中药益气化瘀方对体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞生物学功能的影响

为研究中药益气化瘀方对体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞生物学功能的影响. 取健康10周龄SD大鼠70只,体重200±50g,雌雄各半,随机分为空白组(E)、芬必得组(D)、中药低剂量组(C)、中药中剂量组(B)、中药高剂量组(A),每组14只.定时、定量胃饲,4天后分别处死取血清,相同条件下制备益气化瘀方含药血清和对照血清,取体外培养的大鼠颈椎间盘软骨细胞进行实验研究,采用MTT法观察软骨细胞生长、增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果显示不同中药浓度对培养的软骨细胞生长、增殖均有促进作用,以10%血清浓度高剂量含药血清组促进软骨细胞增殖的作用最为明显,与其他各组相比,有非常显著的差异(P<0.01).细胞周期分析,中药组能促进细胞DNA合成(S期),与对照组相比,有非常显著的差异(P<0.01).表明益气化瘀方具有促进大鼠颈椎间盘软骨细胞生长、增殖及促进细胞DNA合成的作用.     

痛痹方血清对体外培养乳兔关节软骨细胞增殖和MMP-3与TIMP-1的影响

目的观察痛痹方含药血清对体外培养的乳兔关节软骨细胞和MMP-3与TIMP-1的影响。方法采用体外培养的乳兔软骨细胞为干预对象,并加入10μg/LIL-1建立变性软骨细胞损伤模型,制备痛痹方含药血清作为干预措施,培养48h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖,ELISA法测定分离的上清培养液中MMP-3和TIMP-1含量。结果不同浓度的痛痹方含药血清均能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖,降低MMP-3/TIMP-1,与空白血清对照均有显著性差异(P<0.01)。结论痛痹方血清能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖,下调软骨细胞MMP-3/TIMP-1。     

牛膝总皂苷体外干预人膝骨关节炎软骨细胞Ⅱ型胶原表达及最佳浓度的实验研究

目的:观察牛膝总皂苷(TSA)体外干预人膝骨关节炎软骨细胞增殖及Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ)表达水平及最佳浓度.方法:将人膝骨关节炎软骨细胞进行分离、培养、鉴定,并将其分为6组,分别为0、0.01、0.05、0.1、0.5、1 mg/ml组.制备TSA存储液及6组不同TSA浓度DMEM/F12(D/F12)培养基,分别用6组培养基对P3代软骨细胞培养并进行细胞形态学观察;采用CCK-8法检测软骨细胞P1、P2、P3传代增殖情况,观察其生长曲线;采用Western-blot法检测P3代软骨细胞CollagenⅡ蛋白表达、RT-PCR法检测Collagen Ⅱ mRNA表达.结果:软骨细胞体外分离并培养成功,经甲苯胺蓝染色鉴定细胞为软骨细胞来源;CCK-8法绘制的生长曲线符合Logistic生长曲线规律,P3代软骨细胞增殖速度高于P1、P2代;Western-Blot法检测结果显示,Collagen Ⅱ蛋白表达量浓度为0.5 mg/ml时达最高,RT-PCR法检测结果显示,各组浓度AST能促进软骨组织Ⅱ型胶原mRNA表达上调,以0.5 mg/ml组最明显(P＜0.05).结论:TSA能体外有效促进软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原mRNA表达上调,以0.5 mg/ml浓度最明显,具有促进软骨修复的作用,具体作用机制有待进一步研究.     

补肾康膝方对家兔软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的 观察补肾康膝方含药血清对体外培养的兔关节软骨细胞的增殖凋亡和端粒酶活性的影响.方法 取兔的关节软骨,将软骨细胞分离传代后,分为补肾康膝方含药血清组和对照组,置入37℃,50 ml/L的CO2培养箱内培养7 d后,采用MTT法检测细胞增殖;TUNEL法检测各组软骨细胞的凋亡;软骨细胞经扩增后用ELISA检测端粒酶活性.结果 补肾康膝方高、中、低剂量组细胞增殖均高于对照组(P<0.05);补肾康膝方含药血清各组的软骨细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05);补肾康膝方含药血清各组的软骨细胞端粒酶活性明显高于对照组.结论 补肾康膝方可能通过上调软骨细胞端粒酶活性,从而抑制软骨细胞的凋亡.     

