甘木通总黄酮保护H_2O_2诱导的PC12细胞损伤

目的探讨甘木通(Clematis filamentosa)总黄酮(TFC)对H_2O_2引起的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用。方法用H_2O_2损伤PC12细胞建立神经元氧化应激损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,观察甘木通总黄酮对神经元损伤的作用;形态学以及Hoechst 33258染色观察TFC对细胞形态的影响;生化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)的量。结果与200μmol/L H_2O_2诱导的模型组对比,中(10μg/m L)、高(100μg/m L)剂量甘木通总黄酮预处理细胞形态好于模型组,细胞活性明显增强(P0.05),细胞内的SOD活性增强(P0.05),MDA水平减低(P0.05)。结论甘木通总黄酮对H_2O_2引起的神经损伤有保护作用。     

银杏内酯B对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的观察银杏内酯B(GB)对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法将对数生长期的H9C2心肌细胞随机分为5组:对照组、H_2O_2(200μmol/L)干预组、GB(50、100和200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组,每组设10个复孔。经药物干预16 h后,采用MTT法检测细胞存活率;测定培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性;检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用RT-PCR法检测细胞中AKT mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达,计算Bcl-2/Bax表达比值,Western blot法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达并进行半定量分析,比色法检测细胞中Caspase-3、Caspase-9活性。结果与H_2O_2干预组比较,GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞存活率显著升高(P0.01),培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低(P0.05或P0.01),细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低(P0.05或P0.01);GB干预组细胞凋亡状况明显好转,其中GB(100、200μmol/L)+H_2O_2(200μmol/L)干预组细胞凋亡率显著降低(P0.01),AKT mRNA和bcl-2 mRNA表达显著上调(P0.05或P0.01),Bax mRNA表达显著下调(P0.01),Bcl-2/Bax表达比值显著升高(P0.01),细胞中NF-k B蛋白表达量和Caspase-3、Caspase-9活性显著降低(P0.05或P0.01)。结论 GB对H_2O_2诱导损伤H9C2心肌细胞凋亡具有抑制作用;其作用机制可能与GB能够有效改善抗氧化酶活性、降低氧化应激损伤,下调NF-κB蛋白表达,上调抗凋亡基因AKT和bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达比值,降低Caspase-3、Caspase-9活性有关。     

萝卜硫素通过Nrf2/ARE通路对人结肠上皮细胞氧化应激损伤的调控作用

目的:探讨萝卜硫素对H_2O_2诱导的氧化应激损伤人结肠上皮细胞的保护作用。方法:体外原代培养人结肠上皮细胞,并将细胞分为空白对照组、H_2O_2诱导组、H_2O_2+低剂量萝卜硫素组、H_2O_2+中剂量萝卜硫素组及H_2O_2+高剂量萝卜硫素组,用H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,CCK8法检测萝卜硫素对细胞存活率的影响,同时检测细胞匀浆中的氧化应激产物,免疫印迹法检测核转录因子(Nrf2)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、醌氧化还原酶1(NQO1)及血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果:H_2O_2能诱导人结肠上皮细胞氧化应激损伤;与H_2O_2诱导组相比,不同剂量萝卜硫素可增加细胞存活率、降低氧化应激产物丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的释放并增强超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,差异均有统计学意义(P0.05);萝卜硫素可增强Nrf2转位,诱导GCLC、NQO1及HO-1蛋白的表达,与H_2O_2诱导组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:萝卜硫素可降低人结肠上皮细胞的氧化应激损伤,其作用机制可能与活化Nrf2/ARE信号通路有关。     

橄榄苦苷对H_2O_2诱导的PC12氧化应激损伤的保护作用

目的:观察橄榄苦苷(Oleuropein)对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用,并探讨其分子机制。方法:实验分为空白对照组、模型组和实验组。利用H_2O_2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,实验组给予50、100、200、400μmol/L的橄榄苦苷分别作用24、48、72 h,采用MTT法检测PC12细胞的活力,TUNEL法检测细胞凋亡率,ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)活性,免疫印迹法(western blot)检测胞浆细胞色素c(Cytochrome c,Cyt-c)、Caspase-3蛋白的表达。结果:橄榄苦苷能够抑制H_2O_2诱导的PC12细胞的活力下降(P0.01),降低H_2O_2诱导的PC12细胞的凋亡率(P0.05,P0.01),抑制H_2O_2诱导的PC12细胞内SOD及GSH-PX活力的降低(P0.01,P0.05),橄榄苦苷抑制H_2O_2诱导的细胞凋亡蛋白Cyt-c、Caspase-3表达的上调(P0.01,P0.05)。结论:橄榄苦苷对H_2O_2诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制细胞凋亡有关。     

黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞损伤保护作用的研究

目的观察黄芪多糖(APS)对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用机制。方法无菌条件下分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后分为空白对照组、H_2O_2组、APS(20、40和80μmol/L)+H_2O_2组,每组设10个复孔。给药干预24 h后,观察比较各组细胞形态、细胞存活率、细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性、细胞凋亡状况及细胞凋亡率情况。结果倒置光学显微镜下,空白对照组呈单层簇状生长,且伪足多而饱满,搏动明显,节律一致;H_2O_2组细胞胞浆空泡、伪足少,细胞脱落、悬浮、溶解坏死,搏动弱且频率低、节律不齐等;APS各治疗组与H_2O_2组比较,心肌细胞形态不同程度好转,且以APS(80μmol/L)+H_2O_2组改善效果最明显。H_2O_2组心肌细胞存活率与空白对照组比较降低(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组细胞存活率与H_2O_2组比较升高(P0.01)。H_2O_2组乳鼠心肌细胞SOD、GSH-Px、CAT活性与空白对照组比较降低,MDA含量则升高(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组SOD、GSH-Px、CAT活性与H_2O_2组比较均升高(P0.05或P0.01),MDA含量则降低(P0.01)。H_2O_2组乳鼠心肌细胞培养液中AST、CPK、LDH活性与空白对照组比较均升高(均P0.01)。APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组AST、CPK、LDH活性与H_2O_2组比较均降低(均P0.05或P0.01)。Flow Cytometry检测空白对照组仅存在少量凋亡细胞,H_2O_2组凋亡细胞数量较空白对照组增多;与H_2O_2干预组比较,APS干预24 h可明显改善H_2O_2诱导损伤乳鼠心肌细胞凋亡状况,其以APS(80μmol/L)+H_2O_2组效果最明显。H_2O_2组乳鼠心肌细胞凋亡率与空白对照组比较升高(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组细胞凋亡率与H_2O_2组比较则降低(P0.01)。结论APS可通过有效改善细胞生存状态、提高细胞存活率、降低氧化应激损伤、抑制细胞凋亡而发挥对H_2O_2乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。     

黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的影响,并探讨其可能作用机制。方法分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后分为空白对照组、H_2O_2组、黄芪多糖20μmol/L+H_2O_2组、黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组、黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组,每组设10个复孔。每组给予相应干预24 h后,采用MTT法检测细胞存活率,采用紫外-可见分光光度计检测细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)]活性,采用氧敏感荧光探针DCFH-DA检测氧自由基(ROS)含量,采用全自动生化分析仪检测培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]和丙二醛(MDA)含量,通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用免疫印迹法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况并进行半定量分析。结果与H_2O_2组比较,黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组和黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组细胞存活率及细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高(P均0.05),ROS含量显著降低(P0.05),培养液中AST、CPK、LDH和MDA含量及细胞凋亡率、NF-k B蛋白表达量均显著降低(P均0.05);黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组细胞存活率及细胞中SOD、GSH-Px活性均显著高于黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组(P均0.05),CPK、MDA含量及细胞凋亡率、细胞中NF-κB蛋白表达量均显著低于黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组(P均0.05)。结论黄芪多糖可能通过提高心肌细胞存活率、改善抗氧化酶活性、提高ROS清除能力、降低心肌酶含量、抑制细胞凋亡、下调NF-k B蛋白表达而对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤起保护作用,且高剂量效果更好。     

