人胰激肽释放酶基因的克隆及表达载体的构建

目的 :克隆中国人胰组织激肽释放酶基因 ,构建原核、真核表达载体 ,为开发生产人源激肽释放酶基因工程产品及人源激肽释放酶基因药物奠定基础。方法 :提取人胰腺组织总RNA ,逆转录后琼脂糖电泳初步鉴定PCR产物。将激肽释放酶cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS ,酶切鉴定后 ,对激肽释放酶基因进行序列测定分析。用双酶切法 ,插入原核表达载体PET 2 8b ,真核表达载体pBacPAK9质粒中。酶切鉴定后 ,进行序列测定分析。结果 :本实验克隆的激肽释放酶基因与GenBank报告的激肽释放酶基因相比 ,碱基序列相同。测序分析表明人胰组织激肽释放酶基因经酶切 ,正确插入到原核表达载体PET 2 8b ,真核表达载体pBacPAK9质粒中。结论 :克隆并构建成功中国人组织激肽释放酶基因的原核、真核表达载体 ,可用于基因工程产品及基因药物的深入研究工作     

人组织激肽释放酶基因家族与胃肠道肿瘤检测

激肽释放酶是人体激肽释放酶-激肽系统(kallikreinkinin system)的主要成分,是一种丝氨酸蛋白酶,能够使激肽原释放出激肽,它具有很高的生理学活性,在人体组织中起着十分重要的生理作用.激肽释放酶分为组织激肽释放酶(TK)和血浆激肽释放酶(PK)两大类,这两种酶在分子量、底物特异性、免疫学特征、基因结构和释放出的激肽种类等方面均有显著的不同[1].人组织激肽释放酶主要参与血管张力和通透性的维持、各种生长因子的裂解激活、调节神经系统可塑性以及皮肤表皮细胞脱落与再生等众多的生理过程[2].人组织激肽释放酶基因是一类大的多基因家族,在基因结构、蛋白质水平及三维结构上都具有显著的保守性.     

转导激肽释放酶基因对高血压大鼠的作用

目的初步研究转导人组织激肽释放酶基因对高血压大鼠的降压及其他作用。方法从质粒中扩增人组织激肽释放酶基因，定向亚克隆至pcDNA3．1载体，测序鉴定。Wistar大鼠，饮水中伺于10％果糖制备高血压模型。经静脉分别注入重组质粒及空白质粒。ELISA法检测大鼠血清激肽释放酶水平，尾套法测血压变化。常规测量大鼠胰岛素、血糖及甘油三酯。结果与对照组相比，大鼠血清中人组织激肽释放酶基因表达明显增加，并明显降低大鼠血压。结论转导人组织激肽释放酶基因使得高血压大鼠血压明显下降。     

人组织激肽释放酶基因家族

激肽释放酶 (kallikrein ,KLK)是一组丝氨酸蛋白酶 ,存在于不同组织和生物液体中。最初由Werle等人于 1930s从胰腺中分离。主要分为两大类 :血浆激肽释放酶和组织激肽释放酶。二者在其分子量、特异性底物、免疫学特征、基因结构以及所释放的激肽类型等方面均存在明显差异。血浆激肽释放酶又称为Fletcher因子 ,正式命名后缩写为KLKB1。由单基因编码 ,该基因位于 4 q35染色体上 ,与组织激肽释放酶分属不同基因家族。血浆激肽释放酶由 15个外显子组成 ,编码一个酶 ,该酶可使由肝脏产生的高分子前体物质激肽原 (kininogen)释放活性肽%D%D缓…     

人组织激肽释放酶基因6与胃癌研究进展

人组织激肽释放酶基因6（human tissue kallikreins gene 6,KLK6）是人组织激肽释放酶基因家族的重要成员,是当前研究较热的肿瘤生物学标志物之一,它位于人类19号染色体上,定位于19q13．3-13．4染色体区,编码人类组织激肽释放酶6（hk6）。近年发现hk6广泛存在于人体组织和体液中,在结肠癌、胃癌、食管癌、胰腺癌等消化道肿瘤组织中表达上调,并且KLK6的表达与胃癌的临床分期和淋巴结转移密切相关,可作为一种新的肿瘤标志物,对胃癌的早期诊断和预测预后有一定价值。     

人组织激肽释放酶--可能的肿瘤标志物

人激肽释放酶属于丝氨酸蛋白酶,它包括15个激肽释放酶基因.激肽释放酶在许多组织中都有表达,包括产生激素的类固醇激素和激素依赖组织,如前列腺、乳腺、卵巢和睾丸.大部分激肽释放酶在癌细胞中受类固醇激素调节.PSA(hK3)和hK2是广泛使用的前列腺癌的肿瘤标志物.多种人激肽释放酶正成为前列腺癌、卵巢癌和乳腺癌诊断和预后判定的新的血清标志物.几种其他的激肽释放酶在各种内分泌相关的恶性肿瘤中、在mRNA和蛋白水平两方面都有不同程度的表达,有预后评估价值.     