中药补肾方对体外培养软骨细胞影响

目的 为了解中药补肾方对体外培养软骨细胞的作用.方法 取Wistar大鼠关节软骨,将软骨细胞分离传代后,分为补肾方含药血清组和对照组,置入37 ℃,50 ml/ L 的CO2培养箱内培养7 d 后,采用MTT 法检测细胞增殖; TUNEL 法检测各组软骨细胞的凋亡.结果 中药补肾方高、中、低剂量组细胞增殖均高于对照组( P<0. 05) ;中药补肾方含药血清各组的软骨细胞凋亡率明显低于对照组( P<0. 05) .结论 中药补肾方可促进软骨细胞增殖与抑制软骨细胞的凋亡.     

益气化瘀补肾方血清对兔关节软骨细胞增殖与Caspase3/7酶活性的影响

目的观察益气化瘀补肾方含药血清对体外培养的兔关节软骨细胞增殖与Caspase3/7酶活性的影响。方法取兔的膝关节软骨,将软骨细胞分离传代后,取第三代细胞,用10μg/L的IL-1β诱导正常软骨细胞退变,制备益气化瘀补肾方含药血清作为干预措施。益气化瘀补肾方组分别加入IL-1β及不同溶度（5%,10%,20%）益气化瘀补肾方含药血清培养液,对照组分别加入IL-1β及不同溶度（5%,10%,20%）空白血清培养液,分别培养24h、48h后,采用MTT比色法检测软骨细胞增殖。另取对数生长期第三代软骨细胞分为4组：正常软骨细胞＋20%空白血清;正常软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方含药血清;IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清;IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方含药血清。每组6个复孔,每孔100μl,各组分别用相应的血清培养24h、48h后进行检测,采用Caspase3/7试剂盒检测各组软骨细胞的Caspase3/7酶活性变化情况。结果不同浓度的益气化瘀补肾方血清均能拮抗IL-1β抑制软骨细胞增殖;与正常软骨细胞＋20%空白血清组比较,IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清组Caspase3/7酶活性升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与IL-1β诱导软骨细胞＋20%空白血清组比较,IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组Caspase3/7酶活性降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;正常软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组的Caspase3/7酶活性与正常软骨细胞＋20%空白血清组和IL-1β诱导软骨细胞＋20%益气化瘀补肾方血清组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论益气化瘀补肾方血清能拮抗IL-1β抑制软骨细胞增殖,下调软骨细胞Caspase3/7酶活性,从而抑制软骨细胞的凋亡。     

牛膝对人软骨细胞体外增殖的影响

目的:探讨牛膝对人关节软骨细胞体外增殖的影响。方法:膝骨关节炎患者口服不同浓度牛膝醇提物,收集不同浓度牛膝含药血清,取膝骨关节炎行关节置换手术患者的关节软骨,剪碎后,采用Ⅱ型胶原酶溶解消化软骨细胞,甲苯胺蓝染色确定软骨细胞的存在。将第3代软骨细胞分别接种于4组:空白对照组、含药血清高剂量组、含药血清中剂量组、含药血清低剂量组。荧光倒置相差显微镜观察软骨细胞形态和结构,采用CCK-8法检测软骨细胞增殖情况,RT-PCR法分析软骨细胞基因Ⅱ型胶原mRNA表达水平。结果:牛膝含药血清高、中剂量组细胞增殖率高于对照组(P0.05),含药血清低剂量组与空白对照组比较差异无统计学意义(P0.05);RT-PCR法检测结果显示牛膝含药血清高、中、低剂量组均高于空白对照组(P0.05)。结论:牛膝含药血清能促进人软骨细胞体外培养增殖和Ⅱ型胶原的合成。     

