肿瘤坏死因子alpha上调人结肠癌细胞株突变型p53蛋白的表达

目的：研究TNF-alpha对人结肠癌细胞株HT-29及HCT116 p53表达的影响。方法：给予人结肠癌细胞株HT-29（表达突变型p53蛋白）及HCT116（表达野生型p53蛋白）不同浓度的TNF-alpha刺激后,应用细胞免疫荧光及实时荧光定量PCR检测突变型p53蛋白表达及p53 mRNA水平的改变。结果：免疫荧光显示TNF-alpha刺激后能显著提高HT-29细胞核突变型p53蛋白的表达（P〈0.05）,而对表达野生型p53的HCT116的p53水平无明显改变。实时荧光定量PCR结果表明TNF-alpha刺激对HT-29及HCT-116的p53 mRNA水平无明显改变。结论：TNF-alpha能显著上调HT-29突变型p53蛋白的表达,但是该上调作用并不是发生于转录水平。TNF-alpha刺激对表达野生型p53的HCT116细胞株p53水平无明显改变。     

导入野生型p53基因对人胶质瘤细胞生长及化疗敏感性的影响

目的 研究野生型p53基因对人胶质瘤细胞生长及化疗敏感性的影响。方法 将载有野生型p53基因的表达质粒PC53-SN3导入U251细胞。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测p53基因在转染细胞中的表达,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和流式细胞仪检测p53基因对U251细胞生长抑制及凋亡的影响以及它与顺铂联合作用后的效果。结果 通过RT-PCR证实了野生型p53基因在U251细胞中的表达。MTT检测发现p53基因对U251细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率为(79.60±5.69)％。顺铂对 U251细胞的抑制作用随着顺铂浓度的增加(1、2、4、8 mg/L)而增强,抑制率分别为(19.40±6.69)％、(24.41±2.68)％、(51.84±13.38)％、(66.22±5.02)％,但不如 p53基因的抑制作用强。当野生型 p53基因与顺铂联合作用于 U251细胞时,抑制率明显增加,分别为(91.64±1.00)％、(94.98±1.67)％、(95.32±2.01)％、(95.65±1.00)％。p53基因转染所产生的 U251细胞凋亡率为 17.38％。顺铂引起的细胞凋亡率随着顺铂浓度的增加(1、2、4、8mg/L)而增加,分别为5.71％、5.93％、6.27％、6.81％。当p53基因与不同浓度的顺铂(1、2、4、8mg/L)联合作用于U251细胞时,凋亡率也明显增加,分别为23.50％、23.54％、23.89％、28.88％。结论 野生型p53基因与     

PAC-1|L-OHP单用及联合用药对人结肠癌细胞的抑制作用

目的观察体外单用及两者联合应用半胱天冬酶原活化复合物-1(PAC-1)和奥沙利铂(L-OHP)对人结肠腺癌细胞株HCT116、SW480、HT-29,SW116和SW620的生长抑制作用。方法 MTT法检测两药单用和合用前后对细胞增殖活性的影响。结果 PAC-1和L-OHP单用对5种人结肠癌细胞均有明显的诱导凋亡和增殖抑制作用,并呈时间和浓度依赖性;PAC-1对上述细胞的半数抑制浓度(IC50)之间无统计学差异(P0.05),L-OHP对上述细胞的的IC50值有统计学意义(P0.05)。PAC-1与L-OHP联用(同时给药)产生拮抗作用(CI(1)。结论 PAC-1与L-OHP单用均对人结肠腺癌细胞有抑制作用,但各细胞株对两药的敏感性不同,两者联合应用(同时给药)起拮抗作用。     

