紫草素对肾透明细胞癌抗凋亡的作用与机制研究

目的 探究紫草素对肾透明细胞癌凋亡及抗失巢凋亡的作用,并进一步在机制上探究其对抗凋亡相关信FAK(局部粘着斑激酶)、AKT（蛋白激酶B）、Src（原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src）、GSK3b（糖原合成酶激酶3）活化和促凋亡信号caspase-3的影响。方法 CCK8检测紫草素对肾透明细胞癌细胞活力的影响,细胞集落实验和poly-HEMA悬浮培养检测紫草素对肾透明细胞癌失巢凋亡的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡能力;caspase-3试剂盒法检测紫草素对肾透明细胞癌caspace-3活性的影响,Western blot检测紫草素作用后细胞失巢凋亡相关信号FAK、AKT、Src、GSK3b的活化情况以及下游靶基因的表达情况。结果 CCK8检测细胞活力发现,紫草素对肾透明细胞癌细胞的活力具有明显的抑制作用,且随着紫草素剂量的增加,细胞活力呈现剂量依赖性的下降（P＜0.01）。将肾透明细胞癌786-O在软琼脂上培养10d形成集落,结果显示,与对照组相比,低、中、高剂量组的细胞集落数明显减少（P＜0.01）,且呈剂量依赖性下降。poly-HEMA条件培养也表明,紫草素能明显抑制细胞失巢悬浮后的聚团能力。流式细胞仪检测细胞凋亡率显示,对照组0.40±0.52%;低剂量组8.0%±0.98%;中剂量组19±1.22%;高剂量组35±1.35%。低、中、高剂量组与对照组相比差异均具有统计学意义（P ＜ 0. 05或P＜0.01）;caspase-3细胞活性检测显示,无论是贴壁生长还是非粘性生长的肾透明细胞癌经紫草素处理后caspase-3活性均明显下降（P ＜ 0. 01或P＜0.001）;Western blot结果显示,紫草素能明显降低肾透明细胞癌细胞786-O中 FAK、AKY、Src、GSK3b的磷酸化激活,与对照组相比均有显著性差异;RT-PCR结果显示,紫草素能明显诱导FasL、Bim等促凋亡分子mRNA的表达。结论 紫草素能明显促进肾透明细胞癌的凋亡并降低其抗失巢凋亡的能力,其机制上可能是由于紫草素抑制了抗凋亡信号的激活和促凋亡信号caspase-3的活化,进一步促进了促凋亡分子FasL、Bim的表达。     

BTG1在肾透明细胞癌组织中的表达及对786-O细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨B细胞易位基因1(BTG1)在肾透明细胞癌组织中的表达及对肾透明细胞癌细胞株786-O增殖和凋亡的影响.方法:采用免疫组化法检测20例肾透明细胞癌及其癌旁组织中BTG1蛋白的表达.构建BTG1表达质粒及合成BTG1的干扰RNA分别转染786-O细胞,通过MTT法实验观察BTG1对786-O细胞体外增殖的影响,...     

PDE5基因沉默对肾透明细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨PDE5基因对肾透明细胞癌细胞株786-O细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成PDE5 siRNA序列,按照HiPerFect转染试剂盒操作手册转染786-O细胞.采用实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)和Western blot法检测转染后PDE5 基因的表达,通过WST-1法检测细胞增殖情况,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性.结果 与空白对照组和阴性对照组相比较,PDE5 siRNA转染组的mRNA及蛋白表达水平显著降低,786-O细胞增殖能力明显受到抑制,caspase-3活性明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 siRNA干扰PDE5基因表达可抑制肾透明细胞癌细胞株786-O细胞的增殖并促进凋亡.     