少阳生骨方对去分化软骨细胞增殖以及Ⅱ型胶原表达影响研究

目的：对比观察少阳生骨方（SYSGF）与盐酸氨基葡萄糖胶囊对去分化软骨细胞增殖以及Ⅱ型胶原表达的影响,探讨少阳生骨方对膝关节软骨保护方面的作用。方法：①去分化软骨细胞体外培养体系的建立以及鉴定;②用CCK-8法观察少阳生骨方以及盐酸氨基葡萄糖对去分化软骨细胞增殖影响;③用免疫组化法观察少阳生骨方以及盐酸氨基葡萄糖对去分化软骨细胞Ⅱ型胶原表达影响。结果：①通过酶消化法建立1周龄SD大鼠去分化软骨细胞体外培养体系,通过镜下观察、甲苯胺蓝染色以及Ⅱ型胶原表达染色鉴定,确认分离培养的软骨细胞符合软骨细胞的生物学特性。②CCK-8法观察去分化细胞结果显示：0.6%、1.2%、2.4%含少阳生骨方药物以及盐酸氨基葡萄糖的药物血清与空白组相比,其均能促进去分化软骨细胞的增殖（P〈0.05）,但少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组相比其结果差异性没有统计学意义（P〉0.05）。③用免疫组化染色法观察去分化软骨细胞结果显示：不同药物以及不同药物浓度干预去分化软骨细胞后其Ⅱ型胶原均有表达,表达部位在胞浆,为红棕色颗粒或成片状,但与空白组相比,少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组表达率明显增加（P〈0.05）。同浓度含药血清少阳生骨方组与盐酸氨基葡萄糖组Ⅱ型胶原表达结果差异性没有统计学意义（P〉0.05）。结论：少阳生骨方能促进去分化软骨细胞的增殖以及Ⅱ型胶原的表达,提示少阳生骨方能有效保护关节软骨,这或许是其防治骨性关节炎的机制之一。     

补肾益气活血方对人骨关节炎软骨细胞增殖及相关细胞因子的干预作用

目的:探讨补肾益气活血方对人骨关节炎软骨细胞增殖及相关细胞因子干预作用,为骨关节炎的治疗提供依据。方法:选取本院90例人关节炎患者进行研究,行软骨细胞分离培养传代,设立空白对照组,IL-1组,补肾益气活血方组各30例,空白对照组细胞不添加任何药物,IL-1组添加含IL-1血清,益气活血方组添加IL-1血清和补肾益气活血方血清,观察各组软骨细胞增殖情况,并且运用逆转录聚合酶链技术检测软骨细胞基质蛋白酶13(MMP-13)和II型胶原的表达情况。结果:补肾益气活血组软骨细胞增殖情况与正常对照组及IL-1组相比,差异有统计学意义(P0.05);补肾益气活血组MMP-13及Ⅱ型胶原表达情况与其他两组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:体外条件下,补肾益气活血药方能够抑制炎性因子IL-1诱导的MMP-13表达,且能对抗MMP-13抑制软骨细胞II型胶原合成,促进软骨细胞的增殖,具有保护软骨细胞的作用。     

补肾益气活血方含药血清对兔软骨细胞增殖和bFGF-mRNA表达的影响

目的观察补肾益气活血方对体外培养兔软骨细胞增殖和bFGF-mRNA表达的影响。方法体外分离、培养兔膝骨关节软骨细胞,检测细胞增殖和软骨细胞bFGF-mRNA原位表达。结果补肾益气活血方高、中、低剂量组细胞增殖均优于对照组(P<0.05),软骨细胞bFGF-mRNA表达均显著高于对照组(P<0.01)。结论补肾益气活血方能促进关节炎软骨细胞bFGF-mRNA表达,加强软骨细胞增殖。     

补肾、柔肝中药对软骨细胞生物功能的影响

目的:比较补肾方和柔肝方对体外软骨细胞生物学特征的影响.方法:用补肾方和柔肝方含药血清培养软骨细胞,以MTT法检测细胞增殖能力并确定相关血清药理学的主要参数,综合运用组织细胞学、组织化学和分子生物学等方法观察比较含药血清对软骨细胞生物学性能的影响.结果:补肾方和柔肝方均能促进体外软骨细胞的增殖;促进细胞外基质胶原和蛋白多糖的合成;对软骨细胞分泌的PGE2无抑制作用,同时也不诱导软骨细胞异常分泌MMP-3.结论:补肾方和柔肝方对体外软骨细胞生物学特征的影响具有相似的作用,即促进软骨细胞的增殖和基质的合成.因此,为中医药以调摄肝肾为治疗原则防治退行性骨关节炎提供了细胞学依据.     

