苯丁酸钠联合奥沙利铂对结肠癌细胞HT29的凋亡作用

目的:探讨苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)诱导HT29细胞的凋亡作用及其机制。方法:结肠癌HT29细胞分为空白对照组、奥沙利铂组、苯丁酸钠(1 mmoL/L)+奥沙利铂组、苯丁酸钠(2 mmoL/L)+奥沙利铂组,MTT法测定各组细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3和核转录因子NK-κB的表达。结果:苯丁酸钠能降低奥沙利铂诱导的HT29细胞存活率,随着其浓度增高,细胞凋亡率逐渐升高(P<0.01),细胞中Caspase-3蛋白和NK-κB蛋白表达则逐渐降低(P<0.05),均呈浓度依赖性。结论:苯丁酸钠(SPB)联合奥沙利铂(L-OHP)可诱导HT29细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-3和NK-κB信号传导通路有关。     

青蒿琥酯联合奥沙利铂对人结肠癌细胞HCT116的作用研究

目的观察青蒿琥酯(Artesunate,Art)与奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)联合用药对人结肠癌细胞株HCT116增殖和凋亡的影响。方法利用不同浓度单药Art、L-OHP及Art(6.25μg·mL-1)联合不同浓度L-OHP处理结肠癌HCT116细胞株48 h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法分析细胞增殖变化;金正均Q值法判断两药联合效应,苏木精—伊红(HE)染色法观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度Art和L-OHP对HCT116细胞株增殖均有抑制作用,且抑制率随药物浓度提高而增高(P0.05);联合用药表现出协同或相加效应;HE染色可见随Art浓度增加,细胞膜破裂,细胞核染色逐渐加深,细胞正常结构消失;Art(6.25μg·mL-1)与LOHP(0.5μg·mL-1)联合用药,联合组早期细胞凋亡率较单药Art(20.31±3.8)%、L-OHP(14.83±3.9)%显著提高(P0.05)。结论 Art与L-OHP联合用药能够显著抑制HCT116细胞株增殖并增强对细胞凋亡的诱导作用。     

乙型肝炎病毒核壳蛋白对HepG2细胞凋亡的影响

目的初步探讨乙型肝炎病毒野生型核壳蛋白和L60V、I97L变异核壳蛋白影响HepG2细胞凋亡的分子机制。方法将构建的野生型核壳蛋白融合表达载体(pEGFP-WT),L60V变异核壳蛋白(pEGFP-V60)和I97L变异核壳蛋白(pEGFP-L97)表达载体HepG2阳性细胞株复苏培养;Western blot检测各核壳蛋白表达;TNF-α、Act-D诱导各种HepG2细胞株凋亡,48h采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测NF-κB信号传导通路中IKK-α、IκB-α、NF-κBP65蛋白表达与caspase-8、caspase-3蛋白表达情况。结果Western blot检测pEGFP-WT组、pEGFP-V60组和pEGFP-L97组核壳蛋白表达基本相同;流式细胞术检测显示,与pEGFP-C1细胞株相比,48h时pEGFP-WT、pEGFP-V60和pEGFP-L97表达细胞株的细胞凋亡率均明显偏低(P<0.01);4组细胞株IKK-α、IκB-α、NF-κBP65蛋白表达水平无明显差异,而pEGFP-WT组caspase-8、caspase-3蛋白表达水平明显低于pEGFP-V60和...     

苦参碱逆转人结肠癌细胞株（HT-29）奥沙利铂耐药性的作用及机制研究

目的：研究苦参碱对结肠癌耐药细胞HT-29/奥沙利铂(Oxaliplatin, OXA)耐药性的逆转作用并探讨其可能的作用机制。方法采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株HT-29/OXA;CCK-8法测定苦参碱对HT-29/OXA细胞的耐药性逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化;实时定量PCR 检测各组细胞肺耐药蛋白（lung resis-tance protein LRP)和 P-glycoprotein (P-gp) mRNA表达水平; Western blot 检测各组细胞LRP和P-gp蛋白的表达水平。结果苦参碱使HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的敏感性增加,耐药性得到部分逆转。奥沙利铂(0.5μg/mL)和苦参碱(3.0μg/mL)单独用药对结肠癌耐药细胞株HT-29/OXA细胞周期以及细胞凋亡没有影响;联合用药对HT-29/OXA生长增殖具有明显抑制作用并且能够通过改变细胞周期引起凋亡（P<0.05）。奥沙利铂(0.5μg/mL)和苦参碱(3.0μg/mL)单独用药对HT-29/OX-ALRP和P-gp mRNA以及蛋白的表达没有影响;联合用药作用后LRP mRNA和P-gp mRNA表达水平降低（P<0.01）,同时下调了LRP和P-gp蛋白表达（P<0.01）。结论苦参碱部分逆转HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制可能与细胞内LRP和P-gp表达降低有关。     

奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中caspase-8的活化

目的 探讨奥沙利铂诱导结肠癌细胞株SW480凋亡过程中半胱天冬酶亚类8(caspase-8)的变化.方法 以不同浓度(0,0.03,4.0,100 μg/ml)的奥沙利铂干预体外培养的人结肠癌细胞株SW480,分别于24,36,48 h后,应用MTT法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,Western-blot分析caspase-8酶原的变化,半定量RT-PCR检测caspase-8 mRNA水平的改变,肽核酸(pNA)标记底物的比色法检测caspase-8的相对活性.结果 奥沙利铂对结肠癌细胞株SW480生长增殖具有明显抑制作用,其效应呈浓度和时间依赖性.流式细胞仪分析显示SW480细胞呈G2/M期阻滞;奥沙利铂浓度为0,0.03,4.0,100 μg/ml时SW480细胞的凋亡率分别为(0.15±0.09)%、(0.43 ±0.17)%、(6.92 ±0.81)%、(11.76 ±1.25)%.用不同浓度的奥沙利铂处理SW480细胞株24 h,caspase-8酶原的表达随药物浓度的增加而减少,caspase-8 mRNA水平呈浓度依赖性的增加(P＜0.01).用4.0 μg-ml奥沙利铂分别处理细胞0.5,2,6,12,24,36 h,caspase-8活性于2 h开始升高,12 h达高峰(P＜0.01);用不同浓度的奥沙利铂处理细胞12 h,caspase-8活性呈浓度依赖性的升高(P＜0.01).结论 奥沙利铂能够明显抑制人结肠癌细胞株SW480的增殖,诱导SW480细胞发生G2/M期阻滞,其作用机制可能与caspase-8表达上调有关.     

姜黄素增强结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性及其机制研究

目的探究姜黄素(CUR)增强结肠癌HCT-116细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性及其机制。方法首先检测CUR和5-FU单用及联用对体外培养的HCT-116细胞增殖能力的影响,并分析两药联用的协同效应;然后分别检测CUR增强5-FU对HCT-116细胞迁移的抑制效应和凋亡的诱导效应;最后检测NF-κB、caspase-3、E-cadherin的表达水平。结果 CUR单用、较大剂量5-FU单用和CUR与低剂量5-FU联用对HCT-116细胞增殖均有抑制作用(P0.05),并且呈现时间和剂量依赖效应;两药可呈协同效应;各药物组均显著抑制HCT-116细胞发生转移;诱导凋亡(P0.01);WB结果显示,两药联合处理后,NF-κB表达水平显著降低,而凋亡蛋白caspase-3与E-cadherin表达显著增高。此外,各实验中联用组的抑制效应显著高于各单用组(P0.05)。结论姜黄素可通过NF-κB信号通路,诱导凋亡、抑制EMT,增强结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性。     

脂质体莪术醇逆转卵巢癌顺铂耐药作用的机制

目的 研究脂质体莪术醇(LC)对人卵巢癌细胞顺铂耐药的逆转作用及其机制。方法 采用卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP,细胞分为5组：空白对照组、阴性对照组(含12.5μg/ml脂质体)、顺铂组(4μg/ml)、LC组(20μg/ml)、联合组[顺铂(4μg/ml)+LC(20μg/ml)],CCK-8检测各组细胞增殖能力,高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内顺铂平均含量,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测P糖蛋白(P-gp)的mRNA相对表达量,免疫细胞化学和Western blot检测各组细胞P-gp蛋白的表达情况。结果 联合组细胞增殖能力最低,凋亡率最高(P<0.05);联合组细胞内顺铂平均含量大于顺铂组(P<0.05);联合组细胞的P-gp mRNA和蛋白相对表达量低于单用顺铂组(P<0.05)。结论 LC可通过抑制P-gp的表达,降低人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

