雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用机制的研究

目的探讨雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用机制。方法将Tca8113细胞分为对照组(0μmol/L顺铂和0μg/m L雷公藤红素)、顺铂组(15μmol/L顺铂)、雷公藤红素组(50μg/m L雷公藤红素)以及联合组(15μmol/L顺铂和50μg/m L雷公藤红素),MTT法检测细胞活力,酶联免疫吸附法测定血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、抗凋亡蛋白(Bcl-2)、凋亡蛋白(Bax)水平。结果顺铂组、雷公藤红素组以及联合组Tca8113细胞存活率分别为:(0.61±0.12)%、(0.59±0.12)%、(0.27±0.11)%,顺铂组、雷公藤红素组Tca8113细胞存活率低于对照组的(1.00±0.00)%,差异有统计学意义(P0.05),联合组Tca8113细胞存活率低于对照组、顺铂组与雷公藤红素组,差异有统计学意义(P均0.05),雷公藤红素组Tca8113细胞存活率低于顺铂组,但差异无统计学意义(P0.05);顺铂组、雷公藤红素组Tca8113细胞VEGF、VEGF-C、Bcl-2水平低于对照组[VEGF:(39.14±1.78)μmol/L、(41.11±1.45)μmol/L比(61.45±2.73)μmol/L,P0.05;VEGF-C:(43.11±1.37)μmol/L、(43.13±1.65)μmol/L比(61.33±2.16)μmol/L,P0.05;Bcl-2:(52.47±0.98)μmol/L、(53.47±1.03)μmol/L比(78.47±1.33)μmol/L,P0.05],Bax水平高于对照组[(45.14±0.89)μmol/L、(44.14±1.12)μmol/L比(43.14±1.36)μmol/L,P0.05)];联合组VEGF、VEGFC、Bcl-2水平显著低于对照组、顺铂组与雷公藤红素组[VEGF:(23.1±2.13)μmol/L分别与(61.45±2.73)μmol/L、(39.14±1.78)μmol/L和(41.11±1.45)μmol/L比较,P0.05;VEGF-C:(21.45±1.47)μmol/L分别与(61.33±2.16)μmol/L、(43.11±1.37)μmol/L和(43.13±1.65)μmol/L比较,P0.05;Bcl-2:(36.47±1.25)μmol/L分别与(78.47±1.33)μmol/L、(52.47±0.98)μmol/L和(53.47±1.03)μmol/L比较,P0.05];Bax水平高于对照组、顺铂组与雷公藤红素组(79.14±1.45)μmol/L分别与(43.14±1.36)μmol/L、(45.14±0.89)μmol/L和(44.14±1.12)μmol/L比较,P0.05];雷公藤红素组VEGF、VEGF-C、Bcl-2、Bax水平与顺铂组相近,差异无统计学意义(P0.05)。结论雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞作用优于顺铂和雷公藤红素单独作用,作用机制可能与其抑制VEGF、VEGFC、Bcl-2表达,促进Bax表达相关。     

