斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原血清学特性

采用高浓度尿素并以简化方法,从斯氏狸殖吸虫成虫水溶性抗原(PsAWA)制备后的离心沉渣中,已分离、提取出尿素溶解性抗原(PsAWU),效果较满意。本工作用ELISA和对流免疫电泳对PsAWU与PsAWA血清学特性进行了比较分析。 敏感性 用ELISA(间接法)以两种抗原不同浓度(80～0.312 μg/ml)检测阳     

斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原的分离提取

采用8mol/L尿素并以简化的方法,从斯氏狸殖吸虫成虫水溶性抗原(PsAWA)制备后的离心沉渣中,进一步分离提取出尿素溶解性抗原(PsAWU)。210mg虫体干粉,收获PsAWA 50.18mg,PsAWU 63.19mg,使抗原制备总收获量增加1.26倍。ELISA初步鉴定表明:PsAWU具有比PsAWA更高的血清学活性,4℃保存一定时期其活性变化亦与之相似。     

人精子膜抗原的提取及分析

目的:用两种酶裂解法提取精子膜抗原并对其进行蛋白浓度测定和成分分析。方法:分别用尿素裂解液和表面活性剂Triton X-100﹑脱氧胆酸钠(DOC)的TDOC裂解液裂解液提取精子膜抗原,借助BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度,并通过SDS-PAGE法比较分析蛋白成分。结果:两种方法提取的精子膜抗原经SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色后均有条带显示,TDOC裂解液提取的样本中显示仅有一条蛋白带,分子质量集中在100ku左右,尿素裂解液提取的样本中有多条蛋白条带,分子质量集中在130～35ku。结论:尿素裂解液提取法提取精子膜抗原的效果优于TDOC裂解液提取法,为抗精子相关抗体的研究提供了条件。     

单克隆抗体IA2结合胰岛细胞膜155kD和160kD抗原蛋白的纯化

免疫吸附实验表明87％1型糖尿病人血清自身抗体能替代单克隆抗体IA2与大鼠胰岛β-肿瘤细胞结合^[1]，并且单抗1A2能与人胰岛及大鼠胰腺提取物中的抗原结合。由于抗原含量很低，用亲和沉析、免疫沉淀、HPLC的方法均未得到可检测量的抗原蛋白。我们尝试用凝胶洗脱的办法得到了足够的大鼠胰腺提取物抗原蛋白。银染及Western Blot显示为155kD和160kD两条带。用胰蛋白酶部分消化后N末端氨基酸序列分析得到了12个氨基酸，初步认为该抗原不同于谷氨酸脱羧酶(GAD)、酪氨酸磷酸酶(IA2)等已发现的抗原。本实验为该抗原蛋白的分子克隆及1型糖尿病发病机制的研究打下了基础。     

单克隆抗体IA2结合胰岛细胞膜155kD和160kD抗原蛋白的纯化

免疫吸附实验表明87％ 1型糖尿病人血清自身抗体能替代单克隆抗体IA2与大鼠胰岛β-肿瘤细胞结合,并且单抗1A2能与人胰岛及大鼠胰腺提取物中的抗原结合。由于抗原含量很低,用亲和沉析、免疫沉淀、HPLC的方法均未得到可检测量的抗原蛋白。我们尝试用凝胶洗脱的办法得到了足够的大鼠胰腺提取物抗原蛋白。银染及Western Blot显示为155kD和160kD两条带。用胰蛋白酶部分消化后N末端氨基酸序列分析得到了12个氨基酸,初步认为该抗原不同于谷氨酸脱羧酶(GAD)、酪氨酸磷酸酶(IA2)等已发现的抗原。本实验为该抗原蛋白的分子克隆及1型糖尿病发病机制的研究打下了基础。     

两种伤寒杆菌菌体(O)抗原、鞭毛(H)抗原免疫血清制备方法的比较

为了制备高效价的兔抗伤寒杆菌免疫血清,为凝集反应、肥达氏反应提供抗体,比较了两种不同的免疫抗原制备抗体的免疫效果,结果发现T1(H)抗原较(O)菌液抗原制备抗体效果更为理想,均能用于以上两种反应.     