黄芪皂苷Ⅱ对肾透明细胞癌细胞生长抑制作用及机制

目的 探讨黄芪皂苷Ⅱ(AsⅡ)对肾透明细胞癌786-O细胞增殖的影响及潜在机制。方法 噻唑兰(MTT)法和克隆实验检测AsⅡ对786-O细胞的生长和集落形成的抑制作用。细胞流式术检测ASⅡ的凋亡诱导作用。随后,用免疫印迹法检测不同处理组细胞PI3K-AKT-mTOR通路蛋白及凋亡执行蛋白的变化,最后利用PI3K-AKT-mTOR通路激活剂IGF-1与AsⅡ对细胞共处理后,流式细胞术检测细胞凋亡水平的变化,进一步验证PI3K-AKT-mTOR通路在凋亡诱导中的作用。结果 AsⅡ对786-O细胞的增殖抑制效应具有浓度和时间依赖性,时间与浓度之间有交互作用(F_时间=513.00,P<0.001;F_浓度=1 678.00,P<0.001;F_{时间×浓度}=18.23,P<0.001),并可抑制细胞集落形成。AsⅡ可诱导细胞凋亡并诱导凋亡执行蛋白cleved caspase-3的表达(P_{0μmol/L AsⅡ组vs 10μmol/L AsⅡ组}=0.013 9,P_{0μmol/L AsⅡ组...}     

NS398通过环氧化酶-2依赖途径诱导肾癌细胞786-O凋亡

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-O增殖和凋亡的影响及其机制。方法同浓度NS398作用体外培养786-O细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96h后肾癌细胞786-O的增殖活性。30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72h后,RT-PCR法检测COX-2 mRNA表达;免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测前列腺素E2(PGE2)释放水平;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型。RT-PCR法和免疫细胞化学检测显示NS398作用后能降低COX-2 mRNA和蛋白表达。ELISA检测显示NS398作用后PGE2释放水平呈下调趋势;流式细胞仪检测表明,30、180μmol/L NS398处理组凋亡率分别为(14.3±1.4)%、(31.5±2.1)%,与对照组凋亡率(2.1±0.4)%比较,凋亡率显著上升(P<0.05)。结论NS398可能通过COX-2依赖性途径抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡。     

Survivin在肾透明细胞癌786-O细胞株中表达的实验研究

目的:检测抗凋亡基因survivin在肾透明细胞癌786-O细胞株中的表达并探讨其临床意义.方法:运用MTT(四唑盐比色)法检测细胞生长状态并绘制生长曲线,运用RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)法和免疫组化法检测786-O细胞株中survivinmRNA及survivin蛋白的表达情况.结果:检测出786-O细胞株中有survivin mRNA的表达,survivin蛋白的表达亦呈阳性,而正常肾细胞无阳性表达.结论:survivin mRNA及survivin蛋白在肾透明细胞癌中均有明显的表达,利用这一表达特异性,为以survivin基因为靶点的肾癌基因治疗研究提供了实验依据.     

PLOD2基因在肾透明细胞癌中的作用及与预后的关系

目的探讨PLOD2基因在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达与患者的诊断率、生存率的关系及其对细胞增殖和迁移的影响。方法收集ccRCC及对应癌旁肾组织各12例,qRT-PCR和免疫组织化学方法分别检测配对组织中PLOD2基因mRNA和蛋白的表达,分析其与患者诊断率和生存率的关系;采用siRNA技术敲减786-O和ACHN细胞中PLOD2的表达; MTT和克隆形成实验检测786-O和ACHN细胞的增殖; Transwell和流式细胞技术分别检测786-O和ACHN细胞的迁移和周期分布。结果在ccRCC组织中,PLOD2基因mRNA表达高于癌旁肾组织(P<0.01); PLOD2蛋白的阳性表达率高于癌旁肾组织[91.7%(11/12)比8.3%(1/12),P<0.001]。PLOD2高表达的ccRCC患者比低表达的生存率低(P=0.026),且具有更好的诊断率(AUC=0.636 6)。786-O和ACHN细胞中,与各自对照组相比,PLOD2敲减组的吸光度值和克隆形成数均明显减少; 786-O细胞敲减组G0/G1期细胞百分率高于其对照组[(50±4)%比(27±5)%,P<0.01]; ACHN细胞敲减组G0/G1期细胞百分率高于其对照组[(67±8)%和(59±8)%,P<0.05]; 786-O细胞敲减组迁移细胞数少于其对照组[(56±8)个比(100±12)个,P<0.01]; ACHN细胞敲减组迁移细胞数少于其对照组[(52±5)个和(143±6)个,P<0.001]。结论PLOD2基因在ccRCC组织呈高表达,与患者的诊断和预后相关; PLOD2基因下调能抑制ccRCC细胞的增殖和迁移,提示其可能在ccRCC的发生发展中具有重要作用。     

