紫草素对肾透明细胞癌抗凋亡的作用与机制研究

目的 探究紫草素对肾透明细胞癌凋亡及抗失巢凋亡的作用，并进一步在机制上探究其对抗凋亡相关信FAK(局部粘着斑激酶)、AKT（蛋白激酶B）、Src（原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src）、GSK3b（糖原合成酶激酶3）活化和促凋亡信号caspase-3的影响。方法 CCK8检测紫草素对肾透明细胞癌细胞活力的影响，细胞集落实验和poly-HEMA悬浮培养检测紫草素对肾透明细胞癌失巢凋亡的影响，流式细胞术检测细胞的凋亡能力；caspase-3试剂盒法检测紫草素对肾透明细胞癌caspace-3活性的影响，Western blot检测紫草素作用后细胞失巢凋亡相关信号FAK、AKT、Src、GSK3b的活化情况以及下游靶基因的表达情况。结果 CCK8检测细胞活力发现，紫草素对肾透明细胞癌细胞的活力具有明显的抑制作用，且随着紫草素剂量的增加，细胞活力呈现剂量依赖性的下降（P＜0.01）。将肾透明细胞癌786-O在软琼脂上培养10d形成集落，结果显示，与对照组相比，低、中、高剂量组的细胞集落数明显减少（P＜0.01），且呈剂量依赖性下降。poly-HEMA条件培养也表明，紫草素能明显抑制细胞失巢悬浮后的聚团能力。流式细胞仪检测细胞凋亡率显示，对照组0.40±0.52%；低剂量组8.0%±0.98%；中剂量组19±1.22%；高剂量组35±1.35%。低、中、高剂量组与对照组相比差异均具有统计学意义（P ＜ 0. 05或P＜0.01）；caspase-3细胞活性检测显示，无论是贴壁生长还是非粘性生长的肾透明细胞癌经紫草素处理后caspase-3活性均明显下降（P ＜ 0. 01或P＜0.001）；Western blot结果显示，紫草素能明显降低肾透明细胞癌细胞786-O中 FAK、AKY、Src、GSK3b的磷酸化激活，与对照组相比均有显著性差异；RT-PCR结果显示，紫草素能明显诱导FasL、Bim等促凋亡分子mRNA的表达。结论 紫草素能明显促进肾透明细胞癌的凋亡并降低其抗失巢凋亡的能力，其机制上可能是由于紫草素抑制了抗凋亡信号的激活和促凋亡信号caspase-3的活化，进一步促进了促凋亡分子FasL、Bim的表达。

Study on the effect and Mechanism of shikonin on apoptosis of Renal clear Cell carcinoma