青藤碱对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞核因子κB信号转导的影响及其机制

背景：青藤碱是从中药青风藤中提取的生物碱单体。在治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)方面，具有较明确的疗效，但其治疗机制尚不清楚。目的：观察不同剂量的青藤碱体外作用对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子(TNF—α mRNA、白细胞介素1β(IL—1β)mRNA、白细胞介素10(IL-10)mRNA的影响，以阐明该药治疗RA的可能机制。设计：以细胞为研究对象，分组对照的重复测量设计、单位：一所军医大学医院的中医科和烧伤研究所。材料：实验于2002—03／2002—10在全军烧伤研究所实验室完成。实验动物为健康清洁级雄性Wistar大鼠25只。以AA大鼠为模型，收集滑膜细胞，依次作如下分组：正常对照组，AA组，AA+青藤碱30mg／L组，AA+青藤碱60mg／L组，AA+青藤碱120mg／L组。电泳迁移率改变分析法测NF—κB的活性，反转录PCR检测TNF-α mRNA，IL—1β mRNA，IL—10 mRNA的表达。主要观察指标：不同剂量的青藤碱体外作用对后佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞NF—κB活性，TNF—1β mRNA，IL—1β mRNA及IL—10 mRNA的对比结果。结果：与正常对照组相比，AA后滑膜细胞内NF—κB活性与TNF—α mR—NA，IL—1β mRNA，IL—10 mRNA的表达均显著升高，分别为17&;#177;6，0．570&;#177;0．047，0．730&;#177;0．093，0．683&;#177;0．081(t=2．71—4．07，P&;lt;0．05)。经青藤碱作用后，NF—κB活性的变化趋势与TNF—α mRNA，IL-1 mRNA的相关性较好(r=0．810，P&;lt;0．001；r=0．562，P&;lt;0．05)，与IL-10 mRNA无统计学上的相关性，青藤碱在一定的浓度范围(30～120mg／L)内呈浓度依赖性抑制NF—κB活性与TNF—α mRNA，IL—1β mRNA的表达，而对IL—10 mRNA的抑制效应与浓度无关。结论：青藤碱可能通过抑制NF—κB活性而降低滑膜细胞内TNF-α mRNA及IL—1βmRNA的表达。     

粉防己碱对高脂饮食兔血清白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α及血管壁细胞核因子-κB表达的影响

目的：观察中药粉防己碱对高脂饮食兔血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血管壁细胞核因子-κB表达的影响，进一步探讨粉防己碱抗动脉粥样硬化的机制。方法：将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(普通饲料)、高脂模型组(高脂饲料)和粉防己碱组(高脂饲料+粉防己碱)。喂养12周后处死动物，放射免疫法检测血清IL-1β，TNF-α含量；采用逆转录聚合酶链式反应对血管壁细胞核因子-κB mRNA表达定量分析：Western杂交定量分析血管壁细胞核因子-κB p65蛋白亚基。结果：高脂模型组血清IL-1β，TNF-α显著高于正常对照组和粉防己碱组(P&;lt;0．05)，正常对照组和粉防己碱组差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；高脂模型组(1．414&;#177;0．106)NF-κB mRNA显著高于正常对照组(0．085&;#177;0．062)和粉防己碱组(0．453&;#177;0．034)，而高脂模型组NF-κB蛋白亚基p65(10．08&;#177;5．75)显著低于正常对照组(35．90&;#177;3．07)和粉防己碱组(35．91&;#177;4．38)(P&;lt;0．001)。结论：粉防己碱有抑制炎症因子IL-1β，TNF-α合成和分泌的作用；高血脂激活NF-κB，p65易位人胞核促进转录而降解，而粉防己碱对其有抑制作用，这可能是粉防己碱抗AS作用的机制。     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子的变化及免疫功能机制

