激光共聚焦显微镜观察前胡丙素对新生大鼠缺氧再灌注心肌细胞内游离钙的影响

目的 激光共聚焦显微镜观察缺氧再灌注损伤对心肌细胞内Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]i）的影响，以及前胡丙素对模拟心肌缺氧再灌注过程中减轻钙超载的作用。方法 采用SD大鼠乳鼠进行心肌细胞培养，建立模拟缺氧再灌注模型。实验分4组：正常组：细胞正常培养；缺氧预适应组：预先缺氧2h，复氧1h，再缺氧12h后，复氧2h；前胡丙素预处理组：先予前胡丙素单体终浓度为100μmol／L 作用1h，再行缺氧12h，后复氧2h；模拟缺氧再灌注组缺氧12h，后复氧2h。细胞上清检测LDH值。心肌细胞以Fluo-3／AM荧光指示剂负载，应用激光共聚焦显微镜技术检测心肌细胞（[Ca^2＋]i）变化。结果 模拟缺氧再灌注组心肌细胞（[Ca^2＋]i）荧光强度值显著高于前胡丙素预处理组及缺氧预适应组（P〈0．01），前胡丙素预处理组与缺氧预适应组细胞内荧光强度无明显组间差异。结论 心肌细胞缺氧再灌注损伤导致Ca^2＋超载，而前胡丙素有明显减轻心肌细胞模拟缺氧再灌注时Ca^2＋超载的作用。应用激光扫描共聚焦显微镜技术可以直观地进行细胞内钙离子研究。     

三七总皂苷对酒精诱导骨髓基质干细胞分化影响的实验研究

目的：三七总皂苷能阻断受体操纵性钙通道，增强一氧化氮的扩张血管作用，改善微循环，具有抗缺血再灌注损伤的作用，关于三七总皂苷对酒精性骨坏死防治作用的研究尚少。实验拟观察三七总皂苷对酒精诱导兔骨髓基质干细胞成脂分化的抑制作用。 方法：实验于2006-11／2007-08在广西医科大学完成。①实验材料：三七总皂苷由江苏康宝制药有限公司提供（国药准字Z32020670）。4周龄大白兔由广西医科大学实验动物中心提供，清洁级，实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。②实验方法：采用密度梯度离心法与贴壁法相结合体外分离、培养兔骨髓基质干细胞。取第3代细胞，并随机分为3组：空白组：细胞在含10％胎牛血清DMEM培养基中培养，不加酒精和三七总皂苷；模型组：每次更换培养液时加酒精0．09mol／L：50mg／L三七总皂苷组：每次更换培养液时，加0．09mol／L酒精与三七总皂苷50mg／L：100mg／L三七总皂苷组：每次更换培养液时，加酒精0．09mol／L与三七总皂苷100mg／L。③实验评估：检测细胞内三酰甘油含量与碱性磷酸酶活性。 结果：①干预14d时，模型组细胞内碱性磷酸酶活性降低，明显低于三七总皂苷干预组和空白组（P〈0．05）。三七总皂苷干预两组细胞内碱性磷酸酶活性，与空白组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。②干预21d时，模型组脂滴最多，三七总皂苷干预两组较模型组明显减少（P〈0．05），空白组未见明显脂滴出现。③三七总皂苷干预组和空白组三酰甘油含量差异无统计学意义（P〉0．05），三七总皂苷干预组和空白组细胞内三酰甘油含擐低于模型组细胞内三酰甘油含量（P〈0．05）。 结论：三七总皂苷能抑制酒精诱导的兔骨髓基质干细胞成脂分化，而促进成骨分化，可能有治疗酒精性骨股头缺血性坏死的     