雷公藤红素逆转宫颈癌细胞顺铂耐药性实验研究

目的研究中药活性成分雷公藤红素逆转耐药宫颈癌细胞株Hela/R对顺铂的耐药性,并探讨其机制。方法采用顺铂梯度暴露法构建顺铂耐药宫颈癌细胞株Hela/R;采用MTT法检测雷公藤红素是否能增强顺铂对Hela/R的杀伤活性;Western blot试验检测常规Hela细胞及Hela/R细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-w及Bcl-xl表达水平;流式细胞术检测雷公藤红素联合顺铂对Hela/R细胞的凋亡诱导效应及对线粒体膜电位的影响。结果 1、2、4、8、16、32、64μmol/L顺铂对Hela及Hela/R细胞的细胞活力抑制率分别为:(18.6±1.5)%(Hela),(1.9±1.0)%(Hela/R);(23.9±2.4)%(Hela),(3.1±1.2)%(Hela/R);(47.8±3.9)%(Hela),(6.8±1.5)%(Hela/R);(63.4±5.4)%(Hela),(11.6±1.8)%(Hela/R);(72.7±5.9)%(Hela),(20.4±2.0)%(Hela/R),(85.7±6.7)%(Hela),(41.2±3.3)%(Hela/R);(91.8±7.9)%(Hela),(55.8±4.3)%(Hela/R),两组比较,P均0.05。2μmol/L雷公藤红素对Hela/R细胞的细胞活力抑制率为(6.6±1.1)%;2μmol/L雷公藤红素分别加10、20、40μmol/L顺铂组Hela/R细胞的细胞活力抑制率优于单用10、20、40μmol/L顺铂组[(57.2±3.9)%比(12.4±1.2)%、(71.4±5.1)%比(27.8±1.9)%、(84.8±6.8)%比(45.2±3.1)%,P0.05]。Hela/R细胞Bcl-w/β-actin表达水平高于Hela细胞[(70.9±4.9)比(22.1±1.3),P0.05],Bcl-2/β-actin与Bcl-xl/β-actin表达水平差异无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,雷公藤红素可明显抑制Hela/R细胞Bcl-w/β-actin的表达[(29.3±2.6)比(68.9±4.5),P0.05]。雷公藤红素增强顺铂对Hela/R细胞线粒体膜电位的损伤,促进细胞色素C的释放,而诱导Hela/R细胞发生凋亡。结论雷公藤红素体外能提高顺铂对耐药宫颈癌细胞的杀伤活性,其机制可能为通过抑制Bcl-w表达,提高促凋亡蛋白的活性,进而促进耐药宫颈癌细胞发生线粒体途径的凋亡。     

miRNA-20a-BCL-2信号通路介导雷公藤红素、平阳霉素对舌鳞癌细胞增殖与侵袭的实验研究

目的探讨miRNA-20a-BCL-2信号通路介导雷公藤红素、平阳霉素对舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖与侵袭。方法 Tca8113细胞液于DMEM培养液中培养,作为对照组;雷公藤红素组、平阳霉素组、联合组(雷公藤红素+平阳霉素)的培养方法为10%胎牛血清DMEM培养液分别含有20μg/mL的雷公藤红素、20μmol/mL的平阳霉素以及20μg/mL雷公藤红素+20μmol/mL平阳霉素。以上各组每孔设6个平行样,培养48h,培养结束后,检测Tca8113细胞活力、凋亡、侵袭情况,实时荧光逆转录法测定miRNA-20a、BCL-2 mRNA水平,酶联免疫吸附法测定MMP-9、cyc D1、VEGF蛋白水平。结果与对照组比较,雷公藤红素组、平阳霉素组、联合组增加Tca8113细胞抑制率[(72.56±0.98)%、(59.43±0.44)%、(92.44±0.16)%比(0.00±0.00)%,P0.05],Tca8113细胞凋亡率[(42.32±9.43)%、(43.09±8.21)%、(60.54±9.88)%比(29.34±8.32)%,P0.05],降低Tca8113miRNA-20a RNA水平[(1.53±0.17)、(1.52±0.20)、(0.53±0.10)比(1.97±0.25),P0.05],Tca8113 BCL-2RNA水平[(4.13±0.36)、(4.16±0.39)、(2.32±0.29)比(5.16±0.21),P0.05)],Tca8113穿膜数[(434±25)个、(458±54)个、(223±33)个比(757±19)个,P 0.05],Tca8113 MMP-9水平[(465.32±15.32)μmol/L、(469.98±43.76)μmol/L、(196.14±19.23)μmol/L比(567.98±23.76)μmol/L,P0.05],Tca8113cyc D1水平[(345.87±13.98)μmol/L、(352.87±16.98)μmol/L、(172.87±9.54)μmol/L比(578.00±15.09)μmol/L,P 0.05],Tca8113 VEGF水平[(630.87±14.87)μmol/L、(625.87±15.76)μmol/L、(245.76±32.76)μmol/L比(916.91±28.97)μmol/L,P0.05]。结论雷公藤红素联合平阳霉素能抑制miRNA-20a-BCL-2信号通路及下游细胞因子的表达,进而抑制Tca8113增殖、侵袭。     

