Caveolin-1抑制血管吻合口狭窄及其对肿瘤坏死因子-α的作用

目的 探讨caveolin-1对兔颈总动脉吻合口狭窄的影响及其与肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的关系.方法 40只新西兰兔,随机分为正常组、手术组、空转染组和转染组,每组10只.行颈总动脉血管端-端吻合,并局部转染caveolin-1质粒(转染组)或空质粒(空转染组).于术后第7天每组随机取5只新西兰兔的颈总动脉标本,用Western blot法检测caveolin-1和TNF-α的表达；其余每组的新西兰兔于术后4周处死取颈总动脉标本用于HE染色,通过Image-Pro Plus 6.0软件测量内膜与中膜面积的比值,观察颈总动脉内膜增殖情况.结果 与正常组比较,手术组内膜明显增殖,内膜/中膜面积比值明显增高(P＜0.05)；与手术组比较,caveolin-1转染组内膜增殖不明显,内膜/中膜面积比值未见明显增高(P＜0.05).Western blot结果显示:转染组caveolin-1的表达明显高于其他组(P＜0.05)；而与正常组比较,手术组TNF-α表达明显升高(t=41.28,P＜0.05),而与手术组比较,转染组TNF-α表达明显下降,差异有统计学意义(t=36.37,P＜0.05).结论 Caveolin-1可抑制血管吻合口狭窄,其作用可能与下调TNF-α表达有关.     

人arresten基因转染对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨体内转染arresten基因对自体移植静脉内膜增生的影响。方法:建立大鼠自体静脉移植模型。血管吻合术前，用脂质体介导重组质粒pSecTag2-AT（Ⅰ组），空载体pSecTag2转染（Ⅱ组）移植血管，等体积脂质体溶液处理移植血管(空白对照组，Ⅲ组）。各组动物均于4周后切取移植血管，RT-PCR检测移植血管中arresten mRNA的表达；常规HE，Verhoeff弹力纤维染色；计算机图象分析检测移植静脉血管内膜及中膜面积、厚度；免疫组化检测移植血管内膜α-SMA及PCNA的表达；Western blot检测TGF-β1蛋白的表达。结果:Ⅰ组转染的移植静脉中有目的基因mRNA的表达, 而Ⅱ、Ⅲ组无Ⅰ组内膜、中膜面积小均于Ⅱ组和Ⅲ组，差异有显著性（P<0.05）。而内膜面积/中膜面积3组间无统计学差异（P>0.05）；Ⅰ组内膜厚度小于Ⅱ组和Ⅲ组，组间比较有统计学差异（P<0.01）；α-SMA染色表明增生内膜中的细胞是血管平滑肌细胞；PCNA阳性细胞数及表达指数Ⅰ组均低于Ⅱ组和Ⅲ组（P<0.05）；Ⅰ组TGF-β1蛋白的表达明显低于Ⅱ组和Ⅲ组。结论:移植血管转染arresten基因，可有效抑制自体移植静脉内膜的增生，在防治血管移植术后再狭窄方面显示出良好的临床应用前景。     

纤维蛋白胶联合转染金属蛋白酶组织抑制剂-1预防自体移植静脉再狭窄

目的 为减少冠状动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄,探讨术中应用纤维蛋白胶联合转染金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)对自体移植静脉再狭窄的影响及其作用机制.方法 将24只新西兰大耳白兔随机分为3组,每组8只,即非支架组(NS组)、纤维蛋白胶外支架组(FS组)、纤维蛋白胶联合转染TIMP-1组(TS/FS组) 建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型.术后28 d取出移植静脉桥,进行组织病理分析移植静脉内膜厚度、中膜厚度及内膜面积、中膜面积,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组移植静脉中TIMP-1基因的表达.结果 术后28d,TS/FS组移植静脉内膜厚度及内膜面积分别为(37.98 ±4.19) μm及(0.557±0.049) mm2,与NS组的( 76.87±4.32) μm、(1.025 ±0.103)mm2及FS组的(50.28 ±4.69) μm、(0.743±0.052) mm2比较,明显减少(P＜0.05);TS/FS组移植静脉中膜厚度及中膜面积分别为(28.45 ±3.01) μm及(0.458 ±0.053) mm2,与NS组的(55.98±4.33) μm、(0.944±0.084) mm2及FS组的(36.46±4.36) μm、(0.643 ±0.056)mm2比较,差异有统计学意义(P＜0.05).与NS组和FS组比较,TS/FS组TIMP-1基因的mRNA和蛋白表达明显增强,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 纤维蛋白胶联合血管外膜TIMP-1转染能够实现移植静脉TIMP-1基因的过表达;纤维蛋白胶外支架联合TIMP-1对移植静脉内膜和中膜增生有协同抑制作用.     