沉默Lin28b基因表达促进人结肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性

目的 探讨人结肠癌细胞中Lin28b基因表达及其与奥沙利铂化疗敏感性之间的关系.方法 构建干扰Lin28b的shRNA质粒(sh-Lin28b),并转染至结肠癌细胞(Cac02、SW480和HCT116细胞);逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测结肠癌细胞中Lin28b在mRNA和蛋白水平的表达;用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测sh-Lin28b和奥沙利铂化疗协同作用,Transwell实验检测处理后的结肠癌细胞迁移能力.结果 RT-PCR和Western blot结果证实Cac02、HCT116及SW480结肠癌细胞中均有Lin28b基因表达,其中在SW480细胞中的蛋白表达量比在HCT116中高1.83倍.SW480和HCT116细胞中Lin28b的mRNA表达在50 nmol/L的sh-Lin28b作用下分别被下调36.4％和90.2％,在100 nmol/L的sh-Lin28b的条件下分别被下调61.8％和89.5％.CCK-8结果显示奥沙利铂处理48 h后,HCT116细胞的IC50值为(6.09±1.42) mg/L,SW480细胞升高34.3％,至(8.18 ±3.64) mg/L.sh-Lin28b联合奥沙利铂处理组比较于对照转染组(NC)抑制SW480和HCTll6细胞生存率分别为(55.10±0.78)％和(50.30±0.69)％.Transwell 实验结果显示SW480细胞的迁移能力在sh-Lin28b的作用下降低至(48.60±0.92)％.结论 沉默表达于结肠癌细胞的Lin28b,可显著抑制结肠癌细胞的迁移能力,并促进奥沙利铂的化疗敏感性.     

肝X受体激动剂GW3965对人结肠癌细胞奥沙利铂耐药的逆转作用及机制

目的:探讨肝X受体(LXR)激动剂GW3965对人结肠癌细胞奥沙利铂(OXA)耐药的逆转作用及机制。方法:用OXA药物浓度持续递增法诱导人结肠癌HCT116细胞构建OXA耐药的人结肠癌HCT116/L-OHP细胞,比较HCT116/L-OHP细胞与其亲本HCT116细胞的生长情况,以及对不同浓度OXA作用的反应情况;检测HCT116/L-OHP细胞经GW3965处理48 h后OXA耐药性及自噬相关蛋白ATG-5、Beclin-1、p62、LC3的表达的变化。结果:成功构建人结肠癌耐OXA细胞HCT116/L-OHP,表现为HCT116/L-OHP细胞与亲本HCT116细胞比较,增殖能力有所减弱,但对OXA的耐药性明显增强(IC_(50):244.99μmol/L vs.10.05μmol/L,P0.05),其耐药指数(RI)为24.45。不同浓度(10、20、30μmol/L)GW3965作用后,HCT116/L-OHP细胞对OXA的IC_(50)、RI均明显降低(均P0.05),且呈浓度依赖性(IC_(50):199.49、114.71、87.32μmol/L;RI:19.89、11.40、8.69),3个浓度的逆转倍数分别为1.23、2.15、2.82;ATG-5、Beclin-1蛋白的表达明显降低,而p62、LC3-II蛋白的表达明显升高(均P0.05),且均呈浓度依赖性。结论:LXR激动剂GW3965可逆转人结肠癌细胞对OXA的耐药,其机制可能与调节自噬相关蛋白表达水平有关。     

p53抑制剂对热化疗损伤结肠上皮细胞p53、Bax和MDM2表达的影响

目的探讨p53抑制剂PFT-α(pifithrinalpha,PFT-α)对热化疗诱导原代培养结肠上皮细胞凋亡及p53靶基因Bax和MDM2表达的影响。方法原代培养结肠上皮细胞分为正常对照组、热化疗组和PFT-α加热化疗组,运用顺铂联合温热(43℃)处理结肠上皮细胞30min,对比加入不同浓度的PFT-α后,AnnexinV-FITC/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡。MTT法分析PFT-α对热化疗杀伤DLD1细胞的影响。Westernblot检测结肠上皮细胞的p53、Bax和MDM2蛋白表达。结果热化疗导致结肠上皮细胞发生凋亡,Bax和MDM2蛋白表达明显高于对照组。PFT-α作用于顺铂联合温热处理结肠上皮细胞后,细胞凋亡率下降呈剂量依赖性,同时p53在结肠上皮细胞胞核/胞质表达比例下降,Bax和MDM2的表达逐渐降低。热化疗杀伤肿瘤细胞的效应并未受到低剂量PFT-α影响。结论PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞具有保护作用,其机制可能与改变p53核转位和抑制促凋亡基因Bax和MDM2的表达相关,抑制p53可作为克服热化疗抗肿瘤治疗副效应的新策略。     

