合江佛手挥发油调控Bcl-2/Bax蛋白表达诱导人恶性胶质瘤U87细胞凋亡

目的：研究合江佛手挥发油诱导人恶性胶质瘤U87细胞凋亡及对凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法：采用不同浓度的合江佛手挥发油作用于人乳腺癌细胞MCF-7、人恶性胶质瘤细胞U87、人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞A549,以CCK-8法（Cell Counting Kit-8 assay）筛选体外抗肿瘤活性最强的细胞;Hoechst33342/PI、透射电子显微镜观察及Annexin V-FITC/PI双染法相结合检测U87细胞的凋亡;Western Blot检测U87细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果：合江佛手挥发油对MCF-7、U87、HepG2、A549细胞的IC50分别为（173.99±18.68）、（82.19±13.07）、（192.87±19.66）和（215.83±23.27）μg·mL^-1,其中对U87细胞抑制活性最强。合江佛手挥发油作用于U87细胞48 h后,Hoechst33342/PI、透射电子显微镜观察均可见核固缩、碎裂和凋亡小体等凋亡形态学改变。Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,合江佛手挥发油和阳性对照维甲酸组U87细胞凋亡率明显增高,与阴性对照比较,P<0.05或P<0.01,药物作用呈现出较好的剂量依赖关系。Western Blot法结果表明,Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值降低。结论：合江佛手挥发油通过下调Bcl-2/Bax蛋白表达的比值,明显诱导人恶性胶质瘤细胞U87细胞凋亡。     

基于ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨玫瑰花甲醇提取物对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨玫瑰花甲醇提取物（RE）对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响及潜在作用机制。方法：采用CCK8法检测不同浓度RE对PC-3细胞增殖的影响;采用Hoechst染色法和Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡;DCFH-DA检测细胞ROS水平;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3、Cyt-C、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达。结果：RE呈浓度依赖性抑制前列腺癌PC-3细胞增殖,24 h和48 h后的IC₅₀值分别为31.30 mg·mL^-1和16.76 mg·mL^-1;RE能显著诱导PC-3细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）,且呈现浓度依赖性;RE可显著提高PC-3细胞ROS水平（P<0.05,P<0.01）,且具有浓度依赖性;RE能显著上调PC-3细胞Bax、cleaved caspase-3、Cyt-C的蛋白表达及Bax/Bcl-2的比值（P<0.05,P<0.01）,显著下调Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,以上均呈现浓度依赖性。结论：本研究表明RE在体外有明显抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖作用,并可能通过调控ROS/PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导其凋亡,研究结果可为玫瑰花及其组方临床治疗前列腺癌提供实验依据。     

姜黄素增加HepG2细胞对顺铂敏感性的作用及机制研究

目的　探讨姜黄素对肝癌细胞株HepG2 对顺铂敏感性的影响及其作用机制。方法　采用不同浓度姜黄素（0、2.5、5、7.5、10 μM）及顺铂（10、20、40、80 μM）单用或联用处理HepG2 细胞株后,通过MTT 检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Real-time PCR 技术检测Survivin、Cyto-C、Bcl2、Bax 的基因表达情况;western blot 检测Survivin、Cyto-C、cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax 的蛋白表达。结果　姜黄素以浓度依赖性方式抑制HepG2细胞株Survivin 的mRNA 表达和蛋白表达（P<0.05）;姜黄素联合顺铂处理的HepG2 细胞增殖抑制率及细胞凋亡率较单用顺铂处理均明显增加（P<0.05）;姜黄素联合顺铂可显著抑制Survivin 的蛋白表达,降低Bcl-2/Bax 比例,增加Cyto-C、cleaved caspase-3 蛋白表达（P<0.05）。结论　姜黄素可增加HepG2 细胞对顺铂的敏感性,可能与其抑制Survivin 的表达,降低Bcl-2/Bax 比例,增加cleaved caspase-3、Cyto-C 蛋白的表达有关。     

尾加压素Ⅱ对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制研究

目的：探讨尾加压素Ⅱ（U-Ⅱ）对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制。方法：将体外培养A549细胞分为正常对照组、顺铂组（25μg/mL）及U-Ⅱ＋顺铂组（10-7mol/L U-Ⅱ＋25μg/mL顺铂）,TUNEL法测定A549细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测A549细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果：与正常对照组相比,顺铂组肺腺癌A549细胞的凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax表达明显升高（P〈0.01）;与顺铂组相比,U-Ⅱ则能够抑制A549细胞的凋亡,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达（P〈0.01）。结论：U-Ⅱ可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达从而抑制肺腺癌A549细胞凋亡。     

