金属硫蛋白对供心细胞凋亡的影响

目的探讨金属硫蛋白(MT)对供心细胞凋亡和凋亡蛋白表达的影响.方法 Wistar大鼠16只,按腹腔注射的药物不同分为2组,每组各8只.对照组:腹腔注射蒸馏水0.5ml,24小时后取离体心脏,灌注HTK心脏停搏液,4℃保存3小时后建立Langendorff灌注模型,灌注重碳酸盐缓冲液(KH)2小时;实验组:腹腔注射3.6% ZnSO4(1.5ml/kg),其余处理同对照组.测定心肌MT含量、心肌细胞凋亡率、琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯、B淋巴细胞瘤/白血病2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2家族Bax蛋白和Fas蛋白的表达.结果实验组与对照组比较,MT含量明显增高(P＜0.01),心肌细胞凋亡率明显降低(P<0.01),琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段梯光密度明显减弱(P<0.01),Bcl-2表达明显增高,Bax和Fas表达明显减弱(P＜0.01).结论心肌MT可通过调节Bcl-2、Bax和Fas蛋白的表达降低供心心肌细胞凋亡率.     

凋亡相关蛋白及粘附分子在大鼠心脏急性排斥反应中的作用

目的 探讨凋亡及凋亡相关因子Fas／FasL、Bcl-2/Bax，粘附分子ICAM-1、P-selectin、E-selectin、L-Selectin、PECAM-1和VCAM-1在心脏移植中的表达及意义。方法 用免疫组织化学方法和原位杂交法，检测大鼠心脏移植后不同时间(1、3、5、7d)、Fas／FasL、ICAM-1、P-selectin、L-selectin、E-selectin蛋白、Bcl-2/Bax、VCAM-1、PECAM-1 mRNA的表达情况。结果 随着移植后天数的增加，细胞凋亡增多，Fas／FasL、Bax表达增加，粘附分子ICAM-1、VCAM-1、PECAM-1表达也增加，Selectin表达较少。正常大鼠肝脏未见细胞凋亡及粘附分子的表达。结论 细胞凋亡和粘附分子ICAM-1、VCAM-1、PECAM-1表达增加可能与心脏移植后急性排斥反应有关，而Fas／FasL、Bax可能促进了凋亡的发生。     

细胞凋亡与糖尿病肾病的关系及糖肾康作用机制的研究

目的:从细胞凋亡角度探讨糖尿病肾病(DN)的发病机理及糖肾康对糖尿病肾病细胞凋亡的影响。方法:将60只大鼠随机分为5组:空白对照组、模型组、中药预防组(糖肾康8.75g·kg~(-1)·d~(-1))、中药高剂量组(糖肾康17.5g·kg~(-1)·d~(-1))中药低剂量组(糖肾康8.75g·kg~(-1)·d~(-1))。糖尿病肾病大鼠模型以小剂量链脲佐菌素腹腔注射配合高糖饮食制作;治疗6周后,采用原位末端标记法和免疫组化方法检测肾组织内细胞凋亡及Fas/FasL、Bcl-2等相关基因的表达。结果:模型组大鼠肾组织内细胞凋亡明显增多,Fas/FasL基因表达增加,Bcl-2基因表达减少,与其他组别相比有统计学差异(P<0.05或P<0.01);模型组PKC主要表达在肾小球和肾小管的细胞膜上,而其他组则主要表达于胞浆。结论:糖尿病肾病大鼠肾组织尤其是肾小管细胞凋亡明显增多,糖肾康可通过降低Fas/FasL基因表达,促进Bcl-2基因表达,抑制PKC在胞膜的表达而起到控制肾组织内细胞凋亡的作用。     