松花粉对H2O2诱导HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨松花粉对过氧化氢(H_2O_2)诱导人肝癌HepG2细胞应激性氧化损伤的保护作用。方法:将HepG2细胞分为正常组,H_2O_2模型组和样品干预组。样品干预组用不同浓度的松花粉预处理HepG2细胞12 h,H_2O_2模型组和样品干预组用400μmol·L~(-1)过氧化氢氧化损伤细胞2 h,产生氧化应激损伤。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测HepG2细胞活力;微板法检测细胞内活性氧(ROS),超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测抗氧化通路中关键基因核因子E2相关因子2(Nrf2),Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达水平,以评价松花粉对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。结果:MTT结果显示,与正常组比较,松花粉(80,40,20,10,5 mg·L~(-1))对HepG2细胞没有毒性;H_2O_2模型组中ROS,LDH及MDA的水平显著升高(P0.01),SOD和GSH-Px的活性显著降低(P0.01)。与H_2O_2模型组比较,松花粉干预组中ROS,LDH及MDA的水平显著降低(P0.05,P0.01),SOD和GSH-Px的活性显著升高(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,松花粉显著上调Nrf2,HO-1和GCL的蛋白表达,并下调Keap1的蛋白表达。结论:质量浓度5~20 mg·L~(-1)松花粉可有效保护400μmol·L~(-1)H_2O_2对HepG2细胞应激性氧化损伤。其机制可能与调节SOD,GSH-Px活性,ROS,LDH,MDA水平有关,同时与调控抗氧化通路中关键基因Nrf2,Keap 1,HO-1,GCL蛋白的表达水平有关。     

五味子乙素通过上调miR-374a改善过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞损伤

目的研究五味子乙素(SchB)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)氧化损伤的保护效应及其作用机制。方法 H_2O_2诱导ARPE-19细胞氧化损伤模型,分别采用CCK8实验、流式细胞术、DCFH-DA染色和RT-qPCR技术检测细胞活力、凋亡、ROS含量及miR-374a表达水平;Western blot方法检测、氧化应激相关蛋白表达水平,PI3K/AKT和MEK/ERK信号通路相关蛋白表达情况。结果 H_2O_2刺激明显降低了ARPE-19细胞活力,诱导其凋亡及氧化应激损伤;SchB改善H_2O_2诱导的ARPE-19细胞损伤;SchB上调H_2O_2诱导的ARPE-19细胞中miR-374a表达,并且miR-374a沉默部分逆转了SchB对H_2O_2诱导的ARPE-19细胞损伤的保护效应;SchB还可通过上调miR-374a表达降低PI3K/AKT和MEK/ERK信号通路活化。结论 SchB通过上调miR-374a表达,抑制PI3K/AKT和MEK/ERK信号传导,改善H_2O_2诱导的ARPE-19细胞氧化损伤;SchB可能成为治疗视网膜氧化损伤的药物。     

氧化应激条件下克癃胶囊对PC-3细胞内GSH、ROS水平的影响

目的:研究克癃胶囊对双氧水诱导的PC-3细胞氧化应激反应的保护作用。方法:体外培养PC-3细胞,建立双氧水诱导PC-3细胞氧化应激的模型,给予克癃胶囊进行干预。分为4组:正常组、模型组(H_2O_2 100μmol/L)、阴性对照组(tBHQ50μmol/L+H_2O_2100μmol/L)、克癃胶囊组(克癃方100μg/m L+H_2O_2 100μmol/L)以DCFH-DA为荧光探针,利用流式细胞仪检测细胞内活性氧自由基(ROS)含量,利用化学显色法测定PC-3细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,评价细胞氧化应激水平。结果:ROS、GSH水平模型组与正常组比较,阳性对照组、克癃胶囊组与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.01);ROS水平阳性对照组与克癃胶囊组比较,差异有统计学意义(P0.01),但两组GSH水平比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:克癃胶囊对双氧水诱导的PC-3细胞氧化应激具有保护作用。     

