切除修复交叉互补基因表达与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的:探讨卵巢癌细胞系COC1、COC1/DDP、A2780、A2780/DDP中切除修复交叉互补基因(ERCC1)表达与顺铂耐药的关系.方法:采用RT-PCR方法检测4种卵巢癌细胞系中ERCC1基因的表达,MTT检测各细胞系对顺铂的敏感性.结果:4种细胞系中均有ERCC1基因表达,耐药细胞中的表达量明显高于敏感细胞(P＜0.05).DDP作用于COC1、COC1/DDP细胞72小时后,随着ERCC1基因表达的升高,细胞对顺铂的耐药性增加.结论:卵巢上皮性癌细胞系中ERCC1基因表达的升高与卵巢癌顺铂耐药相关.     

Drosha基因在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达研究

目的 探讨Drosha基因和卵巢癌顺铂耐药的关系.方法 分别采用实时定量PCR和免疫印迹法检测Drosha基因mRNA及其蛋白在A2780/DDP及A2780细胞中表达的差异.结果 A2780/DDP细胞中Drosha基因mRNA及其蛋白的表达量分别是A2780细胞表达量的(56.79±1.65)%和(50.16±1.34)%,两者比较差异均有统计学意义(P＜0.001).结论 Drosha基因在A2780/DDP细胞中明显下调,提示Drosha基因和卵巢癌顺铂耐药相关.     

凋亡相关基因及蛋白的表达与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的探讨COC1/DDP和COC1中凋亡相关基因及凋亡相关蛋白的表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用于COC1及COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡率;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关基因及蛋白Bcl-2、Caspase-3、Smac和Survivin在COC1和COC1/DDP中的表达。结果DDP作用于COC1和COC1/DDP细胞48h后细胞随着DDP浓度的升高,凋亡率也相应增高。COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的表达明显高于COC1。COC1/DDP中促进凋亡的基因及蛋白Smac、Caspase-3的表达明显低于COC1。结论在COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的高表达以及促进凋亡的基因及蛋白Smac和Caspase-3的低表达可能参与COC1/DDP对DDP耐药的发生机制。     

miR-130a对卵巢癌A2780细胞顺铂耐药性的影响及其机制的研究

目的 探讨miR-130a表达的改变对卵巢癌A2780细胞（包括顺铂敏感细胞株A2780s和耐药株A2780/DDP）顺铂耐药性的影响及其机制。方法 将A2780s、A2780/DDP细胞各分为4组,分别予以单纯脂质体处理、转染阴性对照小RNA、miR-130a模拟物(可使miR-130a表达增加)、miR-130a抑制物(降低miR-130a表达)处理,MTS法检测各组细胞增殖情况和对顺铂的耐药性,RT-PCR、Western blot 法检测未处理和处理后细胞多耐药基因1（MDR1）、抑癌基因（PTEN） mRNA和蛋白的表达。结果 A2780/DDP细胞MDR1 mRNA和MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp）的表达高于A2780s细胞（PMDR1 mRNA和P-gp表达水平;下调miR-130a的表达,同样不影响细胞的增殖, 但增强其对顺铂的敏感性, 并可降低MDR1 mRNA和P-gp的表达,提高PTEN蛋白的表达。结论 miR-130a抑制物通过上调PTEN蛋白和下调P-gp的表达来逆转卵巢癌A2780细胞系对顺铂的耐药性。miR-130a有望成为耐药性卵巢癌基因治疗的新靶点。     

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌细胞耐药的影响

目的:观察RNA干扰沉默ERCC1基因对卵巢癌细胞耐药的影响。方法:体外合成靶向于ERCC1基因的小干扰RNA(ERCC1-siRNA),用脂质体法转染至卵巢癌耐药细胞系COC1/DDP,RT-PCR方法检测转染前后细胞内ERCC1 mRNA的表达,W estern blot方法检测ERCC1基因蛋白表达的改变,MTT实验检测转染前后COC1/DDP细胞对顺铂敏感性的变化。结果:转染ERCC1-siRNA后,COC1/DDP细胞中ERCC1基因的mRNA和蛋白表达均明显减少。RNA干扰联合顺铂用药能明显提高COC1/DDP细胞对顺铂的敏感性。结论:RNA干扰ERCC1基因能明显抑制COC1/DDP细胞内ERCC1基因mRNA和蛋白的表达,增加COC1/DDP细胞对化疗药顺铂的敏感性。     