银杏内酯B对肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨银杏内酯B（Ginkgolide B,GB）抑制肺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用机制。方法：以人肺腺癌细胞A549、人肺鳞癌细胞NCI-H520、人非小细胞肺癌NCI-H1975共3种肺癌细胞株为实验对象,MTT法检测GB对肺癌细胞增殖的抑制作用;Transwell小室法检测GB对肺癌细胞侵袭力的影响;划痕法检测GB对肺癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测GB对肺癌细胞增殖周期、凋亡的影响;Western blot检测Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达。结果：GB对A549、NCI-H520及NCI-H1975细胞的生长抑制作用均呈时间和剂量依赖性,抑制率随着GB浓度的增加和处理时间的延长而升高;GB处理细胞后,小室膜下表面的细胞数与对照组相比明显减少,对A549、NCI-H520及NCI-H1975细胞的侵袭抑制率分别为35.6%、28.9%、30.2%;GB作用后肺癌细胞较对照组移行愈合率明显降低（P<0.05）。与对照组相比,低、中、高剂量的GB作用于肺癌细胞后,各给药组细胞G₀/G₁比例均明显升高（P<0.05）,细胞凋亡率显著增加（P<0.05）,并呈剂量相关性。并下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达（P<0.05）。结论：GB对肺癌细胞的侵袭迁移具有明显的抑制作用,对肺癌细胞生长的抑制作用与阻断细胞增殖周期、诱导凋亡有关。其作用机制与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平有关。     

白花前胡甲素联用低浓度紫杉醇对卵巢癌细胞紫杉醇耐药株A2780/TAX的作用研究

目的: 探讨白花前胡甲素(praeruptorin A, PA)增强卵巢癌A2780/TAX细胞对紫杉醇化疗敏感性的作用及机制,为卵巢癌的减毒增敏治疗提供新思路。方法: 体外培养A2780/TAX细胞,分组(对照组、紫杉醇组、PA组、PA+紫杉醇组)干预;噻唑蓝溴化四唑(MTT)法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测法检测细胞毒性;克隆形成实验评价细胞增殖能力;流式细胞术Annexin V-FITC/ PI双染法检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹实验检测Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase 3、Caspase 3、Cleaved PARP、PARP及 MMP9、MMP2的蛋白表达水平;划痕实验检测细胞迁移情况。结果: PA与低浓度紫杉醇联用显著抑制A2780/TAX细胞活力和增殖能力;流式细胞术Annexin V-FITC/ PI双染结果显示,联用组的细胞凋亡率显著高于紫杉醇单用组;蛋白免疫印迹结果显示,与对照组、紫杉醇组相比,PA与低浓度紫杉醇联用能显著降低Bcl-2、Caspase 3、PARP、MMP9、MMP2蛋白表达量,提高Bax、Cleaved Caspase 3和Cleaved PARP蛋白水平;划痕实验结果显示,PA与低浓度紫杉醇联用能抑制A2780/TAX细胞迁移。结论: PA与低浓度紫杉醇联用可抑制A2780/TAX细胞活力和增殖能力,诱导细胞凋亡,并通过下调MMP9和MMP2表达抑制细胞迁移。     

双氢青蒿素通过PI3K/Akt通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制

摘要：目的:研究双氢青蒿素通过磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）通路逆转肺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的分子机制。方法:体外培养人肺癌耐顺铂株（A549/DDP）,给予不同浓度双氢青蒿素(20,40,80,160,200,250,300μmol·L-1)处理48 h后,通过MTT法检测双氢青蒿素对A549/DDP细胞增殖影响,选取双氢青蒿素最佳实验浓度及在不同浓度DDP(0,20,40,60,80,100μmol·L-1)作用下观察并计算顺铂对A549/DDP细胞IC50和双氢青蒿素对A549/DDP逆转倍数;通过流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot法检测各组细胞中凋亡相关因子B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和半胱氨酸蛋白酶3（Caspase3）及PI3K/Akt通路相关蛋白PI3K、AKT、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）的表达。结果:随双氢青蒿素浓度升高,细胞增殖抑制率依次升高（P<0.05）,且具有浓度依赖性,IC10（32.07±1.04）μmol·L-1是双氢青蒿素为最佳逆转耐药浓度;随DDP浓度的升高,双氢青蒿素A549/DDP细胞增殖抑制率随之升高（P<0.05）,DDP+双氢青蒿素组顺铂对A549/DDP的IC50为（26.42±1.23）μmol·L-1,顺铂组为（58.16±1.32）μmol·L-1,双氢青蒿素的逆转耐药倍数为2.21;与对照组相比,DDP组、双氢青蒿素组、DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）;与DDP组、双氢青蒿素组相比,DDP+双氢青蒿素组细胞凋亡率、caspase-3表达显著升高（P<0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt/Akt表达显著降低（P<0.05）。结论:双氢青蒿素通过抑制PI3K/Akt通路促进A549/DDP细胞凋亡,在一定程度上可逆转肺癌A549/DDP细胞株对顺铂的耐药性。     

