巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤小鼠造血干细胞移植后重建造血能力的影响简

目的 研究藏药巴桑母酥油丸对放射线-化学复合损伤后机体骨髓造血干细胞功能的影响,探究其“补益”作用机制.方法 将经60Co γ射线照射＋环磷酰胺腹腔注射方法得到的放射线-化学复合损伤小鼠分为巴桑母酥油丸组、生理盐水组、空白组,分别灌胃巴桑母酥油丸、生理盐水及自然恢复14d后,将其骨髓作为供体移植给受致死剂量γ射线照射的同种受体小鼠,再检测受体小鼠外源性脾集落、骨髓造血祖细胞集落产率、骨髓细胞造血干细胞抗原-1（Sca-1）阳性细胞率,并与灌胃.结果 巴桑母酥油丸组的外源性脾集落、骨髓早期红系祖细胞集落（BFU-E）、粒-巨噬系祖细胞集落（CFU-GM）产率均显著高于空白组和生理盐水组（P＜0.05）,而晚期红系祖细胞集落（CFU-E）、巨核系祖细胞集落（CFU-Meg）、骨髓细胞Sca-1＋细胞率并不离于自然恢复的空白组（P＞0.05）.结论 巴桑母酥油丸可以提高放射线-化学复合损伤小鼠骨髓造血干细胞移植后造血重建能力,提示巴桑母酥油丸可经改善骨髓造血干细胞功能发挥其对放射线-化学复合损伤机体“补益”作用.     

巴桑母酥油丸抑制高浓度小鼠血清对MC3T3-E1细胞的毒性作用

目的初步研究巴桑母酥油丸在小鼠血清对细胞毒副作用及成骨细胞增殖方面的影响。方法 80只小鼠随机分为药物组和生理盐水组,分别灌胃巴桑母酥油丸1.5 g·kg-1·d-1和等体积生理盐水×14d制备含药/生理盐水血清,加入小鼠成骨细胞株MC3T3-E1培养体系(浓度1,5,10,20%),CCK法检测24h、48h、72h细胞增殖情况。结果与空白组比较,24h时,药物组5、10%浓度具有极显著促细胞增殖作用(P0.01);48h、72h时,生理盐水组1、5%浓度及药物组各浓度均具有极显著促细胞增殖作用(P0.01),且48h时生理盐水组10%浓度也具有显著促细胞增殖作用(P0.05)。与相同浓度生理盐水血清组比较,24h时,药物组5、10、20%浓度及48h、72h时10、20%浓度均具有极显著促细胞增殖作用(P0.01)。结论巴桑母酥油丸能缓解小鼠血清对成骨细胞的毒副作用并促进其增殖。     

放射损伤对骨髓细胞间相互作用因素影响的研究

目的：了解放射损伤条件下骨髓细胞的生物力学特性及与细胞间相互作用的关系。方法：以6Gy^60Co照射昆明系小鼠制备动物模型，以细胞电泳法检测骨髓细胞的细胞电泳率，荧光探针法测定细胞膜微粘度，旋转法测细胞的粘附性，核孔滤膜法检测细胞的变形指数。结果：放射损伤后骨髓细胞的变形能力降低，细胞膜微粘度增加，粘附率降低，细胞电泳率降低。结论：放射线对骨髓细胞（包括基质细胞和造血细胞）的力学特性有显著影响，是放射损伤后造血功能减退的原因之一。     

八珍汤对骨髓抑制小鼠骨髓细胞BaxmRNA的影响

目的:观察八珍汤对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,探讨其造血调控作用机制。方法:将实验小鼠分为正常对照组、模型组和八珍汤低、中、高剂量组,除正常组外,其它四组采用Co60γ照射和注射环磷酰胺复合制备骨髓抑制小鼠模型。造模完成的第2天开始给药,正常对照组和模型组每只小鼠灌胃0.2ml/d的生理盐水;八珍汤低、中、高剂量组分别给予5、10、15mg/kg,给药7d后采用原位杂交技术测定骨髓细胞凋亡相关蛋白BaxmRNA表达的影响。结果:八珍汤各组均能降低骨髓细胞中BaxmRNA的表达,而以中剂量组效果最为显著。结论:八珍汤能拮抗骨髓细胞凋亡、促进骨髓造血功能的恢复。     