肾上腺髓质素对缺氧复氧诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨肾上腺髓质素(ADM)对缺氧复氧(HR)诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)凋亡的影响及其机制.方法 体外培养的NRK-52E细胞,随机分为4组:正常对照组、HR组、空质粒+HR组、ADM质粒+HR组.采用Fugene HD转染试剂,将pcDNA3.1-myc-his B空质粒和ADM真核表达质粒分别转染至NRK-52E细胞内,应用免疫细胞化学的方法检测转染效率,转染成功48 h后制作HR模型.锥虫蓝摄取法进行细胞计数并计算细胞存活率,分光光度法检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量评价细胞活力;Annexin V和PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;RT-PCR法检测ADM、Bax、Bcl-2、Fas的mRNA表达;Western印迹法检测活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、8、9(Caspase-3、8、9)的蛋白表达.结果 HR组ADM的表达显著高于正常对照组(P＜0.05).ADM质粒+HR组的ADM表达显著高于空质粒+ HR组(P＜0.05).与正常对照组相比,HR组活细胞计数和细胞存活率显著降低,LDH含量及细胞凋亡率显著升高,Bax、Bcl-2、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著上调,Bax上调更明显,故Bax/Bcl-2升高(均P＜0.05).与HR组相比,ADM质粒+HR组活细胞计数和细胞存活率显著升高,LDH含量及细胞凋亡率显著降低,Bax、Fas、活性Caspase-3、8、9表达显著下调,Bcl-2表达进一步上调,Bax/Bcl-2降低(均P＜0.05).空质粒+HR组和HR组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 ADM在NRK-52E细胞中的高表达可以减轻HR诱导的细胞凋亡,其机制至少部分是通过抑制线粒体通路和死亡受体通路实现的.     

大鼠脊髓损伤急性期睾丸生精细胞凋亡及Fas和Bcl-2蛋白表达的改变

目的 研究脊髓损伤急性期对成年大鼠睾丸生精功能障碍的影响及其机制.方法 80只SD雄性大鼠随机分为脊髓损伤组(40只)和脊髓非损伤组(40只),采用原位细胞凋亡TUNEL法检测脊髓损伤后第1、2、4、8、1 6天睾丸生精细胞的形态及数量变化.采用免疫组化SABC法检测大鼠脊髓损伤后第1、2、4、8、16天睾丸生精细胞Fas、Bcl-2表达情况.结果 大鼠脊髓损伤后睾丸TUNEL标记阳性凋亡细胞第4天开始出现,多表达于初级、次级精母细胞及精原细胞,至第16d,随时间点推移阳性凋亡细胞数逐渐增多.脊髓损伤后第4～16d损伤组睾丸生精细胞Fas表达与非损伤组比较显著增强(P＜0.05),Bcl-2表达损伤组与非损伤组差别无显著性(P＞0.05).结论 大鼠脊髓损伤急性期存在睾丸生精细胞凋亡现象,睾丸生精功能障碍与Fas高表达密切相关,和Bcl-2表达无明显相关性.     

雌激素对脂多糖诱导成骨细胞凋亡基因表达影响的实验研究

目的 探讨雌激素对脂多糖诱导的体外培养大鼠成骨细胞凋亡基因Bcl-2、Bax、Fas表达的影响，为明确雌激素抑制脂多糖诱导的大鼠成骨细胞凋亡的机理提供依据。方法 新生SD大鼠颅骨第2．3代成骨细胞随机分为对照组、脂多糖组、脂多糖＋雌激素组等3组，每组细胞分别培养24、48、72h，5、7、14d后作免疫组化染色，计数各组阳性细胞率，并比较组间的差异性。结果 对照组成骨细胞有少量Bcl-2、Bax、Fas表达，脂多糖组细胞Bax和Fas表达显著升高（P〈0．05），高峰期为72h，Bcl-2的表达无明显变化（P〉0．05）；脂多糖＋雌激素组细胞Bax和Fas表达显著降低（P〈0．05），高峰期仍为72h，且Bcl-2的表达显著升高（P〈0．05）。结论 脂多糖使成骨细胞Bax和Fas表达增强，而对Bcl-2的表达无明显影响；雌激素能抑制脂多糖增强成骨细胞Bax和Fas表达的作用，能使Bcl-2的表达明显增强，使Bcl-2／Bax比值增大从而抑制脂多糖诱导的大鼠成骨细胞凋亡。     