甘草苷对H_2O_2所致SH-EP1细胞株氧化应激损伤中细胞活力值及细胞中线粒体凋亡分子、抗氧化分子含量的影响

目的:探究甘草苷对过氧化氢所致SH-EP1细胞株氧化应激损伤中细胞活力值以及细胞中线粒体凋亡分子、抗氧化分子含量的影响。方法:选择SH-EP1细胞株,将接种细胞板后的细胞分为3组,即对照组、甘草苷组及H_2O_2组。对照组不给予血清处理,甘草苷组采用100、200、400μmol/L浓度的甘草苷与200μmol/L的H_2O_2联合处理,H_2O_2组采用200μmol/L浓度的H_2O_2处理。对比各组间1 d,2 d,3 d,4 d细胞活力值、线粒体凋亡分子Bax、XIAP、Bcl-2、Caspase-3含量及抗氧化分子Nrf2、ARE、SOD、GHS-Px、HO-1的含量。结果:经过4天处理后,相同时间点内H_2O_2组细胞活力值与对照组比较相对较低,甘草苷1、2、3组细胞活力值均高于过氧化氢组,且甘草苷2、3组细胞活力值高于1组,说明甘草苷浓度越高,细胞活力值越大,以上结果差异均有统计学意义(P0.05)。不同期间内,差异有统计学意义(P0.05);线粒体凋亡分子中,H_2O_2组Bax、Caspase-3含量与对照组相比较高,XIAP、Bcl-2含量低于对照组,甘草苷1、2、3组Bax、Caspase-3含量H_2O_2组相比较低,XIAP、Bcl-2含量较高,且甘草苷组在浓度逐渐增加的情况下,Bax、Caspase-3含量逐渐减少,XIAP、Bcl-2含量逐渐增加,以上结果差异均有统计学意义(P0.05)。各组抗氧化分子,H_2O_2组Nrf2、ARE含量高于对照组,GHS-Px、SOD、HO-1含量较低,甘草苷1、2、3组SOD、Nrf2、ARE、GHS-Px、HO-1含量均高于H_2O_2组,且甘草苷组随着浓度增加,抗氧化分子含量逐渐增加,以上结果差异均有统计学意义(P0.05)。结论:甘草苷可以在一定程度上抑制细胞凋亡,对细胞具有保护作用。     

石斛合剂减轻H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激的研究

目的:观察石斛合剂含药血清对H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激的影响及可能的机制。方法:体外培养的SH-SY5Y细胞预先予以石斛合剂含药血清(10%)孵育24 h,加入终浓度为400μmol·L-1的H_2O_2培养1 h,采用MTT法测细胞存活率、酶法测细胞内SOD活力、MDA和GSH含量、流式细胞术测细胞凋亡情况等,以观察石斛合剂含药血清对H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞氧化应激损伤的影响。结果:与模型组比较,石斛合剂含药血清能明显提高受H_2O_2刺激的SH-SY5Y细胞的存活率(P0.05),降低MDA水平和提高SOD和GSH活力(P0.01),并减少因H_2O_2引起的神经细胞凋亡。结论:石斛合剂可保护H_2O_2引起的SH-SY5Y细胞氧化应激损伤并抑制其凋亡。     

五味子乙素调控Jak2/Stat3信号通路抑制心肌细胞氧化应激损伤

目的:研究五味子乙素(schisandrin B)对过氧化氢(H_2O_2)诱导心肌H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用,并对其作用机制进行初步探讨。方法:体外培养H9c2细胞并构建氧化应激损伤模型,将细胞分为正常对照组、H_2O_2诱导组、H_2O_2+低剂量(10μg/mL)五味子乙素组、H_2O_2+中剂量(50μg/mL)五味子乙素组、H_2O_2+高剂量(150μg/mL)五味子乙素组,CCK-8试剂检测H9c2细胞增殖情况,相关试剂盒检测丙二醛(malonaldehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)含量及超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,Western Blot检测细胞中Jak2、p-Jak2、Stat3、p-Stat3(Tyr705、Ser727)、血红素氧合酶1(oxygenase-1,HO-1)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase-1,SOD-1)蛋白表达水平。结果:与H_2O_2诱导组相比,低、中、高剂量五味子乙素组细胞相对存活率显著升高,细胞匀浆氧化应激产物MDA、NO水平显著降低、SOD-1酶活性显著升高,HO-1、SOD-1、p-Jak2及p-Stat3蛋白表达水平显著升高,差异比较均有统计学意义(P0.05),并且均表现出剂量依赖性。结论:五味子乙素对H9c2细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制主要通过激活Jak2/Stat3信号通路来实现。     