微泡造影剂结合超声介导一氧化氮合成酶基因转染防治移植静脉再狭窄

目的 探讨微泡造影剂及超声辐照介导内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)基因转染防治移植静脉血管桥再狭窄的可行性.方法 重组真核表达载体pcDNA3.1-eNOS经微泡造影剂及超声辐照介导体外转染大鼠颈外静脉,再将静脉段间置植入颈总动脉,建立SD大鼠颈外静脉-颈总动脉移植模型.于术后4周取移植静脉标本分别进行苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学染色及Western blot法分析,观察eNOS基因在静脉桥中的功能表达和静脉桥新生内膜的增生.结果 Western blot法分析表明微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染组的移植血管桥内eNOS表达最明显;增殖细胞核抗原( PCNA)检测阳性率为(21.04±3.51)％,细胞凋亡指数为(12.11±1.23)％,新生内膜厚度(25.0±3.5) μm,内膜/中膜比值为0.43,均明显低于其他组(P＜0.05).结论 微泡造影剂及超声辐照介导eNOS基因转染可以有效抑制移植静脉桥新生内膜的增生.     

可溶性支架转染c-myc反义寡核苷酸预防静脉移植物再狭窄

目的 探讨可溶性支架转染c-myc反义寡核苷酸的可行性及其对静脉桥内膜增生的作用,以利在分子水平对静脉桥再狭窄进行防治.方法 新西兰大耳白兔随机分成5组,每组10只.建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植术模型.合成c-myc寡核苷酸,处理可溶性支架,依组别不同,在静脉移植时管腔内分别置人：（1）空白对照;（2）单纯可溶性支架;（3）反义寡核苷酸可溶性支架;（4）正义寡核苷酸可溶性支架;（5）不匹配寡核苷酸可溶性支架;静脉移植后7、28和90d取出静脉桥.行HE及弹力纤维染色,计算内膜、中膜厚度及内膜/中膜比值;利用免疫组化方法,检测各组静脉移植物内c-myc基因及PCNA的表达;采用原位杂交及激光灰度扫描,检测各组静脉桥中c-myc基因mRNA表达水平.结果 静脉移植后7、28和90d反义寡核苷酸可溶性支架组静脉桥内膜增生程度显著降低;c-myc及PCNA蛋白的表达显著低于同时间点其他各组;c-myc基因mRNA的表达显著低于同时间点其他各组.结论 可溶性支架可实现c-myc基因反义寡核苷酸的转染,可溶性支架转染c-myc基因反义寡核苷酸可显著抑制静脉桥c-myc及PCNA基因的表达,预防静脉桥再狭窄.     