背景严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱,活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质.烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚.目的观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF-κB抑制剂吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB活性、IκB-α的表达及肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制.设计随机对照的实验研究.单位创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室.材料实验于1999-01/06在第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成.实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠30只.干预以小鼠常规烫伤模型造成体表面积15%Ⅲ度烫伤.实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组,即0(正常对照组),2,6,12,24,48 h组.收集腹腔巨噬细胞.采用放射免疫法检测TNF-α的含量,电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,免疫印迹法测IκB-α的表达,反转录-PCR测TNF-α mRNA的表达.主要观察指标①检测TNF-α的含量.②测定NF-κB的活性.③检测IκB-α的表达.④测TNF-α mRNA的表达.结果烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进,于伤后12 h达到高峰,为(1 085.65±122.99)ng/L,较正常对照组明显增高(t=14.92,P＜0.01).NF-κB活性于伤后明显活化,于2 h达到了高峰(t=13.31,P＜0.01),为(56.8±7.3)RDU,早于TNF-α的增多.与正常对照组相比,IκB-α的表达于烫伤后2 h显著下降(t=4.23,P＜0.01),达到0.632±0.086,以后上升,至24 h达到高峰(t=7.06,P＜0.01),为1.161±0.097,48 h稍降(t=4.82,P＜0.01),为1.149±0.167.以伤后12 h为调控点,予PDTC后NF-κB活性及TNF-α mRNA表达量均显著下降(P＜0.01).结论烫伤后NF-κB活性及TNF-α表达明显增强,IκB-α对NF-κB在高水平上维持着一种制约关系.烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB信号途径参与TNF-α表达的调控.     

烧伤后磷酸化酪氨酸和核因子-κB表达及细胞因子分泌改变的研究

目的探讨烧伤后早期腹腔巨噬细胞表达磷酸化酪氨酸(Tyr-P)、核因子-Kappa B(NF-κB)mRNA及分泌细胞因子的动态变化。方法采用小鼠20%体表面积的Ⅲ度烫伤模型,分离和培养小鼠腹腔巨噬细胞。用免疫组织化学方法观察烫伤后24小时内不同时间Tyr-P的变化;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察NF-κB mRNA表达的情况;用酶联免疫吸附(ELISA)方法测定上述细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)的水平。结果烫伤后1小时腹腔巨噬细胞的Tyr-P表达就明显增高,与假烫伤组比较差异显著(P<0.01),这种改变在伤后24小时内持续存在;烫伤后1小时NF-κB mRNA表达明显增强,以伤后2小时为明显(P<0.01),伤后4、6小时表达逐步减弱,但仍较假烫伤组高(P均<0.05);烫伤小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-6水平明显增高,烫伤后其含量在不同时期有所不同,与假烫伤组比较差异显著(P均<0.01)。烫伤小鼠腹腔巨噬细胞Tyr-P、NF-κB mRNA与TNF-α、IL-6呈正相关。结论烫伤可使巨噬细胞中Tyr-P、NF-κB mRNA表达增强,分泌TNF-α、IL-6增多,在介导内毒素所致多脏器损害中可能起一定作用。     

雷公藤内酯醇对类风湿关节炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的观察雷公藤内酯醇治疗类风湿关节炎(RA)大鼠的疗效,并通过Toll-样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法将24只健康SD大鼠,随机分为空白对照组、RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组,每组6只。采用热杀死结核分枝杆菌诱导RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠制作RA模型;造模成功后,阳性药双氯芬酸组给予10mg/kg双氯芬酸灌胃,雷公藤内酯醇组大鼠给予6mg/kg雷公藤内酯醇灌胃,空白对照组和RA模型组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。采用ELISA法测定大鼠血清中炎性细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6]表达水平;评价关节炎指数及足体积。免疫组织化学法检测关节滑膜组织TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达,q-PCR法检测滑膜组织TLR4mRNA的表达。结果与空白对照组比较,RA模型组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著升高(P0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著下降(P0.05),且雷公藤内酯醇组TNF-α、IL-4、IL-6表达水平呈极显著下降(P0.01)。与RA模型组比较,雷公藤内酯醇组在第8、12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P0.05),阳性药双氯芬酸组在第12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P0.05)。与空白对照组比较,RA模型组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著上调(P0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组滑膜组织中TLR4、NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下降(P0.05),雷公藤内酯醇组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下调(P0.05)。结论雷公藤内酯醇可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的信号因子表达,从而降低炎性因子的产生,减少炎性反应,起到治疗RA的作用。     