人组织激肽释放酶——可能的肿瘤标志物

人激肽释放酶属于丝氨酸蛋白酶．它包括15个激肽释放酶基因。激肽释放酶在许多组织中都有表达．包括产生激素的类固醇激素和激素依赖组织．如前列腺、乳腺、卵巢和睾丸。大部分激肽释放酶在癌细胞中受类固醇激素调节。PSA(hK3)和hK2是广泛使用的前列腺癌的肿瘤标志物。多种人激肽释放酶正成为前列腺癌、卵巢癌和乳腺癌诊断和预后判定的新的血清标志物。几种其他的激肽释放酶在各种内分泌相关的恶性肿瘤中、在mRNA和蛋白水平两方面都有不同程度的表达．有预后评估价值。     

组织激肽释放酶-激肽系统及其与心血管疾病的关系

组织激肽释放酶-激肽系统(KKS)广泛存在于动物体的各种组织中,通过多条信号通路产生多种生物学作用,参与多器官功能调节和多种病理生理过程,如心血管、肾脏和神经系统的调节,细胞增殖、炎症、凋亡等过程。1 KKS的组成和生物学活性KKS的组成包括激肽释放酶原、激肽释放酶(KLK)、激肽原、激肽和激肽受体。组织中存在的激肽释放酶原活化后成为激肽释放酶。激肽释放酶分为两种类型:组织激肽释放酶和血     

人组织激肽释放酶6在胃癌中的表达及其临床意义

胃癌是常见恶性肿瘤之一,由于起病隐匿,早期诊断极为困难,目前尚未发现特异性肿瘤标志.人组织激肽释放酶基因家族(Kallikreins,KLKs)是近年发现的肿瘤标志家族,KLK6基因是该家族成员之一,其编码的蛋白--人组织激肽释放酶6(human kallikrein 6,hK6)是由223个氨基酸组成的丝氨酸蛋白酶,具有胰蛋白酶样活性[1].国外研究发现,hK6参与了人类多种恶性肿瘤的形成过程,且与肿瘤的侵袭、浸润和转移等生物学行为密切相关[2-3],但hK6与胃癌的关系在国内尚鲜见报道.我们采用免疫组织化学链霉菌抗生素蛋白一过氧化物酶连接法(SP)检测hK6在胃癌、胃溃疡和正常胃黏膜组织中的表达情况,并探讨hK6表达与胃癌患者临床病理参数间的关系.     

人尿激肽释放酶的动力学分析法

腺激肽释放酶是一种丝氨酸蛋白酶,广泛存在于胰、唾液腺、肾及尿中,有人认为在血浆或血清中也有存在。许多报导论述了不同激肽释放酶分析法几乎难以依据酶促的和免疫的特点来区分人尿激肽释放酶和其他腺体激肽释放酶。本文推荐一种检测人尿激肽释放酶的简易动力学分析法。该法基于用分光光度计在405nm波段测定产色物S-2266(37℃,pH8.2)释放的P-硝基苯胺。间歇△A/5′(0～5分钟)。本法可测定低至0.00125kU/ml的酶,敏     

NES1蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

正常上皮细胞特异性-1基因(NES1),又称人组织激肽释放酶10(kallikrein10,KLK10)[1],在调控正常上皮细胞生长、分化等方面起一定作用。激肽释放酶(kallikreins,KLK)存在于不同组织和生物液体中,参与多种疾病的发生、发展,具重要的生物学功能[2,3]。胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,NES1基因作为一种在上皮细胞中表达的抑癌基因[4],其在胃癌发生、发展中的作用尚不清楚。本研究通过免疫组化的方法分析了NES1在正常胃组织和胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生发展中的作用。材料与方法一、材料1.组织标本收集与制备:收集2005年5月～2006…     

组织型激肽释放酶对大鼠急性脑缺血后GLUT-1表达的影响

激肽释放酶-激肽系统（kallikre in-kinin system，KKS）在人体分布广泛，发挥重要生理的作用，尤其在血管再生方面发挥重要作用［1］。本研究通过观察组织型激肽释放酶（TK）对脑缺血后 GLUT-1蛋白表达的影响，     

胰激肽释放酶对高血压病心功能的影响

为探讨胰激肽释放酶对高血压病心功能的影响,我们用脉冲多普勒超声心动图测定了20例高血压患者服胰激肽释放酶前后的左室舒张功能指标。结果表明,胰激肽释放酶可改善高血压病患者左室舒张功能。     

发色多肽用于前激肽释放酶活性测定的研究

目的:弄清N-t-BOC-Leu-Ser-Thr-Arg-pNA作为激肽释放酶测定的发色底物的基础参数并建立血浆(前)激肽释放酶测定的程序。方法:以激肽释放酶及其他相关因子的制品及缺乏血浆测定其Km,max,Ki,回收率,对比试验,并确定最适测定条件。结果:该发色底物受激肽释放酶作用的Km和Vmax分别为235μmol/L和337 nmol(pNA).S-1.U-1(KK);该底物的酰基水解活性不依赖因子、、和蛋白C,而明显依赖于激肽释放酶,且对AT-和LBTI的抑制均不敏感。用该多肽建立了血浆激肽释放酶活性测定法,该方法与传统方法无论是活性测定或抗原定量均有很强的可比性,线性范围6.25%~300.0%。结论:B3644作为激肽释放酶测定的发色底物,具有良好的敏感性和选择性,是建立PK活性测定的理想发色底物。     