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂敏感性的影响

目的研究ERCC1基因表达与卵巢癌顺铂耐药的关系。构建携带ERCC1基因小发夹干扰RNA的重组质粒表达载体,观察RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂敏感性的影响。方法RT-PCR方法检测COC1、COC1/DDP细胞中ERCC1基因表达,基因重组技术构建携带ERCC1小发夹干扰RNA的重组质粒表达载体,脂质体法转染COC1/DDP细胞,RT-PCR及westernblot方法检测转染后细胞内ERCC1mRNA和蛋白的表达,MTT法检测转染后细胞对顺铂敏感性的改变。结果COC1/DDP细胞中ERCC1基因表达明显高于COC1细胞。重组质粒转染后,COC1/DDP细胞中ERCC1mRNA和蛋白表达显著下调。转染后细胞对顺铂的敏感性显著增加。结论COC1/DDP中ERCC1基因表达增强与卵巢癌顺铂耐药相关。RNA干扰抑制ERCC1基因表达能增加卵巢癌耐药细胞COC1/DDP对顺铂的敏感性。     

雌激素影响卵巢癌细胞系COC1顺铂耐药的相关机制

目的研究雌激素对顺铂诱导卵巢癌细胞系COC1和COC1／DDP凋亡的影响。方法运用细胞培养、MTT、原位标记法、流式细胞术和免疫组化等方法，采取雌激素预先作用卵巢癌COC1和COC1／DDP细胞16h，随后与顺铂共同培养诱导凋亡方式，动态地观察雌激素对顺铂诱导这两个细胞系凋亡影响和此过程中细胞周期分布和p53蛋白表达的改变。结果雌激素促进顺铂诱导的COC1和COC1／DDP细胞凋亡．引起细胞周期由G2到S期的转变，p53蛋白对雌激素作用无明显影响。结论处于细胞周期顺铂不敏感期的卵巢癌细胞可能与其耐药有关，雌激素可增加耐药的COC1／DDP细胞顺铂敏感性。     

拓扑替康对人卵巢癌顺铂耐药细胞株作用的研究

目的:探讨拓扑替康(TPT)在体外诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP凋亡的作用及其对凋亡相关蛋白表达的影响。方法:应用TPT诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP凋亡,运用MTT法、透射电镜、DNA凝胶电泳检测和观察TPT对人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/杀伤效应、凋亡形态、生物特性。采用Westernblot印迹杂交法以检测TPT对凋亡相关蛋白bcl-2和bax表达的影响。结果:TPT可诱导细胞株A2780/DDP凋亡,经TPT作用后A2780/DDP细胞内bax蛋白增加,而bcl-2蛋白不表达,bax/bcl-2比值增加。结论:TPT可诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/DDP凋亡,其机制可能与bax蛋白高表达及bax/bcl-2不表达有关。     

肺耐药蛋白与卵巢癌顺铂耐药表型的相关性

目的探讨肺耐药蛋白（lung resistance protein，LRP）与人卵巢癌顺铂耐药细胞A2780／DDP顺铂耐药表型的关系及其分子机制。方法应用Lipofectamine^TM介导反义寡核苷酸（AsODN）体外转染人卵巢癌细胞；采用RT-PCR和Western blot法检测转染前后细胞中LRP基因的表达；应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法和流式细胞仪检测顺铂对转染前后细胞的杀伤效应；通过高效液相色谱仪（HPLC）检测经LRP AsODN或抗LRP单克隆抗体作用后，顺铂在A2780／DDP细胞质、核中的吸收和排泄情况。结果与非耐药亲本细胞A2780相比，A2780／DDP细胞内LRP表达明显增高。LRP AsODN能明显降低A2780／DDP细胞中LRP表达水平，逆转其顺铂耐药表型。经LRP AsODN或抗-LRP单克隆抗体作用后，A2780／DDP细胞中顺铂含量明显增高，尤以胞核中的含量上升为甚，而其从核中的排泄受到显著性抑制。结论LRP可能参与介导人卵巢癌细胞顺铂耐药表型的产生，并可能与顺铂在卵巢癌细胞胞质囊泡以及细胞核质交换中的代谢过程密切相关。     

miR-141-3p表达与卵巢癌细胞顺铂化疗敏感性的相关性研究

［摘要］ 目的 探讨miR-141-3p在卵巢癌细胞对顺铂耐药中的表达和作用。 方法 采用实时荧光定量PCR法检测A2780/DDP细胞中miR-141-3p的表达水平;下调/过表达miR-141-3p后,采用CCK-8法检测卵巢癌细胞对顺铂的增殖率并计算药物IC50;采用Western blot法检测增殖相关蛋白（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达水平。 结果 miR-141-3p在顺铂耐药的卵巢癌细胞株A2780/DDP中的表达显著高于顺铂敏感的卵巢癌细胞株A2780（P＜0.05）。与对照组比较,A2780细胞中过表达miR-141-3p后可显著增加细胞对顺铂的IC50,增殖相关蛋白PCNA表达亦增加（P＜0.05）。与对照组比较,A2780/DDP细胞中下调miR-141-3p表达后,细胞对顺铂的IC50显著下降,增殖相关蛋白PCNA表达下降（P＜0.05）。 结论 miR-141-3p在顺铂耐药卵巢癌细胞的耐药机制中表达增加,下调miR-141-3p可增加顺铂耐药的卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。     

