NVP-AAM077和Ro25-6981对全脑缺血小鼠海马神经元损伤及BDNF表达的影响

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)亚基NR2A和NR2B特异性拮抗剂对脑缺血/再灌注后海马CA1区神经元损伤的不同影响及其可能机制。方法制作三动脉阻断(3-VO)小鼠全脑缺血模型,小鼠随机分为假手术组、脑缺血/再灌注(I/R)对照组、NVP-AAM077(NVP)干预组和Ro25-6981(Ro)干预组;应用Fluoro-JadeB(F-JB)和Nissl染色检测海马神经元变性死亡和存活情况,Western blot对脑源性神经生长因子(BDNF)蛋白表达水平进行定量分析。结果①小鼠全脑缺血12min/再灌注3d后,海马CA1区出现选择性迟发性神经元死亡,NVP干预组增加了缺血所致的海马神经元死亡(P<0.05),而Ro干预组CA1区神经元存活数量明显多于缺血/再灌注组(P<0.01);②NVP干预能明显下调缺血/再灌注所致的海马组织BDNF蛋白表达升高(P<0.01),而Ro干预能明显上调BDNF蛋白的表达(P<0.05)。结论 NMDA受体亚基NR2A和NR2B在小鼠脑缺血/再灌注损伤中具有不同的作用,其机制可能与调节BDNF表达改变有关。     

蝙蝠葛酚性碱调节p-NR1和NR2A对脑缺血再灌注大鼠发挥神经保护作用

目的：探讨蝙蝠葛酚性碱（phenolic alkaloids of Menispermum dauricum,PAMD）对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用及其机制。方法：大鼠局灶性脑缺血模型采用大脑中动脉线栓法制作。动物随机分为假手术组,缺血再灌注组,PAMD低（25 mg·kg^-1）、中（50 mg·kg^-1）、高（75 mg·kg^-1）剂量治疗组。持续栓塞2 h拔出线栓,再灌注4 h,然后断头取脑。干湿重法求出脑组织含水量,伊文思蓝含量测定法观察血脑屏障通透性。分离皮层组织,免疫印迹方法检测NR1和NR2A及各自对应的磷酸化蛋白。结果：（1）PAMD可以减少脑缺血再灌注大鼠脑组织含水量（P<0.05）,降低脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性（P<0.05）;（2）与假手术组比较,缺血再灌注组NR1,NR2A,p-NR2A表达无明显变化,p-NR1表达减少（P<0.05）;与缺血再灌注组比较,PAMD使p-NR1表达增多（P<0.05）,NR2A表达减少（P<0.05）。结论：PAMD可通过调节p-NR1和NR2A对脑缺血再灌注大鼠发挥神经保护作用。     

五味子甲素对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响北大核心CSCD

目的初步研究不同浓度的五味子甲素(Schisandra A,Sch A)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP^+)引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,1 mmol/L MPP^+染毒同时分别给予1、3和5μmol/L Sch A处理48 h,Muse^(TM)细胞分析仪检测凋亡细胞数的变化;hoechst33342染色后激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞形态的改变;Western-blot检测各组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,1 mmol/L MPP^+染毒48 h可引起SH-SY5Y细胞凋亡细胞数明显增多;1、3和5μmol/L Sch A干预可明显抑制1mmol/L MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,且随着Sch A浓度的升高,凋亡细胞数明显减少。Western-blot实验结果显示,MPP^+组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,而Sch A干预组cleaved caspase-3蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 1 mmol/L MPP^+可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,而一定浓度的Sch A能有效抑制MPP^+引起的SH-SY5Y细胞凋亡,且该作用可能是通过抑制caspase-3蛋白活化实现的。     