广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原分析及其诊断价值的探讨

目的分析广州管圆线虫成虫尿素溶解性抗原,探讨其诊断价值。方法广州管圆线虫成虫匀浆后沉渣经尿素溶解,与成虫水溶解性抗原同时进行SDS-PAGE和Western-blot,分析蛋白谱与抗原谱;用ELISA检测不同样本中相应抗体。结果SDS-PAGE结果显示尿素抗原蛋白条带少于水溶解性抗原;尿素抗原与感染大鼠血清、免疫兔血清和广州管圆线虫病患者血清在32000Mr处均出现强反应带,尿素抗原的反应带条数较水溶性抗原少。两种抗原包被ELISA检测广州管圆线虫病疑似病人血清和感染大鼠血清的阳性率相同;尿素抗原用于检测血吸虫感染小鼠血清的交叉阳性率明显低于水溶性抗原,检测正常大鼠血清、献血员血清及其他非广州管圆线虫感染血清时,假阳性数较水溶性抗原少。结论广州管圆线虫成虫尿素抗原含有32000Mr抗原;广州管圆线虫尿素抗原用于诊断时,与水溶性抗原有同样的敏感性,而特异性高于水溶解性抗原。     

流行性出血热病毒抗原组份的分析

用免疫转印技术对流行性出血热(EHF)病毒的抗原组份进行了初步分析。发现两种不同来源的兔抗EHF兔疫血清和20份4～21病日的EHF病人血清,均可与分子量在68,000和66,000道尔顿左右的两种病毒多肽成份发生反应,正常人和非EHF病人血清以及正常兔血清则否,表明这两种多肽可能是EHF病毒引起机体抗体应答反应的主要抗原成份。     

2种非侵入性检测方法对幽门螺杆菌感染的诊断价值

目的 探讨粪便Hp抗原(HpSA)及14C-尿素呼气试验(14C-UBT)2种非侵入性检测方法 对幽门螺杆菌(Hp)感染的诊断价值.方法 采用胃黏膜快速尿素酶法(RUT) 和活组织切片染色法联合检测的结果 作为Hp感染诊断的"金标准",对2009年1月-2011年6月在新疆医科大学附属中医医院门诊就诊的因上消化道症状接受胃镜检查的132例患者进行粪便Hp抗原(HpSA)及14C-尿素呼气试验(14C-UBT)的检测,并与"金标准"进行对比分析.结果 132例患者中RUT法检出Hp阳性95例,组织切片染色法检出Hp阳性92例,其中81例2种方法 检测均阳性,将此81例患者作为Hp感染的现症患者,26例2种方法 均阴性者作为Hp非感染者.对"金标准"检测的81例Hp阳性患者及26例阴性患者再行HpSA及14C-UBT检测.以"金标准"作为Hp感染的诊断标准,14C-UBT检测的敏感性为95.06%(77/81),特异性为92.31%(24/26),阳性预测值为97.47%(77/79),阴性预测值为85.71%(24/28),准确性为94.40%(101/107);HpSA检测的敏感性为91.36%(74/81),特异性为88.46%(23/26),阳性预测值为96.10%(74/77),阴性预测值为76.67%(23/30),准确性为90.65%(97/107).结论 HpSA及14C-UBT检测是非侵入性诊断Hp感染的较理想的方法,值得在临床推广,临床医生可根据具体情况选择检测方法,也可以联合运用检测方法 来减少假阴性或假阳性结果 的出现.     

原发性胆汁性肝硬化患者中自身抗原丙酮酸脱氢酶特异性CD8+CTL表位预测及鉴定

目的鉴定原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者中自身抗原丙酮酸脱氢酶(PDC-E2)上的HLA-A*0201限制性CD8 CTL表位,为临床探索特异性免疫治疗奠定基础.方法应用数据库SYFPEITHI预测PDC-E2上两段涵盖B细胞表位和CD4 T细胞表位的氨基酸序列(163～184aa和36～49aa)附近可能存在的HLA-A*0201限制性T细胞表位,再通过T2细胞株、细胞增殖试验和细胞毒性检测分别分析各抗原肽与HLA-A*0201的结合力、诱导患者外周血单个核细胞(PBMCs)增殖能力及抗原肽诱导的抗原特异性T细胞杀伤毒性,逐步鉴定HLA-A*0201限制性CD8 CTL细胞表位.结果数据库初步预测到5个可能性较大的HLA-A*0201限制性抗原肽,其中两个抗原肽(159～167aa和165～174aa)显示与T2细胞上HLA-A*0201分子有较高的亲和力,这两个抗原肽能刺激大部分HLA-A*0201阳性PBC患者PBMC增殖,并且由其诱导产生的CTL具有特异杀伤活性.结论位于PDC-E2内酯酰区上的KLSEGDLLA(159～167aa)和LLAEIETDKA(165～174aa)是PBC患者体内HLA-A*0201限制性的CD8 CTL表位.     