人组织因子途径抑制因子基因转染对移植静脉新生内膜的影响

目的 为减少冠状动脉旁路移植术后移植静脉再狭窄,探讨人组织因子途径抑制因子(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)基因转染对移植静脉内膜增生的影响. 方法 构建真核表达质粒pCMV-(Kozak)TFPI.将48只日本大耳白兔随机分为3组,每组16只,即TFPI转染组、空载体对照组和空白对照组.建立颈总动脉旁路移植模型.吻合前,TFPI转染组移植静脉内采用阳离子脂质体pCMV-(Kozak)TFPI(400μg)和腔内加压灌注法(30 min)转染,空载体对照组以空质粒pCMV(400 μg)代替pCMV-(Kozak)TFPI,空白对照组不予干预.术后3 d,用RT-PCR、Westernblot和免疫组织化学法检测外源基因在移植静脉中的表达.术后30 d,血管多普勒测最移植静脉管腔内径和管壁厚度;组织病理标本测量内膜面积和中膜面积,并计算其比值;透射电镜观察移植静脉新生内膜的细胞构成. 结果 TFPI转染组移植静脉中有人TFPI基因mRNA和蛋白表达,两对照组未见表达.TFPI转染组移植静脉管腔内径为(2.68±0.32)mm,大于空载体对照组(2.41±0.23)mm和空白对照组(2.38±0.21)mm,差异均有统计学意义(P＜0.05).TFPI转染组管壁厚度为(1.09±0.11)mm,小于空载体对照组(1.28±0.16)mm和空白对照组(1.34±0.14)mm,差异均有统计学意义(P＜0.01).TFPI转染组移植静脉内膜面积和内膜、中膜面积比值分别为(0.62±0.05)mm2及0.51±0.08,均小于两对照组的(0.70±0.05)mm2、0.58±0.06及(0.72±0.04)mm2、0.59±0.08(P＜0.05);中膜面积各组差异无统计学意义(P＞0.05).透射电镜观察,TFPI转染组移植静脉内膜未见甲滑肌细胞,两对照组均见甲滑肌细胞. 结论 人TFPI基凶转染减少移植静脉内膜增生.     

手术缝线携载反义基因预防血管吻合口内膜增生的实验研究

目的：探讨预防血管吻合口内膜增生的新方法。了解手术缝线携载反义基因对吻合口内膜增生的影响。方法：用分别浸泡过反义，正义及错配c-myc基因溶液的保护薇乔缝线行兔颈外静脉间置于同侧颈总动脉的血管吻合。实验动物24只随机分为对照组，反义组，正义组和错配组，每组6只，4周后血管造影观察吻合口通畅情况，同时取材制片显微镜下观察其内膜增生情况，计算机图像分析测量其内膜，中膜厚度及两者比值；内膜，中膜面积及两者比值。结果：所有吻合口通畅，未见闭塞，扩张或动脉瘤，反义组的内膜厚度，内膜／中膜厚度比值及内膜面积，内膜／中膜面积比值较其他组均低（P＜0．05），其他3组间比较差异均无显著意义（P＞0．05）；各组间的中膜厚度及中膜面积间差异无显著意义（P＞0．05），结论：用浸泡过反义 c-myc溶液的保护薇乔缝线进行血管吻合，能有效地抑制血管吻合口内膜增生。     

反义单核细胞趋化蛋白-1基因抑制移植静脉内膜增殖的实验研究

目的探讨反义单核细胞超化蛋白-1(MCP-1)转基因表达对移植静脉术后局部血管MCP-1mRNA表达、单核巨噬细胞浸润及与其相关的内膜增生的影响.方法建立14只兔颈外静脉-颈总动脉移植模型,并随机分为基因治疗组、载体对照组和空白对照组.应用阳离子脂质体介导,将反义MCP-1基因通过局部定位转染的方法转染至移植静脉段.RNA斑点杂交,检测反义基因转染、表达情况;病理形态学观察移植血管新生内膜增生以及血管壁中单核巨噬细胞粘附、浸润的情况.结果RNA斑点杂交提示基因治疗组中有反义MCP-1基因表达.移植静脉自身MCP-1mRNA的表达受到明显抑制(降低38%,P＜0.05).相应的单核巨噬细胞在移植静脉中的粘附、浸润明显减少(减少34%,P＜0.05).内膜增生程度显著减轻(减轻49%,P＜0.05).结论反义MCP-1局部移植静脉内转基因表达,可抑制移植静脉自身MCP-1的表达,抑制单核巨噬细胞的浸润,减轻新生内膜的增殖.     