MDR1 and MDR3 Genes and Drug Resistance to Cisplatin of Ovarian Cancer Cells

To investigate the relationship between MDR1 and MDR3 gene and drug resistance to cisplatin of ovarian cancer cells. Two siRNAs (MDR1, MDR3) which specifically targeted MDR1 and MDR3 genes were transfered into A2780/DDP cells. Then double staining with Annexin- V-FITC/PI was used to detect cell apoptosis by the flow cytometry (FCM). A2780/DDP cell viability was determined by MTT. MDR1 and MDR3 mRNA were assessed by RT-PCR. Caspase-3 protein was detected by Western blotting. Transfection of MDR1 and MDR3 siRNA into A2780/DDP cells failed to reverse the drug-resistance of A2780/DDP cells to cisplatin (P>0.05). No significant differ- ence in the apoptosis efficiency was observed between the MDR1 and MDR3 siRNA, pSuppressor- Neo vector transfection cells and untreated cells (P>0.05). In the presence of cisplatin of different concentrations, the viability of A2780/DDP cells was not significantly decreased after the transfection. No changes in MDR1 and MDR3 mRNA were found in MDR1 and MDR3 siRNA-transfected A2780/DDP cells. As compared with pSuppressorNeo and untreated groups, no significant difference existed in the expression of MDR1 and MDR3 mRNA (P>0.05). The expression of caspase-3 protein in MDR1 and MDR3 siRNA transfected A2780/DDP cells was not significantly increased. It is con- cluded that multidrug resistance induced by cisplatin in ovarian carcinoma cell lines is not due to overexpression of MDR1 and MDR3 gene. The drug resistance of ovarian carcinoma cells to cisplatin is not mediated by P-glycoprotein.     

MDR1 and MDR3 genes and drug resistance to cisplatin of ovarian cancer cells

Summary To investigate the relationship between MDR1 and MDR3 gene and drug resistance to cisplatin of ovarian cancer cells. Two siRNAs (MDR1, MDR3) which specifically targeted MDR1 and MDR3 genes were transfered into A2780/DDP cells. Then double staining with Annexin-V-FITC/PI was used to detect cell apoptosis by the flow cytometry (FCM). A2780/DDP cell viability was determined by MTT. MDR1 and MDR3 mRNA were assessed by RT-PCR. Caspase-3 protein was detected by Western blotting. Transfection of MDR1 and MDR3 siRNA into A2780/DDP cells failed to reverse the drug-resistance of A2780/DDP cells to cisplatin (P>0.05). No significant difference in the apoptosis efficiency was observed between the MDR1 and MDR3 siRNA, pSuppressorNeo vector transfection cells and untreated cells (P>0.05). In the presence of cisplatin of different concentrations, the viability of A2780/DDP cells was not significantly decreased after the transfection. No changes in MDR1 and MDR3 mRNA were found in MDR1 and MDR3 siRNA-transfected A2780/DDP cells. As compared with pSuppressorNeo and untreated groups, no significant difference existed in the expression of MDR1 and MDR3 mRNA (P>0.05). The expression of caspase-3 protein in MDR1 and MDR3 siRNA transfected A2780/DDP cells was not significantly increased. It is concluded that multidrug resistance induced by cisplatin in ovarian carcinoma cell lines is not due to overexpression of MDR1 and MDR3 gene. The drug resistance of ovarian carcinoma cells to cisplatin is not mediated by P-glycoprotein.     

卵巢癌顺铂耐药细胞中DNA转录与修复相关基因的表达

目的 研究DNA转录与修复相关基因的表达与卵巢癌顺铂耐药性之间的关系。方法 以卵巢癌亲本细胞系COC1为对照,应用cDNA微阵列检测其顺铂耐药细胞系COC1/DDP中DNA转录与修复相关基因的表达。结果和结论 与COC1细胞相比,COC1/DDP细胞有143个基因的表达水平发生改变,其中共有20个DNA转录与修复相关基因的表达发生改变,表达上调的有13个基因,表达下调的有7个基因,包括CAD、DDB1、DDIT4等大量DNA修复基因以及一般转录因子RNA多聚酶Ⅰ、Ⅱ基因和DHX9、DDX3X基因的表达上调以及MLH1和BTF3基因的低表达,提示COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性与DNA转录和损伤修复能力的异常有关。     

miR-181a在卵巢癌细胞中对顺铂的耐药作用

目的 探讨miR-181a在卵巢癌化疗抵抗方面的影响及其机制.方法 qRT-PCR检测卵巢癌细胞A2780及 A2780/DDP 中 miR-181a 的表达;对 A2780及 A2780/DDP 细胞分别进行 miR-181a mimics 和 inhibitors的转染,并利用qRT-PCR技术验证;MTT法检测转...