蒙药尖叶假龙胆中雏菊叶龙胆酮对H_2O_2诱导H9c2细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究蒙药尖叶假龙胆中雏菊叶龙胆酮对H_2O_2诱导的H9c2细胞损伤的保护作用机制。方法:首先从尖叶假龙胆中提取雏菊叶龙胆酮单体化合物,然后建立H9c2细胞模型,将H9c2细胞分成五组:对照组,模型组,低、中、高剂量雏菊叶龙胆酮给药组(3.125、12.5、50μmol/L)。利用Real-time Cell Analysis(RTCA)多功能实时细胞功能分析仪建立最适过氧化氢损伤模型并检测活性。采用生化法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)的活性,Western blot技术检测抑制剂作用前后血红素氧合酶-1(HO-1)、谷氨酰半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)蛋白表达情况。结果:雏菊叶龙胆酮对H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化损伤有一定的治疗作用。它能够减轻或抵消H_2O_2诱导的细胞损伤和LDH的释放,并增强SOD活力;HO-1、GCLC蛋白的表达与模型组相比有明显的升高(P0.05),BOS (GCLC抑制剂)和ZnPP (HO-1抑制剂)预处理显著降低雏菊叶龙胆酮的保护作用。结论:蒙药尖叶假龙胆中雏菊叶龙胆酮对H_2O_2诱导H9c2细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过激活Nrf2/ARE信号通路下游的抗氧化蛋白酶HO-1、GCLC表达来达到抗氧化保护作用。     

盐酸小檗碱对 H2O2 诱导的 H9C2 心肌细胞损伤的保护机制研究

目的:探讨盐酸小檗碱对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用和机制。方法:将H9C2心肌细胞随机分成对照组、模型组(200μmol/L H_2O_2处理)、盐酸小檗碱+H_2O_2组(10μmol/L盐酸小檗碱预处理+200μmol/L H2O)2和盐酸小檗碱+Tatbeclin1+H_2O_2组(10μmol/L盐酸小檗碱预处理+1μmol/L Tat-beclin1和200μmol/L H2O)2。采用MTT法测定细胞活力、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法测定细胞损伤、免疫荧光实验分析细胞自噬情况、Western Blot检测细胞beclin1表达。结果:与对照组比较,模型组H9C2细胞存活率显著降低、LDH释放显著增加、LC3绿色荧光增多、beclin1蛋白表达显著增加(P 0.05);与模型组比较,盐酸小檗碱+H_2O_2组H9C2细胞存活率提高,LDH释放减少、LC3绿色荧光减少、beclin1蛋白表达降低(P 0.05);与盐酸小檗碱+H_2O_2组比较,盐酸小檗碱+Tat-beclin1+H_2O_2组H9C2细胞存活率降低、LDH释放增加、LC3绿色荧光增多(P 0.05)。结论:盐酸小檗碱能有效减轻H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤和细胞自噬,其机制可能与抑制beclin1表达有关,为临床上应用盐酸小檗碱防治心肌细胞损伤提供实验基础和理论依据。     

葛根素通过Nrf2/ARE通路调控小神经胶质BV-2细胞的氧化应激损伤

[目的]研究葛根素对双氧水(H2O2)诱导小神经胶质BV-2细胞氧化应激损伤的保护作用,探讨其可能的作用机制。[方法]体外常规培养BV-2细胞,用H2O2诱导细胞氧化应激损伤模型,并同时将细胞分为正常对照组、H2O2诱导模型组、H2O2+5μmol/L葛根素组、H2O2+10μmol/L葛根素组及H2O2+20μmol/L葛根素组,CCK8试剂盒检测葛根素对细胞存活率的影响,相关试剂盒检测细胞匀浆中的氧化应激产物,免疫印迹方法检测核转录因子(Nrf2)、GCLC、NQO1及HO-1蛋白表达水平。[结果] H2O2能诱导BV-2细胞氧化应激损伤;与H2O2诱导组相比,不同剂量的葛根素可明显增加细胞的存活率、降低氧化应激产物丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的释放及增强超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,差异均有统计学意义(P0.05);免疫印迹结果显示葛根素可明显增强Nrf2的转位,并诱导GCLC、NQO1及HO-1蛋白的表达,与H2O2诱导组相比差异有统计学意义(P0.05)。[结论]葛根素可明显降低BV-2细胞的氧化应激损伤,其作用机制可能与活化Nrf2/ARE信号通路的有关。     