异丙酚对急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡的影响

目的 评价异丙酚对急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠40只,体重280～300 g,随机分为5组(n=8):假手术组(S组)、急性肺栓塞组(APTE组)、异丙酚4 mg·kg-1 ·h-1 组(P1组)、异丙酚8 mg·kg-1 ·h- 1组(P2组)和异丙酚16 mg·kg-1 ·h-1 组(P3组).取尾静脉血样0.2 ml,37℃水浴箱内过夜,分割成直径1 mm ,长5 mm的栓子,颈静脉注射混有15个栓子的2 ml生理盐水制备大鼠肺栓塞模型.S组静脉输注生理盐水2 ml/h 4 h;APTE组、P1组、P2组和P3组制备肺栓塞模型,然后APTE组静脉输注5%葡萄糖2 ml/h4 h,P1 组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚4、8、16 mg·kg-1 ·h-1 (用5%葡萄糖稀释至2 m1)4 h.给药结束后,处死大鼠,取肺组织,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测caspase-3、Bcl-2、Box、Fas和FasL的mRNA表达水平,采用Western blot法检测caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas和FasL的蛋白表达水平,计算Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值.结果 与S组比较,AVIE组、P1组、P2组和P3 组肺组织细胞凋亡率升高,caspase-3、Bax、Fas、FasL的mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2的mRNA和蛋白表达下调,Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值降低(P＜0.05或0.01);与APTE组比较,P1组、P2组和P3 组肺组织细胞凋亡率降低,caspase-3、Bax、Fas、FasL的mRNA和蛋白表达下调,Bcl-2的mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值升高(P＜0.05或0.01);P.组、P2组和P3组间肺组织细胞凋亡率、caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、 FasL的mRNA和蛋白表达、Bcl-2/Bax的mRNA和蛋白表达比值差异无统计学意义(P＞0.05).结论 异丙酚可抑制急性肺栓塞大鼠肺细胞凋亡,其机制与下调肺组织caspase-3、Fas和FasL的表达,调节Bcl-2/Bax的平衡有关.     

子宫内膜缺血在子宫内膜异位症中的作用及分子机制

目的探讨子宫内膜缺血在子宫内膜异位症发生中的作用及分子机制。方法选择SPF级,8~10周龄雌性C57BL/6小鼠,建立子宫内膜缺血预处理(IPC)以及缺血(ISCH)模型。根据供体小鼠处理方式分为对照组(CON组)、预缺血处理组(IPC组)、缺血处理组(ISCH组)、ISCH+IPC组以及Akt抑制剂预处理的ISCH+IPC组(ISCH+IPC+LY组);采用HE染色检测异位移植内膜病灶大小,TUNEL法测定细胞凋亡指数,RT-PCR测定子宫组织Akt、Bcl-2以及Bax基因表达,Western blot检测子宫组织p-Akt、Bcl-2以及Bax蛋白表达。结果 (1)IPC组成模率高于CON组(P0.05),IPC+ISCH组成模率以及内膜存活率均高于ISCH组(P0.05)。(2)CON组细胞凋亡指数(AI)与IPC组差异无统计学意义(P0.05);IPC+ISCH组AI低于ISCH组但高于IPC组,差异均有统计学意义(P0.05)。(3)RT-PCR显示,IPC组Akt-mRNA、Bcl-2-mRNA以及Bax-mRNA表达均高于CON组(P0.05);ISCH组及IPC+ISCH组Akt-mRNA、Bcl-2-mRNA表达均低于IPC组,而Bax-mRNA表达高于IPC组(P0.05);IPC+ISCH+LY组Akt-mRNA、Bcl-2-mRNA表达低于IPC+ISCH组,而Bax表达高于IPC+ISCH组(P0.05)。(4)Western blot显示,IPC组p-Akt、Bcl-2及Bax蛋白表达高于CON组(P0.05);ISCH组p-Akt、Bcl-2蛋白表达低于IPC组(P0.05),IPC+ISCH组p-Akt、Bcl-2蛋白表达高于ISCH组、而Bax蛋白表达低于ISCH组(P0.05);IPC+ISCH+LY组p-Akt、Bcl-2蛋白表达低于IPC+ISCH组(P0.05),而Bax蛋白表达高于IPC+ISCH组(P0.05)。结论子宫内膜预缺血处理能够抑制异位移植后内膜细胞凋亡,而这一机制可能与Akt信号通路磷酸化以及上调其下游靶蛋白Bcl-2、下调Bax有关。     

