核因子-κB“诱饵性”寡核苷酸抑制LPS诱导的肠上皮细胞TLR4、IL-8的表达

目的： 研究NF-κB decoy寡核苷酸对LPS诱导结肠癌细胞SW480后，对TLR4、IL-8表达的影响。方法：体外培养SW480细胞，用LPS(10 μg/L)刺激3 h后，用脂质体lipofectin 2000介导NF-κB decoy ODNs转染6 h，收集细胞上清液，用ELISA法检测IL-8；提取细胞mRNA，经 RT-PCR法检测TLR4 mRNA、IL-8 mRNA的表达。并设对照组、Scrambled ODNs组、lipofectin 2000组进行比较。结果：LPS刺激后TLR4 mRNA、IL-8 mRNA和IL-8的表达明显强于对照组；用NF-κB decoy寡核苷酸干预，可以明显抑制TLR4 mRNA、IL-8 mRNA和IL-8的表达。而Scrambled ODNs组和转染剂lipofectin 2000组对其没有明显影响。结论：NF-κB decoy ODNs有望成为治疗IBD的一种新型基因药品。     

核酸锁修饰的NF-κB诱捕寡核甘酸对肺泡巨噬细胞源性基质金属蛋白酶9表达的影响

目的：研究核酸锁（LNA）修饰的NF-κB诱捕寡核甘酸(ODNs)对TNF-α诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者肺泡巨噬细胞（AM）源性MMP-9、MMP-2表达以及NF-κB活性的影响。方法:从COPD患者支气管肺泡灌洗液中分离与培养AM，脂质体转染NF-κB 诱捕 (decoy) ODNs和NF-κB 错配ODNs，接着以TNF-α刺激AM。以半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测MMP-9、MMP-2 mRNA的表达；以Western blotting检测MMP-9蛋白的表达；以凝胶阻滞分析实验（EMSA）检测NF-κB活性。结果:NF-κB decoy ODNs显著抑制TNF-α诱导的AM源性MMP-9、MMP-2 mRNA及MMP-9蛋白的表达（P<0.05）；错配ODNs则对TNF-α诱导的AM源性MMP-9、MMP-2 mRNA以及MMP-9蛋白的表达无显著影响（P>0.05）。NF-κB decoy ODNs显著降低TNF-α刺激所致的NF-κB活性水平（P<0.05），而错配ODNs则对TNF-α刺激所致的NF-κB活性水平无显著影响（P>0.05）。结论:LNA修饰的NF-κB decoy ODNs能够抑制TNF-α诱导的AM源性MMP-9和MMP-2的表达；LNA修饰和decoy ODNs为COPD的治疗提供了新的思路。     

NF-κB "decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞产生NO及活性氧的影响

目的 :探讨NF -κB“decoy”寡核苷酸 (ODNs)对脂多糖 (LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774 1产生一氧化氮 (NO)及活性氧的影响。方法 :通过体外细胞培养技术 ,观察转染NF -κB“decoy”ODNs对LPS刺激巨噬细胞产生NO和活性氧 (ROS)的影响 ,以及诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)活力的变化。结果 :在LPS刺激的巨噬细胞中转染NF -κB“decoy”ODNs减少NO和ROS的产生 ,降低iNOS的活力。结论 :NF -κB“decoy”ODNs可以对抗LPS诱导巨噬细胞产生的ROS和NO ,可能与其特异性竞争抑制活化NF -κB结合位点有关。     

肾上腺素对小鼠巨噬细胞中促炎／抗炎介质比值的影响

目的：研究肾上腺素对脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7中促炎介质［肿瘤坏死因子（TNF-α）、一氧化氮（NO）、环加氧酶-2（COX-2）］和抗炎介质［血红素氧化酶-1（HO-1）、白介素10（IL-10）］表达及NF-κB活化的影响。 方法： 以10 μg/L的LPS刺激体外培养的RAW264.7细胞作为炎症模型，加入不同浓度的肾上腺素（1、5、10、50 μmol/L）孵育24 h后，收集培养上清并提取细胞总蛋白，酶联免疫法测定上清中TNF-α、IL-10浓度，Griess法检测上清NO含量(以NO2-/NO3-表示)，免疫印迹法检测细胞总蛋白中COX-2、HO-1、IκB-α的含量。 结果： 10 μg/L的LPS明显诱导TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2、IL-10及HO-1的产生；LPS+肾上腺素组与LPS单独作用组相比促炎介质TNF-α、NO(NO2-/NO3-)、COX-2的表达量显著下降，而抗炎介质IL-10、HO-1的表达却明显增强；肾上腺素与LPS共同作用组中IκB-α的含量与单独LPS作用组相比无明显差异。 结论： 肾上腺素下调LPS诱导的巨噬细胞中促炎介质的表达同时促进抗炎介质的表达，这种效应并不通过影响NF-κB的活化来实现。     

