安神益脑丸中黄曲霉毒素残留量测定及LC-QQQ/MS确证

目的：建立高效液相色谱-荧光检测器测定安神益脑丸中黄曲霉毒素G₂、G₁、B₂、B₁的方法;分析安神益脑丸中黄曲霉毒素的污染情况。方法：待测样品采用80%乙腈作为提取溶剂,经免疫亲和柱净化、高效液相色谱分离、光化学柱后衍生后,通过荧光检测器测定其中黄曲霉毒素的含量;采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法对以上实验测定结果进行进一步的确证。结果：在优化条件下,黄曲霉毒素G₂、G₁、B₂、B₁分别在0.19~0.95,0.53~2.65,0.22~1.08,0.51~2.55 ng·mL^-1的范围内有良好的线性关系,r>0.999 5,回收率在86.2%~104.9%之间。结论：该方法操作简便,灵敏度高、重复性好、结果准确,可运用于安神益脑丸中黄曲霉毒素的检测。5批样品中有2批检出黄曲霉毒素,检出率为40%,建议增订该品种黄曲霉毒素的检查项。     

HPLC法测定二维亚铁颗粒(Ⅱ)中维生素C、维生素B6含量

目的:建立HPLC测定二维亚铁颗粒（Ⅱ）中维生素C和维生素B₆含量的方法。方法:采用Insteril ODS-3色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相:0.03 mol·L^-1磷酸氢二铵溶液（加入0.01%庚烷磺酸钠,用磷酸调节pH至3.0）-甲醇,梯度洗脱,检测波长为280 nm,流速:0.7～1.0 ml·min^-1,柱温30℃。结果:维生素C与维生素B6分别在37～594μg·ml^-1（r=0.999 9）与3～51μg·ml^-1（r=1.000 0）范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.6%与99.2%,RSD分别为0.48%与0.54%（n=9）。结论:本法简便、结果准确、可靠,可用于二维亚铁颗粒（Ⅱ）中维生素C、维生素B₆的含量测定。     

人血清水溶性维生素B1、B2、B6和B9高效液相色谱串联质谱联用技术测定方法的建立和验证

目的：建立测定人血清中水溶性维生素B₁、B₂、B₆和B₉的高效液相色谱串联质谱联用法。方法：常规送检患者血清经乙酸乙酯萃取,经反相高效液相色谱分离,采用电喷雾离子化四级杆串联质谱多反应监测模式测定维生素B₁、B₂、B₆和B₉浓度。结果：维生素B₁、B₂、B₆、B₉线性范围分别为1~200,5~40,1~80,5~40 ng·mL^-1;R²值分别为0.991 6,0.996 8,0.992 2,0.991 4;最低定量限分别为1,5,1,5 ng·mL^-1;日内、日间RSD均小于8.5%。结论：所建立方法可用于常规送检患者血清水溶性维生素B₁、B₂、B₆和B₉测定。     

HPLC测定跌打止痛贴膏中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量

目的:建立HPLC法同时测定跌打止痛贴膏中三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁含量的方法。方法:色谱柱为Shim-packCLC-ODS C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱;检测波长203 nm,柱温35℃,流速1.0ml·min^-1。结果:三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁线性范围分别为0.035 8～0.178 8 mg·ml^-1（r=0.999 7）,0.225 5～1.128 0mg·ml^-1（r=0.999 6）;平均回收率分别为96.8%（RSD=2.1%）和97.3%（RSD=2.2%）。结论:本方法简便可靠,重复性好,可用于测定跌打止痛贴膏中三七皂苷R₁和人参皂苷Rg₁的含量。     

HPLC法同时测定肠肽胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1含量

目的:建立肠肽胶囊中三七有效成分的HPLC含量测定方法。方法:色谱柱为SinoChrom ODS-BP（150 mm×4.6mm,5μm）,以乙腈（A）和水（B）为流动相,梯度洗脱,检测波长为203 nm,流速为1.0 ml·min^-1,柱温为室温,进样量为20μl。结果:三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁及人参皂苷Rb₁的线性范围依次为63.9～319.5μg·ml^-1、112.6～563.2μg·ml^-1、102.5～512.8μg·ml^-1,线性关系良好（r值分别为0.999 7、0.999 4、0.999 9）;三种皂苷的平均回收率分别为96.47%、98.75%,97.55%,RSD分别为1.52%、1.73%、1.81%（n=6）。结论:本方法简便可行、准确、灵敏度高、专属性强,可用于肠肽胶囊的质量控制。     