脑缺血后激肽释放酶-激肽系统神经血管保护机制的研究进展

激肽释放酶-激肽系统是体内重要的调节系统,参与了脑缺血损伤的病理生理过程,具有神经保护作用。本文从炎症反应、氧化应激、细胞凋亡、血管新生、神经再生等角度综合论述脑缺血后激肽释放酶-激肽系统的神经血管保护机制,希望在此基础上进一步探索和研究,明确该系统的深层作用机理,从而为缺血性脑血管病的预防和治疗提供新的思路。     

前列腺特异性抗原检测研究进展

前列腺特异性抗原(PSA)是33KD大小的依赖雄性激素的糖蛋白,等电点6.9,由237个氨基酸组成,基因定位在第19号染色体上.PSA主要由前列腺管状细胞合成,并存在于精液中,在血液和尿液中含量极低,PSA的其它来源包括尿道和直肠周围的腺体,对精液具有液化作用.PSA与丝氨酸蛋白中的激肽释放酶家族有关,具有类凝乳蛋白酶和激肽释放酶的活性[1-5].……     

人类激肽释放酶基因6在卵巢恶性肿瘤中的表达及其机制研究

目的 研究人组织激肽释放酶基因6（KLK6）mRNA和蛋白在卵巢肿瘤组织中的表达水平,探讨其在卵巢恶性肿瘤中的作用机制.方法 应用RT-PCR和免疫组化SP法分别检测在正常的卵巢组织、卵巢的良性肿瘤、卵巢的交界性肿瘤及卵巢的恶性肿瘤组织中KLK6的mRNA表达及蛋白的表达,探讨该基因的表达与卵巢恶性肿瘤患者的临床病理特征关系.结果 本研究显示,在卵巢癌组织中,KLK6 mRNA的表达水平与正常卵巢组织相比,显著增高;卵巢癌组织中KLK6蛋白的阳性表达率为69.4%,与正常卵巢组织（13.3%）、良性卵巢肿瘤（16.6%）和交界性卵巢肿瘤（44.0%）相比,差异有统计学意义（χ2=25.843,P＜0.001）.结论 KLK6可能参与了卵巢癌的侵袭和转移.     

乳腺癌klk6基因表达的实时荧光定量法的建立及初步应用

目的建立人乳腺癌相关基因组织型激肽释放酶基因家族成员Kallikrein6(klk6)mRNA荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQPCR)检测方法,以检测正常乳腺和乳腺癌组织中klk6基因表达水平。方法以GAPDH作参照,用SYBRGreenI荧光定量技术,建立检测klk6mRNA的FQPCR方法;并检测32份正常乳腺和乳腺癌组织标本的循环阈值(Ct),然后,通过REST软件分析klk6mRNA的表达水平。结果FQPCR方法对GAPDH和klk6mRNA的扩增效率分别为0.90和0.95,批内变异系数(CV)分别为1.0%～2.1%和0.8%～1.2%,批间CV分别为3.2%和3.9%。正常乳腺和乳腺癌组织的klk6对GAPDH的相对表达量分别为0.017±0.009和0.040±0.017。用REST软件分析,提示乳腺癌组织klk6表达水平上调。结论建立的klk6mRNAFQPCR检测方法简便,特异,重复性好,可信度高,可用于klk6基因表达水平与肿瘤相关性研究。     

氩激光联合胰激肽释放酶治疗增殖前期糖尿病视网膜病变疗效分析

目的：观察氩激光联合胰激肽释放酶治疗增殖前期糖尿病视网膜病变的疗效。方法：将61例83眼确诊为增殖前期糖尿病视网膜病变的患者随机分为2组。单纯氩激光组在给予全视网膜激光光凝治疗,氩激光联合胰激肽释放酶组（综合组）光凝后给予口服胰激肽释放酶3个月。术后3个月比较两组视力及眼底变化情况。结果：两组视力及眼底情况均有明显改善,其中综合组优于单纯氩激光组,且有统计学意义（P〈0．05）。结论：氩激光光凝是治疗增殖前期糖尿病视网膜病变安全有效的方法,胰激肽释放酶是一种相对安全和有效的治疗增殖前期糖尿病视网膜病变激光术后的药物。     

激肽系统组份的测定方法

目前已知许多能够测定生物材料中激肽系统单项组份含量的方法,同时评定其生物合成和分解的酶活性。所有方法可分为三种基本类型:免疫学方法、生物学方法和酶学方法。一、免疫学方法:这是以检查与组份结合的相应抗体为依据,方法最灵敏,特异性高,但也是最难得、最费时的方法。目前激肽系统的大多数组份的抗血清制备,虽然因人血浆激肽释放酶的单价特异抗血清早在1974年便已制成,但此酶的定量测定方