益气活血解毒方对胶原诱导性关节炎大鼠T、B、NK细胞增殖和分化的影响

目的应用益气活血解毒方干预胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠,探讨该方对类风湿关节炎(RA)外周血淋巴细胞增殖和分化的影响。方法 48只Wistar大鼠随机分为6组,以牛Ⅱ型胶原尾根及背部多点注射制作CIA大鼠模型,以免疫抑制剂来氟米特为阳性对照药物、益气活血解毒方进行干预,足趾容积测量仪测量各组大鼠足跖关节的肿胀度,流式细胞仪检测大鼠外周血淋巴细胞中T、B和自然杀伤(NK)细胞的比率。结果 (1)药物干预14天后,除空白组外,各组大鼠足跖关节持续肿胀,与加强免疫时比较,肿胀度有增加趋势,模型组与各治疗组比较差异无统计学意义(P0.05);药物干预28天后,模型组大鼠足跖关节肿胀度加剧,阳性对照组、中药各治疗组大鼠足跖关节肿胀度显著低于模型组(P0.01)。(2)模型组与空白组比较,CD3+CD4+T淋巴细胞在外周血中的比率显著升高(P0.01);阳性对照组、中药各治疗组CD3+CD4+T淋巴细胞比率比模型组均显著下降(P0.01);模型组CD3+CD8+T淋巴细胞在外周血中的比率与空白组比较有下降趋势,但差异无统计学意义;阳性对照组、中药中剂量与模型组比较比率下降明显(P0.01、P0.05)。模型组大鼠外周血中CD3-CD19+B细胞比率与空白组比较差异无统计学意义,阳性对照组、中药各治疗组的B细胞比率与模型组比较均显著下降(P0.01)。模型组、治疗组大鼠CD3-CD56+NK细胞比率与空白组比较均显著下降(P0.01),而各治疗组与模型组比较差异无统计学意义。结论益气活血解毒方可以通过调控RA细胞的免疫应答网络,恢复其外周血循环和病变组织中淋巴细胞效应的动态平衡,从而达到治疗RA的目的。     

蓬草除痹汤对CIA大鼠外周血T淋巴细胞亚群影响的实验研究

目的:观察蓬草除痹汤(PCCB)对Ⅱ型胶原诱导关节炎大鼠模型(Collagen induce darthritis,CIA)外周血中T细胞亚群CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T的干预作用,探讨PCCB对类风湿关节炎免疫调节机制。方法:采用类风湿性关节炎(RA)模型CIA大鼠,随机分为PCCB组、雷公藤组、空白组及模型组,连续给药28d,观察大鼠致炎关节肿胀度、关节炎指数(AI)变化、用流式细胞技术观察大鼠外周血中CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T水平。结果:较模型组比,PCCB组、雷公藤组可以显著改善大鼠致炎关节肿胀度及AI(P<0.01);PCCB汤组及雷公藤组外周血中CD4+T明显降低、CD8+T明显升高(P<0.01),CD4+T/CD8+T显著降低(P<0.05)。结论:PCCB能有效改善CIA大鼠关节肿胀度、降低AI,其机制可能与调节大鼠血清中CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T水平有关,为PCCB治疗RA的临床应用奠定基础。     

祛风消炎汤对类风湿关节炎大鼠滑膜组织Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究

目的:探究祛风消炎汤对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜组织Th17/Treg细胞转录因子RORγt和Foxp3表达影响的研究。方法:制备胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型,分为模型组、祛风消炎汤低、中、高剂量组(10、20、40g/kg)及地塞米松组(2mg/kg),每组10只,另取10是正常大鼠作为对照组,共治疗35天。测定各组大鼠治疗前后足关节炎指数(AI)和右后足肿胀度,流式细胞术检测各组大鼠滑膜组织辅助性T细胞17(Th17)和调节性细胞T细胞(Terg)水平,RT-PCR法检测RORγt mRNA和Foxp3mRNA表达水平。结果:治疗后,相比较于模型组,祛风消炎汤能呈剂量依赖性降低CIA大鼠AI评分及足肿胀程度(P0.05)。与模型组比较,祛风消炎汤低、中、高剂量组Treg细胞占比及Foxp3mRNA水平显著增加(P0.05),Th17细胞占比、Th17/Treg比值及RORγt mRNA水平显著降低(P0.05)。结论:祛风消炎汤对RA大鼠具有良好的治疗作用,其作用机制可能与通过降低RA大鼠滑膜组织RORγt水平,提升Foxp3水平来调节Th17/Treg平衡有关。     