p53抑制剂对热化疗损伤结肠上皮细胞p53、Bax和MDM2表达的影响

目的 探讨p53抑制剂PFT-α（pifithrin alpha，PFT-α）对热化疗诱导原代培养结肠上皮细胞凋亡及p53靶基因Bax和MDM2表达的影响。方法 原代培养结肠上皮细胞分为正常对照组、热化疗组和PFT-α加热化疗组，运用顺铂联合温热（43℃）处理结肠上皮细胞30min，对比加入不同浓度的PFT-α后，Annexin V-FITC／PI染色，流式细胞仪检测细胞凋亡。MTT法分析PFT-α对热化疗杀伤DLD1细胞的影响。Western blot检测结肠上皮细胞的p53、Bax和MDM2蛋白表达。结果 热化疗导致结肠上皮细胞发生凋亡，Bax和MDM2蛋白表达明显高于对照组。PFT-α作用于顺铂联合温热处理结肠上皮细胞后，细胞凋亡率下降呈剂量依赖性，同时p53在结肠上皮细胞胞核／胞质表达比例下降，Bax和MDM2的表达逐渐降低。热化疗杀伤肿瘤细胞的效应并未受到低剂量PFT-α影响。结论 PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞具有保护作用，其机制可能与改变p53核转位和抑制促凋亡基因Bax和MDM2的表达相关，抑制p53可作为克服热化疗抗肿瘤治疗副效应的新策略。     

Stat3反义寡核苷酸联合化疗调控结肠癌细胞增殖与凋亡的分子机制

目的　探讨Stat3反义寡核苷酸 (Stat3AS ON)联合 5 氟尿嘧啶 (5 FU )治疗结肠癌的作用机制。方法　应用Stat3AS ON与 5 FU处理结肠癌细胞HCT116,Westernblot检测Stat3、p Stat3、CyclinD1与bcl xL表达 ,MTT法检测细胞增殖状态 ,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡。结果　Stat3AS ON与 5 FU作用于HCT116细胞 72h后 ,G1期细胞比率由 63 .7%上升至 82 .2 % ,S期细胞比率分别由 17.6% ,下降至 9.9% ,凋亡细胞百分比由 6.1%增加至 3 2 .0 %。Stat3AS ON与 5 FU可以抑制结肠癌细胞增殖 ,促进结肠癌细胞凋亡 ,联合应用Stat3AS ON与 5 FU可以起协同作用 ,明显抑制结肠癌细胞Stat3信号转导通路活化。结论　选择性阻断细胞内信号转导通路可能为治疗结肠癌提供新途径     

Sulfone通过抑制ERK途径上调XAF1表达诱导结肠癌细胞凋亡

目的:探讨化学预防药物Sulfone是否通过转录调节XAF1的表达诱导结肠癌细胞凋亡。方法:采用Hoechst 33258染色法检测人结肠癌细胞株HCT116(p53野生型)和SW480(p53突变型)经Sulfone处理后的细胞凋亡率。运用Western印迹法检测上述细胞经Sulfone处理前后XAF1、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和ERK1/2总蛋白质的表达量变化。通过双重荧光素酶报告基因检测Sulfone对XAF1启动子转录活性的调节作用。结果:Sulfone能诱导HCT116和SW480细胞凋亡,其效应随剂量的增加和时程的延长而更明显。Sulfone能有效抑制上述两种细胞中ERK1/2蛋白的磷酸化(抑制率分别为74%和57%,P<0.05),但上调XAF1蛋白的表达(2.2倍和3.1倍,P<0.05)。经Sulfone处理后,XAF1启动子的转录活性在HCT116和SW480细胞分别提高了3.3倍(P<0.01)和2.6倍(P<0.05)。结论:Sulfone通过抑制ERK途径,在转录水平显著上调XAF1的表达进而诱导细胞凋亡,且这种作用的强弱与肿瘤细胞的p53分型有关。     