联合转染P21基因和c-Fos反义核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的 探讨联合转染P^21基因和c—Fos反义核酸对自体移植静脉内膜增殖的影响。方法 选择20只新西兰家兔，随机等分为实验组和对照组，均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术，仅实验组移植静脉段行腺病毒介导的P^21基因溶液浸泡、吻合口周围行c—Fos反义核酸凝胶涂布；术后2周取出移植血管，分别行病理学、免疫组织化学检查。结果 实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度、内膜平滑肌细胞数以及增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达细胞数均较对照组明显减少。结论 联合转染P^21基因反义c—Fos核酸可有效地抑制移植静脉内膜的增生，是一种比较有发展前途的防治移植静脉再狭窄的基因疗法。     

筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1表达的小干扰RNA及其毒性检测

目的 筛选有效抑制血管内皮细胞小窝蛋白-1(Caveolin-1)表达的小干扰RNA(small interferenceRNA,siRNA)序列,并检测转染复合物的细胞毒性. 方法 设计合成针对Caveolin-1的siRNA 3条(siRNA422,siRNA548,siRNA710)及1条带绿色荧光标记的通用阴性对照FAM-siRNA.在siRNAFect介导下转染血管内皮细胞.用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定转染后血管内皮细胞中Caveolin-1 mRNA的表达,Western blot方法测定干扰后Caveolin-1蛋白表达,比较抑制率,筛选出有效抑制Caveolin-1表达的siRNA.采用磺基罗丹明B法(sulforhodamineB,SRB)分析转染复合物的细胞毒性. 结果 ①在siRNAFect相同剂量下,siRNA 20、30 nmol/L组或40 nmol/L组转染效率均达到85％以上(P＜0.01);②siRNAFect 1.3μl复合10 nmol/L或20 nmol/L siRNA组细胞存活率均达到80％以上(P＜0.05);③siRNA548对EA.hy926细胞Caveolin-1基因mRNA抑制效果最明显(P＜0.01);④与阴性对照组及siRNA422、siRNA710相比较,siRNA548干扰血管内皮细胞48 h后,Caveolin-1蛋白的表达量最低(P＜0.01). 结论 ①siRNA548对血管内皮细胞Caveolin-1表达的抑制效果最大.②siRNA浓度20 nmol/L复合siRNAFect 1.3μl转染效率高,细胞毒性低,适合转染.     

Tumors with EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 fusions: the current status

EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 are gene fusions of which one or both have now been consistently described in 5 histopathologically and behaviorally diverse neoplasms: angiomatoid fibrous histiocytoma, conventional clear cell sarcoma (of tendons and aponeuroses), clear cell sarcoma-like tumor of the gastrointestinal tract, hyalinizing clear cell carcinoma of the salivary gland, and primary pulmonary myxoid sarcoma. Some of the tumors in this group have been described only recently, and others have been the subject of recent genetic insights contributing to their characterization. These neoplasms are all rare; yet, the increasing frequency with which EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 fusions are being described in separate entities is noteworthy. The additional molecular mechanisms by which tumors with such variable morphologic, immunohistochemical, and clinical phenotypes are generated are yet to be understood. We review the clinicopathologic and molecular features of this group of neoplasms unified by the presence of EWSR1-CREB1 and EWSR1-ATF1 genetic fusions.     

重症急性胰腺炎治疗的发展

重症急性胰腺炎治疗的发展大体可以分为三个阶段。１　重症急性胰腺炎主治科别的讨论第一个阶段为重症急性胰腺炎的主治科别的讨论,即以内科治疗为好,还是以外科医治为好。这个阶段起始于１８８９年,Ｆｉｔｚ首先系统地描写了重症急性胰腺炎,在这阶段,出现两次反复,主治科由外科到内科,然后又由内科到外科,直到１９３８年,Ｎｏｒｄｍａｎｎ在德国外科大会上对重症急性胰腺炎作了总结报告,认为外科手术对重症急性胰腺炎有害无益。这样,重症急性胰腺炎进入了全面的内科保守治疗的时代,一直延续了３０年。到６０年代后期,由于Ｗａ…     

Plasma glutathione S-transferase pi 1-1 AND alpha 1-1 levels in patients with bladder cancer