蛇床子素增强TNF-α对骨肉瘤细胞凋亡诱导活性及机制研究

目的观察蛇床子素增强肿瘤坏死因子对骨肉瘤细胞的凋亡能力及其机制。方法将骨肉瘤细胞系HOS分为对照组、TNF-α组及蛇床子素联合TNF-α组和蛇床子素+TNF-α+CYLD si RNA组;MTT法检测HOS细胞的细胞活力,Annexin V/PI染色检测HOS细胞的凋亡,免疫共沉淀联合Western blot法检测HOS细胞RIP1蛋白的泛素化,Western blot法检测HOS细胞caspase-8的活化和CYLD去泛素化酶的相对表达量。结果与对照组比较,TNF-α组、蛇床子素+TNF-α组对HOS细胞活力的抑制率增加[(12.5±0.9)%、(58.6±3.8)%比0,P0.05],TNF-α组、蛇床子素+TNF-α组对HOS细胞凋亡诱导率提高(8.3±0.5)%、(39.9±2.5)%比(1.9±0.3)%,P0.05],而蛇床子素+TNF-α+CYLD si RNA组的HOS细胞活力抑制率、HOS细胞凋亡诱导率均低于蛇床子素+TNF-α组[(22.1±1.2)%比(58.6±3.8)%,P0.05;(13.5±0.9)%比(39.9±2.5)%,P0.05]。与对照组、TNF-α组比较,蛇床子素+TNF-α组RIP1泛素蛋白相对表达量降低(0.28±0.02比1.00±0.07、0.81±0.06,P0.05),蛇床子素+TNF-α组活化的caspase-8蛋白的相对表达量明显提高(0.46±0.04比0.01±0.01、0.08±0.02,P0.05),蛇床子素+TNF-α组CYLD蛋白的相对表达量也明显增加(0.81±0.05比0.28±0.02、0.30±0.02,P0.05)。与蛇床子素+TNF-α组比较,蛇床子素+TNF-α+CYLD si RNA组RIP1泛素蛋白相对表达量增加(0.77±0.05比0.28±0.02,P0.05),显示CYLD si RNA能显著抑制蛇床子素对TNF-α的协同作用。结论蛇床子素通过上调去泛素化酶CYLD的表达水平,促进TNF-α依赖的RIP1蛋白的去泛素化,进而诱导骨肉瘤细胞caspase-8的活化和凋亡的发生。     

雷公藤红素增强多柔比星抑制肝癌细胞系Huh7细胞活性的实验研究

目的观察雷公藤红素增强多柔比星对肝癌细胞的杀伤活性及机制。方法设0.5、1、2μmol/L浓度的雷公藤红素为雷公藤红素1、2、3组,设0.1、1g/m L浓度的多柔比星为多柔比星1、2组;MTT法检测多柔比星单独治疗及联合雷公藤红素治疗对肝癌细胞系Huh7的杀伤活性。荧光定量PCR方法检测人正常胎肝细胞系L-O2及肝癌细胞系Huh7、Hep G2和PLC的PKM2表达水平。MTT法检测PKM2表达载体转染对雷公藤红素联合多柔比星杀伤Huh7细胞疗效的影响。结果与对照组Huh7细胞活力零抑制率比较,雷公藤红素1、2、3组分别为(2.6±0.9)%、(4.7±1.3)%(P均0.05)、(8.8±1.9)%(P0.05);多柔比星1、2组分别为(7.5±1.9)%、(61.4±4.2)%(P均0.05);1μmol/L雷公藤红素联合0.1、1g/m L多柔比星较多柔比星1、2组,Huh7细胞活力抑制率明显上升[(58.7±3.8)%比(7.5±1.9)%,P0.05;(89.7±6.7)%比(61.4±4.2)%,P0.05]。PKM2相对表达水平,相对人正常肝细胞系L-O2细胞系的(1.0±0.05),Huh7细胞系为(15.2±0.6)(P0.05),Hep G2细胞系为(11.8±0.5)(P0.05),PLC细胞系为(13.4±0.7)(P0.05);雷公藤红素1、2、3组分别下调为(0.70±0.05)(P0.05)、(0.42±0.04)(P0.05)、(0.31±0.03)(P0.05);多柔比星组无下调作用;1μmol/L雷公藤红素联合0.1、1g/m L多柔比星后PKM2相对表达水平较多柔比星1、2组明显下降[(0.44±0.04)比(0.98±0.07),P0.05;(0.41±0.03)比(1.01±0.07),P0.05]。转染PKM2表达载体后,1μmol/L雷公藤红素联合0.1、1g/m L多柔比星对Huh7细胞活力抑制率较未转染组下降[(60.5±4.3)%比(19.3±2.0)%,P0.05;(91.6±6.9)%比(69.6±4.5)%,P0.05]。结论雷公藤红素通过下调PKM2的表达抑制肿瘤细胞的糖代谢,增强多柔比星对肝癌细胞系Huh7的杀伤活性。     