针刺对家兔超负荷运动骨骼肌细胞内钙离子活度的影响

目的：应用钙离子敏感微电极技术，分析肌肉损伤与细胞内Ca^2＋浓度的关系及针刺对骨骼肌细胞内Ca^2＋活度的影响。方法：实验于2000-09／2001—05在河北医科大学中医学院实验针灸实验室完成。选用同种健康青紫蓝家兔70只，随机数字表法进行分组，分1次针刺处理组和4次针刺处理组，1次针刺处理组30只，分为3个亚组，即针刺组10只，对照组11只，空白组9只。4次针刺处理组40只，分为3个亚组，即针刺组15只，对照组13只，空白组12只。针刺组和对照组通过固定在兔左后肢的表面电极使股四头肌反复被动强直收缩运动，空白组不予电刺激。制造超负荷运动状态的疲劳模型。同时针刺组选取家兔股外侧肌局部（相当于伏兔和粱丘穴位置）于第4天刺激运动结束后即刻进行第1次针刺，4次针刺处理组还将于其后的第1天上，下午，第2天上午各针刺1次，对照组和空白组除不针刺外，亦以同样方式固定于实验架上。标本经处理后通过自制并测定的钙离子敏感微电极进行细胞膜电位的测定，同时测定细胞内外Ca^2＋有效浓度的电位差，计算细胞内钙离子活度。组间比较采用t检验。结果：70只实验动物最终进入结果分析51只。包括1次针刺处理组中针刺组7只，对照组8只，空白组7只。4次针刺处理中针刺组12只，对照组7只，空白组10只。①家兔过度运动后，针刺组及对照组与空白组相比，骨骼肌膜电位的绝对值均显著降低[（64．3&;#177;1．38），（64．1&;#177;1．13），（80．7&;#177;3．09）-mV，P〈0．01]，细胞内钙离子活度显著升高[（1．39&;#177;0．029），（1．38&;#177;0．031），（0．14&;#177;0．018）mmol／L，P〈0．01]。针刺组与对照组相比，膜电位或细胞内钙离子活度的对比无显著差别（P〉0．05）。②运动结束后46h,针刺组膜电位绝对值与对照组比较，显著升高[（79．0&;#177;2．59），（67．6&;#177;1．58）-mV，P〈0．01]，针刺组膜电位的显著升高，与空白组膜电位基本接近[（81．3&;#177;2．69）-mV，P〉0．05]。细胞内钙离子活度值针刺组均细胞内钙离子活度值比对照组显著降低，但仍高于空白组，差别显著（P〈0．01）。结论：超负荷运动导致肌细胞超微结构的改变；细胞内钙离子活度升高；骨骼肌膜电位的绝对值均显著降低，可能是肌肉的损伤所致。针刺能够改善细胞内钙离子的代谢，从而促进超微结构损伤的修复。     