PURPOSE: Transitional cell carcinomas of the human bladder and many gastrointestinal tumors often contain high amounts of the detoxification enzyme glutathione S-transferase pi (GSTP1-1). Elevated levels of GSTP1-1 have been found in serum and plasma from patients with gastrointestinal, lung or head and neck cancer. GSTP1-1 and glutathione S-transferase alpha (GSTA1-1) have been reported to be increased in 10 of 15 patients (67%) with bladder cancer. We evaluate the role of GSTP1-1 and GSTA1-1 as plasma tumor markers in 50 patients with bladder cancer before and after treatment. MATERIALS AND METHODS: Blood from patients with bladder cancer was sampled in ethylenediaminetetraacetic acid tubes. Plasma GSTA1-1 and GSTP1-1 were measured using the sensitive and specific sandwich enzyme-linked immunosorbent assay. RESULTS: Respective plasma GSTA1-1 and GSTP1-1 levels were above the upper normal reference limit in 2 (4%) and 14 (28%) of the 50 patients with bladder cancer. No significant decrease in plasma GSTA1-1 or GSTP1-1 was noted in matched pairs of plasma samples collected before and after treatment. CONCLUSIONS: In contrast to earlier reports, only a limited number of patients with bladder cancer had increased plasma GSTA1-1 or GSTP1-1, which did not decrease after tumor resection. These findings argue against the use of GSTP1-1 or GSTA1-1 as plasma markers for bladder cancer.     

Alpha1-antitrypsin deficiency. 1: epidemiology of alpha1-antitrypsin deficiency

The protein and molecular characteristics of variants of the alpha1-antitrypsin (AAT) gene are described, and available data on the genetic epidemiology of AAT deficiency are presented.     

手术创伤中腹膜组织Sp1、COL1A1和TIMP-1的表达

目的　探讨人手术创伤腹膜组织中核转录因子Sp1激活 ,COL1A1和TIMP 1表达变化与腹膜纤维化之间的关系。方法　采用凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)检测手术创伤后不同时间的腹膜组织核转录因子Sp1的表达水平 ,WesternBlot检测COL1A1和TIMP 1蛋白表达 ,Masson染色观察腹膜组织中胶原纤维的变化。结果　Sp1在手术创伤后 0 .5h被活化 ,随着手术时间延长Sp1活性逐渐增强 ,至创伤后 4h时达高峰 ,同时创伤腹膜组织中的COL1A1和TIMP 1蛋白表达水平逐渐升高 ,存在差异显著性 (P <0 .0 1)。在手术创伤期内随手术时间的延长腹膜组织中胶原纤维增加。结论　核转录因子Sp1活化导致Ⅰ型胶原合成增加 ,细胞外基质降解减少 ,从而启动腹膜纤维化进程。     

Genetic polymorphisms of CYP1A1, CYP2E1, GSTM1, and GSTT1 associated with head and neck cancer

BACKGROUND: Alcohol intake and tobacco smoke, in addition to other environmental and genetic factors, have been associated with head and neck cancer. We evaluated the role of metabolic enzyme polymorphisms on the risk of head and neck cancer in a hospital-based case-control study. METHODS: CYP1A1MspI, CYP2E1PstI, GSTM1, and GSTT1polymorphisms were evaluated in 103 histologically confirmed head and neck cancer cases and 102 controls by means of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism methods. RESULTS: GSTM1null increased the risk of head and neck cancer (odds ratio [OR], 2.2; 95% confidence interval [95% CI], 1.24-3.79), oral cancer (OR, 2.8; 95% CI, 1.28-5.98), and pharyngeal cancer (OR, 2.2; 95% CI, 1.08-4.63). CYP2E1PstI polymorphism indicated a risk for oral cancer (OR, 3.6; 95% CI, 1.29-11.56). The joint effect of GSTM1 null and CYP1A1 polymorphism increased the risk of head and neck cancer (OR, 2.4; 95% CI, 1.13-5.10). CONCLUSIONS: GSTM1 null alone or associated with CYP1A1 increased the risk of head and neck cancer; the CYP2E1PstI mutated allele increased the risk for only oral cancer.