化疗灌注中思美泰与化疗药的相互作用研究

目的 模拟动脉持续灌注模式下药物分布状态,探讨思美泰与不同化疗药物联合应用对化疗药作用的影响.方法 采用MTT法,在体外培养的HepG-2和7702细胞系培养液中,分别检测10种化疗药物与思美泰按照不同给药顺序联用或者序贯使用时,对HepG-2和7702细胞系的杀伤作用.结果 思美泰与泰索帝、健择、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、培美曲塞二钠、奥沙利铂、表柔比星、顺铂存在协同作用,对其余化疗药作用无明显影响.这种协同作用主要发生在思美泰与化疗药共同孵育或者思美泰在化疗结束后给药时.思美泰与化疗药预混后再给药与各自加入培养液共同孵育组比较,作用降低.结论 在不同细胞系中,思美泰与多种化疗药联用具有明显的协同作用,且不同的给药顺序对药物间相互作用有很大影响,其机理需进一步明确.     

γ-氨基丁酸B型受体对结肠癌HCT116细胞周期的影响

目的利用人结肠癌细胞株HCT116细胞为研究模型,探究γ-氨基丁酸B型受体（GABABR）/糖原合成激酶3β（GSK-3β）/核转录因子（NF-κB）信号通路对结肠肿瘤细胞HCT116周期的影响,明确GABABR调控结肠癌细胞增殖的机制。 方法使用人结肠癌细胞株HCT116细胞为模型,构建针对GABABR的shRNA,流式细胞仪检测不同刺激条件下HCT116细胞周期分布,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）法检测细胞的增殖能力变化。 结果GABABR可调控HCT116细胞的增殖。GABABR激动剂巴氯芬将HCT116细胞滞留在G1期,GSK-3β激动剂wort能逆转巴氯芬对结肠癌的该作用;GSK-3β抑制剂SB216763处理后,HCT116细胞增殖得到抑制,而NF-κB激动剂PMA可以阻断此作用;NF-κB激动剂PDTC能够回救敲低GABABR所引起的HCT116细胞增殖抑制,Akt抑制剂MK-2206 2HCl能逆转巴氯芬、SB216763对HCT116细胞增殖的抑制作用。 结论GABABR/GSK-3β/NF-κB信号通路可以调控结肠癌细胞增殖,通过抑制GSK-3β的活性,抑制NF-κB信号通路的激活,将HCT116细胞滞留在G1期。GABABR/GSK-3β/NF-κB信号通路可以作为临床预防和治疗结肠癌的潜在药物靶点之一。     