鞘内泵入吗啡对大鼠细胞免疫功能的影响

目的观察镇痛剂量吗啡鞘内泵入对大鼠细胞免疫功能的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为5组(n=8):假手术组(F组)、生理盐水组(NS组)、M1、M2、M3组(吗啡泵入速率分别为25、5、10μg·h-1)。除F组外各组采用改良Yaksh法进行鞘内置管,置管后5d采用Alzet泵持续泵人生理盐水或吗啡,共7d。第7天各组大鼠进行福尔马林炎性疼痛实验,根据痛级(PIS)评分评价吗啡镇痛效应,处死大鼠后计算睥脏指数并分离脾脏单个核细胞进行培养,甲基-3H胸腺嘧啶核苷掺入法检测脾T淋巴细胞增殖水平,乳酸脱氢酶释放法检测自然杀伤细胞活性。结果与NS组比较,MI、M2、M3组在福尔马林炎性疼痛第一时相和第二时相的PIS评分值、脾脏指数、脾脏T淋巴细胞增殖转化水平和NK细胞活性降低(P<0.05或0.01);与M1组比较,M2、M3组脾脏T淋巴细胞增殖转化水平及NK细胞活性降低(P<0.05);与M2组比较,M3组脾脏NK细胞活性降低(P<0.05)。结论镇痛剂量吗啡鞘内泵入可抑制大鼠细胞免疫功能,且泵入速率越大,免疫抑制效应越明显。     

大鼠异种心脏移植中P选择素和细胞间粘附分子-1表达的意义

目的探讨大鼠异种心脏移植中P选择素和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的意义。方法建立金黄地鼠到SD大鼠的异种异位(腹部)心脏移植模型,然后将模型大鼠随机分为4组:对照组术后不采取任何治疗措施;环孢素A组(CsA组)于手术当天起每天腹腔注射CsA10mg/kg;脾切除组于手术当天切除脾脏;CsA联合脾切除组于手术当天切除脾脏,每天腹腔注射CsA10mg/kg。观察每组移植心脏的存活时间,定时和发生排斥反应时切取移植心组织,进行病理学检查,并以免疫组化方法观察移植物中P选择素和ICAM-1的表达。结果CsA联合脾切除组移植心脏存活时间为(34.2±8.98)d,较对照组、CsA组和脾切除组明显延长(P<0.05)。CsA联合脾切除组术后1~5d移植物中未见明显病理改变;7、14d时移植心脏组织结构清晰,未见血栓及出血;30d时移植心脏组织结构基本正常,排斥反应级别为Ⅰ~Ⅱ;其它三组的病理改变明显,对照组于术后1~2d、脾切除组及CsA组于术后4~7d发生延迟性排斥反应。CsA联合脾切除组术后各观察时点移植心脏组织中均未见P选择素和ICAM-1表达,其它三组的P选择素和ICAM-1均呈阳性。结论异种移植发生延迟性排斥反应时,P选择素和ICAM-1均有表达,可以作为判断异种移植免疫抑制治疗效果的指标之一。     