五味子甲素对MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的初步研究不同浓度的五味子甲素(Schisandra A,Sch A)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ion,MPP~+)引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,1 mmol/L MPP~+染毒同时分别给予1、3和5μmol/L Sch A处理48 h,Muse~(TM)细胞分析仪检测凋亡细胞数的变化;hoechst33342染色后激光共聚焦显微镜进一步观察各组细胞形态的改变;Western-blot检测各组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平的变化。结果与对照组相比,1 mmol/L MPP~+染毒48 h可引起SH-SY5Y细胞凋亡细胞数明显增多;1、3和5μmol/L Sch A干预可明显抑制1mmol/L MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,且随着Sch A浓度的升高,凋亡细胞数明显减少。Western-blot实验结果显示,MPP~+组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高,而Sch A干预组cleaved caspase-3蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 1 mmol/L MPP~+可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,而一定浓度的Sch A能有效抑制MPP~+引起的SH-SY5Y细胞凋亡,且该作用可能是通过抑制caspase-3蛋白活化实现的。     

线粒体通透性转换孔对红景天苷减轻心肌缺血再灌注损伤的作用

目的探讨线粒体通透性转换孔(mPTP)在红景天苷减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中的作用和机制。方法使用Langendorff装置建立大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤模型。将60只SPF级健康雄性成年SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、红景天苷组(Sal组)和环孢菌素A组(CsA组)。用Western Blot法检测细胞色素C(Cyt-c)分别在细胞浆和线粒体中的表达情况;用免疫组化法检测活化型半胱天冬酶-9(cleaved caspase-9)和活化型半胱天冬酶-3(cleaved caspase-3)在各组心肌组织的表达水平;用线粒体肿胀实验法评估各组心肌的mPTP开放程度;酶联免疫分析(Elisa)法测定各组大鼠心肌组织中线粒体细胞色素C氧化酶(COX)和琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性。结果与Sham组比较,I/R组心肌组织中大量Cyt-c由线粒体释放到细胞浆中,cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达水平均显著上升,线粒体吸光度下降率明显升高,COX和SDH活性降低(P<0.05);与I/R组比较,Sal组和CsA组Cyt-c释放和线粒体吸光度下降均受抑制,cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达水平均下降,COX和SDH活性均升高(P<0.05)。结论红景天苷可通过抑制mPTP开放、保护线粒体功能来发挥心肌保护作用,其具体机制与减少Cyt-c的释放、抑制caspase-9和caspase-3的激活及提高COX和SDH的活性有关。     

右美托咪定对急性脑挫裂伤伴硬膜下血肿患者围术期的脑保护研究

目的:研究右美托咪定用于急性脑挫裂伤伴硬膜下血肿患者围术期对脑组织是否有保护作用,为指导临床应用提供理论依据。方法:本实验选取60例气管内全麻下行急性脑挫裂伤伴硬膜下血肿手术的患者,按手术时间顺序随机分为右美托咪定组D组（n=30）,和生理盐水对照组N组（n=30）两组。于入手术室后T₀,手术结束时T₁,手术后3h T₂,手术后8h T₃,四个时间点抽取静脉血4m L离心后取血清存放在-80o C低温冰箱,用ELisa法测定血清中NSE、S100β蛋白含量。结果:两组患者入室后血清中NSE和S100β水平差异无统计学意义（P>0.05）,两组T₁、T₂、T₃时间点S100β和NSE与T₀相比均不断升高（P<0.05）。D组患者T₁、T₂、T₃时间点NSE和S100β蛋白水平与N组比较明显降低,有统计学意义。结论:右美托咪定可以降低急性脑挫裂伤伴硬膜下血肿患者围术期的S100β蛋白、NSE浓度,有脑保护作用。     

NR2A反义寡核苷酸对短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的探讨NMDA受体亚单位2A(NR2A)反义寡核苷酸在短暂性脑缺血/再灌注大鼠海马神经元损伤中的保护作用,为研制和开发针对NR2A的特异性新药提供理论基础和形态学依据。方法健康♂SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和缺血/再灌注组。经生理盐水、错义寡核苷酸和反义寡核苷酸预处理后,以四血管阻断法建立短暂性全脑缺血(15min)/再灌注(1、2、3和5d)动物模型。在确定的时间点进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片(片厚8μm),然后行TUNEL反应、焦油紫染色、原位杂交染色以及免疫组织化学染色。结果短暂性脑缺血/再灌注(I/R)3d,大鼠海马CA1区出现大量的凋亡阳性细胞;I/R5d大鼠海马CA1区细胞严重受损,与对照组相比二组差异具有显著性(P<0.05)。经NR2A反义寡核苷酸预处理后,I/R3d和I/R5d海马CA1区的细胞凋亡和细胞损伤明显减轻,与对照组相比二组差异具有显著性(P<0.05)。NR2A反义寡核苷酸能抑制I/R1d NR2A mRNA表达和I/R2d蛋白质表达,与对照组相比差异具有显著性(P<0.05)。结论短暂性全脑缺血后,NR2A反义寡核苷酸能明显地减轻缺血诱导的大鼠海马CA1区细胞凋亡和细胞损伤,且这种作用与NR2A反义寡核苷酸特异性抑制NR2A及其mRNA的表达密切相关。     