UPLC-MS/MS法与ELISA法测定胖大海中黄曲霉毒素的比较研究

目的 采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)对胖大海中的黄曲霉毒素进行检测，比较 两种方法的检测结果以及方法学差异性。方法UPLC-MS/MS法测定：样品采用70%甲醇提取经过免疫亲和柱净化，色谱柱为C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7μm)，柱温为40℃，流动相为水含0.1%甲酸(A)-甲醇含0.1%甲酸(B)，梯度洗脱，流速为0.3 m L·min^-1，多反应检测扫描采集模式，正负离子同时扫描进行数据采集。同时采用ELISA法测定，样品采用甲醇提取，酶联免疫试剂盒反应。结果 UPLC-MS/MS法测定：黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂线性关系良好，检测限分别为0.013 5,0.002 9,0.008 6,0.003 6μg·kg^-1，定量限分别为0.045 0,0.009 8,0.028 6,0.011 9μg·kg^-1，平均回收率分别为98.98%,10...     

高效液相色谱-荧光检测法测定沉香中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2

目的建立高效液相色谱–光化学衍生–荧光检测法测定沉香药材中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2。方法采用高效液相色谱法,通过免疫亲和柱提取和净化,荧光检测器检测。Agilent Zorbax Ecilpse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇–水(45∶55);体积流量:0.8 m L/min;柱温:30℃;进样盘温度:4℃;荧光激发波长为360 nm,发射波长为450 nm。结果黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2分别在9.3~74.4、3.0~24.0、9.3~74.4、3.5~28.0 pg线性关系良好,r均大于0.998 0;检测限分别为1.86、0.60、1.86、0.70 pg,定量限分别为7.44、2.40、7.44、2.80 pg。平均回收率分别为78%、92%、82%、99%,RSD值分别为4.4%、3.0%、4.3%、2.8%。结论所建立的方法结果准确、重复性、稳定性均良好,可用于沉香药材中黄曲霉毒素的质量控制。     

五维甘草那敏胶囊中泛酸钙、维生素B2含量测定方法改进

目的利用高效液相色谱法同时测定五维甘草那敏胶囊中泛酸钙、维生素B₂的含量。方法色谱柱:Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.5%磷酸溶液(28∶72);进样量:10μL;柱温为30℃;流速:1.0 m L·min^-1;检测波长为210 nm。结果泛酸钙、维生素B2分别在40.76~815.2,10.56~211.2μg·m L^-1范围内线性关系良好。回归方程分别为:Y₁=3.3×10³X+1.4×10⁴(r=0.999 5,n=6),Y₂=1.9×10⁴X-1.9×10³(r=0.999 4,n=6);平均回收率分别为98.82%(RSD=0.76%)、98.54%(RSD=0.98%)。精密度分别为0.63%、0.88%(n=6)。结论该方法经方法学验证,可用于五维甘草那敏胶囊中泛酸钙、维生素B2的含量测定。     

高效液相色谱-光化学衍生法测定湖南产莲子中黄曲霉毒素G1、G2、B1、B2

目的对不同来源的湖南产莲子中黄曲霉毒素G_1、G_2、B_2、B_1进行高效液相色谱-光化学衍生法测定。方法采用高效液相色谱–光化学衍生法,采用岛津GL Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇–乙腈–水(35∶13∶52),柱温35℃;光化学衍生器(254 nm)激发波长λ_(ex)=360 nm,发射波长λ_(ex)=450 nm。结果黄曲霉毒素G_1、G_2、B_2、B_1分别在6.7～33.3、11.4～56.8、10.3～51.5、4.1～20.3 pg线性关系良好;平均回收率分别为98.07%、97.72%、96.11%、99.52%,RSD值分别为1.69%、1.40%、2.72%、1.34%(n=6)。9批莲子样品中,有6批未检出黄曲霉毒素,来自于农贸市场农户自存的2批次检出黄曲霉毒素B_1,实验室塑料袋包装储存1年的1批检出黄曲霉毒素B_1、B_2,但质量分数均低于法定标准限量。结论不同来源湖南产莲子中黄曲霉毒素质量分数均低于《中国药典》2020年版规定限量。该法测定结果准确、重复性良好,可为完善莲子安全性控制和质量标准提升提供实验依据。     