核因子-KB“decoy”寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6表达的影响

目的：研究核因子-kB“decoy”寡核苷(decoy ODNs)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774．1细胞TNF-α和IL-6表达的影响。方法：酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液中TNF-α、IL-6含量，半定量盯-PCR观察细胞TNF-α、IL-6 mRNA表达变化。结果：核因子-KB“decoy”ODNs可降低LPS诱导的J774．1细胞TNF-α和IL-6含量，减少TNF-α及IL-6的表达；对照序列的ODNs和转染剂对TNFα、IL-6无明显影响。结论：核因子-kB“decoy”ODNs可抑制TNF-α和IL-6生成，为急性失控性炎性疾病的防治提供了新思路。     

NF-κB"decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6表达的影响

目的 :研究NF -κB“decoy”寡核苷酸 (ODNs)对LPS诱导小鼠巨噬细胞株J774 1细胞的TNF -α和IL - 6表达的影响 ,探讨F -κB“decoy”寡核苷酸防治LPS诱导急性炎性损伤的可行性。方法 :巨噬细胞株J774 1细胞接种于 6孔板中 ,4× 10 5个细胞/孔 ,37℃、5 %CO2 培养过夜 ,待细胞汇合至 80 % ,用无血清、无抗生素 16 4 0培养液洗涤细胞两次后随机分为 4组。内毒素刺激组 :用含 1mg/LLPS的培养液刺激 ,不加治疗 ;NODN治疗组 :用含 1mg/LLPS的培养液刺激 3h ,然后用脂质体介导 1μmol/L(终浓度 )NF -κB“decoy”ODNs治疗 ;SO…     

NF—KB“decoy”寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞产生NO及活性氧的影响

目的：探讨NF—KB“decoy”寡核苷酸(0DNs)对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774．1产生一氧化氮(NO)及活性氧的影响。方法：通过体外细胞培养技术，观察转染NF—KB“decoy”ODNs对LPS刺激巨噬细胞产生NO和活性氧(ROS)的影响，以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力的变化。结果：在LPS刺激的巨噬细胞中转染NF—kB“decoy”ODNs减少NO和ROS的产生，降低iNOS的活力。结论：NF—kB“decoy”ODNs可以对抗LPS诱导巨噬细胞产生的ROS和NO，可能与其特异性竞争抑制活化NF—kB结合位点有关。     

核因子-κB "decoy"寡核苷酸对LPS诱导巨噬细胞TNF-α和IL-6表达的影响

目的 :研究核因子 -κB“decoy”寡核苷酸 (decoyODNs)对脂多糖 (LPS)诱导小鼠巨噬细胞株J774 1细胞TNF -α和IL - 6表达的影响。方法 :酶联免疫吸附法 (ELISA)测定培养上清液中TNF -α、IL - 6含量 ,半定量RT -PCR观察细胞TNF -α、IL - 6mRNA表达变化。结果 :核因子 -κB“decoy”ODNs可降低LPS诱导的J774 1细胞TNF -α和IL - 6含量 ,减少TNF -α及IL - 6的表达 ;对照序列的ODNs和转染剂对TNFα、IL - 6无明显影响。结论 :核因子-κB“decoy”ODNs可抑制TNF -α和IL - 6生成 ,为急性失控性炎性疾病的防治提供了新思路。     

