的表达水平。采用SPSS 16.0进行数据处理,P0.05有统计学意义。结果 中剂量含药血清培养48h为最佳浓度含药血清;A549/DDP对照组中Bad、NF-κb蛋白和基因的表达明显高于A549对照组(P0.05),A549/DDP最佳含药血清组Bad、NF-κb的蛋白和基因表达减少,与A549/DDP对照血清组比较有统计学意义(P0.05)。A549/DDP对照组中caspase-9蛋白和基因的表达明显低于A549对照组(P0.05),A549/DDP最佳含药血清组caspase-9的蛋白和基因表达增加,与A549/DDP对照血清组比较有统计学意义(P0.05)。结论 补中益气汤含药血清抑制A549/DDP的作用可能是通过调节Bad、NF-κb、caspase-9蛋白、基因的表达,促进细胞凋亡实现的。     

益气除痰方调控未折叠蛋白反应抑制A549肺癌生长的研究

目的:探讨益气除痰方对BALB/c裸小鼠肺癌A549移植瘤的抑制作用及其机制。方法:人肺腺癌细胞A549接种BALB/c裸鼠40只,随机分为模型组(生理盐水)、顺铂注射液(0.002 g/kg)组、益气除痰方低剂量(3.0g/kg)组、益气除痰方高剂量(6.0 g/kg)组、联合用药(益气除痰方6.0 g/kg+顺铂注射液组0.002 g/kg)组。造模第8天,中药灌胃,1次/d,每次0.2 m L,连续14 d。第17天,顺铂注射液腹腔注射,1次/d,每次0.2 m L,连续5 d。第22天,麻醉处死裸鼠,检测瘤体积和瘤质量,计算抑瘤率。采用免疫组织化学法、Western blot法及RTQ-PCR法检测肿瘤组织中钙联蛋白(calnexin,CNX)及调控转录因子X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)的表达。结果:顺铂注射液组、益气除痰方高剂量组及联合用药组瘤质量及瘤体积较模型组显著降低(P0.05或P0.01),且联合用药组显著优于顺铂注射液组(P0.01)。免疫组织化学法、Western blot法及RTQ-PCR法结果均显示顺铂注射液组、益气除痰方高剂量及联合用药组CNX及XBP1的表达较模型组显著降低(P0.01),且联合用药组优于顺铂注射液组(P0.05或P0.01)。结论:益气除痰方能抑制A549肺癌生长,与顺铂联用能起到增效作用,其机制可能与下调相关分子伴侣蛋白CNX及XBP1的表达而抑制未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR),从而导致肿瘤细胞凋亡有关。     

复方大七气汤联合顺铂对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤Bcl-2/Bax表达的影响

目的:探讨复方大七气汤(compound Daqiqi decoction,CDQD)联合顺铂对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤细胞凋亡相关因子Bcl-2/Bax的影响,为临床治疗提供理论依据.方法:将成功建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型的40只荷瘤鼠随机分为5组(n=8):模型对照组、CDQD低、高剂量组、顺铂组、顺铂联合中药组,给药3周后处死所有荷瘤鼠剥离瘤体,测瘤体积、瘤重并绘制肿瘤生长曲线、计算抑瘤率,以RT-PCR法和Western blot法检测Bcl-2(B细胞白血病/淋巴瘤-2基因)、Bax(与Bcl-2相关的x蛋白)mRNA及蛋白量的表达.结果:①瘤重显示CDQD各剂量组瘤重均有一定程度减轻,与DDP组相比无统计学意义,顺铂联合中药组低于其余各组(P＜0.01);肿瘤生长曲线显示与模型组比较,各用药组瘤体积均有不同程度缩小(P＜0.01).②RT-PCR结果显示促凋亡基因Bax mRNA的表达:与模型组比较,各用药组表达增高(P＜0.01),其中顺铂联合中药组表达最高,与其余治疗组相比较差异有统计学意义(P＜0.01);抑凋亡基因Bcl-2 mRNA在顺铂联合中药组表达最低(P＜0.01),CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义.③Western blot法显示与模型组比较,各用药组表达增高(P＜0.01),顺铂联合中药组中Bax蛋白的表达最高(P＜0.01),CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义;Bcl-2蛋白在顺铂联合中药组表达最低(P＜0.01);CDQD高剂量组与顺铂组比较差异无统计学意义.结论:CDQD对卵巢癌皮下移植瘤具有促凋亡作用,其机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax表达,促进肿瘤细胞凋亡有关;并且与顺铂联合用药具有增效作用.     

补中益气汤对A549荷瘤小鼠脾组织Fas蛋白表达的影响

目的:研究补中益气汤对A549荷瘤小鼠脾组织中Fas蛋白表达的影响。方法:建立A549荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤实验,采用随机对照法将30只BALB/c小鼠分为正常组、空白对照组、中药高剂量组、中药低剂量组、西药组,除正常组外,余组荷瘤,成功后,每天灌胃相应药物1次,连续10天后取材。采用免疫组织化学检测脾组织中Fas蛋白的表达;逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测脾组织中Fas的mRNA表达。结果:正常组中Fas蛋白在细胞膜有表达,空白对照组出现较多棕黄色颗粒,与正常组比较,Fas表达明显升高(P<0.01);补中益气汤及顺铂作用后,Fas蛋白表达减少,与空白对照组比较,中药低剂量组、西药组Fas表达明显下降(P<0.05),中药高剂量组下降最显著(P<0.01)。中药高剂量组、中药低剂量组、西药组比较,Fas表达无明显变化(P>0.05)。与正常组比较,空白对照纽Fas的mRNA的表达量明显增加(P<0.01);经补中益气汤及顺铂作用后,Fas mRNA的表达减少,中药高剂量组、中药低剂量组及西药组与空白对照组的差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),而该3组的Fas mRNA的表达与正常组无明显差异。结论:补中益气汤可下调A549荷瘤小鼠脾脏中Fas蛋白的表达,从而促进机体免疫系统对肺癌细胞的杀伤。     

补中益气汤通过Nrf2/ROS通路调控线粒体途径细胞凋亡改善A549/DDP细胞顺铂耐药的分子机制

目的:探讨补中益气汤含药血清通过核因子E₂相关因子2(Nrf2)/活性氧(ROS)通路调控线粒体途径细胞凋亡改善人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞(A549/DDP)顺铂耐药的机制。方法:制备补中益气汤含药血清及培养A549/DDP细胞,并进行随机分组为空白组(10%空白血清)、顺铂组(10%空白血清+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤组(10%含药血清+20 mg·L^-1顺铂)、ML385组(10%空白血清+5μmol·L^-1ML385+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤联合ML385组(10%含药血清+5μmol·L^-1ML385+20 mg·L^-1顺铂)、叔丁基对苯二酚(TBHQ)组(10%空白血清+5μmol·L^-1TBHQ+20 mg·L^-1顺铂)、补中益气汤联合TBHQ组(10%含药血清+5μmol·L^-1TBHQ+20 mg·L^-1顺铂)...