三羟异黄酮对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞的保护作用

目的　探讨三羟异黄酮(genistein,GEN)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)的保 护作用。方法　成年雄性小鼠辐射前24h给予GEN,6.0Gyγ射线辐射后观察BMSCs的形态变化、成纤维细胞集落 (CFU -F)形成数量、BMSCs层对正常小鼠骨髓细胞(BMCs)的粘附能力以及血管细胞粘附分子(VCAM- 1)、纤维连接素(Fn) 和层粘素(Ln)等细胞粘附分子的变化。结果　GEN处理组辐射后BMSCs虽然形态上与单纯辐射损伤组在光镜下无差异, 但其CFU -F形成数量、对正常BMCs的粘附能力以及VCAM -1、Fn和Ln等细胞粘附分子的表达均较单纯辐射损伤组高而且 恢复较快。结论　GEN可减小辐射对小鼠BMSCs的损伤,促进受损BMSCs增殖、粘附功能恢复,改善骨髓造血微环境,有 利于辐射损伤小鼠造血重建,具有辐射防护作用。     

补肾活血冲剂对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血微环境及骨髓黏附分子表达的影响

目的观察补肾活血冲剂对再生障碍性贫血(从)小鼠骨髓造血微环境及骨髓细胞黏附分子表达的影响。方法给小鼠按15ms／kg体重剂量腹腔注射马利兰，每周1次，连续5周，诱发骨髓损伤、造血功能障碍后，予补肾活血冲剂灌胃3个月进行干预，观察其骨髓结构变化、体外成纤维细胞集落形成单位(CFU—F)、骨髓单个核细胞CD49d、CD49c的表达水平、骨髓基质细胞VCAM-1的表达。结果马利兰诱发的小鼠骨髓损伤符合从的病理变化。补肾活血冲剂能促进骨髓造血微环境结构恢复，提高造血组织容量百分率及骨髓单个核细胞CD49d、CD49c及骨髓基质细胞VCAM-1的表达水平。结论补肾活血冲剂能改善骨髓造血微环境及提高骨髓基质细胞黏附分子的表达水平。     

小鼠骨髓细胞肾上腺素β2受体的表达及其意义

目的：探讨骨髓细胞肾上腺素β₂受体(β₂-AR)的表达及其意义,为神经因素调节骨髓造血理论提供依据。方法：用Ficoll淋巴细胞分离液从正常小鼠骨髓分离的单个核细胞直接涂片、粒-单集落造血祖细胞培养后涂片、骨髓基质细胞培养爬片,同时行骨髓石蜡切片及全骨髓细胞涂片,用免疫组织化学SP法检测上述标本中骨髓细胞β₂-AR的表达。另取小鼠采用淋巴细胞注射法制备免疫介导的再生障碍性贫血（简称再障）模型,β₂-AR拮抗剂组静脉注射ICI 118551,对照组静脉注射生理盐水,至第8天采用Western blotting 检测3组小鼠骨髓单个核细胞β₂-AR的表达。结果：正常小鼠骨髓细胞β₂-AR免疫组织化学反应可见胞质及胞膜呈深浅不等的棕黄色,其中单个核细胞48%强阳性,造血祖细胞55%中等阳性、45%弱阳性,骨髓基质细胞68%强阳性,其他辅助细胞呈不同程度的阳性反应。再障模型组、β₂-AR 拮抗剂组及对照组小鼠骨髓单个核细胞β₂-AR相对表达量分别为1.03±0.31、1.72±0.29及1.41±0.35。与对照组比较,再障模型组β₂-AR表达量明显降低（P<0.05）,β₂-AR拮抗剂组β₂-AR表达明显增加（P<0.05）。结论：正常小鼠骨髓细胞有β₂-AR表达,其表达量与骨髓造血状态有关,提示β₂-AR可能通过神经-内分泌-免疫网络途径参与造血调节。     