姜黄素对缺血/再灌注大鼠海马神经细胞凋亡及NR2A、NR2B表达的影响

目的观察不同剂量姜黄素对大鼠全脑缺血/再灌注后海马神经细胞凋亡及N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR2A、NR2B表达的影响。方法采用SD大鼠四血管阻断模型,动物随机分为5组:假手术组(SH组)、缺血/再灌注组(I/R组)、姜黄素30、100、300mg·kg-1组(Cur30、100、300组),每组根据再灌注不同时间点(2h、6h、1d、3d、7d)又分5个亚组。HE染色观察海马神经细胞形态;TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡;免疫组化检测NR2A、NR2B蛋白在海马CA1区及CA3/DG区的表达。结果I/R组凋亡细胞多于SH组及Cur100组,Cur300组凋亡细胞多于Cur100组。姜黄素处理各组及SH组各时间点CA1区、CA3/DG区NR2A的表达均高于I/R组(P<0.05)。SH组及Cur100组CA1、CA3/DG区各时间点NR2B表达低于I/R组(P<0.05)。结论姜黄素减少缺血性神经细胞凋亡的发生可能与增加NR2A、降低NR2B蛋白表达有关;100mg·kg-1姜黄素抗凋亡作用最佳。     

二氢杨梅素诱导凋亡增敏顺铂抗肺癌A549细胞的研究

目的：探讨二氢杨梅素（dihydromyricetin,DMY）增强肺癌A549细胞对顺铂化疗敏感性的作用及机制,为肺癌减毒增敏治疗提供新思路。方法：体外培养A549细胞,分组（对照组、顺铂组、DMY组、顺铂+DMY组）干预细胞;倒置显微镜观察细胞生长状态;CCK-8检测各组细胞增殖情况;流式细胞术AV/PI双染检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白Parp、cleaved Parp、caspase-3、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2表达水平。结果：DMY联合顺铂对细胞的抑制作用显著高于单独应用DMY或顺铂组;流式细胞术AV/PI双染显示联合组的凋亡率显著高于单独用药组;蛋白印记结果显示联合组与单独用药组或与对照组比较总Parp及caspase-3蛋白表达显著降低,cleaved Parp及cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加,Bax蛋白水平升高的同时Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值显著升高。结论：DMY可以增强顺铂对A549细胞的治疗作用,其机制可能与抑制Parp表达介导的线粒体凋亡有关。     

辛伐他汀对创伤性脑损伤大鼠血清及海马NSE表达的影响

【摘要】目的通过观察辛伐他汀对创伤性脑损伤（TBI）大鼠神经元特异性烯醇化酶（NSE）在脑组织和血清中表达的影响,探讨辛伐他汀对大鼠TBI的治疗作用。方法8周龄的SD大鼠90只,随机分为假致伤组、对照组、治疗组,每组30只。对照组、治疗组参照改良的Feeney氏自由落体法制造TBI模型。治疗组大鼠于造模前晚及伤后每晚给予辛伐他汀10mg/kg灌胃;对照组及假致伤组同时给予等量淀粉灌胃。3组大鼠分别于伤后3h、12h、24h、3d、7d、14d取5只大鼠的颈总动脉血3mL,ELISA法测定NSE浓度;断头取脑,免疫组化法检测伤侧海马CA3区NSE表达。结果（1）ELISA法测定：对照组,伤后3h血清NSE即开始升高,24h至3d达高峰,14d仍高于假致伤和治疗组;治疗组,伤后3h血清NSE水平升高,24h达高峰,3d至7d下降,明显低于对照组,伤后14d接近假致伤组。（2）免疫组化检测：对照组伤后3h伤侧海马CA3区NSE光密度值下降,3d至7d达低谷,14d时仍显著低于假致伤组;治疗组的大鼠伤后3h伤侧海马CA3区NSE光密度值下降,12h至24h达低谷,但明显高于对照组,7d开始回升,14d时接近假致伤组水平。结论辛伐他汀可促进TBI后血清NSE水平的下降,提高损伤侧海马神经元的NSE表达,对TBI后大鼠损伤的神经元有保护作用。     