腺病毒介导的RNA干扰对大肠癌HCT116细胞株β-连环蛋白表达的抑制作用

目的 构建针对人β-连环蛋白(catenin)的腺病毒载体pAdHl-shβ-catenin-GFP,应用RNA干扰(RNAi)的方法,观察其在体内和体外对人大肠癌细胞株HCT116生长的抑制作用.方法 设计合成针对β-catenin的shRNA,并克隆至腺病毒表达载体AdH1-GFP上,制备针对β-catenin的腺病毒载体AdH1-GFP-shβ-catenin-GFP,与腺病毒骨架载体共转染293A细胞包装病毒,采用空斑法测定病毒滴度为5×109pfu/ml,感染HCT116细胞.应用Western bolt和报告基因检测HCT116细胞β-cmemn表达水平和转录活性,噻唑蓝(MTT)比色法测定活细胞数并绘制细胞生长曲线,建立软琼脂克隆形成实验观察肿瘤体外成瘤能力,同时建立裸鼠HCT116细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况.结果 成功构建针对β-catenin基因的RNAi腺病毒表达载体,与AdH1-GFP组比较AdH1-shβ-catenin-GFP组在感染24 h和48 h HCT116细胞β-catenin表达水平和转录活性显著降低,细胞的增殖和克隆形成能力则下降50%(P<0.01).体内实验表明重组腺病毒载体介导的β-catenin shRNA明显抑制肿瘤生长(P<0.01).结论 腺病毒介导的RNAi技术可有效降低β-catenin在大肠癌细胞中的表达水平,抑制肿瘤细胞在体内外的增殖活性.     

P21增强结肠癌HCT116细胞化疗敏感性的实验研究

目的研究DNA损伤药物——多柔比星（Doxorubicin，Dox）抑制结肠癌细胞增殖和P21蛋白表达的关系。方法200μg／L Dox作用结肠癌HCT116细胞8～120h，细胞直接计数法绘制生长曲线；流式细胞术检测Dox作用前后细胞周期变化；免疫印迹法（Western blot）检测C-MYC、P53和P21蛋白的表达变化。结果200μg／L Dox可以显著抑制HCT116细胞的增殖；细胞周期在Dox作用8h时无明显变化，但在Dox作用24h后出现G2期阻滞；C-MYC和P53蛋白在Dox作用8h后表达显著增加，但P21在Dox作用24h后才显著增加。结论在P53被诱导表达的早期，Dox的抑制作用不甚明显；在P53诱导P21表达后Dox抑制效应才显著，即Dox抑制结肠癌HCT116细胞的增殖依赖P21的表达。     

8型腺相关病毒介导的TRAIL基因促结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的观察8型腺相关病毒介导的TRAIL基因对结肠癌HCT116细胞凋亡的诱导作用并探讨其作用机制.方法采用三质粒磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,制备出携带TRAIL基因的8型重组腺相关病毒;重组病毒感染结肠癌细胞及正常人肝细胞,利用台盼蓝染色计数法测定细胞生长活性;光镜下观察病毒感染后细胞大体形态改变;Hoechst染色荧光显微镜下观察细胞核形态的改变;DNA凝胶电泳观察细胞凋亡的发生;蛋白印迹检测凋亡相关基因caspase-3,caspase-8蛋白表达的变化.结果携带TRAIL基因的8型重组腺相关病毒能够激活caspase通路,促进结肠癌细胞凋亡,有效抑制结肠癌细胞的生长,而对正常人肝细胞的生长没有影响.结论8型腺相关病毒介导的TRAIL基因能够抑制结肠癌细胞HCT116的体外生长,对正常细胞没有毒性.     

Stat3靶向RNA干扰重组体的构建及鉴定

目的设计针对Stat3的发夹样RNA干扰重组体,通过脂质体转染结肠癌细胞HCT116观察其干扰效果,为探索肿瘤基因治疗的新途径奠定基础。方法设计针对Stat3编码区的有短发夹结构的两条DNA序列,经退火成互补双链,克隆到载体Pavu6 27中构建重组体Pavu6 27-Stat3,再对重组质粒进行酶切鉴定、DNA测序分析。脂质体法转染重组体至大肠癌HCT116细胞株中,以空质粒(Pavu6 27)转染为对照;RT-PCR法观察Stat3基因表达改变。结果酶切鉴定和测序分析均提示Stat3靶向RNA干扰重组体的构建成功,Pavu6 27-Stat3转染后HCT116细胞Stat3基因表达较空载体Pavu6 27转染的对照组显著下降。结论Stat3靶向RNA干扰重组体成功构建,并能有效抑制HCT116细胞中Stat3基因表达。本实验为下一步利用RNAi技术沉默肿瘤细胞中Stat3基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡或抑制其增生,为探索肿瘤基因治疗的新途径打下基础。     