藤黄酸诱导肺癌细胞H1975凋亡的机制研究

目的 研究藤黄酸（GA）诱导人肺癌细胞H1975凋亡的分子机制,探讨氧自由基（ROS）和JNK信号通路在GA杀伤 肺癌细胞中的作用。方法 以人肺癌细胞H1975为研究对象,MTT法测定GA抑制细胞增殖的作用,Annexin V/PI 双染法测定细胞凋亡率,DCFH-DA 法测定ROS 含量,JC-1探针染色分析线粒体膜电位（MMP）,Western blot检测JNK 信号通路的激活和线粒体凋亡途径相关蛋白表达的变化。结果 GA 呈剂量依赖性抑制H1975细胞的增殖,各实验组细胞存活率与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05 或0.01）。1、2.5 和5滋mol/L GA 作用24h 后,细胞凋亡率分别为25.2%、51.8%和75.1%,剪切型凋亡相关蛋白cleaved caspase-9、cleaved caspase-3 和cleaved PARP 的表达随GA 浓度增高而显著增加,与空白对照组比较,均有统计学差异（P＜0.05或0.01）。GA 作用2h 后H1975细胞ROS 含量显著升高,磷酸化JNK（p-JNK）表达上调（P＜0.05或0.01）。GA 作用16h后各实验组细胞MMP 均明显降低（均P＜0.05）。GA 作用24h后实验组细胞线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bak、Bik表达增加,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达与空白对照组相比明显下降（P＜0.05 或0.01）。结论 GA 具有诱导H1975 细胞凋亡的作用,其可能机制是上调细胞内ROS含量,激活JNK 信号通路,进而引起MMP 降低和线粒体凋亡途径激活。     

雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌作用机制的研究

【】：目的：探讨雷公藤红素联合顺铂对舌鳞状细胞癌(Tca8113细胞)的作用机制。方法：将Tca8113细胞分为：对照组(0μmol/L顺铂和0μg/mL雷公藤红素)、顺铂组(15μmol/L顺铂)、雷公藤红素组(50μg/mL雷公藤红素)以及联合组(15μmol/L顺铂和50μg/mL雷公藤红素),MTT法检测细胞活力, 酶联免疫吸附法测定血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、Bcl-2(抗凋亡蛋白)、Bax(凋亡蛋白)水平。结果：顺铂组、雷公藤红素中Tca8113细胞的存活率低于对照组,差异有统计学意义(P <0.05),联合组的存活率低于对照组、顺铂组与雷公藤红素组,差异有统计学意义(P <0.05),雷公藤红素组的存活率低于顺铂组,但差异无统计学意义(P >0.05);顺铂组、雷公藤红素组Tca8113细胞的VEGF、VEGF-C、Bcl-2的水平低于对照组,Bax的水平高于对照组,差异有统计学意义(P <0.05);联合组的VEGF、VEGF-C、Bcl-2低于对照组、顺铂组与雷公藤红素组,Bax高于对照组、顺铂组与雷公藤红素组,差异有统计学意义(P <0.05);雷公藤红素组的VEGF、VEGF-C、Bcl-2、Bax水平与顺铂组相近,差异无统计学意义(P >0.05)。结论：雷公藤红素联合顺铂治疗舌鳞状细胞癌疗效优于顺铂和雷公藤红素单独治疗,作用机制可能与其抑制VEGF、VEGF-C、Bcl-2的表达,促进Bax的表达相关。     