线粒体融合素2通过Ras-PI3K-Akt信号途径抑制缺血再灌注诱导的乳鼠心肌细胞凋亡

目的：研究线粒体融合素2（Mfn2）基因对缺血再灌注诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其相关的信号通路。方法：乳鼠心肌细胞经缺氧/复氧（H/Re）处理模拟心肌缺血再灌注损伤。用Mfn2基因的重组腺病毒（Adv-Mfn2）感染经缺氧复氧处理的乳鼠心肌细胞。采用TUNEL染色、ELISA、流式细胞术等方法检测Mfn2对缺血再灌注诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响。Western blot分析线粒体凋亡路径中Bcl-2蛋白、Bax蛋白、Caspase-9以及磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达变化。结果：TUNEL染色发现Adv-Mfn2感染乳鼠心肌细胞后,细胞凋亡较H/Re组和Adv-LacZ组显著减少。ELISA和流式细胞仪检测结果表明,Adv-Mfn2组心肌细胞凋亡较H/Re组及Adv-LacZ组明显减少,且这一作用呈时间依赖性。Western blot结果显示,Adv-Mfn2组中Bcl-2蛋白表达较H/Re组和Adv-LacZ感染组上升,Bax蛋白表达下降,各组中Caspase-9的表达变化与Bax相同,Adv-Mfn2组的p-Akt蛋白表达水平则较H/Re组和Adv-LacZ感染组明显上升。结论：Mfn2基因主要通过正向调控RasPI3K-Akt信号通路,促进Akt的磷酸化水平,使Bcl-2蛋白表达量增加,Bax蛋白表达量降低,抑制Caspase-9活化,从而抑制缺血再灌注诱导的乳鼠心肌细胞凋亡。     

外源性硫化氢后处理对大鼠心肌缺血/再灌注损伤线粒体通透性转换孔的影响

目的探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)供体——硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)后处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤时线粒体通透性转换孔(mitochondrial per-meability transition pore,MPTP)的影响。方法 60只♂SD大鼠,随机分为5组(n=12):空白组(Control)、缺血/再灌注组(I/R)、NaHS后处理组(N)、苍术苷组(A)、NaHS后处理+苍术苷组(N+A)。采用Langendorff离体心脏灌注模型。Con组持续灌注120 min,其余各组均平衡灌注30 min,全心缺血30 min,复灌60 min。其中,N组复灌即刻给予含有NaHS的K-H液后处理,A组复灌初给予含有苍术苷(MPTP特异性开放剂)的K-H液灌注10 min,N+A组在NaHS处理后,给予苍术苷处理10 min。记录各组平衡末、复灌10、30、60 min心功能指标。复灌末各组取心脏,TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况,氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法分析心肌梗死面积。结果与I/R组相比,NaHS后处理组可改善缺血/再灌注损伤心功能的各项指标(P<0.05),减少心肌梗死面积(P<0.05),降低凋亡指数(P<0.05)。苍术苷则可以取消NaHS的作用。结论外源性H2S后处理能减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤,该作用与其抑制MPTP开放有关。     