梓醇对顺铂诱导大鼠卵巢颗粒细胞损伤的保护作用

目的探讨梓醇对顺铂诱导大鼠卵巢颗粒细胞损伤的保护作用及作用机制。方法收集大鼠卵巢颗粒细胞,经原代培养后设为对照组、模型组(顺铂50 nmol/L)和梓醇50、100、200μmol/L组,各组细胞按相应方式进行处理。采用MTT法测定细胞活力;流式细胞术Annexin V/PI双染法考察细胞凋亡情况;免疫组化法观察细胞增殖能力,WB法定量细胞凋亡蛋白的分子水平。结果顺铂可显著抑制卵巢颗粒细胞活力、增殖,诱导细胞凋亡;在给予梓醇进行干预后,大鼠卵巢颗粒细胞活力增强、增殖上调,细胞凋亡减弱;经顺铂进行刺激损伤,卵巢颗粒细胞中caspase-3、caspase-9的活化蛋白表达量显著上升,而不同浓度的梓醇可显著下调细胞中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的蛋白表达量。结论梓醇可以改善大鼠细胞活力、提高细胞增殖和抗凋亡能力,对顺铂诱导的卵巢颗粒细胞损伤产生明显的保护作用。     

鱼腥草总黄酮调控PI3K/Akt信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究

目的：探讨鱼腥草总黄酮调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的诱导作用。方法：取对数期MCF-7细胞,随机分为4组（5个复孔）,低、中、高剂量组分别用3,6,9 g·L^-1鱼腥草总黄酮处理,对照组用磷酸盐缓冲液（PBS）处理。干预48 h后进行细胞形态学观察;对比干预12,24,48 h时的细胞凋亡率;对比干预48 h时PI3K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA和PI3K、Akt、磷酸化Akt（pAkt）、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量。结果：Hoechst 33258染色结果显示,干预后3剂量组部分细胞体积缩小、染色质浓缩,出现凋亡小体,且中剂量组凋亡现象最为明显;细胞凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最高、高剂量组其次、低剂量组其稍低、对照组最低,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;细胞凋亡率组内比较,对照组随时间的延长变化不显著（P>0.05）,3剂量组均随时间的延长显著增加（P<0.05）;PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最低、高剂量组其次、低剂量组稍高、对照组最高,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;Akt mRNA和蛋白相对表达量组间比较差异均不显著（P>0.05）。结论：鱼腥草总黄酮可促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡,其中浓度为6 g·L^-1时促凋亡作用最强,推测是通过下调PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白表达,上调Bax mRNA和蛋白的表达,与PI3K/Akt信号通路有关。     

ABCG2基因在非小细胞肺癌细胞耐药中的作用和机制探究

目的:分析ABCG2基因在多耐药非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)细胞的表达变化及其可能参与的机制。方法:选择肺癌细胞A549及耐药A549进行细胞培养,分别给予顺铂及依托泊苷化疗药物治疗;取耐药A549细胞分为空白组(不处理)、对照组(给予siRNA对照)及siRNA-ABCG2组(给予siRNA-ABCG2)。采用CCK8法检测各组细胞的药物抑制率,采用Western blot法检测3组细胞中ABCG2蛋白表达情况。结果:2组细胞药物抑制率变化呈剂量依赖性,同剂量中耐药A549组药物抑制率明显低于A549组。耐药A549组细胞ABCG2蛋白表达水平明显高于A549组。3组细胞药物抑制率呈剂量依赖性,其中同剂量的siRNA-ABCG2组药物抑制率明显高于空白组及对照组。siRNA-ABCG2组细胞ABCG2、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平明显低于空白组及对照组,分别使用p-AKT、p-mTOR的激活剂后,可显著降低干扰ABCG2基因后导致的顺铂和依托泊苷抑制率的增加。结论:ABCG2通过调控PI3K/AKT信号通路在耐药A549的耐药性中发挥重要作用,沉默ABCG2基因可改善耐药A549细胞的耐药性,提示ABCG2可作为改善NSCLC细胞对顺铂及依托泊苷化疗药物的耐药性的潜在靶点。     