放烧复合伤骨髓基质细胞某些粘附分子表达的意义

目的：深入探讨放烧复合伤对造血微环境损伤的机制。方法：采用流式细胞仪观察了５．０Ｇｙγ线放射损伤、１５％Ⅲ度体表面积烧伤和放烧复合伤小鼠骨髓基质细胞表达血管细胞粘附分子（ＶＣＡＭ－１）、纤维连接素（Ｆｎ）、层粘素（Ｌｎ）和Ⅳ型胶原（ＣｏｌⅣ）等细胞外基质成分的变化。结果：在本实验条件下，随着伤后时间的延长，骨髓基质细胞表达ＶＣＡＭ－１、Ｆｎ、Ｌｎ和ＣｏｌⅣ的水平具有以单烧组＞正常组＞复合伤组＞单放组的趋势；单烧组具有以伤后３、７、１４ｄ最高，单放组具有以伤后３、７ｄ最低的时效特点。结论：骨髓微环境基质细胞粘附功能的损伤可能是放烧复合伤造血功能障碍发生的重要机制之一。     

照射小鼠骨髓基质对造血干细胞支持功能的观察

615小鼠全身照射500R和2000R后,取股骨骨髓建立贴壁细胞层,然后加入同种正常小鼠的骨髓细胞,进行体外培养,可见两个照射剂量的动物骨髓基质所支持的有核细胞及CFU-S数较正常组明显减少。但500R照射者的造血基质功能尚能恢复.2000R照射者损伤更严重,但其功能未完全丧失。照射小鼠骨髓基质细胞层对造血干细胞的增殖较正常组有更强的刺激作用。     

归芪口服液促进放射损伤小鼠骨髓造血机能的恢复及其机制

目的探讨归芪口服液对放射损伤小鼠骨髓组织中CD54表达的影响及其促进早期骨髓造血恢复的可能机制。方法将42只清洁级近交系健康昆明小鼠随机分为3组。正常组不做任何处理；归芪组和对照组于6．0Gy ^60Coγ射线一次性全身均匀照射后．分别被胃饲归芪口服液（200mg／次，2次／d）和相同剂量的生理盐水。照射后第4、8和14天计数小鼠骨髓单个核细胞和骨髓组织中巨核细胞数，测量骨髓造血组织面积，并用免疫组织化学法检测骨髓组织中黏附分子CD54的表达水平。照射后第8天计数小鼠的脾集落形成单位（CFU—S）数。结果照射后第4、8、14天归芪组骨髓单个核细胞、骨髓组织中巨核细胞计数和骨髓造血组织面积均显著高于对照组（P〈0．01或P〈0．05）；第4、8天归芪组骨髓组织中CD54的表达水平显著高于对照组（P〈0．01），第14天归芪组CD54表达水平下降，明显低于对照组（P〈0．01）。照射后第8天归芪组CFU—S计数显著高于对照组（P〈0．01）。结论归芪口服液能够促进放射损伤小鼠早期骨髓造血功能的恢复，其机制之一可能是通过调节骨髓组织中黏附分子CD54的表达。     

红斑汤对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠外周血细胞及骨髓细胞CD34、CD45表达的影响

目的：探讨红斑汤对环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠外周血及骨髓细胞CD34、CD45表达的影响。方法：除正常组外,其余各组给以环磷酰胺25 mg·kg^-1,隔日1次,腹腔注射2次即可造成骨髓抑制模型,正常组以生理盐水代替。观察红斑汤对小鼠外周血细胞及骨髓细胞CD34、CD45的影响。结果：与正常组相比,模型组小鼠外周血白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板及骨髓细胞CD34、CD45均可见降低,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;红斑汤组及鲨肝醇组小鼠外周血中白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,可以认为红斑汤组与鲨肝醇组,具有促进骨髓抑制小鼠白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板的恢复,且鲨肝醇组疗效不显著优于红斑汤组（P〉0.05）;红斑汤组和鲨肝醇组骨髓细胞CD34、CD45及CD34、CD45的双阳性率也明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）,说明红斑汤组和模型组均能促进骨髓细胞CD34、CD45的恢复,且鲨肝醇组不优于模型组（P〉0.05）。结论：红斑汤具有升高骨髓抑制小鼠外周血中白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板及骨髓细胞CD34、CD45;具有改善环磷酰胺对小鼠骨髓抑制的作用。     