A型肉毒毒素注射引起大鼠前列腺增生模型细胞凋亡的研究

目的：探讨A型肉毒毒素注射后前列腺的组织形态学变化。方法：建立SD大鼠前列腺增生模型,模型大鼠前列腺内分别注射不同剂量的A型肉毒毒素后,TUNEI。检测前列腺细胞的凋亡,免疫组织化学技术检测对照组与10U肉毒毒素注射组Bcl-2、Fas及Caspase-3的表达差异。结果：随着注射剂量的加大,大鼠前列腺体积及湿重出现明显下降,细胞凋亡增加。相比对照组,10U肉毒毒素注射组Bcl一2的表达下调而Fas及Caspase-3的表达上调。结论：A型肉毒毒素能有效的缩小前列腺体积,引起前列腺细胞的凋亡。     

人参皂甙Rg3对子宫内膜异位症大鼠血管生成的影响

目的探讨人参皂甙Rg3对大鼠子宫内膜异位症(EMs)模型,异位组织中血管内皮生成因子(VEGF)和微血管密度(MVD)的影响。方法建立Wistar大鼠子宫内膜异位症模型,3周后将大鼠随机分为空白对照、人参皂甙Rg35mg/kg、10mg/kg和孕三烯酮4组,相应处理8周后,观察各组异位子宫内膜体积和形态学的变化,免疫组织化学法测定血管内皮生长因子(VEGF)在异位内膜的表达,并通过CD31标记异位子宫内膜血管,测定其微血管密度(MVD)。结果(1)治疗后,各给药组移植物呈现不同程度萎缩(P<0.05),其中以Rg310mg/kg组最为明显;(2)各给药组VEGF表达、MVD数量均低于对照组(P<0.05),其中以Rg310mg/kg组最为明显。结论Rg3可以通过调节VEGF表达和MVD数量来抑制EMs大鼠模型异位组织的血管生成。     

滋肾化毒饮联合环磷酰胺对狼疮性肾炎患者外周血淋巴细胞Fas、FasL、Bcl-2表达的影响及临床疗效观察

目的:观察滋肾化毒饮联合间断性环磷酰胺(CTX)静脉冲击疗法对活动期狼疮性肾炎(LN)患者外周血淋巴细胞(PBL)凋亡调控因子及临床指标的影响.方法:将活动性LN患者40例,随机分为治疗组和对照组,每组各20例.治疗组予滋肾化毒饮联合间断性CTX静脉冲击疗法,对照组予间断性CTX静脉冲击疗法.观察治疗3个月前后的PBL的Fas、FasL、Bcl-2表达及临床指标变化,Fas、FasL、Bcl-2用免疫组化法测定.结果:治疗后两组Fas、FasL及治疗组Bcl-2表达下调(P＜0.05),而Fas、FasL表达下调幅度大于对照组(P＜0.05).治疗组SLEDAI、24 h尿蛋白、Hgb、Ccr、C3指标的改善优于同期对照组(P＜0.05).治疗组肝功能受损、白细胞减少、舌苔厚腻、失眠、痤疮发生率明显少于对照组(P＜0.05).结论:调控Fas、FasL介导的凋亡可能是CTX、激素、滋肾化毒饮有效治疗活动狼疮性肾炎机制之一.     