环氧化酶-2抑制剂NS398对肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨环氧化酶-2(Cyelooxygenase-2,COX-2)抑制剂NS398对肾癌细胞786-0增殖和凋亡的影响.方法:不同浓度NS398作用体外培养的786-0细胞后,采用噻唑蓝(MTT)法检测24、48、72、96 h后肾癌细胞786-0的增殖活性.终浓度为30、180μmol/L的NS398作用786-O细胞72 h后,免疫细胞化学检测COX-2蛋白表达;RT-PCR法检测COX-2mRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:NS398可以抑制786-O细胞的增殖,呈时间和剂量依赖型.RT-PCR法检测显示NS398作用后能降低COX-2mRNA表达.免疫细胞化学结果显示NS398作用后能降低COX-2蛋白表达.流式细胞仪检测表明,30、180 μmol/L NS398处理组凋亡率分别为14.3%±1.4%、31.5%±2.1%,与对照组凋亡率2.1%±0.4%比较,凋亡率显著上升(P<0.05).结论:NS398可能通过降低COX-2表达,抑制肾癌细胞增殖和诱导其凋亡.     

BTG1在HK-2和786-O细胞株中的表达及其对细胞周期和细胞凋亡的影响

目的：探讨B细胞易位基因1（ BTG1）在人肾小管上皮细胞株（ HK-2）和肾透明细胞腺癌细胞株（786-O）中的表达及BTG1基因对HK-2和786-O细胞周期、细胞凋亡的影响。方法：采用Western blotting方法检测BTG1蛋白在HK-2、786-O细胞株中的表达,构建BTG1表达质粒转染786-O细胞,合成BTG1干扰RNA转染HK-2细胞,通过流式细胞仪（ FACS）观察BTG1对HK-2、786-O细胞周期和细胞凋亡的影响。结果：Western blotting检测显示,BTG1蛋白在HK-2中的表达高于786-O。786-O中高表达BTG1蛋白能够促进其凋亡,增加其G0/G1期比率;HK-2中低表达BTG1蛋白能够抑制其凋亡,减少其G0/G1期比率。结论：BTG1可能通过对细胞凋亡及细胞周期的调控抑制肾细胞癌的生长。     

KIF21B在肾细胞癌中的表达及其对肾癌细胞786-O凋亡的调控作用研究

目的 分析肌动蛋白家族成员21B(KIF21B)在肾细胞癌中的表达水平及意义,探讨KIF21B对肾癌细胞凋亡的影响及机制。方法 采用免疫组织化学、蛋白印迹法(Western blot)检测KIF21B在人肾细胞癌组织和癌旁组织中的表达差异,分析KIF21B改变与患者临床病理特征的相关性。采用Western blot检测KIF21B在人胚肾细胞和肾癌细胞株中的表达差异。以特异性慢病毒下调肾癌细胞786-O中KIF21B表达后,采用流式细胞术和Tunel检测KIF21B对786-O细胞凋亡的影响。采用Western blot检测低表达的KIF21B对PI3K/AKT通路蛋白的调控作用。结果 肾细胞癌组织中KIF21B阳性表达率明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),且阳性表达水平与患者Fuhrman分级、T分期、肿瘤转移存在相关关系。沉默慢病毒及空载体慢病毒作用786-O细胞72 h后,沉默组786-O细胞中KIF21B表达水平下调且细胞凋亡增加,差异有统计学意义(P<0.05)。沉默KIF21B后,786-O细胞中PI3K/AKT关键蛋白表达水平被抑制。结论 KI...     

SIAH1可通过上调Bim表达诱导乳腺癌细胞失巢凋亡

目的 研究SIAH1对乳腺癌细胞失巢凋亡的影响及其相关机制.方法 采用脂质体介导法将SIAH1表达质粒pcDNA3-myc-SIAH1、对照质粒pcDNA3-myc、Bim干扰片段BimsiRNA和对照片段control siRNA转染入乳腺癌细胞系MCF-7,利用Western blot法检测SIAH1和Bim的表达,并应用Annexin V-FITC/PI试剂盒及流式细胞仪技术分析各组细胞在悬浮和贴壁生长状态下细胞的凋亡情况.结果 与未处理组及转染对照质粒组相比,转染SIAH1表达质粒后,SIAH1(P＜0.05)和Bim(P＜0.05)表达均明显上调,且失巢凋亡率明显增加,分别为7.36％、8.02％及38.4％.另外,与单独转染SIAH1表达质粒pcDNA3-myc-SIAH1相比,共转染pcDNA3-myc-SIAH1与Bim siRNA后,Bim表达显著降低(P＜0.05),同时细胞失巢凋亡率明显降低(P＜0.05),分别为36.8％与8.16％.结论 过表达SIAH1可通过上调Bim表达来诱导乳腺癌细胞失巢凋亡.     