绞股蓝黄酮对过氧化氢损伤A549细胞的作用

该文主要研究绞股蓝黄酮对H_2O_2氧化损伤的人肺腺癌A549细胞的修复作用并探讨其可能的作用机制。分别使用浓度为200~700μmol·L~(-1)的H_2O_2诱导A549细胞不同时间,从而建立氧化损伤模型,再用50 mg·L~(-1)绞股蓝黄酮保护10 h。利用MTT法检测6个绞股蓝黄酮化合物对H_2O_2损伤A549细胞活力修复的影响;DCFH-DA荧光探针检测细胞中ROS的含量;分别采用TBA法、NBT法和TNB法检测细胞内MDA,SOD和GSH的含量,Western blot法检测细胞内Nrf2,NOQ1,HO-1蛋白的表达。结果表明,500μmol·L~(-1)H_2O_2作用10 h,细胞存活率降低至60.4%,在50 mg·L~(-1)芦丁(1),4'-O-甲基-山柰酚-3-O-芸香糖(2),异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖(5),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖(6)作用10 h后,细胞存活率显著提高。与正常组比较,H_2O_2损伤使SOD,GSH含量以及HO-1蛋白表达量降低,使ROS,MDA含量增加,引起细胞氧化损伤。与模型组比较,绞股蓝黄酮组可降低细胞内ROS,MDA的含量,提高SOD,GSH的含量,激活Nrf2,NOQ1,HO-1蛋白的表达,从而改善H_2O_2诱导的A549细胞氧化应激损伤。     

D159687减轻神经元氧化应激损伤的作用机制研究

目的研究D159687对过氧化氢(H_2O_2)所致的小鼠海马神经元HT22细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法实验分为正常对照组、模型组、D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组。将HT22细胞株接种于96孔板,对照组采用10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养,其他组加入不同浓度的D159687进行干预培养,后经H_2O_2损伤。CCK-8法测定各组细胞存活率,Western blot法检测Caspase-3和NADPH氧化酶亚基gp91phox、p47phox表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡情况,并测定各组细活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果模型组细胞存活率、SOD活性均显著低于正常对照组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著高于正常对照组(P均0.05);D159687 0.5μmol/L组、D159687 1μmol/L组、D159687 2μmol/L组、D159687 4μmol/L组细胞存活率、SOD活性显著高于模型组(P均0.05),ROS表达水平、MDA含量及Caspase-3、p47phox、gp91phox蛋白表达水平均显著低于模型组(P均0.05)。结论在0.5～4μmol/L浓度范围内,D159687浓度依赖性地拮抗H_2O_2所致HT22细胞损伤,同时抑制HT22细胞凋亡,这种作用可能与其抑制NADPH氧化酶关键亚基gp91phox和p47phox蛋白表达有关。     