负载microRNA-27b-骨髓间充质干细胞来源外泌体的软骨细胞-聚乳酸羟基乙酸共聚物骨软骨复合体移植治疗软骨缺损的实验研究

目的:探讨负载microRNA-27b(miR-27b)-骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源外泌体(exosomes,exo)的软骨细胞(chondrocytes,chon)-聚乳酸羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]骨软骨复合体移植治疗软骨缺损的效果及作用机制。方法:(1)培养BMSC并制备BMSC来源exo(BMSC-exo),观察BMSC-exo的形态,测定BMSC-exo的粒径和Zeta电位,并采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测BMSC-exo表面标记蛋白CD9和CD63。(2)将培养至第2或第3代的BMSC分为2组,BMSC组于RPMI-1640培养基中培养,不进行干预,miR-27b-BMSC组采用miR-27b过表达的重组腺病毒感染;培养24 h后,制备BMSC-exo和miRNA-27b-BMSC-exo,并分别提取BMSC、BMSC-exo、miRNA-27b-BMSC、miRNA-27b-BMSC-exo的RNA,采用实时定量PCR检测miR-27b的表达。(3)分别采用Dil细胞膜红色荧光探针和Hoechst33258染色试剂给miR-27b-BMSC-exo和大鼠软骨细胞染色,于荧光显微镜下观察大鼠软骨细胞对miR-27b-BMSC-exo的摄取情况。(4)将大鼠软骨细胞分为2组,BMSC-exo组接种于BMSC-exo终浓度为80μg·mL^-1的RPMI-1640培养基中,miR-27b-BMSC-exo组接种于miR-27b-BMSC-exo终浓度为80μg·mL^-1的RPMI-1640培养基中;培养4 h后,采用实时定量PCR检测miR-27b的表达。(5)将大鼠软骨细胞分为4组,对照组于RPMI-1640培养基中培养,不进行干预,白细胞介素(interleukin,IL)-1β组在IL-1β终浓度为10 ng·mL^-1的RPMI-1640培养基中培养,miR-27b-BMSC-exo组在IL-1β终浓度为10 ng·mL^-1、miR-27b-BMSC-exo终浓度为80μg·mL^-1的RPMI-1640培养基中培养,BMSC-exo组在IL-1β终浓度为10 ng·mL^-1、BMSC-exo终浓度为80μg·mL^-1的RPMI-1640培养基中培养;分别于培养0 h、1 h、2 h、3 h、4 h和8 h,采用MTT法测定各组大鼠软骨细胞活力;培养24 h后,提取各组大鼠软骨细胞总蛋白,采用Western Blot检测软骨损伤相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteine aspartic acid specific protease,caspase)-3、caspase-9、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13的表达。(6)取18只8周龄SD雌性大鼠,于SD大鼠的左后肢股骨远端滑车沟槽制造直径4.5 mm、深度1 mm的软骨缺损,建立软骨缺损SD大鼠模型;将18只软骨缺损SD大鼠模型随机分为3组,对照组植入chon-PLGA骨软骨复合体,miR-27b-BMSC-exo组植入miR-27b-BMSC-exo-chon-PLGA骨软骨复合体,BMSC-exo组植入BMSC-exo-chon-PLGA骨软骨复合体;饲养12周后处死SD大鼠,观察软骨修复效果,免疫组织化学染色检测软骨损伤修复标志蛋白Ⅱ型胶原蛋白、MMP-13的表达;提取SD大鼠软骨组织总蛋白,采用Western Blot检测软骨损伤相关蛋白caspase-3、caspase-9、MMP-13的表达。结果:(1)BMSC-exo的鉴定结果。BMSC-exo为圆盘形囊泡状膜结构,粒径92~115 nm,数量占比最高的BMSC-exo的粒径为106 nm;BMSC-exo的Zeta电位为(-22.13±2.1)mV。BMSC-exo表面标记物CD9和CD63在BMSC-exo组的表达量显著高于BMSC组(相对灰度值:6.513±0.714,1.001±0.021,t=18.902,P=0.000;7.564±0.636,1.026±0.027,t=25.158,P=0.000)。(2)miR-27b表达的检测结果。miR-27b在miR-27b-BMSC组BMSC中的表达量高于BMSC组(相对表达量:46.785±8.153,1.000±0.280,t=13.748,P=0.000);miR-27b在miR-27b-BMSC组exo中的表达量高于BMSC组(相对表达量:34.825±8.612,1.000±0.325,t=9.621,P=0.000)。(3)miR-27b-BMSC-exo的摄取情况。大鼠软骨细胞和miR-27b-BMSC-exo共培养4 h,miR-27b-BMSC-exo被大鼠软骨细胞摄取。