双去甲氧基姜黄素对小鼠乳腺癌的抗肿瘤作用及机制

目的　本研究旨在研究双去甲氧基姜黄素（bisdesmethoxycurcumin,BDMC）对小鼠乳腺癌的影响及机制。方法　采用小鼠乳腺癌4T1细胞,分为Control组及不同剂量（3、9、27 μM）BDMC组,通过CCK8法检测BDMC对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖的影响,TUNEL染色检测BDMC对4T1细胞凋亡的影响,Western blot检测BDMC对4T1细胞Bax、Bcl-2及cleaved caspase-3表达的影响;采用4T1乳腺癌荷瘤小鼠模型,分为Control组及不同剂量（10、30 mg/kg）BDMC组,检测BDMC对小鼠肿瘤体积及体质量的影响,Western blot检测BDMC对乳腺癌小鼠肿瘤组织Bax、Bcl-2及cleaved caspase-3表达的影响。采用单因素方差分析。结果　与Control组相比,9、27 μM BDMC均能明显抑制4T1细胞增殖（均P<0.01）,促进其凋亡（均P<0.01）,同时上调细胞Bax/Bcl-2比值及cleaved caspase-3表达（均P<0.01）;10、30 mg/kg BDMC均能明显抑制乳腺癌小鼠肿瘤体积的增长（均P<0.05）,同时明显上调肿瘤组织Bax/Bcl-2比值及cleaved caspase-3表达（均P<0.05）,但对体质量无明显影响。结论　BDMC对乳腺癌小鼠模型具有明显的抗肿瘤作用,其机制与激活线粒体凋亡通路有关。     

槲皮素通过Bim-Bak/Bax途径提高顺铂耐药膀胱癌细胞对顺铂敏感性的研究

目的 探讨槲皮素能否逆转膀胱癌细胞对顺铂的耐药性并研究其机制。方法 MTT法检测顺铂耐药T24膀胱癌细胞在顺铂和槲皮素处理下的细胞活力。流式细胞实验检测顺铂耐药T24膀胱癌细胞在顺铂和槲皮素处理下的细胞凋亡。Western blot试验检测顺铂耐药T24膀胱癌细胞在顺铂和槲皮素处理下Bim、活化caspase-9、活化caspase-3的表达水平以及细胞色素c、Smac/DIABLO的释放。免疫共沉淀实验检测顺铂耐药T24膀胱癌细胞在顺铂和槲皮素处理下Bim蛋白与Bak、Bax蛋白的相互作用。结果 相比于常规T24细胞,顺铂耐药T24细胞对顺铂的敏感性显著下降。MTT和流式细胞实验结果表明槲皮素能显著促进顺铂对耐药T24细胞的杀伤活性和凋亡诱导活性。免疫共沉淀和Western blot试验结果表明槲皮素能显著上调顺铂耐药T24细胞中Bim蛋白的表达,从而通过与Bak、Bax蛋白的相互作用促进顺铂对肿瘤细胞线粒体膜孔道的开放,诱导细胞色素c和Smac/DIABLO从线粒体中释放到细胞质中,最终引起caspase-9和caspase-3的活化。结论 槲皮素通过Bim-Bak/Bax途径提高顺铂耐药膀胱癌细胞对顺铂的敏感性。     