蛇葡萄素对肾癌786-O细胞增殖和凋亡的作用

目的 探讨蛇葡萄素(AMP)对人肾癌786-O细胞株增殖与凋亡的作用.方法 将不同浓度的AMP作用于体外培养的肾癌786-O细胞株,采用MTT法检测不同浓度的AMP对肾癌786-O细胞增殖的作用的影响;采用Annexin V/PI双染法检测不同浓度的AMP对肾癌786-O细胞凋亡的作用.结果 MTT结果显示AMP能显著抑制肾癌786-O细胞增殖,半数抑制浓度(IC50)为17.23 μg/mL;经不同浓度的AMP作用7h后,肾癌786-O细胞凋亡率明显增加,AMP浓度为10 μg/mL和20 μg/mL作用于肾癌786-O细胞后,细胞凋亡率升高(P＜0.05);而AMP浓度为40μg/mL和80 μg/mL作用细胞后,细胞凋亡率显著升高(P＜0.01).结论 AMP在体外能显著抑制肾癌786-O细胞增殖,且能促进肾癌786-O细胞凋亡.     

CDK9与肾透明细胞癌临床病理特征及肿瘤侵袭的关系

目的探讨肾透明细胞癌组织CDK9的表达水平,分析其与肾透明细胞癌临床特征的关系,研究CDK9对肾细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。方法选取2013年1月至2016年12月在河南科技大学第一附属医院接受手术切除治疗的肾透明细胞癌患者组织标本102例和癌旁组织标本30例作为研究对象,应用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测CDK9的表达水平,收集102例患者性别、年龄、病理分级等临床病理资料,并分析其与CDK9表达的关系。体外应用肾细胞癌细胞(ACHN、786-O和OSRC-2)研究CDK9对肾细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果与癌旁组织比较,CDK9 mRNA和蛋白在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。CDK9 mRNA表达水平以中位数为界分为低表达组和高表达组,两组患者的病理T分期、TNM分期和远隔转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤细胞系中CDK9表达显著高于人正常肾小管上皮细胞HK-2,其中786-O及ACHN细胞中CDK9表达显著升高(P均<0.01)。体外沉默CDK9显著抑制786-O及ACHN的细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.01)。结论 CDK9表达与肾透明细胞癌的恶性特征、癌细胞增殖、迁移和侵袭能力密切相关,有望成为肾透明细胞癌的潜在治疗靶点。     

姜黄素对肾癌786-O细胞增殖及凋亡的实验研究

目的观察姜黄素对肾癌786-O细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP蛋白)表达水平以及细胞凋亡的影响,研究姜黄素对肾癌细胞的生长抑制作用并探讨其分子机制,进一步揭示姜黄素对肾癌的治疗作用。方法不同浓度姜黄素作用人肾癌786-O细胞24、48、72 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测姜黄素对人肾癌786-O细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测姜黄素诱导细胞的凋亡率;免疫细胞化学检测姜黄素对786-O细胞HIF-1α和XIAP表达的影响。结果姜黄素对人肾癌786-O细胞有明显的抑制作用,可引起细胞凋亡,并且存在剂量和时间依赖;不同浓度姜黄素作用细胞48 h后,HIF-1α和XIAP蛋白表达量下降。结论姜黄素通过下调HIF-1α和XIAP的表达抑制人肾癌786-O细胞的增殖,诱导人肾癌786-O细胞的凋亡。     

