痫宁喷雾剂对癫痫大鼠海马c-fos表达的影响

目的:研究痫宁喷雾剂对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马神经元损伤及c-fos表达的影响,探讨其治疗癫痫的机制。方法:将46只SD大鼠随机分为空白组、模型组、对照组和鼻腔组。采用氯化锂-匹罗卡品制成慢性癫痫大鼠模型,分别给予生理盐水喷鼻,丙戊酸钠灌胃,痫宁喷雾剂鼻腔给药。病理切片观察大鼠海马神经元损伤情况,免疫组化法检测大鼠海马c-fos的表达。结果:对照组与鼻腔组大鼠海马神经元水肿、固缩等损伤较模型组明显减轻(P0.01),对照组与鼻腔组大鼠海马c-fos表达较模型组明显下降(P0.05),鼻腔组与对照组比较无显著性差异(P0.05)。结论:痫宁喷雾剂能明显减轻癫痫大鼠海马神经元水肿、固缩等损伤,降低c-fos表达水平,对神经元具有保护作用,其作用机制可能与降低神经元c-fos的表达有关。     

姜黄素对匹罗卡品致痫大鼠海马S100B蛋白表达的影响

目的:观察氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马组织S100B表达,探讨姜黄素对癫痫大鼠神经保护作用机制。方法:动物随机分为3组,空白对照组、癫痫组、姜黄素治疗组。癫痫模型采用氯化锂-匹罗卡品诱导大鼠癫痫持续状态(SE),给药SE后予姜黄素300 mg/kg腹腔,大鼠癫痫造模后24 h和72 h取海马组织,苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理形态学变化,免疫组化染色和免疫印迹法检测海马组织S100B蛋白的表达。结果:癫痫组海马神经元脱失和损伤明显,姜黄素治疗组明显减轻;与对照组相比,海马神经元S100B免疫反应阳性表达增加,差异显著(P<0.05);与模型组比较姜黄素治疗组海马神经元S100B阳性表达水平降低,差异显著(P<0.05)。结论:姜黄素治疗可降低匹罗卡品致痫大鼠海马神经元S100B蛋白表达,可能通过抑制星形胶质细胞活化来减轻癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用。     

益气熄风化痰法对慢性癫痫大鼠大脑海马区GAD65表达的影响

目的 观察益气熄风化痰法(痫宁片)对氯化锂联合匹罗卡品所致的慢性癫痫大鼠大脑海马区谷氨酸脱羧酶(GAD65)的免疫反应表达的影响,探讨其抗癫痫的可能机制.方法 将70只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药对照组和痫宁片组,采用氯化锂和匹罗卡品复制慢性癫痫大鼠模型,分别给予生理盐水、丙戊酸钠、痫宁片灌胃,4周后采用免疫组化SABC法检测大鼠大脑GAD65的表达.结果 阳性药对照组与痫宁片组大鼠大脑GAD65表达较模型组增强(P＜0.05),痫宁片组与阳性药对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 益气熄风化痰法能增强癫痫大鼠大脑海马区GAD65的表达,这是其抗癫痫的主要机制之一.     

姜黄素对匹罗卡品致痫大鼠海马COX-2和5-LOX表达的影响

目的:观察氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马组织环氧酶-2(COX-2)和5-脂氧合酶(5-LOX)表达,探讨姜黄素对癫痫大鼠神经保护作用机制。方法:动物随机分为5组,生理盐水对照组,癫痫组,丙戊酸钠组,姜黄素低剂量组,姜黄素高剂量组。癫痫模型采用氯化锂-匹罗卡品诱导大鼠癫痫持续状态(SE),SE后各治疗组分别予丙戊酸钠口服溶液(140 mg/kg)、低剂量姜黄素(100 mg/kg)及高剂量姜黄素(300 mg/kg)腹腔注射,大鼠癫痫造模后24 h和72 h取海马组织,苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理形态学变化,荧光定量PCR检测COX-2和5-LOX mRNA表达,免疫印迹法(Westetn Blot)检测海马组织COX-2和5-LOX蛋白的表达。结果:癫痫组海马神经元脱失和损伤明显,丙戊酸钠组和姜黄素治疗组明显减轻;与对照组相比,癫痫组海马组织COX-2和5-LOX mRNA及蛋白表达增加(癫痫72 h组5-LOX除外),差异显著(P0.05);与癫痫组比较,姜黄素治疗组海马组织COX-2和5-LOX mRNA及蛋白表达降低,差异显著(P0.05),且姜黄素高剂量组上述指标下降幅度大于低剂量组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:姜黄素治疗可降低匹罗卡品致痫大鼠海马神经元COX-2和5-LOX mRNA及蛋白表达,可能通过影响花生四烯酸代谢通路COX-2和5-LOX表达来减轻癫痫发作脑损伤发挥神经保护作用。     