实验性脑缺血大鼠再灌注前后给予藻酸双酯钠对脑组织神经细胞内钙离子浓度及神经细胞凋亡的影响

背景：藻酸双酯钠具有选择性钙拮抗作用，从而产生神经保护作用。目的：观察局灶性脑缺血大鼠再灌注前后给予藻酸双酯钠对脑组织神经细胞内钙离子浓度的影响以及对神经细胞凋亡保护作用的差异。设计：随机对照观察。单位：中南大学湘雅医院神经内科和南华大学第一附属医院激光整形外科。材料：实验于2003—11／2004-04在中南大学湘雅医院神经内科实验室完成，选用雄性SD大鼠65只。大鼠随机分为6组，实验过程中脱失17只，剩余48只，每组8只。方法：假手术组仅切开颈部皮肤后缝合切口。缺血组、藻酸双酯钠5mg／kg缺血前组、藻酸双酯钠5mg／kg缺血后组、藻酸双酯钠10mg／kg缺血前组、藻酸双酯钠10mg／kg缺血后组建立右侧大脑中动脉缺血模型后，除缺血组外，其余4组分别在再灌前30min或再灌后5h经腹腔给予不同剂量的藻酸双酯钠或赋形剂。流式细胞术测量受损脑组织神经元细胞内Ca^2＋浓度及凋亡率，同时测定大鼠的神经功能障碍评分。主要观察指标：①藻酸双酯钠对右侧大脑中动脉缺血大鼠神经功能障碍评分、脑细胞内Ca^2＋荧光强度及神经元凋亡的影响。②右侧大脑中动脉缺血大鼠行为障碍评分与细胞内Ca^2＋荧光强度和凋亡相关性。结果：选取大鼠65只，脱失17只，纳入48只进人数据分析。①藻酸双酯钠对右侧大脑中动脉缺血大鼠功能障碍、大脑细胞内Ca^2＋荧光强度及凋亡率的影响：藻酸双酯钠5mg／kg缺血前组、藻酸双酯钠5mg／kg缺血后组、藻酸双酯钠10mg／kg缺血前组、藻酸双酯钠10mg／kg缺血后组神经功能障碍评分较缺血组明显减轻（1．80&;#177;0．21，2．20&;#177;0．23，1．20&;#177;0．11，2．00&;#177;0．22，3．40&;#177;0．65），再灌注前给药较再灌注后给药的功能改善更为明显；给予藻酸双酯钠后各给药组的Ca^2＋浓度较缺血组均有不同程度的下降，再灌前30min给予10mg／kg藻酸双酯钠组的Ca^2＋浓度下降最为明显，约下降70％；给药后缺血侧神经元凋亡率明显下降。并呈时间依赖性，再灌注前给药较再灌注后给药抑制凋亡作用更明显（5．68％，10．03％；4．000／19，9．91％）。②右侧大脑中动脉缺血大鼠行为障碍评分与细胞内Ca^2＋荧光强度和膜联蛋白／碘化丙啶凋亡相关性：大鼠行为障碍评分与细胞内Ca^2＋荧光强度和膜联蛋白／碘化丙啶凋亡检出率均呈明显的正相关（r=0．51，0．62，P〈0．05）；细胞内Ca^2＋荧光强度与膜联蛋白／碘化丙啶凋亡检出率亦呈正相关（r=0．84，P〈0．05）。结论：①藻酸双酯钠能通过抑制胞内钙离子浓度增高，发挥抗凋亡效应，从而起到神经保护作用，最终改善神经功能障碍。②其药效呈时间依赖性．再灌注前给药较再灌注后给药作用更明显。     

体外模拟缺血再灌注后海马细胞内质网活性变化

目的：通过采用D-273内质网荧光分子探针来观察内质网钙库在脑缺血再灌注中的变化和作用。 方法：实验于2004—09/2005—05在中国中医科学院针灸研究所形态室完成。实验选用原代培养的8．0-9．0d的新生大鼠海马细胞，实验分正常对照组和缺血再灌注模型组，正常对照组换有糖Earle液，正常条件下培养。缺血再灌注模型组模拟缺血将培养液换成缺氧缺糖的Earle液3．5h，模拟再灌注状态换回培养液12h。应用内质网荧光分子探针D-273染色。激光共聚焦显微镜静态扫描观察缺血再灌注模型组和正常对照组的胞内荧光强度。 结果：正常对照组细胞的平均荧光值为602&;#177;131（n=10），缺血再灌注模型组细胞缺氧缺糖3．5h后再灌12h后内质网的荧光值为310&;#177;44（n=10），出现了下降的趋势，缺血再灌注模型组细胞内质网荧光值非常显著地低于对照组（P〈0．01）。结论：体外模拟缺血再灌注海马细胞内质网活性下降，损伤模型成功；D-273可作为一种特异性内质网的荧光分子探针。     

丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导人腹膜间皮细胞氧化应激及其损伤的影响

【目的】研究丹参酮ⅡA对腹膜透析液（PDF）诱导人腹膜间皮细胞（HPMCs）氧化应激及其损伤的影响。【方法】体外培养的HPMCs同步后分为五组：A组即对照组（DMEM培养基＋完全培养基）;B组即腹膜透析液组（含4．25％PDF的完全培养基）;C组即丹参酮组（含100μmmol／L丹参酮的完全培养基）;C1组即丹参酮1组（含50μmol／L丹参酮ⅡA的PDF）、C2组即丹参酮2组（含100μmol／I。丹参酮ⅡA的PDF）,干预72h后（其中B组、C1、C2组为加热的PDF）,流式细胞仪及荧光显微镜检测线粒体膜电位的变化;荧光显微镜检测胞内钙离子浓度的变化。采用活性氧捕获剂二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯（DCFH—DA）孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度而测得细胞内活性氧水平。并检测上清液中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、和丙二醛含量;不同浓度丹参酮ⅡA干预48h后,MTT比色法检测不同浓度丹参酮ⅡA干预下细胞增殖活力。【结果】B组上清液丙二醛含量、胞内钙离子、细胞内活性氧水平较对照组及C1、C2组显著增加（P〈0．01）,超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶及线粒体膜电位水平显著降低（P〈0．01）。不同浓度丹参酮ⅡA组HPMCs的增殖活性显著高于B组（P〈0．01）,丹参酮ⅡA不同浓度间无显著差异（P〉0．05）。【结论】丹参酮ⅡA可以通过降低PDF干预下丙二醛含量、减轻钙离子负荷、维持线粒体膜电位的水平、保护抗氧化还原酶的活性来拮抗商业性PDF对HPMCs的氧化应激及其损伤。     