(4)共培养后大鼠软骨细胞中miR-27b表达的检测结果。miR-27b在miR-27b-BMSC-exo组大鼠软骨细胞中的表达量高于BMSC-exo组(相对表达量:3.315±0.523,1.000±0.244,t=9.826,P=0.000)。(5)大鼠软骨细胞活力测定结果。时间因素与分组因素存在交互效应(F=2.836,P=0.049)。4组大鼠软骨细胞活力总体比较,差异有统计学意义,即存在分组效应(F=11.345,P=0.049)。培养前及培养1 h、2 h,大鼠软骨细胞活力的组间差异无统计学意义(F=0.047,P=0.406;F=0.765,P=0.189;F=2.095,P=0.063);培养3 h、4 h、8 h,大鼠软骨细胞活力的组间差异有统计学意义(F=4.720,P=0.039;F=7.421,P=0.021;F=95.348,P=0.000),IL-1β组的大鼠软骨细胞活力小于对照组、miR-27b-BMSC-exo组、BMSC-exo组(3 h:P=0.002,P=0.011,P=0.026;4 h:P=0.002,P=0.002,P=0.006;8 h:P=0.004,P=0.004,P=0.011),miR-27b-BMSC-exo组的大鼠软骨细胞活力大于对照组和BMSC-exo组(3 h:P=0.019,P=0.023;4 h:P=0.015,P=0.002;8 h:P=0.003,P=0.029)。不同时间点大鼠软骨细胞活力总体比较,差异无统计学意义,即不存在时间效应(F=0.258,P=0.083)。(6)大鼠软骨细胞中软骨损伤相关蛋白表达的检测结果。切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13的表达量组间比较,差异有统计学意义(F=15.691,P=0.024;F=98.021,P=0.002;F=76.312,P=0.004),IL-1β组大鼠软骨细胞中切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13的表达量均高于对照组、miR-27b-BMSC-exo组、BMSC-exo组(切割-caspase-3:P=0.025,P=0.020,P=0.006;切割-caspase-9:P=0.011,P=0.008,P=0.036;MMP-13:P=0.034,P=0.003,P=0.009);miR-27b-BMSC-exo组大鼠软骨细胞中切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13的表达量均低于BMSC-exo组(P=0.023,P=0.010,P=0.007)。(7)SD大鼠软骨缺损修复效果。直视下观察,miR-27b-BMSC-exo组SD大鼠软骨缺损修复效果优于对照组和BMSC-exo组。病理染色结果显示,对照组软骨层较薄,边缘不规则,软骨下骨和软骨无界限;miR-27b-BMSC-exo组和BMSC-exo组软骨层较厚,边缘光滑,软骨下骨和软骨界限清晰,且miR-27b-BMSC-exo组透明软骨修复效果优于BMSC-exo组。(8)软骨损伤修复标志蛋白表达的检测结果。免疫组织化学染色显示,对照组和BMSC-exo组SD大鼠软骨组织中MMP-13高表达,miR-27b-BMSC-exo组SD大鼠软骨组织中MMP-13低表达;对照组SD大鼠软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白低表达,BMSC-exo组和miR-27b-BMSC-exo组SD大鼠软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白高表达。MMP-13、Ⅱ型胶原蛋白表达阳性率的组间比较,差异有统计学意义(F=126.178,P=0.002;F=209.24,P=0.001)。miR-27b-BMSC-exo组SD大鼠软骨组织中Ⅱ型胶原蛋白表达量高于对照组和BMSC-exo组(P=0.005,P=0.012),MMP-13的表达量低于对照组和BMSC-exo组(P=0.029,P=0.014)。(9)SD大鼠软骨组织中软骨损伤相关蛋白表达的检测结果。切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13表达量的组间比较,差异有统计学意义(F=15.126,P=0.026;F=33.151,P=0.019;F=53.522,P=0.016),miR-27b-BMSC-exo组切割-caspase-3、切割-caspase-9和MMP-13的表达量均低于对照组和BMSC-exo组(切割-caspase-3:P=0.003,P=0.006;切割-caspase-9:P=0.001,P=0.019;MMP-13:P=0.007,P=0.008)。结论:miR-27b-BMSC-exo-chon-PLGA骨软骨复合体移植治疗软骨缺损,治疗效果显著,其作用机制可能与抑制caspase-3、caspase-9以及MMP-13的表达、促进Ⅱ型胶原蛋白的表达有关。     