TNF-α与香烟烟雾在诱导气道上皮细胞株黏蛋白表达的相互作用

目的 探讨肿瘤坏死因子TNF-α与香烟提取物共同诱导气道黏液高分泌的相互关系及作用特点。方法 培养的人气道上皮细胞BEAS-2B,转染核转录因子（NF）-κB"decoy"寡核苷酸（ODNs）,并以乱序NF-κB ODNs为对照转染组,各组均分别予以TNF-α、10%香烟提取物（CSE）单独刺激及共同刺激,以Western blot、ELISA及RT-PCR法检测各组刺激前后磷酸化表皮生长因子受体（p-EGFR）、黏蛋白（MUC5AC）蛋白及mRNA水平。结果 转染乱序NF-κB ODNs的细胞予以TNF-α、10% CSE刺激后,各组细胞中p-EGFR蛋白水平较对照组升高,伴随MUC5AC蛋白含量及基因转录水平的提高(P<0.05);共孵育组中较单独刺激组升高更为显著（P<0.05）。转染NF-κB"decoy"ODNs组再予以TNF-α刺激,细胞中MUC5AC蛋白含量及mRNA水平与未转染组相比升高不明显,而单用CSE刺激组中的MUC5AC、p-EGFR水平仍有明显升高（P<0.05）;共孵育组显示出与CSE单独刺激组相似的结果。结论 TNF-α、CSE能协同促进气道上皮细胞中黏蛋白合成,转录因子NF-κB主要参与TNF-α所致的MUC5AC表达,而在CSE诱导的效应过程中作用不明显。     

β-胡萝卜素对脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制

目的:探讨β-胡萝卜素对脂多糖(LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7炎症因子的影响及其机制。方法:采用5μg/ml的LPS刺激巨噬细胞24 h后用不同浓度的β-胡萝卜素(20、40、80、160μmol/L)处理细胞3 h,MTT法测细胞活性,荧光定量PCR测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA相对表达量,ELISA测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌量,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量。5μg/ml的LPS和不同浓度的NF-κB抑制剂PDTC(1、5、10μg/ml)共同处理巨噬细胞24 h,Western blot测NF-κB p65蛋白相对表达量,荧光定量PCR、ELISA测炎症因子的表达和分泌。比较LPS+PDTC组和LPS+PDTC+β-胡萝卜素组炎症因子和NF-κB p65蛋白相对表达的变化。结果:与LPS组相比,不同浓度的β-胡萝卜素对LPS刺激的巨噬细胞的细胞活性有提升作用,对炎症因子和NF-κB p65蛋白的表达有抑制作用;抑制NF-κB蛋白的表达可以抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子的分泌;LPS+PDTC+β-胡萝卜素组对炎症因子的抑制作用比LPS+PDTC组明显,且差异显著(P0.05),但两组对NF-κB p65蛋白的表达不明显。结论:β-胡萝卜素可以通过抑制NF-κB通路中NF-κB p65蛋白的表达抑制LPS刺激的巨噬细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌,且此通路不是唯一相关的通路。     

没食子酸通过拮抗脂多糖诱导的TLR4/NF-κB活化抑制RAW264.7巨噬细胞炎性反应

目的观察没食子酸对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)通路的影响。方法将巨噬细胞分为空白对照组、LPS组、LPS联合没食子酸组、LPS联合NF-κB抑制剂吡咯二硫代甲酸(PDTC)组和LPS联合地塞米松(DM)组。处理后的细胞培养24 h,ELISA检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、IL-6水平,实时定量PCR检测TLR4、NF-κB mNRA水平,Western blot法检测p65、p-p65、TLR4、磷酸化的NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白表达水平。结果 LPS诱导RAW264.7巨噬细胞后TNF-α、IL-1、IL-6水平升高,没食子酸可降低LPS诱导引起的TNF-α、IL-1和IL-6表达水平升高。LPS刺激后TLR4 mRNA及蛋白表达增加,NF-κB活化,没食子酸可拮抗以上作用,阻止NF-κB活化。结论没食子酸可通过TLR4/NF-κB通路抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应。     

白芍总苷对巨噬细胞一氧化氮和诱导型一氧化氮合酶生成的影响及其机制研究

目的：探讨白芍总苷（TGP）抗炎作用与调节巨噬细胞一氧化氮（NO）的产生及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的表达的关系,并从调控核转录因子-κB（NF-κB）活性的途径探讨其作用机制。方法：预先用不同浓度的TGP与大鼠腹腔巨噬细胞共同孵育,然后加入脂多糖（LPS）刺激细胞,检测细胞培养液中NO的产生,Westernblot方法检测iNOS的表达和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）的含量,同时检测NF-κB与DNA的结合活性。结果：TGP显著抑制了LPS诱导的大鼠腹腔巨噬细胞产生NO、表达i-NOS,同时也显著增加了细胞内IκBα蛋白的含量和抑制了NF-κB与DNA的结合活性。结论：TGP的抗炎作用与其通过抑制巨噬细胞NF-κB的活性,从而降低巨噬细胞iNOS的表达、减少NO产生密切相关。     