脉冲电磁场对成骨细胞-破骨细胞复合培养体系中成骨细胞膜电位及细胞内钙离子的影响

目的：探讨脉冲电磁场(pulsed electric-magnetic fields，PEMF)对体外培养成骨细胞-破骨细胞复合体系中成骨细胞膜电位及细胞内游离钙离子浓度的影响，为脉冲电磁场治疗骨质疏松寻找理论依据。方法：体外分离、培养1d龄SD乳鼠颅骨成骨细胞和四肢骨破骨细胞，利用共育培养板将两者培育在同一环境中；实验分空白组、维拉帕米组、河豚毒素组及维拉帕米+河豚毒素组，根据荧光探针DiBAC4(3)及Fluo-3／AM能与活细胞细胞膜及胞内钙离子特异性动态结合后发出荧光的特性，分别对各组成骨细胞进行膜电位和钙离子荧光染色，染色后利用流式细胞仪(flow cytometry，FCM)技术分别测量各组行PEMF处理前后荧光强度的改变，以间接反应细胞膜电位、细胞内钙离子浓度的变化。结果：在行PEMF处理前各组细胞细胞膜电位及细胞内钙离子浓度稳定在一定基线水平(空白组细胞膜电位及细胞内钙离子浓度的荧光基准值分别为：(37．68&;#177;1．81)和(164．24&;#177;2．82)，而在PEMF作用后，空白组细胞胞内膜电位荧光值于40s后开始升高，150s左右达峰值(75．05&;#177;2．27)，表明细胞膜电位出现了去极化；而钙荧光值的升高出现在PEMF作用后约60s时，120s后达到峰值(237．22&;#177;2．67)，且升高后在PEMF作用过程中一直稳定在一定水平。PEMF使细胞出现去极化的效应能被钠通道阻断剂河豚毒素所阻断，而钙通道阻断剂维拉帕米对其没有明显的影响；但河豚毒素及维拉帕米均能使PEMF升高细胞内钙离子浓度的效应受阻。结论：PEMF作用于成骨细胞钠离子通道引致细胞出现去极化，从而开放电压依赖型钙离子通道而升高细胞内钙离子浓度，钙离子作为细胞内第二信使，介导PEMF对成骨细胞功能的调节作用。     

类缺血后神经元内钙离子浓度变化及不同钙阻滞剂对其影响

目的：观察类缺血后神经元内钙离子浓度及细胞活性的变化，探讨缺血性神经元的损伤与细胞内钙离子的关系及不同钙阻滞剂的作用。方法：采用孕小鼠皮层神经元培养技术，应用相差显微镜观察培养的神经元形态结构，激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内钙离子浓度。结果：给予神经元类缺血处理10min后，神经元内钙离子浓度明显高于尼卡地平组（P＜0．01）。类缺血处理10min后再灌注2h细胞损伤程度较尼卡地平干预组有显著性差异。结论：尼卡地平可抑制神经元细胞内钙离子浓度的升高，降低缺血性神经元的损伤的程度。     