Akt/GSK-3β/eNOS 通路在藏红花酸保护离体大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 研究藏红花酸 （CRO） 对离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用, 探讨其与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 （Akt） /糖原合成酶激酶 （GSK） -3β/一氧化氮合酶 （eNOS） 信号通路的关系。方法 SD 大鼠 40 只, 随机数字表法均分为正常（N）组、 缺血再灌注（IR）组及 5、 10、 15 mg/L 加药（CRO1、CRO2、 CRO3）组, 比较再灌注 30 min 时各组心率（HR）, 冠脉流量 （CF）, 左心室内压测定(LVDP、 LV+dp/dtmax、 LV-dp/dtmax)。灌流结束 TTC 心肌染色评估梗死范围,分光光度法测定肌浆乳酸脱氢酶 （LDH） 和肌酸激酶 （CK-MB); Western blot 检测各组心肌组织内 Akt、 磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-Akt )、 GSK-3β、 磷酸化的糖原合成酶激酶 (p-GSK) -3β、 eNOS、 磷酸化的一氧化氮合酶（pNOS）。结果 IR 组再灌注 30 min 时 HR、CF、LVDP、LV+dp/dtmax、 LV-dp/dtmax 较 N 组及加药组降低, 心肌梗死面积较加药组增大, LDH、 CK-MB 表达较 N 组及加药组增加 （均 P < 0.05）, CRO3组再灌注指标较 CRO1组升高, 梗死面积降低, LDH、 CK-MB 表达减少 （P < 0.05）。IR 组 Akt、 GSK-3b 及 eNOS 较 N 组及加药组的表达差异无统计学意义, 但 p-Akt、 p-GSK-3β及 p-NOS 与 N 组及加药组降低, 且 CRO3组较 CRO1组增加（均 P < 0.05）。结论 藏红花酸能够减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤, 其作用机制可能与激活 Akt/GSK-3β/eNOS 通路并影响其磷酸化水平有关。     

Sulforaphane improves outcomes and slows cerebral ischemic/reperfusion injury via inhibition of NLRP3 inflammasome activation in rats

Ischemia/reperfusion (I/R) injury has been correlated with systemic inflammatory response. In addition, NLRP3 has been suggested as a cause in many inflammatory processes. Sulforaphane (SFN) is a naturally occurring isothiocyanate found in cruciferous vegetables, such as broccoli and cabbage. While recent studies have demonstrated that Sulforaphane has protective effects against cerebral ischemia/reperfusion injury, little is known about how those protective effects work. In this study, we focus our investigation on the role and process of Sulforaphane in the inhibition of NLRP3 inflammasome activation, as well as its effect on brain ischemia/reperfusion injury. Adult male Sprague–Dawley rats were injected with Sulforaphane (5 or 10 mg/kg) intraperitoneally at the beginning of reperfusion, after a 60 min period of occlusion. A neurological score and infarct volume were assessed at 24 h after the administration of Sulforaphane. Myeloperoxidase (MPO) activity was measured at 24 h to assess neutrophil infiltration in brain tissue. ELISA, RT-PCR and Western blot analyses were used to measure any inflammatory reaction. Sulforaphane treatment significantly reduced infarct volume and improved neurological scores when compared to a vehicle-treated group. Neutrophil infiltration was significantly higher in the vehicle-treated group than in the Sulforaphane treatment group. Sulforaphane treatment inhibits NLRP3 inflammasome activation and the downregulation of cleaved caspase-1, while reducing IL-1β and IL-18 expression. The inhibition of inflammatory response with Sulforaphane treatment improves outcomes after focal cerebral ischemia. This neuroprotective effect is likely exerted by Sulforaphane inhibited NLRP3 inflammasome activation caused by the downregulation of NLRP3, the induction of cleaved caspase-1, and thus the reduction of IL-1β and IL-18.     