肾上腺髓质素对大鼠肾缺血再灌注损伤中肾小管上皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的 观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)对大鼠肾缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)中肾小管上皮细胞凋亡的影响,并探讨其机制.方法 Wistar大鼠32只,随机分为4组:假手术组和IRI组各6只,转染空质粒组和转染AM质粒组各10只.大鼠右肾切除后1周,用超声微泡造影剂介导的基因转染方法将大鼠AM真核表达质粒转染大鼠肾脏,1周后采用免疫组织化学方法检测转染效率.转染成功后夹闭左肾动脉45 min制作肾IRI模型,于再灌注24 h后留取肾组织标本.TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡,RT-PCR检测肾组织Bcl-2、Bax和Fas的mRNA表达,蛋白质印迹法检测caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白质表达.结果 转染AM质粒组的AM表达显著高于转染空质粒组(0.51±0.09和0.23±0.05,P＜0.05).与假手术组相比,IRI组肾组织细胞凋亡率明显增加[(38.79±7.52)%和(2.89±0.52)%,P＜0.05];肾组织Bax、Bcl-2、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达上调,分别为0.72±0.18和0.23±0.04、0.80±0.12和0.38±0.06、1.24±0.25和0.39±0.09、0.76±0.13和0.38±0.08、0.92±0.14和0.32±0.06、0.89±0.12和0.42±0.09(P＜0.05),Bax/Bcl-2升高(0.91±0.18和0.61±0.08,P＜0.05).转染AM质粒组肾组织凋亡细胞数、Bax、Fas、caspase-3、caspase-8和caspase-9表达下调,分别为(19.36±6.78)%、0.48±0.11、0.62±0.07、0.53±0.08、0.46±0.08、0.51±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);Bcl-2表达进一步上调为1.23±0.25,Bax/Bcl-2降低为0.44±0.12,与IRI组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).转染空质粒组和IRI组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 AM能减轻肾IRI引起的肾小管上皮细胞凋亡,其部分机制可能是通过抑制caspase依赖的内、外源性凋亡途径实现的.

Abstract：

Objective To investigate the effect and mechanism of adrenomedullin (AM) on apoptosis of renal tubular epithelial cell in rats induced by renal ischemia reperfusion injury. Methods Thirty-two Wistar rats were randomly divided into 4 groups: control group, IRI group, empty plasmid group and AM group. One week after removing the right kidney, eukaryotic expression vector encoding rat AM gene was transfected into the left kidney using an ultrasound-microbubble mediated system. After 1 week the transfer efficiency was detected by immunohistochemical method . Renal IRI model induced by clamping left renal arteries for 45 min followed by reperfusion for 24 h. Tubular cell apoptosis was detected by TUNEL assay. Bcl-2, Bax and Fas expressions were examined by RT-PCR. The expressions of caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were determined by Western bolt analysis. Results The expression of AM in the AM group was significantly higher than the empty plasmid group (0.51±0.09 vs 0.23±0.05; P<0.05). Compared with the control group, the apoptosis rate of renal tubular cell in the IRI group was significantly higher [(38.79±7.52)% vs (2.89±0.52)%; P<0.05]. The expressions of Bax, Bcl-2, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9 were also significantly increased (0.72±0.18 vs 0.23±0.04, 0.80±0.12 vs 0.38±0.06, 1.24±0.25 vs 0.39±0.09, 0.76±0.13 vs 0.38±0.08, 0.92±0.14 vs 0.32±0.06, 0.89±0.12 vs 0.42±0.09; P<0.05). Bax/Bcl-2 was also significantly increased (0.91±0.18 vs 0.61±0.08; P<0.05). Compared with the IRI group, AM pretreatment significantly decreased the apoptosis rate of renal tubular cells [(19.36±6.78)% vs (38.79±7.52)%; P<0.05]. AM inhibited the up-regulation of Bax, Fas, caspase-3, caspase-8 and caspase-9, while promoting the up-regulation of Bcl-2 (0.48±0.11 vs 0.72±0.18, 0.62±0.07 vs 1.24±0.25, 0.53±0.08 vs 0.76±0.13, 0.46±0.08 vs 0.92±0.14, 0.51±0.12 vs 0.89±0.12, 1.23±0.25 vs 0.80±0.12; P<0.05). Bax/Bcl-2 significantly decreased (0.44±0.12 vs 0.91±0.18; P<0.05). The above parameters had no significant diffe-rence between the empty plasmid group and the IRI group (P>0.05). Conclusion AM can reduce apoptosis of renal tubular epithelial cell induced by renal IRI, the mechanism of which might be achieved by inhibiting caspase-dependent intrinsic and extrinsic pathways.     

