骨形态发生蛋白在骨形成与修复中的作用

在脊椎动物骨形态发生蛋白 (ＢＭＰ)的重要作用之一是诱导软骨、骨和骨骼的支持组织形成。实际上 ,ＢＭＰ是骨组织形成和修复的一个重要调节因子。 1988年Ｗｏｚｎｅｙ利用重组ＤＮＡ技术克隆得到了ＢＭＰ 1、ＢＭＰ 2和ＢＭＰ 3的ｃＤＮＡ。到目前为止 ,已发现了ＢＭＰ 1～ＢＭＰ 13,并已获得相应的ｃＤＮＡ。除ＢＭＰ 1以外 ,其余均是ＴＧＦ β超家族成员。它们均是机体分泌的信号分子[1 ] 。通过ＢＭＰ的研究 ,有可能发展一种对骨骼疾病治疗的新方法。1　ＢＭＰ与骨诱导在体内ＢＭＰ的活性标志是诱导形成新骨[2 ] 。为确定一种ＢＭＰ的诱…     

人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达

目的：扩增、克隆人骨形成蛋白－３（ｈＢＭＰ－３）成熟肽ｃＤＮＡ基因，利用大肠杆菌表达ｈＢＭＰ－３成熟肽．方法：ＰＣＲ方法扩增ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，双脱氧终止法测序正确后，克隆入大肠杆菌表达载体ｐＤＨ，受控于ＰＲＰＬ启动子，重组质粒ｐＤＨＢ－３ｍ以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主菌在４２℃进行温度诱导．结果：扩增出ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，序列测定完全正确；含重组质粒ｐＤＨ－Ｂ３ｍ的工程菌诱导后在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新生蛋白带，分子质量为１４．５ｋｕ，与预期ｈＢＭＰ－３成熟肽分子量大小一致，约占菌体总蛋白的２８％．结论：成功扩增、克隆ｈＢＭＰ－３成熟肽ｃＤＮＡ基因，并可在大肠杆菌中得到高效表达     

人重组骨形态发生蛋白Ⅲ在大肠杆菌中的表达及活性测定

本文报道了利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组骨形态发生蛋白Ⅲ。运用ＰＣＲ技术，从质粒ｐＳＰ６４／ｈＢＭＰ３中扩增出约０．３３ｋｂ的ｈＢＭＰ３ｃＤＮＡ片断，然后亚克隆到表达质粒ｐＭＳ３１ｂ申，在大肠杆菌一成功地高效表达出人ＢＭＰ３融合蛋白，表达产物具有体内诱导异位化骨的趋势。     

人重组骨形态发生蛋白Ⅲ在大肠杆菌中的表达及活性测定

本文报道了利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人重组骨形态发生蛋白Ⅲ。运用ＰＣＲ技术，从质粒ｐＳＰ６４／ｈＢＭＰ３中扩增出约０．３３ｋｂ的ｈＢＭＰ３ｃＤＮＡ片断，然后亚克隆到表达质粒ｐＭＳ３１６ｂ中，在大肠杆菌中成功地高效表达出人ＢＭＰ３融合蛋白，表达产物具有体内诱导导位体骨的趋势。     

人骨形态发生蛋白-2的基因重组及其在大肠杆菌中的表达

目的用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白２（ｈＢＭＰ２）。方法将包含ｈＢＭＰ２部分前肽和成熟肽的３′端７３０ｂｐｃＤＮＡ片段,插入原核表达载体ｐｋｐＬ３ａ的多克隆位点,构建成ｐＫｐＬ３ａ／ｈＢＭＰ２重组表达载体,转化大肠杆菌ｐｏｐ２１３６,挑选阳性克隆,经诱导表达后用ＳＤＳＰＡＧＥ鉴定。结果该克隆表达的ｈＢＭＰ２为ＭＷ２７０００,表达量占菌体总蛋白１０％,部分纯化后植入大鼠股部肌肉,组织学观察到肌肉内大量间充质细胞增生及骨与软骨形成。结论说明重组ｈＢＭＰ２具有诱导异位骨与软骨形成的生物学功能。     

期刊文摘

ＯＰＧ与ＭＢＰ融合蛋白在大肠杆菌中的表达[刘继中 ,纪宗玲 ,陈苏民 ,胡蕴玉 ,李　毅 ,张晓楠 .细胞与分子免疫学杂志 ,2 0 0 2 ;18(6 ) :5 5 1 5 5 3]　　目的　克隆人骨保护素 (ＯＰＧ)成熟肽段编码区基因 ,并在大肠杆菌中表达 .方法　采用ＲＴ ＩＦＣ ,扩增人ＯＰＧ成熟肽段编码区ｃＤＮＡ ,并克隆入原核表达载体 ｐＭＡＬ ｃ2ｘ中 ,转化ＢＬ2 1(ＤＥ3)ＰｌｙｓＳ大肠杆菌感受态细胞 .经 0 .1ｍｍｏｌ·Ｌ-1ＩＰＴＧ诱导后 ,收集菌体蛋白 ,进行ＳＤＳ ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定 .结果　获得人ＯＰＧ成熟肽段编码区ｃＤＮＡ …     