板蓝根中外源性有害残留的全面检查及风险评估

目的 对板蓝根中外源性有害残留进行全面检查和风险评估,为板蓝根的安全用药提供参考。方法 采用气相色谱-三重四极杆质谱联用仪和液相色谱-三重四极杆质谱联用仪测定33种禁用农药,免疫亲和柱-高效液相色谱-柱后光化学衍生法测定4种黄曲霉毒素,电感耦合等离子体质谱测定5种重金属及有害元素,离子色谱法测定二氧化硫,并采用靶标危害系数法对安全风险做出评估。结果 64批样品中33种禁用农药和黄曲霉毒素B₁、B₂、G₁、G₂均未检出。二氧化硫低于《中华人民共和国药典》(2020年版)规定限度(150 mg·kg^-1),64批样品及板蓝根品种中二氧化硫和Pb、Cd、As、Hg、Cu的靶标危害系数均远低于1。基于风险评估结果提出板蓝根中Pb、Cd、As、Hg、Cu的限度分别为2、1、2、0.2、20 mg·kg^-1。结论 板蓝根中外源性有害残留风险低。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定地龙中4个黄曲霉毒素

目的:建立同时测定地龙中4个黄曲霉毒素含量的高效液相色谱串联质谱法。方法:样品经甲醇-水(80∶20,v/v)提取,通过免疫亲和柱净化后,采用高效液相色谱串联质谱法测定其中4个黄曲霉毒素的含量,以多反应监测(MRM)方式分别监测离子对m/z 313→241(黄曲霉毒素B1,CE 50 eV),m/z 315→259(黄曲霉毒素B2,CE 43 eV),m/z 329→243(黄曲霉毒素G1,CE 38 eV)和m/z 331→245(黄曲霉毒素G2,CE 40 eV)。结果:黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测限分别为0.03,0.02,0.03,0.02μg.kg-1,回收率在88.0%～100.3%范围内,RSD均低于6.1%。结论:该方法快速、灵敏,结果准确,适用于地龙中4个黄曲霉毒素的同时检测。     

高效液相色谱-柱后光化学衍生法测定参苓白术散中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1

目的 建立中成药参苓白术散中黄曲霉毒素G2、G1、B2、B1的测定方法.方法 样品经70％甲醇提取,免疫亲和柱净化后,采用高效液相色谱-柱后光化学衍生-荧光检测法定量,以串联质谱法验证.结果 高效液相色谱法线性关系良好(r＞0.999),回收率范围76.8％～115.2％(RSD范围1.8％～12.9％),检测了57批样品,并使用串联质谱仪的多反应监测模式确证了阳性结果.结论 本法快速、简便、灵敏、准确,专属性强,可用于参苓白术散中黄曲霉毒素的检测.     

Binding of aflatoxins B1 and G1 to rat liver chromatin

Direct evidence for aflatoxin-chromatin interaction was obtained using fluorescence quenching as a measure of the interaction. Interaction of aflatoxin B₁ with components of chromatin increased in the following order: nonhistone residue, DNA, histone, histone-free chromatin, and intact chromatin. Fluorescence change due to interaction of aflatoxin B₁ with various complexes of chromatin constituents was not significantly different from that obtained with DNA. Association of aflatoxin B₁ with chromatin components was very weak whereas that with reconstituted deoxyribonucleoprotein (consisting of histone, nonhistone residue, and DNA) and with native chromatin was strong as shown by increase in fluorescence polarization of aflatoxin. Such data suggest the importance of structural integrity of chromatin in the binding with aflatoxin. Interaction of aflatoxin G₁ with chromatin was less than that of aflatoxin B₁.     