中药复方熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马电压门控性Ⅰ型钠通道α亚基蛋白表达的影响

[目的]研究中药复方熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马电压门控性Ⅰ型钠通道α亚基蛋白(Nav1.1)表达的影响。[方法]建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠模型。实验大鼠随机分为5组:空白组、模型组、熄风胶囊低剂量治疗组(熄低组)、熄风胶囊中剂量治疗组(熄中组)、熄风胶囊高剂量治疗组(熄高组)。分别通过免疫组织化学染色法检测实验大鼠海马Nav1.1的表达。[结果] Nav1.1蛋白在IE大鼠海马的表达,发现致痫大鼠海马CA1区和DG区神经元结构基本正常,且Nav1.1变化不明显,在CA3区,模型组致痫大鼠神经元变性、坏死明显,Nav1.1在神经元变性、坏死部位染色变浅,甚至消失,在变性、坏死神经元周围的正常组织中染色增强。其中,模型组可见CA3区神经元退变、坏死,Nav1.1在神经元退变、坏死部位染色变浅,甚至消失,而在熄风胶囊治疗组中,随剂量增大,退变、消失的神经元减少,同时棕褐色区域减少程度减低,均与剂量成正相关,但在变性、坏死的神经元周围的正常组织中染色增强不明显,而且从定量分析来看,模型组Nav1.1的表达量增多,而各熄风胶囊治疗组却增加不明显。[结论]熄风胶囊可能通过保护海马神经元,调节IE大鼠海马神经元Nav1.1的表达,推测其可通过对钠通道的抑制作用以降低神经元细胞膜兴奋性而发挥抗癫痫作用。     

基于基因芯片技术研究定痫丸对氯化锂-匹罗卡品致痫小鼠海马组织miRNA-187表达的影响

目的:研究定痫丸对氯化锂-匹罗卡品致痫小鼠海马组织miRNA-187表达的影响。方法:采用基因芯片技术筛选出氯化锂-匹罗卡品致痫小鼠海马组织差异表达基因,并运用q-PCR技术验证其差异性表达。予定痫丸悬混液灌胃,运用q-PCR技术检测定痫丸悬混液对癫痫小鼠海马组织差异基因的表达。结果:通过基因芯片筛选出癫痫小鼠海马组织中差异表达miRNA下调18个,上调10个。筛选出miRNA-187,运用q-PCR技术验证了其表达下调(P0.05)。经定痫丸悬混液干预后,发现癫痫小鼠海马组织miRNA-187表达上调(P0.05)。结论:定痫丸可能通过上调miRNA-187对癫痫起到治疗作用,初步揭示定痫丸治疗癫痫的分子机制。     

康痫丸对致痫大鼠行为及病理学影响

目的 探讨康痫丸治疗原发性癫痫的作用机制.方法 将40只SD大鼠随机分为正常对照组、癫痫模型组、丙戊酸钠组、康痫丸组,每组10只.采用戊四氮(PTZ)亚惊厥剂量造模.观察药物处理后致痫大鼠癫痫发作行为的改变,大脑海马和皮层病理形态学改变.结果 康痫丸能延长癫痫发作潜伏时间并缩短惊厥时间.改善行为学异常状态,与癫痫模型组比较均有显著性差异;癫痫模型组出现以神经元变性甚至细胞坏死为主的病理变化,康痫丸变性、坏死神经元百分比明显低于模型组.结论 康痫丸可减轻致痫大鼠异常行为发作程度,减轻致痫大鼠的神经元损伤.     

戊四唑致痫模型大鼠脑神经元损害及宁痫颗粒的干预作用

目的 :观察慢性癫痫模型大鼠大脑神经元损害的病理学变化及中药复方宁痫颗粒的影响作用。方法 :以戊四唑 (PTZ) 35 m g/ kg腹腔注射 ,诱导 SD大鼠慢性癫痫模型 ,应用病理学方法 ,观察比较各组大鼠皮质、海马区神经元受损情况。结果 :模型组皮质、海马区神经元明显损伤 ,数目减少 ;中药组神经元形态、数量均未见显著改变。结论 :PTZ诱导慢性癫痫发作可造成大脑皮质、海马神经元的损伤 ;宁痫颗粒对癫痫发作所致的神经元损伤具有良好的保护作用     

熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤影响的研究

[目的]探讨熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠海马损伤的影响。[方法]应用氯化锂-匹罗卡品复制难治性癫痫大鼠模型。观察实验大鼠的反复自发性发作(SRS)情况、海马形态学改变和苔藓纤维出芽(MFS)。[结果]1)治疗组癫痫大鼠SRS的发作次数均明显低于模型组(P<0.01)。2)光、电镜结果显示:各治疗组中联合治疗组海马结构损伤最轻。3)Timm染色结果显示:联合治疗组对海马CA3区及齿状回MFS有较强的干预作用,优于单药治疗组。这种干预作用的强弱与熄风胶囊的剂量呈现一定正相关关系。[结论]熄风胶囊单药及与卡马西平(CBZ)联合用药能够有效的控制氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠的SRS,降低海马神经元损伤的程度,抑制苔藓纤维异常出芽。     

cox-2抑制剂塞来昔布对氯化锂-匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后脑内cox-2,Glu表达的影响

目的观察环氧化酶-2（cox-2）抑制剂塞来昔布对氯化锂一匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后脑内cox-2、谷氨酸（Glu）表达的影响，探讨其抗癫痫的作用机制。方法采用免疫组化法对氯化锂一匹罗卡品诱发癫痫大鼠模型脑内cox-2和Glu的表达进行测定，并研究塞来昔布对癫痫影响及可能的作用机制。结果癫痫模型组大脑皮质及海马区cox-2和大脑皮质Glu免疫反应较空白对照组明显增多（P〈0．05），给药组免疫反应较模型组明显减少（P〈0．05）。结论癫痫持续状态后脑内cox-2、Glu表达明显增加；塞来昔布能够有效减轻脑内cox-2、Glu的表达，塞来昔布可能具有减轻癫痫发作和保护神经元的作用。     

柴贝止痫汤对癫痫—抑郁共病模型大鼠大脑皮层及海马中5-HTT、5-HT1AR、5-HT2AR和DA2R表达的影响

目的 观察柴贝止痫汤对氯化锂—匹罗卡品慢性颞叶癫痫—抑郁共病模型大鼠大脑皮层及海马中5-羟色胺转运体(5-hydroxytryptamine transporter, 5-HTT)、5-羟色胺受体(5-hydroxytryptamine repreceptor, 5-HTR)(5-HT_1AR、5-HT_2AR)和多巴胺(dopamine, DA)受体(DA₂R)表达的影响,探讨柴贝止痫汤对癫痫—抑郁共病的干预机制。方法 建立氯化锂—匹罗卡品慢性颞叶癫痫—抑郁共病大鼠模型。造模成功后,将大鼠随机分为6组：正常组、模型组、西药组(西酞普兰给药)和柴贝止痫汤低、中、高剂量组,连续灌胃给药14天,每天2次。干预后,通过糖水偏好及强迫游泳实验进行抑郁行为学监测;酶联免疫吸附法检测大鼠大脑皮层及海马中5-HT、DA含量;实时定量PCR法检测大鼠大脑皮层及海马中5-HTT、5-HT_1AR、5-HT_2AR和DA₂R基因的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠大脑皮层及海马...     

抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑组织中海马区c-fos蛋白表达的影响

目的:研究中药复方抗痫灵抑制癫痫的发病机制。方法:采用免疫组化方法和实时荧光定量PCR(Real timePCR)方法检测大鼠脑组织中海马c-fos蛋白表达的影响。结果:经中药复方抗痫灵治疗6周后,致痫大鼠脑组织海马区c-fos蛋白阳性表达显著降低。结论:中药复方抗痫灵可能通过减少戊四氮致痫大鼠脑组织海马区c-fos蛋白的阳性表达,对癫痫有明显的抑痫作用。     

中药补脑止痫散对癫痫大鼠海马c-fos和PKCa表达的影响

目的 利用戊四氮点燃大鼠模型研究中药补脑止痫散对癫痫大鼠海马神经元c-fos和PKCa表达的影响,探讨补脑止痫散抗痫机制.方法 将80只大鼠随机分为8组,分别为空白组、模型组、补脑止痫散低、中、高剂量10天组和低、中、高剂量21天组,在戊四氮点燃大鼠模型后,分别用补脑止痫散低、中、高剂量对相应的组别进行灌胃,在预定时间点处死大鼠并取材,用免疫组化法检测海马神经元c-fos和PKCa的表达情况.结果 与模型组相比,补脑止痫散中、高剂量组海马神经元c-fos和PKCa的表达量均明显减少,差异极显著(P＜0.01);c-fos表达:高剂量组低于中剂量组,中剂量组低于低剂量组,21天组低于10天组,均差异显著(P＜0.05);PKCa表达:高剂量组和中剂量组均显著低于低剂量组(P＜0.05),中剂量和高剂量组之间比较无显著差异,10天组和21天组比较无显著差异(P＞0.05).结论 补脑止痫散能明显抑制癫痫大鼠海马神经元c-fos和PKCa的表达,中、高剂量组作用强于低剂量组;抑制c-fos和PKCa表达是补脑止痫散的抗痫机制之一.     