复方高渗液对低血容量休克大鼠心肌细胞Ca2+浓度及线粒体膜电位的影响

目的 探讨复方高渗溶液对低血容量休克大鼠心肌细胞Ca^2＋浓度及线粒体膜电位变化的影响。方法选用Wistar成年大鼠84只，随机分成高渗复苏组（HS组）和生理盐水复苏组（NS组）两组，制备休克模型后按不同时相（休克前、休克、复苏后5、15、30、60、90min）处死大鼠6只，取心室肌细胞培养传代，以Fluo-4／AM为游离钙荧光探针JC-1荧光染色，应用流式细胞仪分别检测不同时相心肌细胞Ca^2＋浓度及线粒体膜电位。结果①HS组在休克，复苏后5、15、30min各时间点的心肌细胞Ca^2＋浓度较休克前明显升高，线粒体膜电位较休克前显著降低（P〈0．01）；在复苏后印、90min心肌细胞Ca^2＋浓度和线粒体膜电位与休克时相比差异有非常显著性（P〈0．01）。②NS组在休克、复苏后各个时间点同休克前比较心肌细胞Ca^2＋浓度均明显升高，线粒体膜电位明显下降（P〈0．01）；复苏后各时间点与休克时比较差异无显著性（P〉0．05）。③HS组在复苏后印、90min心肌细胞Ca^2＋浓度及线粒体膜电位较NS组差别显著（P〈0．01）。结论①低血容量休克可引起大鼠心肌细胞Ca^2＋浓度升高，线粒体膜电位下降，可导致线粒体功能障碍。②复方高渗液不但能改善低血容量休克大鼠心肌细胞Ca^2＋浓度。而且能有效稳定其线粒体膜电位；应用生理盐水复苏，对心肌细胞Ca^2＋浓度及线粒体膜电位作用不显著。     

周围神经损伤后脊髓前角运动神经元内游离Ca~（2＋）的浓度

背景：神经损伤后可引起细胞膜上Ca2＋通道的开放,使细胞外Ca2＋内流,造成细胞内的钙超载。目的：观察臂丛神经根切断伤后相应脊髓前角运动神经元内游离Ca2＋浓度的变化。方法：健康成年雄性Wistar大鼠84只,分为3组：假手术组暴露臂丛神经不切断;对照组臂丛神经切断伤后不做其他处理;实验组臂丛神经切断伤后,给予腹腔注射Ca2＋阻带剂维拉帕米4mg/（kg？d）。于切断伤后12h,24h,48h,72h,1周,2周,4周每组随机以4只取材。结果与结论：周围神经损伤开始,对照组及实验组大鼠损伤侧脊髓前角运动神经元细胞内Ca2＋浓度开始升高,至伤后48h达高峰,此后逐渐下降,伤后1周,实验组已基本回至正常水平,但仍较假手术组高。说明神经损伤后相应神经元细胞膜上L型Ca2＋通道开放,Ca2＋内流进入细胞内,导致神经细胞内游离Ca2＋浓度增加,L型Ca2＋通道可以被维拉帕米阻断,减少神经损伤后的Ca2＋内流,减少神经细胞凋亡的数量。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

The characteristics of interpretation of results of analysis of protein amount in urine of pregnant women

The adequacy of implementation of present proteinuria diagnostic thresholds under examination of pregnant women was examined. The analysis was applied to all urine samples of pregnant women from December 2009 to March 20010. The amount of protein in urine was concurrently evaluated by turbidimetric analysis with sulfosalicylic acid, colorimetric analysis with pyrogallol red, "dry chemistry" technology (the diagnostic strips). It is established that the mentioned techniques of analysis of protein in urine provide independent results. The results of colorimetric analysis are characterized by better precision and adequacy. However, in case of pregnant women the diagnostic threshold of protein concentration should be shifted from 0.120 to 0.150 g/l.     

超声评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响

目的 探讨超声在评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响的价值。方法 回顾性收集经病理学证实为头颈部肿瘤、放疗前后的颈动脉超声资料以及其他基线资料完整的患者93例,比较放疗前后放疗侧颈动脉和非放疗侧颈动脉粥样硬化斑块和溃疡斑块的总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积。结果 放疗前后颈动脉超声检查的平均间隔时间为（6.1±1.9）年;放疗前放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积与非放疗侧比较差异均无统计学意义（P均>0.05）;放疗后放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积均较非放疗侧加重,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 放疗可导致头颈部肿瘤患者颈动脉粥样硬化斑块的形成和进展,且斑块具有易损性特点。