一氧化氮和白介素-10抑制核因子-κB活化的实验研究

目的探讨一氧化氮(NO)和白介素-10(IL-10)对内毒素(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的调节,为临床运用提供理论依据.方法用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、NO+LPS组和IL-10+LPS组.用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量.结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4 h显著高于正常对照组(P＜0.01);NO+LPS组和IL-10+LPS组的NF-κB活性和TNF-α含量与LPS组相比均明显下降,尤在刺激后1 h最显著(P＜0.01).结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;NO和IL-10可抑制NF-κB活化,减少TNF-α的释放,缓解LPS诱导的ALI.     

雷公藤内酯醇对大鼠重症急性胰腺炎肺损伤的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇对重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤大鼠的保护作用及其可能机制.方法 将36只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组和雷公藤内酯醇处理组(Tri组)3组,每组6只.sham组仅行剖腹术;Tri组和模型组采用牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法复制SAP肺损伤模型,然后分别腹腔注射雷公藤内酯醇0.2 mg/kg或等量生理盐水.制模后6 h处死动物,取肺组织测定肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达、蛋白含量及核转录因子-κB(NF-κB)活性.结果 与sham组比较,模型组肺组织TNF-α mRNA与IL-1β mRNA表达及蛋白含量、NF-κB活性均显著升高;与模型组比较,Tri组上述指标均明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.01).结论 雷公藤内酯醇对SAP肺损伤大鼠具有一定保护作用,与抑制NF-κB活性进而下调TNF-α、IL-1β等炎症因子表达有关.     

一氧化氮和白介素—10抑制核因子—kB活化的实验研究

目的探讨一氧化氮(NO)和白介素-10(IL-10)对内毒素(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的调节,为临床运用提供理论依据.方法用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、NO+LPS组和IL-10+LPS组.用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量.结果LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h显著高于正常对照组(P＜0.01);NO+LPS组和IL-10+LPS组的NF-κB活性和TNF-α含量与LPS组相比均明显下降,尤在刺激后1h最显著(P＜0.01).结论LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;NO和IL-10可抑制NF-κB活化,减少TNF-α的释放,缓解LPS诱导的ALI.     

雌二醇对骨髓基质细胞核结合因子α1基因及成骨细胞生成的影响

目的研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的条件培养体系中, 17β-雌二醇( E2)对其核结合因子α 1 (Cbfα 1 )基因表达的影响,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用.方法取自 1只 3月龄雌性 SD大鼠骨髓基质细胞在生长培养基中传代后,用 1,25(OH)2D3和地塞米松( DEX)诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化.应用半定量 RT- PCR技术,观察不同浓度 E2对骨髓基质细胞分化过程中核结合因子α 1mRNA表达的影响,以α-磷酸奈酚为底物,测定细胞碱性磷酸酶的活性, Van Gieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量.结果 E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 Cbfα 1 mRNA的表达,且呈剂量依赖性.E2浓度为 0,1× 10- 10, 1× 10- 8和 1× 10- 6mmol/L时, Cbfα 1 mRNA的表达量分别为 23.4%± 1.8%, 21.8%± 2.0%, 15.8%± 1.5% ( t=6.3, P< 0.01)和 5.8%± 0.8%( t=17.8, P< 0.01).Northern blot 结果显示 Cbfα 1 mRNA的表达量分别为 4.22± 0.11, 2.51± 0.12( t=21, P< 0.01), 1.88± 0.10( t=31, P< 0.01)和 1.17± 0.09( t=41, P< 0.01).ALP活性随 E2浓度增加而降低,在上述 E2浓度时, ALP活性分别为 (42.6± 2.5)U/g,(17.9± 2.0)U/g( t=15, P< 0.01) ,(10.8± 1.5) U/g( t=21, P< 0.01)和 (3.6± 0.7)U/g( t=29, P< 0.01).细胞Ⅰ型胶原的含量随 E2浓度增加而降低.结论 E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中 Cbfα 1mRNA的表达,减少成骨细胞的生成.     