人骨形成蛋白2碳端肽在大肠杆菌中的高表达及活性测定

利用基因工程技术生产人骨形成蛋白（ｈＢＭＰ），为其诱骨机理及临床应用研究提供前提条件。作将ｈＢＭＰ２ ｃＤＮＡ３’端７３２ｂｐ片段，克隆入大肠杆菌表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，经ＩＰＴＧ诱导后，表达产物存在于包涵体中，将其纯化复性后，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＦＰＬＣ分析，并作小鼠体内异位诱骨活性检测。表达的ｈＢＭＰ２与ＧＳＴ的融合蛋白Ｍｒ＝５１ｋｕ，占菌体总蛋白的３０％，纯化、复性后，ＦＰＬＣ分析示尖而     

颌骨造釉细胞瘤中骨形成蛋白基因表达的原位杂交及免疫组化研究

利用骨形成蛋白（ＢＭＰ）单克隆抗体、ＢＭＰ多克隆抗体及地高辛甙元标记的ＢＭＰ１、ＢＭＰ２Ａ、ＢＭＰ３的ｃＤＮＡ探针，分别进行了４０例颌骨造釉细胞瘤中ＢＭＰ基因表达的原位杂交和免疫组化研究。结果发现，３种ＢＭＰ某因在造釉细胞瘤中均有过量表达，尤以ＢＭＰ２Ａ最为显著；与原位杂交结果相反，免疫组化显示，４０例造釉细胞瘤均为阴性。因此，ＢＭＰ基因的过量表达可能与造釉细胞瘤的发生有关，造釉细胞瘤中ＢＭＰ的产量可能较少，或其结构发生了改变。     

重组人骨形态发生蛋白-2/7融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和初步活性测定

构建重组人骨形态发生蛋白－２／７融合体, 研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用ＤＮＡ 重组技术,将编码人骨形态发生蛋白－２ （ＢＭＰ－２） 成熟肽的０．３６ ｋｂ 基因片段与编码人骨形态发生蛋白－７ （ＢＭＰ－７） 成熟肽的０．４４ｋｂ 基因片段连接,得到重组人骨形态发生蛋白－２／７ 融合基因; 经测序鉴定后,将其克隆到表达载体ｐＢＶ２２２中,转化大肠杆菌ＤＨ５α, 温度诱导表达。表达蛋白经初步纯化后测定其对培养小鼠成骨样细胞增殖、分化及碱性磷酸酶活性的影响。克隆质粒转化的工程菌,经４２℃诱导４～６ ｈ 后,高效表达重组人骨形态发生蛋白－２／７, 在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一新的蛋白带, 分子量约２９ ｋｕ,约占菌体总蛋白的２０％ ,表达蛋白以包涵体的形式存在,经初步纯化、裂解、复性后的ＢＭＰ－２／７ 蛋白具有促进成骨样细胞分化、增殖及增加碱性磷酸酶活性的作用。ＢＭＰ－２／７ 融合基因的构建和表达,可能提供一种全新的具有诱导成骨作用的蛋白     

基因重组人骨形成蛋白-2对培养骨髓细胞的生物学效应

目的 骨髓是机体重要的造血器官,其中的单个核细胞主要是单核细胞和巨噬细胞,骨髓组织在骨损伤修复过程中也发挥重要的作用,为提高骨形成蛋白（ＢＭＰ）修复骨缺损的能力。方法 本实验观察了基因重组人骨形成蛋白－２（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＢｏｎｅＭｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃＰｒｏｔｅｉｎ－２,ｒｈＢＭＰ２）对培养骨髓细胞生物学活性的影响。结果 低浓度的ｒｈＭＢＰ２）对培养骨髓细胞生物学活性的影响。结     

昆虫杆状病毒表达系统中人骨形成蛋白3的表达及鉴定

探索人骨形成蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达规律。方法将ｈＢＭＰ３全长ｃＤＮＡ克隆入转移载体ＢａｃＰＫ８中,酶切鉴定后,将此载体与病毒ＤＮＡ经脂质体包裹转染昆虫细胞,重组病毒经蓝白选后,提取其ＤＮＡ进行ＰＣＲ反应,鉴定目的基因。收集重组病毒感染５ｄ的细胞进行免疫荧光及电子显微镜观察。结果克隆了目的基因的重组载体经内切酶消化后,琼脂糖电泳示有相应大小的目的基因片段切下,ＰＣＲ电泳结果见有目的基因片段的     

rhBMP—2 cDNA转染的NIH—3T3细胞对小鼠急性放射损伤的基因治疗

目的：探讨重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）ｃＤＮＡ转染的ＮＩＨ－３Ｔ３细胞对小鼠经６．５Ｇｙ，７．０Ｇｙγ射线全身照射引起的放射损伤的基因治疗作用及其机理。     