盐酸法舒地尔对大鼠癫痫持续状态海马神经元的保护作用

目的探讨盐酸法舒地尔对大鼠癫痫持续状态（SE）后凋亡的影响及其可能作用机制。方法将大鼠随机分成3组,对照组（A组）、模型组（B组）和盐酸法舒地尔组（C组）,对采用氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫大鼠模型的海马神经元细胞,采用免疫组化法对TUNEL、XIAP及Caspase-9阳性细胞进行测定。结果模型组海马神经元细胞TUNEL、XIAP及Caspase-9较对照组明显增多（P〈0.05）;盐酸法舒地尔组TUNEL、Caspase-9较模型组明显减少（P〈0.05）,XIAP较模型组显著增加（P〈0.05）。结论 SE后海马神经元细胞内TUNEL、XIAP及Caspase-9表达均明显增加,盐酸法舒地尔能够减轻海马神经元细胞TUNEL、Caspase-9的表达,促进海马神经元细胞XIAP的表达。盐酸法舒地尔可能通过促进XIAP生成进而抑制Caspase-9表达,从而起到保护神经元的作用。     

柴胡疏肝汤对匹罗卡品致难治性癫痫大鼠痫性发作的影响

目的 探讨"从肝论治"复方柴胡疏肝汤对匹罗卡品致难治性癫痫模型大鼠痫性发作的影响.方法 将制备成功的50只SD难治性癫痫大鼠模型随机分为5组,模型组(A)、VPA组(B),柴胡疏肝汤低(C)、中(D)、高(E)组,每组各10只,各组灌胃给药,分别观察给药4周、8周后痫性发作次数、平均发作时间及发作级别的变化.结果 A组大鼠痫性发作明显;和A组比较,B、C、D、E组大鼠痫性发作均有不同程度的减轻(P<0.05或P<0.01),而E组减轻大鼠痫性发作最明显(P<0.01).结论 "从肝论治"复方柴胡疏肝汤能减轻难治性痫痈大鼠痫性发作,有明显的抗痫痈作用.     

熄风胶囊对匹罗卡品致痫大鼠电压门控性钠通道功能的影响

[目的]研究中药复方熄风胶囊对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马神经细胞电压门控性钠通道(VGSC)功能的影响。[方法]建立氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠模型。将实验大鼠随机分为空白组、模型组、熄风胶囊低剂量治疗组(熄低组)、熄风胶囊中剂量治疗组(熄中组)和熄风胶囊高剂量治疗组(熄高组)。通过全细胞膜片钳检测海马神经细胞VGSC功能的变化。[结果] 1)成功复制氯化锂-匹罗卡品大鼠模型。与模型组比较,熄高组、熄中组和熄低组发作次数均低于模型组(P0.01),而熄风胶囊治疗组中,随剂量增加发作次数逐渐减少,其中熄高组和熄低组比较差异有统计学意义(P0.05)。2)全细胞膜片钳记录钠电流结果:与空白组比较,各组的钠电流密度明显增加、激活曲线阈值下降、失活曲线阈值上升、失活后恢复时间缩短,差异有统计学意义(P0.01);与模型组相比较,各熄风胶囊治疗组的钠电流密度下降、激活曲线阈值上升、失活曲线阈值下降、失活后恢复时间延长,差异有统计学意义(P0.01);各治疗组间比较,从电流-电压曲线可见,熄高组和熄中组相比有随剂量增加而电流下降趋势,但无统计学意义(P0.05),而熄高组、熄中组分别与熄低组比较有显著性差异(P0.01);激活曲线和失活可见各中药治疗组之间,随剂量升高电流有下降趋势,提示治疗后激活和失活阈值有上升趋势,但各治疗组间无统计学意义(P0.05);失活后恢复曲线可见总体上随剂量升高恢复时间有延长趋势,但各治疗组间无统计学意义(P0.05)。[结论]熄风胶囊通过减少VGSC电流,增强VGSC失活,抑制失活后的恢复,延长恢复时间来达到降低VGSC异常活化的作用,从而降低癫痫反复自发性发作,这可能是其作用机制之一。     