中药复方含药血清对回转模拟失重成骨细胞影响的观察

目的:观察中药复方含药血清对模拟失重条件下体外培养成骨细胞的影响,探讨该方对抗骨丢失的部分作用机理.方法:分离乳鼠颅骨成骨细胞,体外培养后,随机分为5%,10%,20%浓度的空白血清对照组和5%,10%,20%空白血清回转组和5%,10%,20%含药血清回转组,连续回转48h模拟失重,观察该方对大鼠成骨细胞增殖、Ⅰ型胶原合成、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)生成的影响.结果:5%和10%空白血清回转组成骨细胞增殖比正常重力组明显降低(P＜0.05);与10%空白血清回转模拟失重组相比,10%含药血清回转组可显著促进细胞增殖(P＜0.05).正常重力组与回转模拟失重组Ⅰ型胶原含量比较差异无统计学意义(P＞0.05);与5%和10%空白血清回转模拟失重组相比,5%和10%含药血清回转组均能明显促进成骨细胞Ⅰ型胶原合成(P＜0.05).与5%正常重力组相比,5%空白血清回转组成骨细胞ALP活性明显降低(P＜0.05);与5%和20%空白血清回转模拟失重组相比,5%和20%舍药血清回转组能明显提高成骨细胞ALP活性(P＜0.05).与10%、20%空白血清组相比,10%、20%空白血清回转组成骨细胞BGP含量明显降低(P＜0.05);而中药复方含药血清对其模拟失重成骨细胞BGP活性没有显著影响(P＞0.05).结论:该方能改善模拟失重条件下成骨细胞增殖,分化成熟,增加胶原蛋白合成,从而实现对抗失重骨丢失的效果.     

川芎嗪注射液对体外培养软骨细胞影响的实验研究

目的探讨川芎嗪对骨性关节炎的药理效应及作用机理.方法采用家兔关节软骨细胞体外培养模型,加入不同浓度的川芎嗪药物,观察软骨细胞的增殖及总蛋白的合成.结果川芎嗪不影响软骨细胞的活性.8%的川芎嗪可显著提高体外培养关节软骨细胞的增殖.4%～16%的川芎嗪对细胞蛋白质合成有促进作用,与对照组相比有非常显著意义.结论川芎嗪的有效成分可促进软骨细胞分泌合成代谢因子,刺激细胞增殖和蛋白质合成.     

参麦注射液对体外培养软骨细胞增殖及DNA合成的影响

目的:探讨参麦液对软骨细胞增殖与DNA合成的影响.方法:运用关节软骨体外培养方法,设立空白对照与IGF-Ⅰ药物对照组,采用MTT比色法与二苯胺显色法观察不同浓度参麦液对软骨细胞增殖与DNA合成情况.结果:参麦液与生长因子IGF-Ⅰ均可促进软骨细胞增殖与DNA合成,同空白对照组相比具有非常显著性差异(P＜0.01),其中5%参麦液组同浓度为5 ng/ml的IGF-Ⅰ组作用效果相当(P＞0.05).结论:参麦液可促进软骨细胞的合成代谢,减少其分解代谢,从而减轻关节软骨的退变,延缓OA的进展.     

蠲痹方含药血清对绝经后膝骨关节炎大鼠软骨细胞自噬的影响及其作用机制

目的:探讨蠲痹方含药血清对绝经后膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)大鼠软骨细胞自噬的影响及其作用机制。方法:(1)绝经后KOA动物模型的建造和蠲痹方含药血清的制备。采用摘取大鼠卵巢,并切断膝关节内侧副韧带、前交叉韧带,摘除膝关节内侧半月板的方法,建造绝经后KOA大鼠模型。造模成功后,对模型大鼠进行蠲痹方浓缩液灌胃,制备蠲痹方含药血清。(2)大鼠软骨细胞的提取。分别取正常大鼠和模型大鼠的膝关节软骨分离、提取软骨细胞。(3)蠲痹方含药血清最佳作用浓度筛选。将模型大鼠软骨细胞分为模型组及1.25%、2.5%、5%、10%、20%含药血清组6组,除模型组外,其余各组分别加入相应体积分数的蠲痹方含药血清干预24 h。检测各组软骨细胞的活力,筛选蠲痹方含药血清最佳作用浓度。(4)蠲痹方含药血清对大鼠软骨细胞G蛋白耦联受体30(G protein-coupled receptor 30,GPR30)表达影响的检测。将模型大鼠软骨细胞分为模型组及1.25%、2.5%、5%、10%含药血清组,并取正常大鼠软骨细胞设为空白组。除模型组和空白组外,其他各组软骨细胞用相应体积分数的...     