HP8：增强子结合蛋白家族的一个新基因的cDNA克隆

以大鼠增强子结合蛋白（Ｃ／ＥＢＰ）ｃＤＮＡ为探针，筛选人胎肝ｃＤＮＡ库，得到一个含有２４８０碱基命名为ＨＰ８的ｃＤＮＡ克隆，其中８４－１１０９位碱基属编码区。经基因数据库（ＥＭＢＬ，９５．６版本）查对未发现同源基因。该基因编码的蛋白Ｃ－末端含有亮氨酸拉链结构，和Ｃ／ＥＢＰ功能区（Ｃ／ＥＢＰ基因家族新成员。基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实该基因为单拷贝基因。在１４种胎儿组织中显示小肠、皮肤高表达，肾     

人巨细胞病毒p52蛋白基因的克隆及表达

制备人巨细胞病毒Ｐ５２蛋白特异性抗原。方法用ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶＰ５２蛋白ＩｇＭ抗原决定簇编码区ＤＮＡ片段，克隆表达载体ＰＢＶ２２０中，转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５ａ株，用氨苄青霉素抗性和质粒酶切图谱分析法筛选阳性克隆，经温控诱导基表达。     

骨形成蛋白的研究进展及其临床意义

骨形成蛋白属于转化生长因子 β(ＴＧＦ β)超家族成员 ,在胚胎发生和发育、组织与细胞的分化和增殖等方面起重要作用。其信号传导依赖于两型受体的存在 ,在受体配体复合物中 ,Ⅱ型受体可磷酸化Ⅰ型受体的ＧＳ区 (富含氨基乙酸、丝氨酸、苏氨酸残基 ) ,从而为后继信号的活化奠定了基础。ＢＭＰＲ ⅠＡ介导生长刺激信号 ,而ＢＭＰＲ ⅠＢ则传递生长抑制信号 ,骨形成蛋白 2在肿瘤细胞的凋亡中具有双向作用。本文综述了骨形成蛋白的研究进展及其在肿瘤治疗中的意义。骨形成蛋白 (ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃｐｒｏｔｅｉｎ ,ＢＭＰ)最初因…     

人脑发育过程中髓鞘碱性蛋白基因的表达

为探索人脑髓鞘碱性蛋白（ＭＢＰ）基因表达时空的秩序与髓鞘发生和形成之间关系，采用＾３２Ｐ－和生物素标记鼠ＭＢＰｃＤＮＡ和地高辛标记人ＭＢＰｃＤＮＡ探针，对发育过程中人脑进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点杂交和原位杂交研究。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ斑点分析结果显示：１６周胎龋脑ＭＢＰｍＲＮＡ表达已明显，Ａ５９０值近２．０／μｇＲＮＡ，随发育逐渐增国，至成年其表达增至９倍。８－２５周期龄脊髓和延脑切片以及２０、２２和２     

PCR克隆EB病毒潜伏膜蛋白-1基因

目的：构建ＥＢ病毒潜伏膜蛋白－１重组表达质粒。方法：ＰＣＲ克隆技术,即用ＰＣＲ方法从Ｂ９５－８细胞中钓出ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因ＤＮＡ序列,然后定向克隆到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１中,以此构建成ｐｃＤＮＡ３．１－ＬＭＰ重组质粒。结果：经酶切鉴定,确定已获得重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＬＭＰ１。结论：在真核表达质粒中已成功地克隆了ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因。     

重组人骨形态发生蛋白—2／7融合基因的构建及其在大肠杆菌 …

构建重组人骨形态发生蛋白－２／７融合体,研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用ＤＮＡ重组技术,将编码人骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）成熟肽的０．３６ｋｂ基因片段与编码人骨形态发生蛋白－７（ＢＭＰ－７）成熟肽的０．４４ｋｂ基因片段连接,得到重组人骨形态发生蛋白－２／７融合基因;经测序鉴定后,将其克隆到表达载体ｐＢＶ２２２中,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,温度诱导表达,表达蛋白经初步纯化后测定其对培养小     

人单核细胞趋化蛋白1基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：克隆表达具有重要生物功能的人单核细胞核细胞趋化蛋白１（ｈｕＭＣＰ－１）。方法：从人外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中提取ｐｏｌｙ（Ａ）＾＋ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增出ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ。将ｈｕＭＣＰ－１ｃＤＮＡ插入融合表达载体ｐＧＥＸＩＮ,１ｍｍｏｌ／Ｌ异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导后获得高效表达。结果：Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明与ｈｕＭＣＰ－１单克隆抗体有明显交叉反应。结论     

人骨形成蛋白-2诱导人脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨重组人骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ－２）对体内、外人脑胶质瘤ＳＨＧ４４细胞生物学特性的影响。方法 绘制ｒｈＢＭＰ－２作用前、后的ＳＨＧ４４细胞生长曲线,ＭＴＴ法测定ｒｈＢＭＰ－２对ＳＨＧ４４细胞增殖的作用;以流式细胞仪、电镜和琼脂糖凝胶电泳分别检测其细胞周期、超微结构和ＤＮＡ片段改变;观察局部注射ｒｈＢＭＰ－２对裸鼠皮下ＳＨＧ４４胶质瘤增长的影响。结果 流式细胞检测显示,ｒｈＢＭＰ－２可抑