PPARs激动剂罗格列酮对大鼠癫痫持续状态海马神经元的保护作用

目的探讨罗格列酮（RSG）对大鼠癫痫持续状态（SE）后海马神经元凋亡的影响及其可能作用机制。方法采用免疫组化法对氯化锂-匹罗卡品诱发癫痫大鼠模型脑内Bcl-2、Bax及TUNEL阳性细胞的表达进行测定,并研究RSG对癫痫影响及可能机制。结果模型组（M组）海马区TUNEL、Bcl-2、Bax较对照组（N组）明显增多（P〈0.05）;RSG组Bax、TUNEL较M组明显减少（P〈0.05）,Bcl-2阳性细胞、Bcl-2/Bax比率较M组明显增多（P〈0.05）。结论SE后脑内TUNEL、Bcl-2、Bax表达明显增加;RSG能够减轻海马TUNEL、Bax的表达,增加海马Bcl-2的表达从而增加Bcl-2/Bax比率。RSG可能具有减轻癫痫发作和保护神经元的作用。     

预先针刺对癫痫持续状态后神经元损伤保护作用的实验研究

目的：观察预先针刺对癫痫持续状态（SE）后神经元损伤的保护作用。方法：建立氯化锂－匹罗卡品大鼠SE模型。神经元尼氏体亚甲蓝特殊染色法观察大鼠海马CA1区神经元尼氏体变化；原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）及电镜观察大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果：预先针刺组大脑皮质、海马CA1区可见少量棕色TUNEL染色阳性细胞核，较SE组明显减少，尼氏体染色阳性细胞数较SE组明显增多。结论：预先针刺可以减轻SE后神经元损伤，抑制神经元凋亡。     

重组人生长激素对癫痫持续状态大鼠神经元凋亡及XIAP、Caspase-3表达的影响

目的探讨重组人生长激素对大鼠在癫痫持续状态（SE）后海马神经元凋亡的影响及其可能作用机制。方法将大鼠随机分成对照组、模型组和重组人生长激素组。采用免疫组化法对氯化锂-毛果芸香碱（匹罗卡品）诱发癫痫大鼠模型脑内XIAP、Caspase-3及TUNEL阳性细胞的表达进行测定。结果模型组海马区TUNEL、XIAP、Caspase-3较对照组明显增多（P〈0.05）;重组人生长激素组TUNEL、Caspase-3较模型组明显减少（P〈0.05）,而XIAP较模型组显著增加（P〈0.05）。结论重组人生长激素可能通过促进XIAP生成进而抑制Caspase-3表达,从而起到保护神经元的作用。     

柴胡疏肝汤对癫痫大鼠miRNA132、NF-kB表达的影响

目的:探讨柴胡疏肝汤对癫痫大鼠微RNA132(miRNA132)、核因子kB(NF-kB)表达的影响。方法:将实验大鼠分为癫痫组、假手术组、空白组,癫痫组采用腹腔注射氯化锂溶液联合盐酸匹罗卡品诱发癫痫模型,建立癫痫模型后,筛选出造模成功大鼠,随机分为模型组、中药组、西药组,中药组用柴胡疏肝汤灌胃,西药组给予卡马西平片,模型组及其他各组给予同等量的生理盐水灌胃,最后比较各组的大鼠的痫性发作情况,并用PCR检测各组大鼠海马及颞叶皮层中miRNA132、NF-kB的mRNA的表达。结果:①空白组和假手术组无痫性发作,模型组1~4周的痫性发作级别数值无变化,西药组和中药组的痫性发作从1~4周逐次减少。第1周,模型组与中药组的痫性发作级别数值无变化(P>0.05),西药组的痫性发作级别数值低于模型组(P<0.05)。第2~4周,中药组的痫性发作级别数值均低于模型组(P<0.05),西药组的痫性发作级别数值均低于中药组(P<0.05)。②空白组和假手术组的miRNA132表达无差别(P>0.05),模型组的miRNA132表达低于假手术组(P<0.05),中药组的miRNA132表达高于模型组(P<0.05),西药组的miRNA132表达高于中药组(P<0.05)。③空白组和假手术组的NF-kB的mRNA表达无差别(P>0.05),模型组的NF-kB的mRNA高于假手术组(P<0.05),中药组的NF-kB的mRNA低于模型组(P<0.05),西药组的NF-kB的mRNA低于中药组(P<0.05)。结论:柴胡疏肝汤可以提高miRNA132,减少NF-kB表达,减少癫痫大鼠的痫性发作。