全反式维甲酸联合阿司匹林对体外抑制肺腺癌细胞株A549增殖和促凋亡的作用及其机制

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）联合阿司匹林（ASA）体外抑制肺癌A549细胞增殖,促凋亡作用和机制。方法：体外培养人肺腺癌A549细胞,5,10 μmol·L^-1的ATRA单独及分别联合5,10 μmol·L^-1的ASA进行干预48 h、72 h后,MTT法检测细胞增殖抑制率;TUNEL法观测药物作用48 h后细胞凋亡状态;RT-PCR法检测药物作用后肺腺癌A549细胞COX-2 mRNA的表达;Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2、COX-2和caspase-3蛋白的表达。结果： ATRA与ASA联用对A549增殖具有协同作用;TUNEL法结果显示ATRA可诱导A549细胞凋亡,与ASA联用凋亡率显著升高（P<0.05）;RT-PCR显示A579细胞中COX-2 mRNA呈现高表达状态,ASA可下调COX-2表达,ATRA无此作用;Western blot结果显示ATRA和ASA协同作用使A549细胞中Bcl-2、COX-2蛋白表达受到抑制,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax值降低,对凋亡通路的影响大于单药作用（P<0.05）。结论： ASA联合ATRA可协同抑制肺腺癌细胞A549的增殖及以及促进其发生凋亡,其作用机制可能是ASA通过抑制COX-2蛋白表达,与ATRA共同通过Bcl/caspase通路诱导肿瘤凋亡实现的。     

YM-155协同顺铂杀伤非小细胞肺癌细胞的机制研究

目的 探讨survivin小分子抑制剂YM-155对非小细胞肺癌顺铂化疗的协同治疗作用并研究其机制。方法 MTT法检测YM-155和顺铂对非小细胞肺癌细胞系A549的杀伤活性。Western blot试验检测A549细胞中survivin、细胞色素C、凋亡诱导因子、caspase-9和caspase-3的表达水平。流式细胞术检测A549细胞的线粒体膜电位和凋亡率。结果 YM-155能增强顺铂的抗肺癌活性,显著降低顺铂对A549细胞的半抑制浓度（IC₅₀）。YM-155处理能显著抑制A549细胞中survivin的表达。顺铂+YM-155组A549细胞的线粒体膜电位明显低于顺铂单治疗组。顺铂+YM-155组A549细胞的凋亡率,细胞色素C、凋亡诱导因子释放水平以及caspase-9、caspase-3活化水平均明显高于顺铂单治疗组。顺铂+YM-155+survivin质粒组A549细胞的相对细胞活力和线粒体膜电位明显高于顺铂+YM-155组。顺铂+YM-155+survivin质粒组A549细胞的凋亡率、细胞色素C、凋亡诱导因子释放水平以及caspase-9、caspase-3活化水平均明显低于顺铂+YM-155组。结论 YM-155通过抑制survivin的表达能够增强顺铂对非小细胞肺癌细胞线粒体途径凋亡的诱导活性。     

川楝素下调ATF2蛋白的表达增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性研究

目的 探讨川楝素辅助治疗是否能增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性并研究其机制。方法 MTT法检测肺癌细胞系A549在顺铂和川楝素处理下的细胞活力。Western blot试验检测顺铂和川楝素对A549细胞ATF2磷酸化水平,Bcl-xl蛋白表达水平、细胞色素c释放水平、caspase-9和caspase-3活化水平的影响。流式细胞术检测A549细胞在顺铂和川楝素联合处理下的细胞凋亡率。结果 MTT试验结果显示,川楝素辅助治疗能明显提降低顺铂对A549的IC₅₀。Western blot试验结果显示川楝素处理能显著抑制A549细胞ATF2的表达和磷酸化。MTT试验结果显示,转染ATF2表达质粒显著抑制川楝素对顺铂的协同抗肺癌活性。Western blot和流式细胞试验结果显示,川楝素能显著抑制A549细胞中顺铂诱导的Bcl-xl表达水平的上调,进而促进A549细胞中顺铂诱导的细胞色素c的释放、caspase-9和caspase-3活化及A549细胞的凋亡水平。结论 川楝素通过抑制ATF2蛋白的磷酸化增强顺铂对肺癌细胞的凋亡诱导活性。     