健脑益智口服液在脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用及其机制

目的 探讨健脑益智口服液在反复脑缺血再灌注损伤中的神经保护机制. 方法 实验分为空白对照组、假手术组、模型组、中药组.实验期间空白对照组、假手术组、模型组以蒸馏水灌胃,中药组以健脑益智口服液灌胃,用药 5 d后实施脑缺血再灌注术.手术后第 1,10天,小鼠断头取脑以测定超氧化物歧化酶( SOD)的活性、丙二醛、肿瘤坏死因子α( TNF-α)以及白细胞介素 1β( IL-1β)的表达. 结果 与对照组 (26.82± 3.58) mg/g相比,模型组鼠脑缺血再灌注后 SOD活性第 1天 (13.95± 4.52) mg/g 和第 10天 (15.82± 4.39) mg/g 明显降低,丙二醛、 TNF-α ,IL-1β含量显著升高.与模型组相比,健脑益智口服液能显著提高 SOD[(21.35± 4.07) mg/g]的活性 (F=16.56, q=3.29,P< 0.05),并降低丙二醛的水平 (F=81.88,q=34.61,P< 0.01).健脑益智口服液能显著下调小鼠大脑皮质 TNF-α (F=96.44,q=35.11,P< 0.01)和 IL-1β (F=38.30,q=40.92,P< 0.01)的水平. 结论 健脑益智口服液通过降低脑缺血再灌注后脑氧化反应以及 TNF-α和 IL-1β表达而起到神经保护作用.     

羧胺三唑对TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞中细胞因子分泌和NF-κB活化的影响

目的 探讨羧胺三唑对TNF-α诱导的佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞分泌促炎细胞因子的影响及部分机制.方法 用弗氏完全佐剂诱导大鼠佐剂性关节炎模型,分离培养的佐剂性关节炎成纤维样滑膜细胞用20 ng/ml TNF-α刺激并用不同浓度羧胺三唑（10、20、40 μmol/L）处理.ELISA法检测成纤维样滑膜细胞上清中IL-1β和IL-6含量,Western blot法检测NF-KB p65的蛋白表达.结果 经20 ng/mlTNF-α刺激后,成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β和IL-6水平,以及细胞核中NF-KB p65的表达显著增加（P＜0.01）.羧胺三唑（20、40 μmol/L）能够显著抑制TNF-α诱导的IL-1β[（417.39 ＋29.80） pg/mlvs.（264.63±9.35） pg/ml,（186.13±25.71）pg/ml,P ＜0.01]和IL-6[（383.45±32.13） pg/ml vs.（248.39±30.51） pg/ml,（189.64±27.86） pg/ml,P＜0.01]分泌,且明显减少细胞核中NF-κB p65的表达（P＜0.01）.结论 羧胺三唑可能通过抑制NF-KB活化来减少TNF-α诱导的佐剂性关节炎成纤维样滑膜细胞中促炎细胞因子IL-1β、IL-6的产生.     