提高短期应用质子泵抑制剂后幽门螺杆菌检测水平的研究

目的:通过对短期应用质子泵抑制剂后的慢性胃炎及消化性溃疡患者,以不同方法检测幽门螺旋杆菌(Hp)感染情况,通过对比阳性率及敏感性,发现短期应用质子泵抑制剂后Hp检测敏感方法。方法:以服用质子泵抑制剂但不超过1周(用药组)及未服用质子泵抑制剂(对照组)患者为入组条件,将两组各60例,分别取胃窦、胃体大弯侧黏膜,采用快速尿素酶法、病理组织切片染色检测,另行粪便Hp抗原检测,统计阳性率及敏感性,并进行两组间对比分析。结果:用药组60例患者中Hp阳性52例,阳性率86.7%,对照组60例患者中Hp阳性50例,阳性率为83.3%,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。用药组胃体部尿素酶试验阳性率大于胃窦部(P﹤0.05),两组间胃窦部尿素酶试验阳性率低于对照组(P﹤0.01),胃窦、胃体病理组织学检测阳性率与对照组间差异无统计学意义(P﹥0.05)。而用药组中联合检测(胃窦+胃体)病理切片染色、胃窦病理+粪便Hp抗原、(胃体病理+粪便Hp抗原)阳性率均为80%,敏感性92.3%,阴性预测值较高,与胃窦病理、胃体病理、粪便Hp抗原检测相比差异无统计学意义(P﹥0.05),与尿素酶试验相比差异有统计学意义(P﹤0.01)。结论:短期应用质子泵抑制剂后对Hp尿素酶试验检测有明显影响,进行胃窦、胃体黏膜病理切片染色、粪便抗原检测或两者联合检测可以提高检测阳性率及敏感性。     

NPC相关抗原的血清学分析

目的:对重组克隆表达抗原血清学分析(SEREX)法筛选出的鼻咽癌(NPC)系列肿瘤抗原进行特异性检测,判断新检测出的NPC抗原的相应抗体在NPC病人血清及正常人血清中的阳性率,为NPC抗原对NPC的免疫诊断、免疫治疗积累基础资料。方法:运用噬菌体转染-蛋白印迹、免疫组织化学技术,检测3种NPC肿瘤抗原(GX-NPC-1,GX-NPC-2,GX-NPC-4)在20个NPC病人及15个正常人血清中的阳性表达率。结果:3种NPC肿瘤抗原在NPC病人血清中的阳性表达率分别为55%(11/20)、55%(11/20)、50%(10/20);正常人各为33.3%(5/15)、26.7%(4/15)、6.7%(1/15),经统计学分析,前两种肿瘤抗原在NPC及正常人血清中的表达差异无统计学意义,而GX-NPC-4在两种血清中的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论:3种NPC肿瘤抗原中GX-NPC-4抗原在NPC患者的血清中的表达率明显增高,可能为NPC特异性抗原,值得进一步研究。     

五种抗原用酶联免疫吸附试验诊断血吸虫病的研究

本文对用5种血吸虫抗原作ELISA诊断血吸虫病的效果进行比较研究.除盐水浸提成虫抗原SEW外,其余4种抗原(可溶性虫卵抗原SEA,尿素溶性虫卵抗原JEU,可溶性成虫抗原SWA,尿素溶性成虫抗原JWU)均具较高的敏感性(88.24%～90.20%)和特异性(86.84%～94.73%),这4种抗原间的敏感性和特异性均无显著性差异(P>0.05).结果表明用本文方法制备的2种尿素溶性抗原JEU和JWU,其制备方法简便、抗原产量高、诊断效果好,使通常废弃的沉渣得到利用,为抗原来源增辟新途径,具有较好的实用和经济价值.     

斯氏狸殖吸虫成虫尿素溶解性抗原的分离提取

斯氏狸殖吸虫病(四川肺吸虫病)在我国流行分布较广,寄生人体以肺外型为主,虫体多不发育成熟,通常需借助免疫学方法进行诊断。近年来,一些流行区的生态环境受到破坏,影响了囊蚴的采集。加上用囊蚴感染动物至获得成虫费时费事,造成抗原材料来源困难。以往,此病免疫诊断用抗原一般为虫体盐水或盐水缓冲液的浸出物,而将离心后的沉淀作为残渣废弃。最近国内外报导用高浓度尿素从血吸虫卵和成虫的非水溶性部分中分离、提取出尿素溶解性抗原。本实     

尿素溶解性抗原用于ELISA诊断旋毛虫病的初步研究

文本报告了旋毛虫感染期幼虫虫体尿素溶解性抗原的提取及其用于ELISA诊断旋毛虫病的效果。ELISA检测24例旋毛虫病人血清IgG和12例病人滤纸干血滴IgG,阳性率均为91.67％(22/24和11/12),21例病人血清IgM,阳性率为95.24％(20/21),对日本血吸虫病人血清作IgG和IgM检测时均有一定的交叉反应,而感染其它几种寄生虫的小鼠血清无交叉反应。 本实验结果表明尿素溶解性抗原用于ELISA诊断旋毛虫病具有较高的敏感性、特异性和好的重复性,是一种具有实用价值和经济价值的诊断抗原。     