度他雄胺和“扶正抑瘤”中药复方对人前列腺癌PC-3细胞转移抑制效应的对照研究

目的:通过失巢凋亡抑制,对照研究新型5α还原酶抑制剂—度他雄胺和由人参、姜黄、肿节风组成的"扶正抑瘤"中药复方调控人前列腺癌PC-3细胞转移的效应。方法:采用人前列腺癌PC-3细胞体外培养的方法;MTT法检测PC-3细胞对度他雄胺和中药复方含药血清的敏感度,并确定两者的浓度梯度;软琼脂集落形成实验法观察两者对PC-3细胞失巢条件下增殖的影响;以Poly-HEMA包被培养细胞悬浮生长和琼脂糖电泳实验观察两者对PC-3细胞失巢凋亡的诱导作用;并采用流式细胞仪PI单染和AV-PI双染定量检测各组细胞凋亡率。结果:MTT比色法确定度他雄胺的浓度梯度为15%(低剂量),30%(中剂量)和45%(高剂量),中药复方为30%(中剂量);软琼脂集落实验表明度他雄胺45%含药血清组和中药复方含药血清组对细胞集落形成数量具有抑制作用(P0.05),2组间比较无差异(P0.05);琼脂糖电泳显示度他雄胺45%含药血清组和中药复方含药血清组出现较明显凋亡DNA-Ladder条带;流式细胞检测PI单染显示,度他雄胺45%含药血清组和中药复方含药血清组可提高PC-3细胞失巢凋亡率(P0.01),AV-PI双染显示度他雄胺各浓度组和中药复方含药血清组仅具有提高细胞早期失巢凋亡率的趋势(P0.05)。结论:度他雄胺可抑制人前列腺癌PC-3细胞在失巢条件下增殖,并呈现一定的浓度依赖性,中药复方也可抑制人前列腺癌PC-3细胞在失巢条件下增殖,两者效应相当,两者均对PC-3细胞失巢凋亡具有相似诱导作用,但对细胞早期凋亡诱导作用均有限。     

GRM1通过AKT/mTOR通路调控肾细胞癌细胞的生物学行为

目的：探讨抑制GRM1对肾细胞癌(RCC)细胞增殖、迁移、侵袭等行为的影响及其潜在的分子机制。方法：采用RT-qPCR和免疫组化检测RCC肿瘤组织中GRM1的表达情况。采用慢病毒转染shRNA构建沉默GRM1的786-O细胞(786-O-shGRM1),并采用RT-qPCR和WB检测转染效率。采用CCK-8检测786-O-shGRM1的细胞活力，流式细胞术检测周期与凋亡，Transwell法检测迁移与侵袭。使用AKT激活剂SC79进行细胞处理后，同法检测细胞786-O-shGRM1的细胞活力、周期、凋亡、迁移与侵袭。结果：GRM1在RCC肿瘤组织的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.01)。沉默GRM1后786-O-shGRM1细胞的活力下降(P<0.01),细胞周期受阻断(P<0.01),细胞凋亡比例增加(P<0.01),细胞迁移及细胞侵袭受抑制(P<0.01)。AKT激活剂SC79可逆转抑制GRM1所致的细胞活力、周期、凋亡、迁移与侵袭的变化。结论：GRM1在肾细胞癌中高表达，通过抑制GRM1能够抑制肾癌细胞增殖、迁移、侵袭，促进肿瘤细胞凋亡，且AKT/...     

葛根素对肾透明细胞癌786-O细胞生长抑制作用的研究

目的通过观察葛根素对肾透明细胞癌786-O细胞增殖与凋亡的影响,探讨其抑制786-O细胞生长的作用机制。方法分别以二甲基亚砜（空白对照）、不同浓度（10、20、40mg/L）葛根素和70mg/L5-氟尿嘧啶干预对数生长期786-O细胞48h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖率,细胞克隆实验观察细胞克隆形成能力,流式细胞术分析细胞周期分布,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平,Westernblot法检测细胞周期和细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果与空白对照相比,20、40mg/L葛根素或5-氟尿嘧啶干预能够降低786-O细胞增殖率和细胞克隆数目（均P＜0.01）,提高处于G0/G1期细胞百分比并降低S期细胞百分比（均P＜0.01）,提高细胞凋亡率（均P＜0.01）,上调第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）、激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（CleavedCaspase-3）、周期蛋白激酶抑制因子p27表达水平（均P＜0.01）,下调磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）表达水平（均P＜0.05或0.01）,降低PI3K、Akt磷酸化比值（均P＜0.05或0.01）。与5-氟尿嘧啶干预相比,40mg/L葛根素干预能够降低786-O细胞增殖率和细胞克隆数目（均P＜0.01）,提高G0/G1期细胞百分比并降低S期细胞百分比（P＜0.05或0.01）,提高细胞凋亡率（P＜0.05）,上调PTEN、CleavedCaspase-3、p27表达水平并下调p-PI3K、p-Akt、cyclinD1表达水平（P＜0.05或0.01）,降低PI3K、Akt磷酸化比值（均P＜0.05）。结论葛根素能够通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡而抑制肾透明细胞癌786-O细胞生长,可能与诱导PTEN表达而抑制PI3K/Akt通路有关。     