血管紧张素Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB信号通路的影响

目的 阐明血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肺泡巨噬细胞核转录因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 收集正常或其他肺病患者正常肺叶组织肺泡灌洗液,分离、纯化、培养肺泡巨噬细胞.予10-6M AngⅡ刺激15,30,60,120 min.另外,予AT-1受体阻断剂irbesartan(10-6M)预处理肺泡巨噬细胞60 min后再予10-6 M AngⅡ刺激60 min.设置对照组.凝胶电泳移动抑制实验(EMSA)检测NFκB的结合活性.免疫蛋白质印迹检测胞浆内IκBα的表达.RT-PCR检测TNF-α和ICAM-1的表达.应用SPSS 13.0软件进行One-Way ANOVA方差分析,多重比较采用LSD法.以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 AngⅡ刺激肺泡巨噬细胞15 min NF-xB结合活性增强,60 min达到峰值.AT-1受体阻断剂irbesartan可阻断NF-κB结合活性增强.与对照组(1.0)相比,AngⅡ处理组(0.29±0.11)ⅠκBα旺表达减弱,且差异具有统计学意义(P=0.013).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组ⅠκBα表达(0.83±0.12)则增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与对照组(0.42±0.099)相比,AngⅡ处理组TNF-α(1.13±0.17)表达增强,且差异具有统计学意义(P=0.001).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.77±0.15)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.02).与对照组ICAM-1表达(0.16±0.050)相比,AngⅡ处理组(0.55±0.08)增强且差异具有统计学意义(P=0.003).与AngⅡ处理组相比,AngⅡ+irbesartan处理组(0.32±0.07)减弱,且差异具有统计学意义(P=0.001).结论 Ang Ⅱ对肺泡巨噬细胞NF-κB通路有正向调节作用.     

核因子κB抑制剂PDTC对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用

目的探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用。方法构建动静力失衡性颈椎病大鼠模型,将造模成功大鼠分为模型组,PDTC低、中、高剂量组,另外设立假手术组(仅切开颈部皮肤),每组大鼠10只,PDTC低、中、高剂量组大鼠每天分别腹腔注射50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg PDTC,假手术组及模型组腹腔注射等量生理盐水,连续28 d。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠椎间盘组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)及IL-6含量,Realtime PCR检测TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA表达,Western blot检测各组大鼠椎间盘组织中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达。结果与假手术组比较,模型组中大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量提高(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量上调(P <0. 05)。与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量降低(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量下调(P <0. 05),并呈剂量依赖性。结论 PDTC能显著地抑制颈椎病大鼠椎间盘炎症反应,并其作用呈剂量依赖性。     

甘草酸二铵对急性肺损伤大鼠肺组织糖皮质激素受体及核因子κB表达的影响

目的 观察甘草酸二铵(GL)对急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织核因子κB(NF-κB)、糖皮质激素受体(GR)表达的调控作用及对血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)表达的影响.方法 将24只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组和GL干预组,每组8只.ALI模型组、GL干预组分别给予内毒素(LPS)5 mg/kg尾静脉注射;IPS注射前1 h,GL干预组给予GL 20 mg/kg静脉注射.观察4 h后各组大鼠肺组织病理,测定肺湿干比(W/D)、PaO_2,并采用逆转录-PCR反应检测肺组织NF-κB mRNA,GR mRNA的表达,western blot法测定肺组织Nf-κB及GR蛋白的表达,ELISA法测定血清TNF-α,IL-10质量浓度.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析,各组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用q检验.结果 (1)ALI模型组TNF-α为(153.68±20.42)ng/L,明显高于生理盐水组(43.96±7.57)ng/L(P<0.01)和GL干预组(87.23±7.52)ng/L(P<0.01).ALI模型组IL-10为(42.48±6.81)ug/L,明显高于生理盐水组(24.72±8.03)ng/L(P<0.01),但低于GL干预组水平(58.33±9.62)ug/L(P<0.05).(2)ALI模型组NF-κBmRNA和蛋白的表达水平[分别为(3.414±0.521),(254.7±16.4)]明显高于生理盐水组[分别为(0.432±0.085),(45.6±7.3)](P<0.01),而GRmRNA和蛋白的表达[分别为(0.152±0.025),(11.5±2.3)]则明显低于生理盐水组[分别为(0.434±0.013),(54.6±6.5)](P<0.01);GL干预组NF-κB mRNA和蛋白的表达水平[分别为(1.894±0.272),(133.5±11.7)]明显低于ALI模型组(P<0.01),GR mRNA和蛋白的表达[分别为(0.308±0.033),(28.2±5.6)]则明显高于ALI模型组(P<0.05,P<0.01).(3)ALI模型组肺组织出现充血、水肿、中性粒细胞浸润,GL干预组肺部炎症较ALI模型组减轻.结论 甘草酸二铵可能通过下调NF-κB的表达,同时提高GR的表达,进而调节炎症因子TNF-α及抗炎介质IL-10的表达,从而起到减轻ALI的作用.     