4种抗原用于斑点免疫金银染色试验诊断日本血吸虫病的比较

采用斑点免疫金银染色(Dot-IGSS)试验对4种日本血吸虫抗原的敏感性及特异性进行比较。结果显示粗提成虫抗原(AWA)、尿素溶解性成虫抗原(JWU)、硫酸铵沉淀成虫抗原(AW)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测40例日本血吸虫病人血清抗体的敏感性均达100.0％,40例正常人血清的可疑阳性反应分别为2.5％、0、2.5％和0,40例肝吸虫病人血清的可疑交叉率分别为2.5％、0、2.5％和0,表明在高敏感的IGSS检测系统中,粗提成虫抗原的敏感性和特异性与部分纯化者和虫卵抗原无显著性差异(P>0.05)。     

H-Y抗原检测与性分化异常(附20例分析)

用 C_(57)BL/b(B_6)小鼠制备 H-Y 抗血清,应用 SPA 菌体花环法、酶联免疫滤过染色法、~(125)I-SPA 放射免疫法,对20例性分化发育异常者进行 H-Y抗原测定,并结合染色体核型和临床资料进行分析,证明 H-Y 抗原在性分化过程中起重要作用,因而提出性分化异常患者作染色体检查的同时,必须测定 H-Y 抗原。     

抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单抗轻重链可变区基因克隆与序列分析

目的:获取抗人CD14单克隆抗体(单抗)ZCH-7-2F9(简称2F9)轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,为2F9单链抗体(ScFv2F9)的构建奠定基础。方法:复苏2F9和NS-1细胞株,并亚克隆2F9细胞株,从其最佳克隆93A10提取总RNA,RQ1 RNase-Free DNase处理污染的DNA,与NS-1细胞进行同步对照,通过RT-PCR,扩增获得2F9单抗VL基因和VH基因,分别克隆入pGEM○R-T Easy载体,然后转化DH5α细菌,酶切鉴定并纯化阳性重组子,测序后进行在线核苷酸序列分析。结果:2F9单抗VL基因全长321 bp,编码107个氨基酸,归属于小鼠Ig的Vκ基因,氨基酸序列分析结果显示,VL含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR),在第23位和第88位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸;其VH基因全长360 bp,编码120个氨基酸,归属于小鼠Ig的VH基因,氨基酸序列分析结果显示,VH含有明确的4个框架区和3个抗原决定簇互补区,在第22位和第96位为半胱氨酸,是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸。结论:经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别是2F9单抗的VL和VH基因,为2F9基因工程抗体研究奠定了坚实的基础。     

非标记抗体技术在流行性出血热病毒抗原研究中的应用

将非标记抗体技术应用于流行性出血热病毒抗原研究,对感染细胞内病毒抗原及经免疫转印到硝酸纤维膜上的病毒多肽抗原进行了检测,并分别与间接免疫荧光和间接酶标抗体方法进行了比较。结果表明,非标记抗体技术敏感性高,背景浅,可用于流行性出血热病毒抗原检测与分析。用非标记抗体技术及间接免疫荧光法对流行性出血热单克隆抗体培养上清液进行筛选,两种方法阳性检出率相同(7.29％,7/96),但前者滴度(1:16～256)高于后者(1:4～32)。     

氨基酸三联体方法评价11例心脏移植供受体匹配情况的结果分析

目的 介绍氨基酸三联体方法在评价心脏移植供受体HLA－Ⅰ类抗原配合程度中的应用，分析其与交叉反应组评价方法之间的结果差异。方法 分别用上述两种方法对11例心脏移植供受体的HLA抗原配合情况进行评价，并对两种评价结果进行分析。结果 （1）应用HLA抗原交叉反应组方法分析11例心脏移植供受体，其HLA抗原配合的优劣顺序为：例1＝例3＝例5＝例6＞例7＝例9＝例11＞例2＝例8＞例4＞例10，例1、例3、例5、例6供受体配合最好；（2）应用氨基酸三联体方法分析上述11你心脏移植供受体，其HLA抗原配合的优劣顺序为：例3＞例5＞例2＞例8＞例11＞例7＞例4＞例6＞例9＞例10＞例1，例3供受体配合最好，例1最差。结论 氨基酸三联体方法从分子水平提供了多个分析参数供参考，能更精确地比较供受体HLA－Ⅰ抗原间的差异，可能更有利于供受体的筛选和评价。