Effect of Ligustrazine on Bone Marrow Microenvironment and Signal Transducti on Path in Irradiation Injured Mice

Ｗｅｈａｖｅｒｅｐｏｒｔｅｄ ｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙｔｈａｔｌｉｇｕｓｔｒａｚｉｎｅｃｏｕｌｄｐｒｏｍｏｔｅｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈｉｍｐｒｏｖｉｎｇｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄｅｎｈａｎｃｉｎｇａｄｈｅｓｉｖｅ     

补肾活血方对激素性股骨头坏死大鼠BMSCs分化影响的研究

目的 探讨补肾活血方含药血清对激素性股骨头坏死大鼠股骨近端骨髓间充质细胞体外分化的影响.方法 建立激素性股骨头坏死大鼠模型后,提取股骨近端骨髓单个核细胞,随机分为4组培养,空白血清对照组(A组)、补肾活血方含药血清低(B组)、中(C组)、高(D组)浓度组,分别加入重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)诱导下的骨髓间充质细胞的培养体系,观察各组的细胞形态学、细胞内ALP含量及TGF-β基因表达.结果 补肾活血方含药血清能增强rhBMP-2的活性,促进股骨近端骨髓体外成骨细胞的分化增殖(P＜0.01),促进分化中的骨髓间充质细胞表达TGF-β1 mRNA(P＜0.01).结论 补肾活血方通过增强rhBMP-2活性及TGF-β1 mRNA的表达在骨坏死的修复中起关键作用.     

异体骨髓基质细胞的免疫性研究

目的研究异体骨髓基质细胞（BMSCs）的免疫原性,同时探讨异体骨髓基质细胞作为组织工程种子细胞的可行性。方法抽取大耳白兔胫骨结节及股骨转子处骨髓,经密度梯度离心,贴壁筛选,获取BMSCs并培养、扩增。24只成年新西兰兔随机分成两组,每组12只,造成双侧12mm桡骨缺损,A组缺损区移植吸附异体BMSCs的明胶海绵,B组缺损区移植吸附自体BMSCs的明胶海绵。分别于术后2、4、8周抽取外周静脉血,样本用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群CD^＋4、CD^＋8的阳性率及CD^＋4／CD^＋8比值;于术后第2、4、8、10周拍摄X线片动态观察新生骨痂生长及骨组织愈合情况,于术后第2、4、8、10周取材进行组织学染色,观察骨缺损修复过程中的组织形态学变化。结果术后第2、4、8周A组、B组外周血T淋巴细胞亚群CD^＋4、CD^＋8的阳性率和CD^＋4／CD^＋8比值三者差异均无显著性（P〉0．05）;组织形态学显示A组无明显淋巴细胞浸润,A组与B组新骨形成方式及骨愈合时间两者无明显差异（P〉0．05）。结论异体骨髓基质细胞移植免疫性低,可作为组织工程理想的种子细胞。     

当归多糖对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞细胞周期及细胞凋亡的影响

目的:探讨当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BMNCs)细胞周期及细胞凋亡的影响,旨在阐明APS防护辐射性造血损伤的分子机制.方法:BALB/c小鼠随机分为3组:正常对照组、生理盐水(NS)组和A...     

Effect of panaxatriol on hematogenesis and granulocyte-macrophage colony stimulating factor in radiation injured mice

OBJECTIVE: To assess the recovery effect of panaxatriol (PT) on myeloid hemopoiesis in radiation injured mice, and analyze the underlying mechanism. METHODS: This study was carried out in the Animal Center of Shandong University, Jinan, China, during March to September 2006. Forty-five inbred albino mice were separated randomly into 3 groups: control group, radiation group, and radiation + PT group (200 mg/kg/d, 3 weeks). Peripheral blood cells were detected by globuli meter, CD34+ cells in bone marrow were detected by flow cytometry, and the protein expression of granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) was detected by immunocytochemistry. RESULTS: The numbers of peripheral blood cells and bone marrow CD34+ cells, and the expression of GM-CSF in the radiation group were lower than in the control group. After treatment with PT, the numbers of peripheral blood cells and CD34+ cells, and the expression of GM-CSF increased significantly. CONCLUSION: Panaxatriol can relieve myelosuppression induced by radiation injury. The abilities of regulating the expression of hemopoietic growth factor GM-CSF and promoting the maturation of bone marrow cells may be responsible for some of these beneficial effects.     