microRNA-139-5p及其靶基因Notch1在结直肠癌中的作用

目的：探讨microRNA-139-5p（miR-139-5p）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞转移和侵袭的影响。 方法：用荧光定量PCR方法检测miR-139-5p在结直肠癌组织与不同结直肠癌细胞株中的表达变化;用Boyden小室分析和伤口愈合实验检测miR-139-5p转染及miR-139-5p抑制对结直肠癌细胞转移和侵袭能力的影响;生物信息学方法预测miR-139-5p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证,Western blot方法检测miR-139-5p转染对靶基因表达的影响。 结果：与各自的正常对照组比较,结直肠癌组织与结直肠癌细胞系中miR-139-5p表达均明显降低（P<0.05）。结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞转染miR-139-5p后,转移与侵袭能力均明显降低（均P<0.05）,而miR-139-5p抑制剂处理后,两种细胞的的侵袭能力均明显增强（均P<0.05）。生物信息学预测显示,Notch1是miR-139-5p的靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western blot结果显示,转染miR-139-5p后,结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞中Notch1蛋白表达均明显下调（均P<0.05）。 结论：miR-139-5p可能通过调节Notch1的表达而抑制肿瘤细胞的转移和侵袭,而下调的miR-139-5p可能在结直肠癌的发生发展中起了重要作用。     

microRNA-224在结肠癌细胞中的表达及意义

目的：探讨microRNA-224（miR-224）对结肠癌细胞中的表达及意义。 方法：用real-time PCR检测4种结肠癌细胞株（Caco-2、HCT116、HT-29、LoVo）和正常结肠黏膜组织中miR-224的表达水平;将HCT116细胞分别转染miR-224模拟物和阴性对照组序列,以未处理的HCT116细胞作为空白对照,用real-time PCR法检测各组细胞miR-224的表达水平,用MTT法和平板克隆实验法检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测各组细胞周期情况。 结果：4种结肠癌细胞株miR-224的表达均明显高于正常结肠黏膜组织（均P<0.05）;与空白对照组HCT116细胞比较,miR-224模拟物转染组HCT116细胞miR-224的表达水平明显升高,增殖活力明显增强,细胞克隆数量明显增高（均P<0.05）;细胞周期G1到S期转换的趋势增强（P=0.074）;阴性对照组序列转染组HCT116细胞的各项指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：miR-224在结肠癌细胞中表达上调,miR-224可能通过促进细胞增殖与细胞周期的演进,而在结肠癌发生发展的过程中发挥促癌基因的作用。     

下调X连锁凋亡抑制蛋白基因表达增强结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的研究

目的 观察下调X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)基因表达后结肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的变化.方法 采用脂质体包裹方法将携带靶向干扰XIAP序列的表达载体转染人结肠癌细胞HCT-8和HCT116,观察结肠癌细胞生长活性的变化;应用5-Fu后,观察结肠癌细胞对5-Fu敏感性的变化,并应用蛋白印迹方法检测结肠癌细胞内凋亡相关因子caspase-3的活性变化. 结果抑制XIAP基因表达后,结肠癌细胞HCT-8和HCT116的生长活性受到有效抑制;结肠癌细胞HCT-8对5-Fu的耐药性得到逆转(P＜0.01),HCT116对5-Fu的敏感性得到明显提高(P＜0.05);结肠癌细胞内caspase-3的表达活性提高,5-Fu诱导细胞凋亡的活性得到增强. 结论XIAP的表达是结肠癌细胞HCT-8和HCT116对5-Fu耐药的一个重要机制;抑制XIAP基因表达后能够增强结肠癌细胞HCT-8和HCT116对5-Fu化疗的敏感性.