异甘草素通过调节VEGFA/NF-κB通路抑制高糖诱导的ARPE-19细胞增殖、迁移

目的探讨异甘草素通过调节VEGFA/NF-κB通路抑制高糖诱导的ARPE-19细胞增殖、迁移。方法异甘草素(30、60、120μmol/L)处理ARPE-19细胞24 h后,加入25 mmol/L葡萄糖24 h;将si-con、si-VEGFA质粒转染至ARPE-19细胞,加入25 mmol/L葡萄糖24 h;异甘草素(60μmol/L)处理ARPE-19细胞24 h后,将pcDNA-con、pcDNA-VEGFA质粒转染,加入25 mmol/L葡萄糖24 h。MTT检测细胞存活率;Western blot检测基MMP2、MMP9、VEGFA、CyclinD1、p-p65、p-IκBα蛋白表达;Transwell实验检测细胞迁移;PT-PCR检测VEGFA mRNA表达。结果高糖诱导的人视网膜上皮细胞ARPE-19存活率升高,MMP2、MMP9蛋白表达升高,细胞迁移数量升高,VEGFA蛋白和mRNA表达升高(P0.05)。异甘草素处理后高糖诱导的ARPE-19细胞中细胞存活率降低,MMP2、MMP9蛋白表达降低,细胞迁移数量降低,VEGFA蛋白和mRNA表达降低(P0.05);低表达VEGFA使高糖诱导的ARPE-19细胞中CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达降低,细胞存活率降低,细胞迁移数量降低(P0.05)。异甘草素处理后高糖诱导的ARPE-19细胞中p-p65、p-IκBα表达降低(P0.05);过表达VEGFA逆转了异甘草素对高糖诱导的p-p65、p-IκBα表达的抑制作用。结论异甘草素可抑制高糖诱导的ARPE-19细胞增殖和迁移,其机制可能与VEGFA有关。     

特女贞苷对血管内皮细胞氧化损伤的作用研究

目的研究特女贞苷对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)中p66Shc及凋亡相关蛋白表达水平的作用。方法采用H_2O_2诱导EA.hy926形成氧化应激损伤的血管内皮细胞模型,随机分为空白组、模型组(H_2O_2)、特女贞苷组(H_2O_2+5、50、500μmol/L特女贞苷)、阴性对照组(H_2O_2+5、50、500μmol/L DMSO)、抗坏血酸组(H_2O_2+5、50、500μmol/L抗坏血酸)。检测各组细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、β-gal活性;采用Western blot法测定p66Shc、caspase-3活体剪切体、Bax、Bcl-2蛋白含量;实时荧光定量PCR(qPCR)法检测p66mRNA含量。结果与空白组比较,模型组及阴性对照组SOD活性、Bcl-2表达量及Bcl-2/Bax比值下降,MDA含量、β-gal活性、p66Shc蛋白水平及mRNA含量、capase-3活性剪切体和Bax表达水平升高(均P0.05)。与模型组比较,特女贞苷组及抗坏血酸组SOD升高,MDA含量(除特女贞苷组浓度500μmol/L外)和β-gal活性降低(P0.01),抑制p66Shc表达及mRNA水平(P0.01);特女贞苷组Bax和capase-3活性剪切体(除浓度500μmol/L外)表达水平降低,Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值升高(均P0.01)。与同浓度的抗坏血酸组比较,特女贞苷组对Bax、Bcl-2蛋白水平、Bcl-2/Bax比率、p66mRNA的调节作用较明显(P0.05)。结论特女贞苷可能通过抑制p66Shc削弱血管内皮细胞的氧化损伤及降低凋亡相关蛋白的表达。     

金丝桃苷对过氧化氢诱导的A549细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究金丝桃苷对过氧化氢(H_2O_2)诱导的A549细胞氧化损伤的保护作用,并探讨其相关的作用机制。方法:体外培养A549细胞,采用H_2O_2(400μmol·L~(-1))作用24 h,建立A549细胞氧化损伤模型,分为空白组,模型组(400μmol·L~(-1)H_2O_2),阳性药(100μmol·L~(-1)N-乙酰半胱氨酸)组和不同浓度金丝桃苷(1,10,100μmol·L~(-1))组。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,通过酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测活性氧(ROS),丙二醛(MDA)含量,乳酸脱氢酶(LDH),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。通过罗丹明123染色法检测细胞线粒体膜电位改变。采用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测沉默信息调节因子3(Sirt3),异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)和锰超氧化物岐化酶(Mn SOD)蛋白表达。结果:与模型组比较,金丝桃苷显著提高细胞存活率(P0.01),降低LDH的外漏,ROS和MDA含量(P0.05,P0.01),明显增加CAT,SOD,GSH-Px活性(P0.05,P0.01)。金丝桃苷能够显著提高线粒体膜电位,上调Sirt3,IDH2和Mn SOD蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:金丝桃苷能够保护H_2O_2诱导的A549细胞氧化损伤,其作用可能与提高清除ROS能力,调控Sirt3线粒体途径相关。