维生素B1丸

本品含维生素B₁(C₁₂H₁₇ClN₄OS·HCl)应为标示量的93.0~110.0%。[性状]本品为白色或类白色糖丸。     

HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B1、B2和B6含量

摘 要 目的:建立HPLC法测定复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B₁、维生素B₂和维生素B₆含量的方法。方法: 采用Insteril ODS-3色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相：0.01 mol·L^-1庚烷磺酸钠（含0.25%三乙胺,用冰醋酸调节pH至3.8)-甲醇（75∶25）,柱温30℃,检测波长为280 nm,流速：1.0 ml·min^-1。结果: 维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆分别在3.98～99.40 μg·ml^-1（r=0.999 7）、4.08～101.91μg·ml^-1（r=0.999 9）、2.08～52.00 μg·ml^-1（r=0.999 9）范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.18%、99.53%、99.27%,RSD分别为0.60%、0.67%、0.71%(n=9)。结论:本法简便、快速、准确,可用于复方吡拉西坦脑蛋白水解物片中维生素B₁、维生素B₂和维生素B₆的含量测定     

Comparative cytotoxicity study of enniatins A, A1, A2, B, B1, B4 and J3 on Caco-2 cells, Hep-G2 and HT-29

Enniatins (ENs) are ionophoric, phytotoxic, antihelminthic, and antibiotic compounds of hexadepsipeptidic structure produced by several strains of Fusarium spp. The cytotoxicity effect of the ENs A, A₁, A₂, B, B₁, B₄ and J₃ was compared on three tumor cell lines, the human epithelial colorectal adenocarcinoma (Caco-2), the human colon carcinoma (HT-29), and the human liver carcinoma (Hep-G2). The endpoint evaluated was the mitochondrial integrity by using the MTT assays, after 24 and 48 h of incubation. The IC₅₀ value for EN A₂ on Caco-2 cells, after 24 h exposure, was 18.7 ± 4.5 μM and decrease to 2.6 ± 0.7 μM at 48 h of incubation. However, ENs A, A₁, B₁ and B₄ exert pronounced cytotoxic effects in all the cell lines tested by the MTT assay after 24 and 48 h of incubation. The EN A₁ demonstrated to be the most cytotoxic ENs tested. Moreover, no statistical differences were found between the IC₅₀ values obtained for EN A₁ on Caco-2, HT-29 and Hep-G2, with IC₅₀ values ranging from 9.1 ± 2.2 μM to 12.3 ± 4.3 μM at 24 h and decreasing in a range variable from 1.4 ± 0.7 μM to 2.7 ± 0.8 μM at 48 h. On the other hand, EN A, B₁ and B₄ showed lower cytotoxicity, but in a similar range as the IC₅₀ values reported on HT-29 (IC₅₀ values (24 h): 16.8 ± 4.3-26.2 ± 6.7 μM), Caco-2 (IC₅₀ values (24 h): 19.5 ± 4.1 μM) and Hep-G2 (IC₅₀ values (24 h): 23.4 ± 5.6-26.2 ± 7.6 μM) cells. Cytotoxic effect with a 48 h of incubation revealed also a significant toxicity of ENs A (IC₅₀ values ranged from 8.2 ± 1.8 to 11.4 ± 4.6 μM), B₁ (IC₅₀ values variables from 3.7 ± 0.7 to 11.5 ± 5.3 μM) and B₄ (IC₅₀ of 4.5 ± 2.9-15.0 ± 4.0 μM). In summary, this study demonstrated that ENs can exert toxic activity at low micromolar concentrations in mammalian cells.     

HPLC法测定谷维素双维B片中维生素B1和维生素B6的含量

目的:建立HPLC同时测定谷维素双维B片中维生素B1和维生素B6的含量.方法:采用C18柱;以0.04%戊烷磺酸钠-2%冰醋酸.甲醇(35:45:20)为流动相;检测波长:276nm;流速:1.0 mL·min-1.结果:维生素B1在50.64～118.16μg·L-1范围内峰面积与浓度具有良好线性关系,维生素B6在117.84～274.96μg·L-1范围内峰面积与浓度具有良好线性关系;维生素B1的回收率为:99.41%,RSD 1.45%(n=6);维生素B6的回收率为:99.16%,RSD 1.42%(n=6).结论:该方法准确、灵敏度高、重现性好、结果准确.