PDCD4表达下调通过pAKT/pGSK3β途径促进胃癌顺铂耐药的机制初探

摘要：目的 探讨程序性细胞凋亡因子4（PDCD4）表达下调在顺铂诱导胃癌细胞凋亡中的作用机制,为胃癌的 顺铂耐药提供新的分子靶点。方法 通过在人胃癌细胞系SGC7901中敲减表达PDCD4基因,顺铂诱导细胞凋亡,将 细胞分为shNC组、shPDCD4组、shNC加药组和shPDCD4加药组,荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测PDCD4 mRNA 表达水平;Caspase-3活性测定试剂盒、Hoechst染色结合细胞免疫荧光检测细胞凋亡水平;Western blot检测磷酸化蛋 白激酶B（pAKT）和磷酸化糖原合成酶激酶3β（pGSK3β）蛋白表达水平。在细胞中加入特异性Akt抑制剂,将细胞分 为 shNC 加药组、shPDCD4 加药组、LY294002 阻断组（转染 shPDCD4 质粒,先加 LY294002 再加入顺铂处理）和 Wortmannin 阻断组（转染 shPDCD4 质粒,先加 Wortmannin 再加入顺铂处理）,Western blot 检测聚 ADP-核糖聚合酶 （PARP）蛋白表达水平。结果 qRT-PCR 和Western blot 检测结果证实稳定转染ShPDCD4质粒的SGC7901细胞中 PDCD4的mRNA表达和蛋白表达均有显著下降,体外稳定转染ShPDCD4的SGC7901胃癌细胞株构建成功。相较于 shNC 加药组,shPDCD4 加药组 Caspase3 活性下降,细胞凋亡降低（P＜0.05）。PDCD4 表达下调将导致 pAKT 和 pGSK3β的表达水平提高（P＜0.05）,应用Akt抑制剂（LY294002、Wortmannin）阻断该信号通路后,PARP的相对表达 水平重新上调（P＜0.05）。结论 PDCD4表达下调能够通过pAKT/pGSK3β途径降低顺铂引起的胃癌细胞凋亡,进而 促进细胞顺铂耐药的形成。     

长链非编码 RNA HOTAIR 影响人舌鳞癌细胞 Tb3.1 增殖与凋亡的体内外研究

目的 研究长链非编码 RNA HOTAIR 对人舌鳞癌细胞系 Tb3.1 增殖与凋亡的影响 。 方法 使用 HOTAIR siRNA（siHOTAIR）敲低 HOTAIR 的表达; 实验分为 siHOTAIR 组、无义序列组和空白对照组。 前 2 组分别用 siHOTAIR 和无义序列转染舌鳞癌细胞, 空白对照组细胞不做任何处理。 实时定量 PCR 检测 HOTAIR 的表达水平; 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测 Tb3.1 细胞增殖; Western blot 检测 B 细胞淋巴瘤 2（Bcl-2）、活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、BAX 的表达; 流式细胞仪检测细胞凋亡; 平板克隆形成实验检测细胞增殖情况;并行细胞衰老检测 。 动物实验建立 Tb3.1 裸鼠皮下荷瘤模型, 通过免疫组织化学染色及 TUNEL 法评价干扰 HOTAIR 后对 Tb3.1 细胞增殖、凋亡的作用。 结果 siHOTAIR 处理后 HOTAIR 的表达水平降低; Western blot 结果示 Cleaved Caspase-3 和 BAX 表达水平升高, Bcl-2 表达水平降低。 MTT 结果显示 siHOTAIR 组细胞增殖受到抑制;流式细胞示 siHOTAIR 组细胞凋亡升高; 细胞衰老实验显示 siHOTAIR 组细胞衰老数目增加; 免疫组化结果显示, siHOTAIR 组较对照组 Ki-67、Bcl-2 表达减少, Caspase-3、BAX 表达增加; TUNEL 结果显示, siHOTAIR 组较空白对照组肿瘤细胞凋亡水平升高。 结论 干扰 HOTAIR 可以促进舌鳞癌细胞的凋亡并抑制其增殖, HOTAIR 可以作为舌鳞癌治疗的研究方向。     

白术内酯Ⅰ对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡的影响

目的：研究白术内酯Ⅰ（atractylenolide Ⅰ）对人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤生长及凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-3、p53、Bcl-2表达的影响。方法：建立SGC-7901裸鼠移植瘤模型,观察白术内酯Ⅰ对肿瘤生长的影响;TUNEL法检测移植瘤组织中的细胞凋亡;Western blotting检测瘤组织中Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及p53蛋白表达。结果：白术内酯Ⅰ不同程度抑制裸鼠SGC-7901移植瘤的生长,与对照组比较,给药后肿瘤体积（TV,tumor volume）、相对肿瘤体积（RTV,relative tumor volume）和相对肿瘤增殖率[T/C（%）,T_RTV/C_RTV]明显下降;移植瘤组织中凋亡细胞明显增多;白术内酯Ⅰ上调移植瘤组织中Bax、cleaved caspase-3及p53的蛋白表达,下调Bcl-2 的蛋白表达。结论：白术内酯Ⅰ能明显抑制人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤的生长,分子机制主要包括增加Bax、cleaved caspase-3、p53蛋白表达,减少Bcl-2蛋白表达,最终导致肿瘤细胞凋亡。