白介素-10对内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB活化及肿瘤坏死因子释放的调节

目的 探讨白介素-10对内毒素(LPS)诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的调节,为临床运用白介素-10提供理论依据。方法 用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、IL-10＋LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量。结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h明显高于正常对照组;IL-10＋LPS组NF-κB活性和TNF-α含量均显著低于LPS组。结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;白介素-10可抑制NF-κB活化而减少TNF-α的释放。     

白介素10和一氧化氮对内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子κB活化及肿瘤坏死因子释放的调节

目的：探讨白介素-10和外源性一氧化氮(NO)对内毒素（LPS）诱导肺泡巨噬细胞(PAM)核因子-κB(NF-κB)活化及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因表达的调节,为临床运用提供理论依据。方法：用支气管肺泡灌洗法收集PAM进行培养,分为正常对照组、LPS组、IL-10+LPS组和NO+LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析（EMSA）法和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量。结果：LPS组NFκB活性和TNF-α含量在刺激后3小时显著高于正常对照组;IL-10+LPS组和NO+LPS组NF-κB活性和TNF-α含量均显著低于LPS组。结论：LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNFα基因表达增强;白介素-10和外源性NO可抑制NF-κB活化而减少TNF-α的释放。     

树突状细胞CD80和CD86表达及胞外白细胞介素12分泌与不同剂量青藤碱干预的影响

背景:青藤碱是从抗风湿中药青风藤中分离提取的单体生物碱,具有抗炎、镇痛、免疫抑制等药理作用,该药用于治疗类风湿性关节炎等风湿性疾病具有较明确的疗效,在临床上得到了广泛的应用。树突状细胞是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞。目的:观察不同剂量青藤碱对树突状细胞CD80和CD86表达及胞外白细胞介素12分泌的影响。设计:重复测量实验。单位:广东医学院药理教研室。材料:实验于2004-09/2005-05在解放军第三军医大学全军免疫学研究所完成。健康志愿者外周血由西南医院血库提供。青藤碱由湖南正清药业有限公司提供。RPMI1640培养基购于Hyclone公司,FITC标记的单克隆抗体CD80、CD86、鼠免疫球蛋白亚型IgG1均购于eBioscience公司,重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,重组人白细胞介素4,肿瘤坏死因子α购于PE公司。人白细胞介素12ELISA试剂盒购于法国Diaclone公司。方法:取健康志愿者外周血稀释,培养,按重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子1×106U/L、重组人白细胞介素45×105U/L终浓度加入细胞因子,培养7d后可获得树突状细胞。①将常规培养7d后的树突状细胞调整细胞浓度为2×108L-1,加入6孔培养板,分别加入青藤碱使其终浓度为3,10,30mg/L以及肿瘤坏死因子α使其终浓度为10μg/L,同时设对照组,于第9天分别收集悬浮细胞,每管取2×105细胞,用PBS洗涤2次,加入20μLFITC标记的CD80或CD86,对照管则加入鼠免疫球蛋白亚型IgG1,4℃避光孵育30min,充分洗涤后,10g/L多聚甲醛固定,将细胞悬液在流式细胞仪上进行分析。②将常规培养7d后的树突状细胞调整细胞浓度为2×108L-1,加入6孔培养版,分别加入青藤碱使其终浓度为3,10,30mg/L以及肿瘤坏死因子α使其终浓度为10μg/L,同时设对照组,继续培养48h后,收集上清进行白细胞介素12测定。白细胞介素12的检测采用夹心ELISA法检测胞外的白细胞介素12分泌量,按试剂盒说明操作。主要观察指标:①不同剂量青藤碱对树突状细胞表面CD80及CD86表达的影响。②不同剂量青藤碱对树突状细胞分泌白细胞介素12的影响。结果:①树突状细胞表面CD80及CD86表达:不同剂量青藤碱组与对照组树突状细胞表面CD80分子阳性表达率及平均荧光强度差异无统计学意义(P>0.05),各组细胞表面CD86分子阳性表达率及平均荧光强度差异亦无统计学意义(P>0.05)。②各组树突状细胞分泌白细胞介素12水平检测结果:由ELISA测量值可见,青藤碱小、中、大剂量组树突状细胞白细胞介素12水平分别为(863.1±33.7),(668.8±31.9),(512.6±29.6)ng/L,高于对照组[(922.2±36.6),P<0.05-0.01],随青藤碱剂量增大,抑制树突状细胞分泌白细胞介素12水平呈依赖性减少。结论:青藤碱可剂量依赖性地抑制树突状细胞分泌白细胞介素12,而对树突状细胞表面CD80和CD83表达无明显影响;青藤碱的抗类风湿作用可能与其抑制树突状细胞分泌白细胞介素12有关。     