MyD88/PI3-K/NF-κB途径介导脂氧素A4拮抗LPS诱导大鼠内皮细胞的白细胞介素合成

目的研究脂氧素A4（LXA4）对脂多糖（LPS）诱导血管内皮细胞合成白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8的影响，并探讨其机制。方法对体外培养大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC），用LXA4孵育，再加入LPS；或单用LPS刺激PMVEC。在孵育后用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中的IL-1β、IL-6、IL-8蛋白表达；用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6、IL-8的mRNA表达。应用Western blot法检测磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3-K）、髓细胞分化因子88（MyD88）的表达。应用凝胶电泳迁移率试验（EMSA）测定核因子-κB（NF-κB）和活化蛋白-1（AP-1）的DNA结合活性。结果LXA4呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的PMVEC的IL-1β、IL-6、IL-8的蛋白合成与mRNA表达，抑制PI-3K的表达，抑制NF-κB和AP-1的DNA结合活性，但不影响LPS诱导的MyD88表达。结论LXA4通过下调PI3-K的表达和NF-κB、AP-1的DNA结合活性，拮抗LPS对PMVEC的IL-1β、IL-6、IL-8合成的诱导作用。     

抑制核因子-κB对人眼角膜基质细胞分泌细胞因子的影响

目的 观察体外抑制核因子-κB (NF-κB)对人眼角膜基质细胞分泌细胞因子的影响。 方法 四甲基偶氮唑盐（MTT)法检测不同浓度的大黄素对人眼角膜基质细胞活性的影响。用脂多糖(LPS)刺激体外培养的基质细胞,将细胞分为正常对照组(n=6)、LPS组(n=24)和大黄素组(n=24)。LPS组单纯给予LPS刺激,大黄素组于LPS刺激前先用大黄素预处理30min,其余处理同LPS组。分别用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测LPS刺激对角膜基质细胞白细胞介素8（IL-8）基因表达和蛋白分泌的影响,Western blotting检测角膜基质细胞中κB抑制因子α(IκB-α)蛋白的表达。 结果 所用浓度大黄素对体外培养的角膜基质细胞活性无影响。与刺激前相比,LPS刺激可引起人眼角膜基质细胞IL-8 mRNA表达增加,促进IL-8蛋白分泌、下调细胞内IκB-α蛋白水平,P＜0.01差异均有统计学意义。大黄素预处理可明显抑制LPS诱导的人眼角膜基质细胞表达IκB-α,下调细胞IL-8基因表达,减少IL-8蛋白分泌,明显低于同时间点LPS组的表达,P＜0.01差异具有统计学意义。 结论 LPS可引起人眼角膜基质细胞IκB-α的降解,促进NF-κB核转位,引起IL-8表达。体外抑制NF-κB,能减少人眼角膜基质细胞分泌IL-8。     

三百棒通过调控TLR4/NF-κB信号通路对脂多糖诱导的RAW264.7细胞极化的影响

目的：探讨三百棒醇提物(TAAE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7极化趋向以及其对炎症反应的影响。方法：用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型。CCK-8法检测细胞活力;ELISA检测细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10)的水平;Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)的分泌情况;荧光染色双标法观察巨噬细胞的极化状态;免疫荧光染色检测NF-κB定位及表达;Transwell检测TAAE对RAW264.7细胞迁移和趋化性的影响;RT-qPCR检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、Arg-1、NF-κB和TLR4的mRNA水平;Western blot检测iNOS、COX-2、TLR4、NF-κB、p-NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白水平。使用TLR4通路抑制剂TAK-242进一步验证TAAE对TLR4/NF-κB信号通路的影响。结果：与模型组相比较,TAAE降低LPS诱导的炎症模型RAW264.7细胞中M1型促炎因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)及NO水平,促使M2型抑炎因子(IL-10和Arg-1)分泌...     