龟鹿二仙胶及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的比较研究

目的：通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠及豚鼠软骨细胞增殖的影响,比较在生理及病理状况下龟鹿二仙胶汤及拆方各药物的作用。方法：取1月龄SD大鼠和4月龄豚鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,运用MTT法比较龟鹿二仙胶及其拆方含药血清对不同软骨细胞增殖的影响。结果：中药血清各组对SD大鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用,西药组明显高于中药各组;龟板与全方效果相当。中药血清各组对豚鼠软骨细胞增殖均具有非常显著的促进作用。龟鹿二仙胶、龟板促增殖效果与西药相比差异无统计学意义。人参的促增殖作用也比作用于正常软骨细胞时有所增强。结论：在病理状态下,龟鹿二仙胶、龟板的促增殖作用明显增强,人参在细胞机能状况下降时才明显发挥补虚作用。     

黄连碱对软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA基因的表达的影响

目的：观察黄连碱对Sprague Dawley大鼠关节软骨细胞体外增殖及转化生长因子β1mRNA基因表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用及可能机制。方法取SD大鼠关节软骨,剪碎后,采用酶消化法原代分离培养软骨细胞,取处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组加入含10μm黄连碱的培养基,对照组仅加入普通培养基。培养48小时后在倒置显微镜下观察软骨细胞形态,MTT法检测黄连碱在1,3,5,7天对软骨细胞增殖影响,实时荧光定量PCR分别检测培养7天后实验组和对照组细胞转化生长因子β1mRNA表达。结果培养48小时后实验组软骨细胞生长密集程度明显优于对照组;MTT检测也显示实验组细胞增殖情况优于对照组;培养7天后实验组转化生长因子β1mRNA表达显著高于对照组。结论黄连碱能促大鼠软骨细胞增殖,并提高转化生长因子β1mRNA的表达,提示这可能是其治疗骨关节炎的可能机制之一。     

骨刺痹痛丸对体外培养软骨细胞增殖的影响

为探讨骨刺痹痛丸含药血清对体外软骨细胞增殖的影响,取4周龄兔膝关节软骨分离、培养出软骨细胞后,接种于6孔和96孔板中,以A组空白兔血清培养,B组骨刺痹痛丸含药血清培养。分别进行细胞形态学、免疫组织化学的观察及以MTT法检测软骨细胞的活性和增殖能力。结果显示骨刺痹痛丸含药血清在第4~10天软骨细胞增殖加速,与同期对照组比较,具有显著统计学意义(P<0.05)。表明骨刺痹痛丸可促进软骨细胞增殖。     

反式维甲酸诱导大鼠关节软骨细胞的退变

目的:观察反式维甲酸(TRA)对体外培养大鼠软骨细胞的生长增殖、形态和软骨退变相关基因表达的影响。方法:取出生24hSD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。对照组软骨细胞于体积分数为10%的胎牛血清(FBS)的高糖DMEM培养基中进行培养,而TRA组是在对照组培养基的基础上加入10μmolTRA进行培养。培养24h后,观察细胞形态变化,MTT法检测两组细胞的增殖情况,Western Blot检测Ⅱ型胶原和MMP13的表达,DMMB法测定细胞中GAG的含量,定量PCR检测ADAMTS5,MMP9,A-can,Sox9,COLX和ALP的表达。结果:TRA组的软骨形态由原来的多角形变成长梭形,且TRA组抑制软骨细胞的增殖,同时下调基质蛋白Ⅱ型胶原,A-can,GAG含量及转录因子Sox9表达,上调MMP13,MMP9,ADAMTS5,COLX及ALP的表达。结论:TRA具有促进软骨退变的作用,可用于建立体外软骨退变模型。