温化蠲痹方对CIA大鼠外周血Th_1/Th_2细胞平衡的影响

目的：观察中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠外周血Th1/Th2细胞平衡的影响,探讨温化蠲痹方治疗CIA的作用机制。方法：采用牛Ⅱ型胶原乳剂于大鼠尾根部注射,建立CIA模型。随机分为模型组、MTX组、温化蠲痹方组,另设正常对照组,各组分别给药30天后,运用ELISA法检测各组大鼠外周血Th1/Th2细胞水平。结果：与模型组比较,中药组和MTX组大鼠关节炎指数（AI）评分明显降低（P=0.000）;与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠AI评分均明显降低（P=0.006;P=0.009）。与正常组比较,模型组大鼠外周血IFN-γ/IL-4比值明显升高（P=0.000）;与模型组比较,中药组和MTX组大鼠外周血IFN-γ/IL-4比值明显降低（P值均为0.000）,两组之间比较差异无显著性（P=0.642）。结论：CIA大鼠外周血Th1/Th2细胞亚群失衡,恢复CIA大鼠外周血Th1/Th2细胞平衡可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。     

清热活血方对胶原诱导性关节炎大鼠肠道微生态及Th17/Treg平衡的影响

目的通过观察清热活血方对胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠的肠道微生态和Th17/Treg平衡的影响,探讨其治疗类风湿关节炎(rhumatoid arthritis,RA)的机制。方法SD大鼠30只,采用随机数字表法分为与正常组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、清热活血方组、益生菌组,每组6只。除正常组外,其余组大鼠均以Ⅱ型胶原和完全弗式佐剂的混合乳化剂为抗原,尾根部注射制作CIA模型。MTX组每周给予MTX 1.0 mg/kg;清热活血方组和益生菌组每晨分别给予20 g/kg清热活血方和350mg/kg益生菌。连续灌胃4周后,采用16Sr DNA技术对大鼠肠道粪便菌群测序并分析;采用流式细胞术检测各组大鼠脾脏辅助性细胞亚群Th17(CD4~+IL-17~+)细胞和调节性T细胞Treg(CD4~+CD25~+Foxp3~+)的比例。结果与正常组比较,模型组菌群丰度降低(P0.05,P0.01),Th17水平升高,Treg水平降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,清热活血方组菌群丰度升高(P0.05,P0.01),Th17水平降低,Treg水平升高(P0.05);MTX组和益生菌组Treg水平均上调(P0.05),但下调Th17水平不明显(P0.05)。结论清热活血方缓解RA的关节症状可能与其改善肠道菌群失调,调节机体Th17/Treg免疫失衡有关。     

蓬草除痹汤对类风湿关节炎免疫调节作用的实验研究

目的观察蓬草除痹汤(PCCB)对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型外周血中细胞因子IL-17、IL-1β、TNF-α及T细胞亚群CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T的干预作用,探讨PCCB治疗类风湿关节炎(RA)的抗炎免疫作用机制。方法建立CIA大鼠模型,随机分为PCCB组、雷公藤组、空白组及模型组,连续给药28 d,采用酶联免疫吸附(ELISA)法、流式细胞术评价PCCB对CIA大鼠关节炎指数(AI)及大鼠血清IL-17、IL-1β、TNF-α和CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T表达的影响。结果治疗28 d后,PCCB组、雷公藤组关节肿胀度及AI显著改善(P均0.01);血清IL-17、IL-1β、TNF-α水平明显降低(P均0.01);CD4+T降低,CD8+T升高,CD4+T/CD8+T显著降低,且PCCB组的抑制作用明显优于雷公藤组(P0.05)。结论 PCCB能有效改善CIA大鼠关节炎指数,下调大鼠血清中致炎因子IL-17、IL-1β、TNF-α的水平,调节大鼠血清中CD4+T、CD8+T及CD4+T/CD8+T比例,这可能是PCCB治疗RA的主要机制,为临床应用及进一步研究奠定了基础。     

熊果酸对胶原诱导性关节炎大鼠外周血Th17/Treg细胞比例失衡的影响

目的:研究熊果酸(UA)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠外周血淋巴细胞辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)比例失衡的影响。方法:雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠,复制CIA模型,造模成功后CIA大鼠随机分为CIA模型组、UA低剂量组、UA高剂量组、甲氨喋呤(MTX)组、UA+MTX组并予以对应处理。于初次免疫21 d时,收集各组大鼠的外周血淋巴细胞,进行细胞染色,流式细胞术检测外周血Th17/Treg细胞比例,并分离CD~+_4T细胞,RT-PCR法检测RORr、FoxP3、SOCS3mRNA的表达。结果:(1)与空白组相比,模型组CIA大鼠外周血Th17细胞明显增高,与模型组比较,治疗组(UA高剂量组、MTX组、UA+MTX组)Th17细胞比例明显下调;有显著统计学差异(P0.01)。(2)与空白组相比,模型组大鼠的外周血Treg细胞明显下调;与模型组比较,治疗组(UA高剂量组、MTX组、UA+MTX组)Treg细胞比例增高,有统计学差异(P0.05);(3)与空白组相比,模型组RORr升高,FoxP3、SOCS3降低;与模型组相比,各治疗组RORr均降低,FoxP3(UA高剂量组、MTX组、UA+MTX组)表达升高,SOCS3mRNA(UA低剂量组、UA高剂量组、UA+MTX组)表达升高。结论:UA高剂量组、UA+MTX组能抑制CD~+_4T细胞向Th17细胞分化,降低Th17细胞比例,升高Treg细胞比例,维持Th17/Treg细胞平衡,这是UA缓解实验性CIA关节炎症的可能机制。     