脂多糖诱导人气道上皮细胞hBD-2表达及核转录因子κB活性的变化

 目的：观察脂多糖（LPS）诱导人气道上皮细胞人β防御素-2（hBD-2）的表达及核转录因子κB(NF-κB)活性的变化，探讨NF-κB在LPS诱导人气道上皮细胞hBD-2表达中的作用。方法: 体外培养人气道原代上皮细胞，用不同剂量LPS刺激，RT-PCR法检测hBD-2 mRNA的表达，凝胶迁移试验（EMSA）检测不同时相NF-κB活性的变化。 结果: LPS刺激2 h后可见人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达，并呈时间、剂量依赖性；NF-κB在LPS刺激1h后明显活化，并与LPS剂量正相关，抗体超迁移率实验结果显示NF-κB的异型二聚体p65-p50参与了NF-κB的活化。 结论:一定剂量的LPS可诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达，NF-κB在LPS诱导气道上皮细胞hBD-2 mRNA起重要的调控作用。     

四妙勇安汤含药血清对LPS诱导的M1/M2巨噬细胞极化及NF-κB/NLRP3通路的影响

目的 探讨四妙勇安汤含药血清对LPS刺激的M1/M2巨噬细胞极化及NF-κB/NLRP3通路的影响。方法 SD大鼠分别给予四妙勇安汤水煎液、生理盐水灌胃制备含药血清及正常对照血清。细胞分组为正常对照组、模型组、四妙勇安汤组、JSH-23组,除正常对照组外,其余组均用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞。CCK8法检测细胞活性;ELISA检测细胞上清IL-4、IL-18水平;qRT-PCR法检测细胞i NOS、CD197、CD206、NLRP3 mRNA表达;免疫荧光标记测i NOS、CD197、CD206、NF-κB表达;Western blot检测NF-κB磷酸化、NLRP3炎症小体蛋白表达。结果 CCK8显示30%浓度以下的含药血清干预LPS诱导的巨噬细胞OD值无明显变化（P>0.05）。与正常对照组比较,模型组细胞iNOS、CD197、IL-18、NF-κB、NLRP3表达升高,CD206、IL-4表达降低（P<0.01）。与模型组比较,四妙勇安汤组及NF-κB抑制剂JSH-23组细胞iNOS、CD197、IL-18、NF-κB、NLRP3表达降低,CD206、IL-4...     

NF-κB对内毒素诱导的血管内皮细胞凋亡的影响

目的观察NF-κB激活和抑制对血管内皮细胞凋亡的影响。方法获取和培养原代脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）,分别以NF-κB-decoy和错配-decoy预处理细胞,然后以内毒素LPS刺激诱发内皮细胞凋亡,设立单一LPS处理组和空白组做对照,比较各组之间NF—κB活性和凋亡率差异。结果LPS显著增加血管内皮细胞凋亡,NF-κBdecoy组NF—κB活性被显著抑制（P〈0．05）,而错配decoy组则不受影响;LPS组,错配decoy组和NF-κBdecoy组凋亡率依次递减,三组之间P〈0．05。结论NF-κB激活可促进血管内皮细胞凋亡,抑制其活性可能减轻由于内皮细胞凋亡带来的毛细血管渗漏。     

LPS诱导巨噬细胞凋亡的研究

目的 探讨脂多糖(IPS)诱导巨噬细胞发生凋亡的分子机理及信号传导通路。方法 采用夹心ELISA法检测巨噬细胞NF-κB的核内浓度；硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量；吖啶橙荧光染色及凋亡电泳试验显示巨噬细胞凋亡情况。结果 LPS刺激可诱导巨噬细胞的NF-κB活化、NO分泌并最终导致细胞凋亡，而特异性PKC抑制剂(Cal C)和NF-κB阻断剂(PDTC)能在不同程度上抑制LPS的生物活性作用。结论 LPS诱导肺巨噬细胞凋亡的信号传导通路有：PKC、NF-κB的参与，而NO等生物活性介质在其中发挥了重要作用。     

HSP72过度表达对脂多糖刺激的巨噬细胞中NF-κB活性的影响

目的研究过度表达的热休克蛋白72(heat shock protein,HSP72)对脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)刺激的巨噬细胞中NF-κB活性的影响.方法构建pCD-hsp72重组质粒,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,G418筛选稳定转染hsp72基因的细胞,Western印迹检测转染细胞HSP72的表达水平及LPS刺激后RAW264.7细胞内HSP72的表达水平、LPS刺激后转染细胞中IκBα的含量和胞核中NF-κB的含量的变化.结果构建pCD-hsp72重组质粒并转入巨噬细胞,获得稳定转染hsp72基因的细胞株,LPS刺激细胞内HSP72表达增加;HSP72可通过减少LPS刺激的巨噬细胞中IκBα的降解而抑制NF-κB活性.结论HSP72能抑制LPS激活的巨噬细胞中NF-κB的活化.