Abstract：

Objective To investigate sensitivity of colon cancer cells to 5-fluorouracil after downregulation of XIAP gene expression. Method Colon cancer cells HCT-8 and HCT116 were transfected with a short hairpin RNA targeted to XIAP by liposome, cells viability were examined.5-fluorouracil was applied into two kinds of colon cancer cells. Tumor cells sensitiviy to chemotherapeutic drug was evaluated. Caspase-3 activity in tumor cells was examined by Western blot. Result After downregulation of XIAP expression, cell growing viability of these two kinds of colon cancer cells was restricted, HCT-8 resistance to 5-fluorouracil was reversed ( P ＜ 0. 01 ), HCT116 sensitivity to 5-fluorouracil was enhanced (P ＜ 0.05), caspase-3 expression in colon cancer cells was highly activated, apoptosis inducing activity of 5-fluorouracil was increased significantly. Conclusions XIAP expression was a important mechanism in colon cancer cells HCT-8 and HCT 116 resistant to 5-fluorouracil, sensitivity to 5-fluorouracil of HCT-8 and HCT-116 was increased by downregulation of XIAP expression.     

奥沙利铂联合低分子柑橘果胶对HCT116细胞增殖的抑制作用及机制

目的 探讨奥沙利铂(LOHP)联合低分子柑橘果胶(LCP)对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 MTT法检测LOHP单药及LOHP联合LCP对HCT116细胞增殖的影响;流式细胞仅检测以上两组给药处理HCT116细胞的凋亡比例以及细胞周期的变化;应用Western blot分析procaspase-3,-8,-9,PARP的变化.结果 两实验组对HCT116细胞增殖均有抑制作用,联合组抑制作用较LOHP组更为显著(P＜0.05).两组均能使HCT116细胞凋亡比例增加;联合组较LOHP组细胞凋亡更显著(P＜0.01).两组均出现G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增加;联合组较LOHP组增加更为显著(P＜0.01).两组均出现procaspase-3,-9,PARP蛋白的表达下调,联合组较LOHP组下调更加明显;两组间procaspase-8表达无明显差异.结论 LCP能增加LOHP对HCT116细胞增殖的抑制作用,该效应可能与细胞周期的调节以及活化线粒体凋亡途径有关.     

Hepatic Stellate Cells Promote Liver Metastasis of Colon Cancer Cells by the Action of SDF-1/CXCR4 Axis

Background  It has been determined that the chemokine receptor CXCR4 and its ligand stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) regulate several key processes in a wide variety of cancers. However, the function and mechanism of the SDF-1/CXCR4 system in the metastasis of colorectal cancer remain controversial. Methods  Immunohistochemistry was performed to examine quantitatively the expression of CXCR4 in 40 human samples of colorectal cancer and liver metastasis. The functions of SDF-1 on HCT116 colon cancer cells were investigated in vitro. We subcutaneously inoculated HCT116 cells with hepatic stellate cells (HSCs) expressing SDF-1. The CXCR4 inhibitor AMD3100 was tested in vitro and in vivo. Results  By quantitatively counting the number of cells, it was shown that there are more CXCR4-positive cells at the metastatic site in the liver compared with the primary sites. We demonstrated the effect of SDF-1 on the invasion and antiapoptosis of HCT116 cells in vitro. In mouse experiment of liver metastasis, intraperitoneal administration of AMD3100 blocked the metastatic potential of HCT116 cells. Furthermore, we found that α-smooth muscle actin (α-SMA)-positive myofibroblasts derived from HSCs, surrounding the liver metastasis foci, secreted SDF-1. The subcutaneous inoculation of HCT116 cells with HSCs promoted the tumor initiation in nude mice, indicating the importance of the direct interaction between these cells in vivo. Conclusion  These results suggest that HSCs play important role in liver metastasis of colon cancer cells by the action of SDF-1/CXCR4 axis and provide preclinical evidence that blockade of the axis is a target for antimetastasis therapy.