桔梗皂苷D对阿霉素体外抗肝癌活性的干预作用及其机制研究

目的观察桔梗皂苷D对阿霉素体外抗肝癌活性的干预作用并探讨其作用机制。方法将人肝癌细胞系PLC细胞按5×103/孔接种在96孔板上,分为对照组、桔梗皂苷D组、阿霉素组、阿霉素+桔梗皂苷D组、阿霉素+桔梗皂苷D+NAC组和阿霉素+桔梗皂苷D+ASK1小干扰RNA组。各组细胞处理完毕后,采用MTT实验检测肝癌细胞系PLC细胞活力;流式细胞术检测PLC细胞的凋亡和活性氧簇(ROS)的产生;Western blot实验检测PLC细胞ASK1及JNK磷酸化水平及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活化水平。结果桔梗皂苷D联合阿霉素对PLC细胞的细胞活力抑制率和凋亡诱导率显著高于阿霉素组[细胞活力抑制率:(61.5±5.1)%比(15.2±1.4)%,P0.05;凋亡诱导率:(36.8±2.9)%比(7.6±0.6)%,P0.05]。桔梗皂苷D处理不影响PLC细胞内ROS水平,但桔梗皂苷D联合阿霉素处理组ASK1及JNK磷酸化水平及Caspase-3活化水平均显著高于阿霉素组。阿霉素+桔梗皂苷D+NAC组、阿霉素+桔梗皂苷D+ASK1小干扰RNA组PLC细胞活力抑制率和凋亡诱导率均显著低于桔梗皂苷D联合阿霉素组[细胞活力抑制率:(25.8±2.0)%、(19.7±1.6)%比(61.5±5.1)%,P均0.05;凋亡诱导率:(12.4±1.1)%、(10.8±0.9)%比(36.8±2.9)%,P均0.05]。结论桔梗皂苷D可能通过上调ASK1表达增强阿霉素的体外抗肝癌活性。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25~35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响。方法人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验。MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化。运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响。结果结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P<0.05);10 UEpo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P<0.05)。Hoechst 33258核染色发现10 UEpo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P<0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P<0.05)。结论Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用。本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25～35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响.方法 人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验.MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20 μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化.运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响.结果 结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P＜0.05);10 U Epo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P＜0.05).Hoechst 33258核染色发现10 U Epo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P＜0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P＜0.05).结论 Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用.本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础.     

妇产科和生殖生物学杂志

接受宫内DES治疗后宫颈发育不全患者在孕早期行预防性宫颈环扎术（法）；76例感染性肠道疾病和妊娠病例报道及文献回顾（法）；阑尾炎与妊娠21例报道（法）；使用依托孕烯皮下埋植剂（Implanon）避孕发生宫外孕的首例报道（法）；母乳喂养与素食饮食（法）；Galen动脉瘤的产前诊断和处理：通过1个病例报道进行综合描述（法）     

妇产科学和生殖生物学杂志

年龄〈50岁患者经阴道填入聚丙烯筛网治疗生殖道脱垂：阴道解剖结构与功能的预后研究（法）;巨大儿分娩：自然产失败的预测因素（法）;Elhers—DanlosⅣ型患者妊娠期出现肾动脉瘤破裂（法）;盆腔Burkitt淋巴瘤疑似卵巢肿瘤1例（法）;产程中急性胎一胎输血：2例双胎病例的研究（法）     

欧洲皮肤病学会杂志

欧洲银屑病患者现状的调查,3种不同维生素D软膏的流变学特征及轻中度银屑病患者的临床舒适度调查。局部应用3μg／g骨化三醇软膏治疗轻中度银屑病：一项开放标记式研究，Merkel细胞癌：11例病例临床病理研究,光毒量UVA联合外用8-甲氧补骨脂素治疗斑秃,