缺血预适应对肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的机制研究

目的 探讨缺血预适应对肝脏热缺血再灌注损伤保护作用的分子机制。 方法 90 只成年清洁级 SD 大鼠随机均分为 3 组, A 组为假手术组, B、C 组建立 SD 大鼠肝脏热缺血再灌注损伤模型, 并对 C 组大鼠进行缺血预适应干预。 于缺血再灌注后 0、2、6、12、24 h 采集血标本测定丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）, 采用酶联免疫吸附（ELISA）技术检测肝细胞中肿瘤坏死因子（TNF）-α 及白细胞介素（IL）-1β 水平; 采集肝组织标本测定丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）, 流式细胞仪测定肝细胞线粒体膜电位。 结果 B、C 组大鼠的血清转氨酶、TNF-α、 IL-1β 及 MDA 水平均明显高于 A 组（P＜ 0.05）; B、C 组大鼠的凝血酶原活动度和胆碱酯酶低于 A 组（P＜ 0.05）; B、C 组大鼠肝脏 SOD 水平明显低于 A 组;C 组大鼠各项指标均优于 B 组（P＜ 0.05）。 缺血再灌注发生后肝细胞线粒体膜电位水平在 0 h 后即达到最低值, 此后呈逐渐上升趋势（P＜ 0.05）, 并且 C 组的肝细胞线粒体膜电位水平在各时段均高于 B 组（P＜ 0.05）。 结论 缺血预适应对肝细胞热缺血再灌注损伤具有一定的保护作用, 缺血预适应可以通过减少炎症因子 TNF-α 及 IL-1β 的释放, 提高 SOD 拮抗自由基的活性, 减轻线粒体损伤等途径发挥其保护作用。     

脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮质NR2A及NR2B受体表达变化

目的探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位NR2A/2B表达与缺血再灌注损伤的关系。方法建立局灶性大脑中动脉阻塞大鼠模型观察缺血2 h再灌6～96 h的组织病理学改变,实时荧光定量PCR及Western印迹法测定大脑皮质NR2A/2B mRNA及蛋白表达。结果大鼠缺血再灌注后6 h,皮质开始出现明显病理学改变,12 h可见血管内有淤血,24 h梗死区锥体细胞出现严重的核固缩、核溶解,几乎看不到正常神经元,48 h出现大面积角质化,96 h可见炎症细胞浸润。与假手术组相比,再灌组NR2A/2B mRNA于再灌注6 h即开始一直持续明显下降(P<0.01),再灌12和24 hNR2A/2B mRNA比值均为1∶2,偏离正常的1∶1,48 h两者的表达开始上调,至96 h NR2A/2B mRNA比值达到1∶1;再灌24 h后NR2A蛋白表达显著降低(P<0.05);NR2B蛋白于再灌6 h开始明显降低,一直持续到24 h(P<0.01),48 h开始上调,96 h后蛋白表达接近假手术组水平。结论缺血2 h再灌注24 h后神经元损伤最严重,并与NR2A/2B表达改变存在时间一致性和受体亚型选择性。     

Competitive binding of postsynaptic density 95 and Ca^2＋-calmodulin dependent protein kinase Ⅱ to N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B in rat brain

AIM: To investigate the interactions among postsynaptic density 95 (PSD-95), Ca^2 -calmodulin dependent protein kinase Ⅱα (CaMKⅡα), and N-methyl-D-aspartate receptor subunit 2B (NR2B) during ischemia and reperfusion in hippocampus of rats. METHODS: Brain ischemia was induced by four-vessel occlusion procedure in rats. Immunoprecipitation and immunoblotting were performed to study the interactions and phosphorylation of proteins. The association-dissociation of PSD-95 and CaMKⅡα to and from N-methyl-D-aspartate (NMDA) receptor induced by ischemia and reperfusion and the effects of 1-[N,O-bis-(5-isoquinolinesulfonyl)-N-methyl-L-tyrosyl]-4-phenyl-piperazine (KN-62, a selective inhibitor of CaMKⅡ) on these protein interactions were investigated. Coimmunoprecipitation and immunoblotting were performed for the studies of interactions among proteins. RESULTS: The alternations of the binding level of PSD-95 and CaMKⅡα to NR2B during ischemia and reperfusion demonstrated the negative correlation to each other. Pre-administration of KN62 through both cerebral ventricles inhibited the 10min ischemia-induced increase of the binding of PSD-95 to NR2B and, on the contrary, promoted the binding of CaMKⅡα to NR2B. CONCLUSION: PSD-95 competes with CaMKⅡ to bind to NR2B during ischemia and reperfusion in rat hippocampus.