全蝎蜈蚣对CIA大鼠外周血CD4~+CD25~+FoxP3~+Treg细胞的调节

目的:观察全蝎蜈蚣对胶原免疫性关节炎(Collagen-Induced Arthritis,CIA)大鼠外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞的调节作用。方法:Wistar大鼠60只,随机分成6组,分别为正常对照组、模型对照组、全蝎蜈蚣高(0.4 g/kg)、中(0.2 g/kg)、低剂量(0.1 g/kg)组和Ⅱ型胶原蛋白(60μg/kg)治疗组(CⅡ组),二型胶原蛋白诱导大鼠关节炎,并采用流式细胞术检测大鼠外周血CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞及酶联免疫吸附试验检测血清中IL-2表达水平。结果:与模型组比较,全蝎蜈蚣高、低剂量组大鼠外周血CD4+CD25+T细胞及CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞水平显著升高,且中、低剂量组血清IL-2水平显著下降。结论:全蝎蜈蚣治疗关节炎大鼠可能是通过上调外周CD4+CD25+FoxP3+Treg细胞表达水平以恢复或重建免疫耐受而实现的。     

壮药透骨香水溶部位对胶原诱导型关节炎大鼠外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的:研究壮药透骨香水溶部位对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠外周血T淋巴细胞亚群及相关细胞因子的影响,探讨壮药透骨香水溶部位抗类风湿关节炎可能的作用机制。方法:雌性SD大鼠70只,随机分为空白对照组10只和造模组60只,造模组采用牛源Ⅱ型胶原与不完全弗氏佐剂乳化剂进行多点皮下注射致炎造模,致炎21 d后将造模成功大鼠随机分为透骨香水溶部位18.45、36.89、73.79 g生药/kg组、雷公藤多苷0.01 g/kg组和模型对照组,每组10只,连续灌胃给药28 d。末次给药后取大鼠外周血采用流式细胞术测定T淋巴细胞亚群(CD4~+、CD8~+)水平,取大鼠部分关节组织采用酶联免疫法(ELISA)检测关节组织匀浆液中IL-2、IL-10水平,取大鼠踝关节采用苏木精—伊红染色法(HE染色)观察关节滑膜组织病理变化。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠外周血中CD4~+T细胞数升高,CD8~+T细胞数降低,CD4~+/CD8~+比值显著升高,关节组织匀浆中IL-2含量显著升高,IL-10含量显著降低,病理提示滑膜内可见大量炎性细胞浸润,滑膜细胞排列紊乱(P<0.05或者P<0.01);与模型对照组比较,透骨香水溶部位73.79 g生药/kg组及雷公藤多苷0.01 g/kg组能显著降低CIA大鼠外周血CD4~+T细胞数和CD4~+/CD8~+比值,升高CD8~+T细胞数,降低CIA大鼠关节组织匀浆中IL-2含量,提高IL-10水平,改善CIA大鼠滑膜内炎性细胞浸润程度(P<0.05或者P<0.01)。结论:壮药透骨香水溶部位对CIA大鼠有干预治疗作用,其作用机制可能与调节T淋巴细胞亚群平衡,调控细胞因子IL-2、IL-10的表达有关。     

白芍总苷对关节炎大鼠骨质破坏及T细胞表达RANKL的影响

目的:观察白芍总苷(白芍总苷)对关节炎大鼠原、继发足肿、关节骨质破坏及其对外周血中T淋巴细胞表达破骨细胞分化因子(RANKL)的影响。方法:分别制备佐剂型关节炎(AIA)和胶原型关节炎(CIA)大鼠模型,给药自造模第七天始,持续49天。分别计算各组大鼠足肿胀度,对各组大鼠进行关节摄片观察骨质破坏情况,并检测各组大鼠外周血T细胞表达RANKL的量。结果:AIA和CIA大鼠原、继发性足肿胀度增加,后肢关节的骨密度降低,关节腔间隙增宽,关节结构破坏,且T细胞RANKL表达率显著高于正常对照组;白芍总苷50mg/kg和100mg/kg剂量可不同程度地改善AIA和CIA大鼠原、继发性足肿胀,减缓后肢关节骨质破坏;同时白芍总苷50和100mg/kg剂量可降低关节炎大鼠外周血中T细胞RANKL的表达量。结论:白芍总苷可通过抑制T细胞表达RANKL,从而抑制破骨细胞(OC)的分化,减缓关节炎大鼠原、继发性足肿胀度和关节的骨质破坏。