BRMS1通过下调NF-κB核转位抑制成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β

目的探讨乳腺癌转移抑制蛋白1（BRMS1）对人类风湿性关节炎（RA）的成纤维样滑膜细胞（FLS）分泌IL-1β的影响和机制。方法分别取4例RA患者膝关节滑膜组织及1例正常人（normal）膝关节滑膜组织,采用组织贴壁法分离FLS。用慢病毒法过表达BRMS1蛋白。Western blot检测BRMS1蛋白及核蛋白NF-κB水平,Elisa法检测细胞培养基中IL-1β水平,免疫荧光检测NF-κB核转位。结果RA组FLS的BRMS1蛋白表达较N组明显下调,但NF-κB核转位明显增加、IL-1β分泌明显增加。RA组FLS过表达BRMS1后,FLS核蛋白中NF-κB表达明显减少、IL-1β分泌下降。LPS诱导的NF-κB核转位和IL-1β表达增加被过表达BRMS1明显抑制。结论BRMS1可以抑制NF-κB核转位,从而减少成纤维样滑膜细胞分泌IL-1β。      

罗格列酮对兔二次打击多器官功能障碍综合征的保护作用

[目的]探讨在兔二次打击多器官功能障碍综合征(MODS)动物模型中PPAR-γ、NF-κB、TNF-α、IL-10的表达,血气及生化指标的变化以及罗格列酮及GW9662对其的影响.[方法]在失血性损伤的基础上以脂多糖(LPS)腹腔注射作为二次打击制备兔MODS模型,使用PPAR-γ的激动剂罗格列酮和拮抗剂GW9662进行干预,测定24 h后PPAR-γ、NF-κB、TNF-α、IL-10在肝脏中的表达以及血气及生化指标的变化.[结果]T-H组与D-H-S组较之sham组中PPAR-γmRNA的表达下降,具有显著差异性(P<0.05).在D-H组中,罗格列酮亚组较空白组明显升高,具有显著差异性(P<0.05).GW9662亚组较之罗格列酮亚组明显下降,具有显著差异性(P<0.05).在T-H组较之于sham组,NF-κB、TNF-α的含量增加且具有显著性(P<0.05),IL-10与sham组没有显著性差异(P>0.05).在D-H-S组中NF-κB、TNF-α的含量较T-H组明显增加(P<0.05),IL-10较sham组明显升高(P<0.05),与T-H组相比没有明显差异(P>0.05).在D-H-R组,NF-κB、TNF-α的含量较D-H-S组明显减少(P<0.05),IL-10的含量较D-H-S组明显增加(P<0.05).在D-H-G组NF-κB、TNF-α的含量较D-H-R组明显增加(P<0.05),IL-10的含量较D-H-R组明显减少(P<0.05).在未使用PPAR-γ激动剂或拮抗剂的情况下,T-H组中血气及生化指标较之sham组均没有明显改变,在D-H组中血气及生化指标较之sham组及T-H组均明显升高(P<0.05).在D-H组中罗格列酮组较空白组血气及生化指标明显下降(P<0.05),GW9662组较罗格列酮组血气及生化指标明显升高(P<0.05).[结论]PPAR-γ的激动剂罗格列酮能够改善兔二次打击MODS模型的器官功能.