游离脂肪酸通过刺激整合素连接激酶表达促进肾癌786-O细胞增殖

目的:探讨游离脂肪酸(free fatty acids,FFAs)异常对人肾癌786-O细胞增殖以及整合素连接激酶(inte-grin-linked kinase,ILK)蛋白表达的影响。方法:分别用0、0.05、0.1和0.2 mmol/L的油酸(oleic acid,OA)作用人肾癌786-O细胞48 h,其中0 mmol/L组作为对照组。利用MTT方法检测各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,Western blot方法检测各组细胞中ILK、Akt和p-Akt蛋白的表达水平。结果:MTT检测结果显示,0.05、0.1和0.2 mmol/L OA组与对照组相比,细胞增殖活性显著增高(光密度0.657±0.056、0.682±0.028、0.718±0.042 vs.0.495±0.034,P均<0.001);而不同浓度的OA对786-O细胞的凋亡作用并不明显(凋亡率2.42%±0.25%vs.2.33%±0.87%vs.2.25%±0.51%,P=0.082);与对照组相比,OA组中的ILK、p-Akt蛋白表达显著上调。结论:FFAs通过刺激ILK/Akt通路可促进细胞增殖,可能与肾癌发生有关。     

雷公藤红素诱导人骨肉瘤细胞系HOS凋亡及机制研究

目的探讨雷公藤红素对人骨肉瘤细胞HOS的杀伤作用及其机制。方法将人骨肉瘤细胞HOS用各种不同浓度的雷公藤红素治疗后,采用MTT法检测雷公藤红素对HOS细胞活力的抑制作用;采用流式细胞术检测HOS细胞凋亡及活性氧簇(ROS)的产生情况;Western blot检测HOS细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平。结果雷公藤红素对HOS细胞活力的抑制效应呈剂量依赖性,1、2、3、4、5μmol/L的雷公藤红素组细胞活力抑制率分别为(23.6±3.5)%、(43.7±5.4)%、(57.8±6.9)%、(75.5±6.4)%、(83.7±7.3)%,各雷公藤组细胞活力抑制力与对照组的零抑制力比较,差异均有统计学意义(P均0.05);雷公藤红素可显著诱导HOS细胞发生凋亡,与对照组凋亡率(2.3±0.5)%比较,1、3μmol/L雷公藤红素组凋亡率分别为(17.2±2.2)%(P0.05)、(39.5±3.6)%(P0.05)。雷公藤红素可显著诱导HOS细胞ROS的产生,与对照组ROS阳性率(1.3±0.4)%比较,1、3μmol/L雷公藤红素组ROS阳性率分别为(13.6±1.5)%(P0.05)、(29.4±3.3)%(P0.05)。雷公藤红素处理后HOS细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平均显著上升。结论雷公藤红素或通过ROS/JNK途径诱导人骨肉瘤细胞发生caspase依赖的凋亡。     

腺病毒重组人白细胞介素24对肾癌细胞株786-O 细胞生长和凋亡的影响

目的探讨腺病毒重组人白细胞介素24(IL-24)对肾癌细胞株786-O细胞的生长和凋亡的影响。方法将培养的肾癌细胞株786-O细胞随机分为空白对照组、阴性对照组(转染腺病毒重组人IL-24对照组)及实验组(转染腺病毒重组人IL-24组)。取对数生长期肾癌细胞株786-O,构建腺病毒重组人IL-24及对照并转染至肾癌细胞株786-O实验组细胞及阴性对照组细胞。使用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测肾癌细胞株786-O生长能力;采用流式细胞术检测肾癌细胞株786-O凋亡情况;应用Western Blot检测肾癌细胞株786-O中MMP-9蛋白的表达水平。结果实验组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞表面磷脂酰丝氨酸表达水平高于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肾癌细胞株786-O细胞中MMP-9蛋白表达水平低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。空白对照组与阴性对照组肾癌细胞株786-O细胞增殖能力、细胞膜表面磷脂酰丝氨酸表达水平、MMP-9蛋白表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论转染腺病毒重组人IL-24可抑制肾癌细胞株786-O细胞的生长并诱导细胞凋亡,腺病毒重组人IL-24可能通过下调MMP-9诱导肾癌细胞株786-O细胞的凋亡。