个体价值认同的社会主义核心价值观培育探析

目的 建立人结直肠癌耐奥沙利铂(L-OHP)细胞株,检测其多药耐药性并初步探讨可能的耐药机制。 方法 采用药物浓度梯度递增诱导法建立人结直肠癌耐L-OHP细胞株HCT-8/L-OHP。MTT法鉴定药敏性,并检测耐药细胞株的多药耐药性、生长曲线和细胞群体倍增时间。用光镜、电镜、流式细胞术等方法观察亲本细胞和耐药细胞的形态、周期及细胞凋亡。通过实时荧光定量PCR和Western-blot检测HOXB8基因和ABCC1(MRP or MRP1),ERCC1,P-gp,GST-π的mRNA及蛋白表达水平。 结果 建成了肠癌耐药细胞模型HCT-8/L-OHP,半抑制浓度(IC50)为62.33 μmol/L,耐药指数(RI)为10.78。耐药株细胞形态发生变化,代谢率降低,生物活力减弱。HCT-8/L-OHP细胞株具有耐药性,细胞增殖减慢。HCT-8/L-OHP细胞在G₂/M期的比例增多,在S期及G₀/G₁期的比例减少,相较于亲本细胞株,差别具有统计学意义(P<0.01); HCT-8/L-OHP细胞凋亡率低于HCT-8细胞。ABCC1(MRP or MRP1),ABCB1(P-gp)等耐药相关基因在耐药细胞株中高表达; HOXB8基因在HCT-8/L-OHP细胞中表达,较亲本细胞株表达明显升高,差别具有统计学意义(P<0.01)。 结论 成功构建了肠癌耐药细胞株HCT-8/L-OHP,耐药的分子机制可能是ABCC1(MRP or MRP1)及ABCB1(P-gp)等基因的表达升高。HOXB8基因过表达可能与人结直肠癌对L-OHP耐药的机制相关。     

左金丸通过ABCB1/P-gp途径对裸鼠人结肠癌多药耐药的抑制作用

目的:探讨左金丸对人结肠癌多药耐药细胞(HCT-116)/奥沙利铂(L-OHP)的抑制作用及其可能机制。方法:建立裸鼠人结肠癌皮下移植瘤耐药模型,随机分为空白对照(生理盐水)组、阳性对照(L-OHP)组、左金丸组,以及左金丸低、中、高剂量联合L-OHP组。分别给予相应药物连续干预28 d,每组留下半数荷瘤裸鼠观察生存期;其余裸鼠于末次给药后12 h,剥取肿瘤,测量、计算抑瘤率,并用免疫组织化学法检测肿瘤组织中P-糖蛋白(P-gp)表达,用qRT-PCR法检测多药耐药基因ABCB1的mRNA表达。结果:左金丸高剂量联合L-OHP组荷瘤小鼠的中位生存时间明显长于其他各组(P0.05);而在抑瘤率方面,左金丸低、中、高剂量联合L-OHP组的抑瘤率均显著高于L-OHP组(P0.01),且高剂量组优于低、中剂量组(P0.05),呈剂量依赖性。左金丸联合L-OHP干预后,肿瘤组织内P-gp和ABCB1基因表达明显降低(P0.01),并且随着左金丸浓度的增加,其抑制作用也加强,具有剂量依赖性。结论:左金丸可抑制人HCT-116/L-OHP结肠癌多药耐药细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,延长裸鼠的中位生存时间,其作用机制可能与下调肿瘤组织中P-gp和ABCB1 mRNA的表达有关。     

奥沙利铂体外干预结直肠癌细胞株HT-29的耐药基因及相关蛋白的表达

目的:检测结直肠癌(colorectal cancer,CRC)奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)耐药细胞株HT-29/L-OHP中多药耐药基因(multidrug resistance gene 1,MDR-1)、多药耐药相关蛋白的基因及他们编码的蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance associated protein,MRP)的表达,探讨其在L-OHP耐药中的作用。方法:利用MTT法检测L-OHP对原代细胞HT-29和耐药细胞HT-29/L-OHP的半数抑制率(IC50);利用RT-PCR及蛋白质印迹法检测HT-29/L-OHP中耐药基因及蛋白的表达情况。结果:L-OHP对HT-29和HT-29/L-OHP细胞的IC50分别为(4.15±0.17)μg.ml-1和(32.01±1.87)μg.ml-1,耐药指数为7.71;与原代细胞相比,HT29/L-OHP中耐药基因及蛋白表达均有所增加。结论:结直肠癌耐药细胞株中MDR-1、MRP基因及其编码的蛋白P-gp、MRP的表达高于原代细胞,这为预测CRC的多药耐药提供了新的依据。