联合应用成骨诱导后骨髓间充质干细胞与PLGA支架材料修复兔桡骨缺损的实验研究

目的研究聚乳酸聚乙醇酸复合物（ Po （ yclactic - co - glycolic acid ）, PLGA ）支架作为组织工程骨支架修复骨缺损的可行性。方法体外培养兔骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells, BMSCs）,在成骨诱导荆地塞米松等的诱导下,向成骨细胞转化,并使之与修饰后PLGA支架复合,植入兔桡骨缺损模型,作为实验组。对照组a为PLGA材料对照,对照组b为空白对照,通过影像学观察骨缺损的修复情况。结果地塞米松等诱导组细胞形态向类成骨细胞转化,碱性磷酸酶表达明显增高,并表达I型胶原。应用多聚赖氨酸修饰的PLGA与成骨诱导的BMSCs复合植入骨缺损后,与对照组相比影像学显示明显促进骨缺损的愈合。结论适当浓度成骨诱导剂可成功的将免骨髓间充质细胞向成骨细胞诱导,诱导后细胞与PLGA支架联合应用可较好修复兔桡骨缺损。     

Study on the effects of Guiqi Oral Liquid in promoting recovery of hematopoiesis in acute irradiation injured mice

Objective: To explore the effects and possible mechanisms of Guiqi Oral Liquid (GQOL) on the recovery of hematopoiesis in acute irradiation injured mice.Methods: The acute irradiation injured mice were randomly divided into 2 groups: the treated group and the control group, and also a normal control group was set up with 6 mice in it receiving no treatment. After the mice in the former two groups were irradiated by 6.0 Gy⁶⁰Coγ-ray, every one of them was given 0. 4 ml GQOL or saline in equal volume through a gastric tube twice a day for 14 days. On the 4th, 8th and 14th day after irradiation, the bone marrow mononuclear cells (BMMNC) and megakaryocytes in bone marrow tissues of the mice were counted, the proportion of hematopoietic tissues (by area) was measured, and the expression of adhesion molecules, CD44 and CD54, in bone marrow were estimated by immunochemistry. The colony forming unit of spleen (CFU-S) in the mice were counted on the 8th day after irradiation.Results: On the 4th, 8th, 14th day after irradiation, the count of BMMNC and megakaryocyte, and the proportion of hematopoietic tissues in the treated group were higher than those in the control group (P<0.01 orP<0.05). CD44 and CD54 expression in the treated group were higher than those in the control group on the 4th and 8th day (P<0.01), but near normal on the 14th day (P<0.01). On the 8th day, CFU-S count in the treated group was higher than that in the control group (P<0.01).Conclusion: GQOL can regulate the expression of adhesion molecules, CD44 and CD54, in the bone marrow of the acute irradiation injured mice, which may be one of the mechanisms of GQOL in accelerating the early phase hematopoiesis recovery of mice. Supported by the National Natural Science Foundation of China (No. 39870926)     

当归补血汤治疗癌性贫血的实验研究

目的：研究不同浓度当归补血汤对荷瘤小鼠补血作用。方法：建立生长良好的H22小鼠的腹水模型,将荷瘤小鼠随机分为2组（模型组、当归补血汤组）,另外再选12只健康小鼠为空白对照组（正常组）。给予正常组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水,当归补血汤组给予当归补血汤灌胃（剂量为12g.kg·d^-1）。分组后连续给药1Od,于末次给药24h眼球采血后处死小鼠收集骨髓。结果：实验数据表明,与正常组相比,模型组红细胞数及血红蛋白含量明显减少,提示可能存在癌性贫血现象。当归补血汤组相比模型组其红细胞数、血红蛋白有所上升,提示当归补血汤可能对抗癌性贫血。将各组骨髓细胞体外培养,当归补血汤组能减缓癌性贫血小鼠骨髓红系祖细胞的凋亡速度。结论：当归补血汤对荷瘤小鼠有一定补血作用。