褪黑激素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨褪黑激素对人增生性瘢痕Fb增殖和凋亡的影响与机制. 方法 采用组织块法分离培养人增生性瘢痕Fb.按随机数字表法将细胞分为低、中、高浓度组和对照组.前3组细胞分别采用含1 × 10-5、1×10-3、1 mmol/L褪黑激素的培养液培养,对照组不加褪黑激素常规培养.处理后24 h进行如下检测:对各组细胞进行形态学观察;用四氮唑复合物( XTT)-硫酸酚嗪甲酯(PMS)比色法检测细胞增殖活性;对细胞行膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)和碘化丙啶(PI)双染色后,用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡情况;荧光定量RT-PCR法检测细胞周期蛋白E(cyclin E)、p53和Fas mRNA表达量.对数据行方差分析和LSD检验. 结果 形态学观察显示,对照组Fb为长梭形,呈集落分布;3个浓度组Fb随着褪黑激素浓度升高,细胞逐渐分散,胞体变形缩小,胞膜皱缩,核质比例减小.对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组Fb增殖活性(吸光度值)依次下降,分别为1.79±0.10、1.49±0.15、1.24±0.20、0.92±0.09(F=67.61,P ＜0.05);S期细胞百分比依次下降,分别为(16.9±1.3)％、(10.6±1.1)％、(6.1±1.2)％、(3.2±0.8)％(F=286.10,P ＜0.05);G2/M期细胞百分比依次下降,分别为(16.7±1.6)％、(13.5±1.1)％、(9.8±1.0)％(6.0±0.7)％(F=162.69,P＜0.05);早、晚期凋亡细胞百分比依次升高(F值分别为424.05、236.44,P值均小于0.05).对照组、低浓度组、中浓度组、高浓度组细胞cyclin E的mRNA表达量依次下降,分别为2.90±0.30、1.58±0.21、0.90±0.20、0.24±0.12(F=266.79,P＜0.05);p53和Fas mRNA表达量依次升高(F值分别为10.11、12.03,P值均小于0.05). 结论 褪黑激素可通过影响细胞cyclin E、p53和Fas基因的表达,抑制增生性瘢痕Fb增殖并诱导该细胞凋亡.     

凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-Xl和BaX Mrna在大鼠缺血预处理脑组织中的表达

目的 检测脑缺血预处理大鼠脑组织中凋亡调控基因Ｂｃ１－２、Ｂｃ１－ｘ１和Ｂａｘ的表达。方法 假手术对照组、预处理对照组、预处理缺血组和缺血组Ｗｉｓｔａｒ大鼠分别再灌２４ｈ，４８ｈ和７２ｈ，采用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和原位分子杂交（ＩＳＨ）方法对脑组织Ｂｃ１－２、Ｂｃ１－ｘ１和Ｂａｘ ｍＲＮＡ的表达进行检测。结果 半定量ＲＴ－ＰＣＲ显示：与假手术对照组相比，预处理对照组大鼠再灌２４     

单侧隐睾大鼠对侧睾丸的损害与Bcl-2和Bax基因表达

目的:探讨单侧隐睾大鼠对侧睾丸生精细胞凋亡与Bcl-2/Bax基因表达的关系。方法:20只健康SD雄性大鼠(22日龄)随机分成隐睾组和对照组,每组10只。通过手术建立单侧隐睾动物模型。术后90 d取对侧睾丸,采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测生精细胞凋亡,免疫组化SP法检测Bcl-2/Bax基因表达。结果:与对照组相比,隐睾组对侧睾丸生精细胞凋亡显著增多(P<0.01),重量显著减轻(P<0.01),Bax表达显著升高(P<0.01),Bcl-2表达显著降低(P<0.01)。凋亡细胞主要是初级精母细胞和圆形精子细胞。结论:单侧隐睾大鼠对侧睾丸的生精细胞凋亡增多与Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达升高密切相关。细胞内Bc l-2/Bax比值是影响生精细胞凋亡的重要因素之一。